葡萄籽原花青素提取物对心肌梗死大鼠肾素-血管紧张素系统及AQP2蛋白表达的影响

目的:探讨葡萄籽原花青素提取物(GSPE)对心肌梗死大鼠肾素血管紧张素-系统及水通道蛋白2(AQP2)表达的影响。方法:将55只无特定病原体(SPF)级Sprague-Dawley(SD)大鼠按照随机数字表法分为健康组、模型组、辛伐他汀组、GSPE低剂量组及GSPE高剂量组,每组11只。除健康组外其余大鼠均采用冠状动脉结扎法制备心肌梗死模型,建模成功后,GSPE低剂量组、高剂量组大鼠分别灌胃100 mg/kg、400 mg/kg葡萄籽原花青素溶液,辛伐他汀组灌胃40 mg辛伐他汀溶液。苏木精-伊红(HE)染色后观察心肌组织形态;末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端转移酶标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;超声心动图监测心功能;放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血浆肾素活性(PRA)、醛固酮水平;免疫印迹法检测心肌组织中AQP2、B细胞淋巴瘤/白血病2号基因(Bcl-2)及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白水平。结果:与健康组比较,模型组大鼠左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)升高,左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短分数(LVFS)降低(P<0.05);与模型组比较,GSPE低剂量组、GSPE高剂量组及辛伐他汀组LVEDD、LVESD降低,LVEF、LVFS升高(P<0.05),GSPE低剂量组、GSPE高剂量组间比较差异有统计学意义,而GSPE高剂量组与辛伐他汀组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与健康组比较,模型组大鼠AngⅡ、PRA、醛固酮升高(P<0.05);与模型组比较,GSPE低剂量组、GSPE高剂量组及辛伐他汀组AngⅡ、PRA、醛固酮降低(P<0.05)。健康组、模型组、GSPE低剂量组、GSPE高剂量组及辛伐他汀组的心肌细胞凋亡率分别为(5.11±0.33)%、(46.22±3.97)%、(28.46±3.77)%、(15.42±2.33)%及(16.34±2.57)%,各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与健康组比较,模型组大鼠心肌组织中AQP2、Caspase-3蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);与模型组比较,GSPE低剂量组、GSPE高剂量组、辛代他汀组大鼠心肌组织中AQP2、Caspase-3蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05)。结论:GSPE对心肌梗死有保护作用,可改善心功能水平,减少心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调控AQP2蛋白表达有关。

以大黄调节AQP2效应探讨“泄热”的机制研究

目的探讨大黄对阳明病肠热腑实证大鼠的退热效应及对结肠与肾脏组织AQP2表达的调节效应,揭示大黄“泄热”作用的可能机制。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组(阳明病肠热腑实证)、大黄水煎液高、中、低剂量组。观察大鼠一般情况并于造模前后、隔日测大鼠肛温、计算粪便干湿重;采用炭粉指示液观察肠推进率;ELISA法检测大鼠血浆及脑脊液中AVP含量;HE法观察肾脏与结肠病理改变;免疫荧光法检测结肠与肾脏AQP2的分布及表达情况。结果与空白组比较,阳明病肠热腑实证大鼠1、3、5、7 d肛温升高(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01)、肠推进率降低、粪水含量降低(P<0.01,P<0.01)、血浆及脑脊液中体温负调节介质AVP含量显著降低(P<0.01,P<0.01);给予大黄水煎液治疗后,肛温明显降低,肠推进率、粪水含量显著升高(P<0.05,P<0.05),血浆及脑脊液中AVP含量明显升高(P<0.05,P<0.05),同时结肠与肾组织病理显著改善、结肠与肾组织AQP2表达明显降低,水排出增多、重吸收减少,提示大黄可通过利尿“利尿”与“泻下”退热。结论大黄可以显著性降低阳明病肠热腑实证大鼠的体温升高,可能通过升高血浆及脑脊液中体温负调节介质AVP含量,同时降低结肠与肾脏AQP2表达,具体机制需进一步研究证实。

雷公藤-甘草配伍干预肾病综合征大鼠AVPR2/AQP2的表达

目的探讨阿霉素诱导的肾病综合征大鼠AVPR2和AQP2的表达以及雷公藤-甘草配伍的干预机制。方法选取成年健康雄性SD大鼠,随机选取10只作为空白组,其余大鼠均接受尾静脉注射给予6.5 mg·kg^(-1)的阿霉素诱导复制大鼠肾病综合征模型。并采用随机数字法将造模成功的大鼠分为4组(n=10):模型组(n=10)、阳性对照组(雷公藤多苷片80 mg·kg^(-1)·d^(-1),n=10)、雷公藤组(雷公藤提取物240 mg·kg^(-1)·d^(-1),n=10)及雷公藤-甘草组(雷公藤提取物240 mg·kg^(-1)·d^(-1)+甘草提取物80 mg·kg^(-1)·d^(-1),n=10)。测定大鼠24 h尿蛋白含量、血清白蛋白、尿素、肌酐水平、肾脏中AVPR2和AQP2 mRNA表达水平。结果大鼠经阿霉素造模后表现出大量蛋白尿、低蛋白血、高度水肿症候。相比于模型组,雷公藤及配伍给药组大鼠精神状态较好,体质量增加明显。与模型组相比,雷公藤组24 h尿蛋白、尿素、AQP2 mRNA表达均显著下降(P<0.05);雷公藤-甘草组24 h尿蛋白、血清白蛋白、尿素、肌酐、AVPR2 mRNA及蛋白、AQP2 mRNA及蛋白表达均显著回调(P<0.05)。相比于雷公藤组,雷公藤-甘草组的24 h尿蛋白、血清白蛋白、AVPR2 mRNA、AQP2蛋白表达回调更加显著(P<0.05)。结论雷公藤可显著降低肾病综合征大鼠AVPR2和AQP2 mRNA高表达,且与甘草配伍后效果更优,雷公藤-甘草配伍给药干预阿霉素诱导的肾病综合征大鼠的机制与纠正AVPR2与AQP2的高表达、减少水的重吸收有关。

大黄总蒽醌对大鼠远端结肠AQP2表达的调节效应

目的:探讨大黄总蒽醌对大鼠远端结肠水通道蛋白2(aquaporin2,AQP2)表达的调节作用。方法:32只SD大鼠随机分为正常组,大黄总蒽醌低、中、高剂量组(0.14,2.5,4.5 g·kg^(-1)·d^(-1),灌胃),正常组给予生理盐水灌胃。大鼠5 d后麻醉处死,取全段结肠内粪便,干燥后检测粪便含水量;留取远端结肠,运用免疫组织化学、Western Not及RT-PCR检测远端结肠AQP2表达的变化。结果:低剂量组大鼠没有出现泻下现象,其远端结肠AQP2表达无显著差异;中剂量组(2.5 g·kg^(-1)·d^(-1))大鼠出现软便及稀便,高剂量组(4.5 g·kg^(-1)·d^(-1))大鼠出现稀便和水样便,粪便含水量显著性增加,其远端结肠AQP2表达亦显著降低(P<0.01)。结论:大黄总蒽醌能抑制大鼠远端结肠AQP2的转录与翻译、增加粪便的含水量,这可能是其泻下效应产生的机制之一。

加减猪苓汤治疗糖尿病肾病Ⅳ期的临床观察及对尿AQP2的影响

目的探讨加减猪苓汤治疗糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)Ⅳ期的临床疗效及对尿水通道蛋白2(Aquaporin2,AQP2)的影响。方法临床采用辨证属阴虚水肿型DKDⅣ期样本50例,随机分为治疗组25例和对照组25例,所有病例均进行常规降糖药控制血糖、低盐、优质低蛋白、低脂饮食、控制血压和运动指导等一般治疗。对照组口服厄贝沙坦片150 mg/d,治疗组在上述治疗基础上,加用加减猪苓汤,6周后比较治疗前后两组24尿蛋白定量、肝肾功能、糖化血红蛋白、血糖、中医症候积分情况等,同时分别在第1、3、6周末检测两组尿AQP2表达。结果治疗6周后,两组中医症候积分、24 h尿蛋白定量、血浆白蛋白、血肌酐及均较治疗前有所改善,差异有统计学意义(P<0.05),且治疗组优于对照组(P<0.05),治疗组尿AQP2在第3周及第6周均表达高于第1周(P<0.05),且高于对照组(P<0.05)。结论猪苓汤猪苓汤治疗DKDⅣ期的患者可减少尿蛋白、改善肾功能及减少中医症候积分,同时提高尿中AQP2表达,延缓DKD的进展。

商陆皂苷甲对水负荷大鼠肾脏AQP2及AQP4表达的影响

目的:观察商陆皂苷甲对水负荷大鼠肾脏水通道蛋白2(AQP2)及水通道蛋白4(AQP4)表达的调节作用,研究商陆皂苷甲利尿作用机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、氢氯噻嗪组及商陆皂苷甲高、中、低剂量组,腹腔注射给药,氢氯噻嗪组给予氢氯噻嗪0.4 mg/kg,商陆皂苷甲高、中、低剂量组分别给5.2、2.6、1.3 mg/kg商陆皂苷甲,收集并测量给药后6 h内的尿量;水负荷实验结束后将大鼠麻醉处死,运用免疫组化及Real Time-PCR技术检测大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达的变化。结果:与空白对照组比较,商陆皂苷甲高剂量组大鼠尿量显著增多,肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA的表达显著下调(P<0.05);商陆皂苷甲中、低剂量组尿量及肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达差异无统计学意义。结论:商陆皂苷甲通过下调大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达,使水分重吸收降低,可能是其利尿作用的机制之一。

六味地黄丸对甲亢型肾阴虚大鼠肾组织AQP1、AQP2含量的影响

[目的]观察六味地黄丸对甲亢型肾阴虚大鼠肾组织水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白2(AQP2)含量变化的影响。[方法]30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、六味地黄丸组,采用甲状腺片制备肾阴虚模型,六味地黄丸给药观察,连续21天。给药前后记录各组大鼠体重、体温、饮水量、尿量等体征;动物处理后,检测大鼠皮肤含水量,ELISA法检测大鼠肾组织AQP1和AQP2含量。[结果]六味地黄丸组大鼠较模型组大鼠体温显著降低(P<0.01)、饮水量明显减少(P<0.05)、尿量和皮肤含水量均显著增多(P<0.01),肾组织AQP1、AQP2含量均显著降低(P<0.01),而与正常组相比无统计差异。六味地黄丸未能有效纠正模型大鼠体重的降低。[结论]六味地黄丸能有效改善甲亢型肾阴虚模型大鼠体温升高以及饮水量、尿量和皮肤含水量等水液代谢相关指标的紊乱,纠正其肾组织AQP1和AQP2含量的异常升高。

AQP2、HSP70在痛风湿热蕴结证模型中表达的意义

目的采用多因素复合的造模方法,先建立湿热模型,采用改良Coderre[1]法痛风造模,以复制痛风湿热蕴结证病证结合动物模型[2],探明水通道蛋白-2(AQP2)、热休克蛋白70(HSP70)在痛风湿热蕴结证中表达的意义,为模型建立指标评估及临床药物疗效判定指标做进一步实验验证。方法实验对象为SPF级雄性SD大鼠,将40只大鼠按随机数字表分为4组,分别为正常对照组、痛风模型组、湿热模型组、痛风湿热模型组,每组10只。对各组分别造模(方法详见正文造模部分),造模期间观察大鼠外观、精神状态、食饮量、体质量变化等一般情况,测定受试踝关节炎症指数、造模72 h各组大鼠的步态情况、血尿酸、尿液AQP2、血浆HSP70等指标。结果4组模型尿液AQP2含量具有显著差异;与正常对照组比较,湿热模型组、痛风湿热模型组尿液AQP2明显升高(P<0.05;P<0.05);与痛风模型组对比,湿热模型组、痛风湿热模型组尿液AQP2明显升高(P<0.05;P<0.05)。四组模型尿液HSP70含量具有显著差异;与正常对照组比较,湿热模型组、痛风湿热模型组血浆HSP70明显升高(P<0.05;P<0.05);与痛风模型组对比,湿热模型组、痛风湿热模型组血浆HSP70明显升高(P<0.05;P<0.05)。结论通过多因素(饮食+气候环境+致病因子+局部用药+全身用药)复合造模方法可以复制出痛风湿热蕴结证病证结合模型,而且AQP2、HSP70两个指标在判断痛风湿热蕴结证型时有着重要作用,AQP2和HSP70含量变化可作为痛风湿热蕴结证模型建立成功与否的评价参考指标。

大黄酚对LoVo细胞AQP2表达的调节效应

目的:探讨大黄酚对体外培养LoVo细胞AQP2表达的调节效应.方法:体外培养LoVo细胞,随机分为对照组,大黄酚10,20,40mg/L不同浓度组.间接免疫荧光定性LoVo细胞AQP2表达,WesternBlot、半定量RT-PCR检测药物处理24h后AQP2蛋白及mRNA表达.体外培养LoVo细胞后,随机又将细胞分为对照组,大黄酚40mg/L组,PKA激动剂8-Bromo-cAMP10mg/L组,大黄酚40mg/L+PKA激动剂8-Bro-mo-cAMP10mg/L组.非放射性法检测药物处理24h后LoVo细胞PKA的活性水平.结果:AQP2表达于LoVo细胞膜,药物处理24h后,大黄酚20,40mg/L组AQP2蛋白分别为(0.64±0.08),(0.46±0.09)显著低于对照组(0.83±0.05),(P<0.01);AQP2mRNA分别为(0.50±0.12),(0.39±0.09),显著低于对照组(0.73±0.08),(P<0.01).40mg/L大黄酚组PKA活性(0.54±0.08)显著低于对照组(0.78±0.10),(P<0.05).结论:大黄酚可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译.大黄酚对AQP2表达的调节效应可能与大黄泻下作用有关,其可能是通过PKA信号通路调节AQP2的表达.

水孔蛋白2(AQP2)在SHR和WKY大鼠肾脏的不同表达

目的 本研究旨在探讨SHR和WKY大鼠肾脏中 ,AQP2mRNA是否存在差异表达及其和精氨酸加压素 (AVP)的关系。方法 成年SHR和WKY大鼠各 9只 ,12周龄 ,体重 2 0 0～ 3 0 0g。断头取血 ,放免法测定血浆AVP含量。取肾脏近髓组织 10 0mg ,RT PCR法检测大鼠肾脏AQP2mRNA的表达量 ,数据以 x±s表示。结果 SHR肾脏AQP2mRNA表达水平显著高于WKY( 0 80 1± 0 0 8vs 0 5 71± 0 0 6,P <0 0 5 ) ,SHR血浆中AVP的浓度显著高于WKY( 90± 17 83vs60 82± 12 5 9) pg/mL。结论 SHR肾脏AQP2mRNA表达量上调 ,可能在SHR高血压的发生发展中发挥着一定的作用 。

真武汤和越婢汤对阿霉素肾病大鼠AQP1/AQP2的影响

目的:分别观察真武汤、越婢汤对阿霉素肾病大鼠肾组织AQP1、AQP2表达的影响,以探讨中医不同利水法的作用机制及差异。方法:选用雄性SD大鼠48只按随机数字表法分为空白组、模型组、真武组及越婢组,采用尾静脉注射阿霉素建立肾病模型,药物灌胃6周后生化检测各组大鼠24 h尿蛋白定量、肝功(ALB,ALT)、肾功(Scr,BUN)及血脂(CHOL,TG)等,HE染色观察大鼠肾脏病理,免疫组化检测肾组织AQP1、AQP2表达。结果:与模型组比较中药2组24 h尿蛋白定量、血脂均明显下降,白蛋白升高,肾脏病理均明显改善,肾组织AQP1、AQP2表达均明显升高,但中药2组比较差异无统计学意义。结论:真武汤和越婢汤均可上调阿霉素肾病大鼠肾组织AQP1、AQP2的表达,改善上述生化指标,减轻肾脏病理损害,但中药2组之间比较差异无统计学意义。

下瘀血汤调控AQP2表达改善SHR肾小管损伤实验研究

目的:观察下瘀血汤对自发性高血压大鼠(SHR)肾小管水通道蛋白2(AQP2)表达的影响。方法:采用14周龄SPF级雄性SHR 32只,按照血压随机分为:模型组(M)、阳性药组(Y)、中药组(Z),中药高剂量加阳性药组(H),每组各8只,另设Wistar-Kyoto(WKY)大鼠8只为正常对照组(N),连续干预治疗8周。分别于0周、2周、4周、6周及8周检测大鼠尾动脉血压。8周后代谢笼收集24 h尿液,记录尿量,检测尿液渗透压,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测尿液中AQP2水平。实验结束后麻醉处死大鼠,留取肾组织标本,HE染色观察肾脏病理变化情况,免疫组化技术检测肾组织AQP2表达情况。结果:(1)模型组大鼠尾动脉舒张压明显升高(P<0.01),中药组可能对血压有积极影响;(2)与正常组比较,模型组大鼠8周时24 h尿量减少(P<0.05),尿液及肾组织AQP2蛋白表达升高(P<0.01),肾组织病理损伤明显。与模型组比较,8周时中药组、中药高剂量加阳性药组24 h尿量增加(P<0.05,P<0.01),各治疗组尿渗透压下降(P<0.05,P<0.01),各治疗组尿液AQP2表达下调(P<0.01),中药组肾组织AQP2平均光密度值下降(P<0.05),各治疗组病理损伤均有不同程度改善。结论:下瘀血汤肾保护作用可能与调控AQP2表达相关。

饲喂羊肉和鸭肉对大鼠结肠AQP2表达的影响

目的:为研究饲喂羊肉和鸭肉对大鼠结肠水通道蛋白2(AQP2)mRNA转录及其蛋白表达水平的影响。方法:将90只3周龄雄性SD大鼠随机均分成3组,分别饲喂豆粕饲料(对照组)、羊肉饲料和鸭肉饲料。饲喂14d和28d对大鼠血清抗利尿激素(AVP)、AQP2mRNA、AQP2蛋白表达及Na+-K+-ATP酶活性进行检测。结果:饲喂羊肉使大鼠的Na+-K+-ATP酶活性、AVP水平、结肠AQP2蛋白表达及其基因转录水平都升高,而饲喂鸭肉使上述指标降低。除结肠AQP2蛋白外,羊肉组和鸭肉组相比,差异显著(P<0.05)。3个实验组大鼠的体质量差异显著,显著顺序为鸭肉组>羊肉组>豆粕组。结论:饲喂羊肉和鸭肉对大鼠结肠AQP2蛋白表达及其基因转录水平具有不同影响,饲喂羊肉使其上调,而饲喂鸭肉使其下调。因此,饲喂羊肉使机体向外利水的生理作用受限,而饲喂鸭肉使机体向外利水的生理作用增强。

不同输血输液方案对失血性休克大鼠肾功能及AQP2,BSC1的影响

目的利用重度失血性休克大鼠模型,探讨不同输血输液方案对肾脏病理、肾功能、水通道蛋白-2(aquaporins-2water channel,AQP2),Na+-2Cl--K+协同转运蛋白-1(Na+-2Cl--K+co-transporter-1,BSC1)影响的差异及相关机制。方法 24只鼠随机分为C组(对照组)、LR组(血液与乳酸钠林格按1∶2稀释后,回输2/3)和HES组(血液与羟乙基淀粉按1∶2稀释后,回输2/3),每组8只,C组仅行股动静脉插管,其余两组经股动脉放血35%,使平均动脉压低于40mmHg达60min,建立大鼠急性失血性休克模型后,按方案输血输液后,缝合苏醒。24h后再次麻醉取材观察肾组织的病理学变化,并测定血清中肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)含量,采集并记录尿量,检测尿比重,采用免疫组织化学及Western blot法分别对肾组织AQP2、BSC1进行定性和定量分析。结果与C组比较:1两组尿量增加,尿比重降低,组间无明显差异。2两组血清BUN、Cr水平均显著增加,两组间无差异。3两组肾组织病理损伤分级显著升高,两组间无差异。4Western blot及免疫组织化学结果显示,两组BSC1、AQP2蛋白表达表达均下调,HES组表达高于LR组。结论急性重度失血性休克能够引起肾脏损伤,与BSC1,AQP2蛋白的下调相关。血液与羟乙基淀粉1∶2混合输注的方案,对肾脏的保护作用优于血液与林格液方案,并可显著降低BSC1,AQP2蛋白的改变。

AQP2基因突变所致先天性肾性尿崩症1例并文献复习

目的对1例先天性肾性尿崩症患者进行临床及基因分析。方法对1例自婴儿期出现多饮、多尿症状的患者进行临床和实验室检查,并采集患者及其父母、哥哥的外周血,提取基因组DNA,用PCR扩增血管加压素2受体(AVPR2)及水通道蛋白-2(AQP2)基因的全部编码区,并进行直接测序。结果患者自婴儿期开始出现脱水症状,9岁确诊为肾性尿崩症时伴发了肾功能不全、身材矮小、智力低下症状。基因检测发现患者AQP2基因存在c.211G>A(p.V71M)纯合子突变。结论先天性肾性尿崩症早期诊断困难,基因检测有助于早期明确诊断。

阿魏酸钠治疗肾病综合征的疗效及对患者尿液AQP2的影响观察

目的探讨阿魏酸钠治疗原发性肾病综合征的临床疗效以及对患者尿液水通道蛋白(AQP2)的影响。方法将43例患者随机分为观察组和对照组,观察组采用常规疗法配合阿魏酸钠治疗,对照组采用常规疗法治疗,比较2组治疗前后尿液AQP2、24 h尿蛋白定量、血浆白蛋白及肾功能等指标的变化。结果治疗后观察组临床疗效优于对照组(P<0.05)。结论阿魏酸钠治疗肾病综合征疗效确切,能显著减少患者尿蛋白、改善患者肾功能,并可有效降低患者肾脏AQP2蛋白表达水平,改善患者水潴留状况。

电针干预豚鼠膜迷路积水的参数优选及其对耳蜗AQP2表达的影响

[目的]观察不同频率电针对豚鼠膜迷路积水的干预情况,以期优选出电针治疗膜迷路积水的适宜治疗参数,并初步探讨电针治疗梅尼埃病的可能机制。[方法]健康雄性豚鼠48只,采用完全随机法分为空白组、模型组、假电针组、电针组(据不同频率分为3个亚组),每组8只。除空白组外,其余各组均通过腹腔注射醋酸去氨加压素的方法建立膜迷路积水模型。空白组不进行干预;模型组造模后仅采取与各治疗组动物相同的固定方式,不行其他干预;电针组中各个亚组,取"百会"和左侧"听宫"穴,分别以2、15、100Hz 3种不同频率进行电针治疗,1次/d,输出电流1mA,留针20min;假电针组予针刺"百会"和左侧"听宫"穴,但不通电,其余处理同电针组,均连续治疗10d。干预结束后,采用听觉脑干诱发电位仪检测各组豚鼠听性脑干反射(auditory brairstem response,ABR)反应阈值,HE染色检测耳蜗积水程度,并通过公式蜗管横截面积/(蜗管横截面积+前庭阶横截面积)计算出比值(R值),免疫组化染色法检测耳蜗水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达情况。[结果]各组豚鼠ABR反应阈值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组豚鼠耳蜗R值增加(P<0.01);与模型组比较,各治疗组豚鼠耳蜗R值均降低(P<0.01,P<0.05);与假电针组比较,100Hz电针组R值降低(P<0.01),2、15Hz电针组R值均较假电针组降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。各电针组组间比较,100Hz电针组R值较2、15Hz电针组降低,差异有统计学意义(均P<0.05);2、15Hz电针组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组豚鼠耳蜗AQP2表达增强(P<0.01);与模型组比较,各治疗组豚鼠耳蜗AQP2表达减弱(P<0.01,P<0.05);各治疗组间比较AQP2表达差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]假电针及电针治疗均能减轻豚鼠膜迷路积水,其中100Hz电针效果最佳,其作用机制可能与下调耳蜗AQP2的表达有关。

姜黄素体外调控AQP2表达抑制MDCK囊泡生成的实验研究

目的:观察姜黄素(curcumin)体外通过调控AQP2表达对囊泡生成的抑制作用。方法:应用正常或过表达AQP2的MDCK囊泡模型,给予10μM的姜黄素,统计囊泡的数目与囊泡的直径,研究姜黄素对囊泡形成与生长的影响,并用Western法检测姜黄素对过表达AQP2的MDCK细胞内AQP2表达的影响。结果:过表达AQP2能够促进囊泡的生成,姜黄素能够下调AQP2的表达,姜黄素显著抑制囊泡的形成与生长,并能部分逆转AQP2促囊泡生成作用。结论:姜黄素体外抑制MDCK囊泡的生成,其机制除与MAPK信号通路、m-TOR信号通路相关外,可能还与其对AQP2的作用相关。

水通道蛋白AQP2在原发性肝细胞肝癌多柔比星耐药机制中的作用研究

目的探索原发性肝细胞肝癌(HCC)多柔比星(doxorubicin,DOX)耐药的机制,为进一步提高HCC患者介入治疗的疗效提供前期探索。方法应用Western blotting方法检测DOX处理后的上皮间质化转变(EMT)的相关蛋白E-Cadherin和Vimentin表达情况,使用流式细胞仪观察细胞干性标记CD133的变化情况,使用基因芯片技术观察DOX处理后的细胞机制变化。结果 DOX能诱导HCC细胞发生上皮间质化转变,并且能提升HCC细胞CD133的比例(3.5%vs 35.5%,P<0.05);基因芯片提示HCC细胞内水通道蛋白AQP2基因显著上调;敲降AQP2基因后,能显著减弱DOX诱导HCC细胞产生EMT的效果。结论水通道蛋白AQP2在肝细胞肝癌多柔比星耐药机制中具有重要作用,降低AQP2的表达可以减弱多柔比星诱导肝癌细胞上皮间质化转变的效果。

PIM-3激酶通过与AQP2作用调节肾脏水代谢的机制研究

目的:研究HK-2细胞中PIM-3激酶与AQP2相互作用调节肾脏水代谢的作用机制。方法:免疫荧光检测PIM-3激酶表达水平;过表达和沉默PIM-3激酶,观察细胞增殖、凋亡及迁移率变化;Western blot检测AQP2、p-AQP2以及细胞凋亡因子表达水平。结果:PIM-3激酶在HK-2细胞中大量表达;PIM-3激酶过表达后,HK-2细胞增殖能力和迁移率提高(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.05);同时伴随p-AQP2表达明显上调(P<0.01),而促凋亡因子Bax、Cleaved Caspase-3表达明显下降(P<0.05);沉默PIM-3激酶结果完全相反。结论:PIM-3激酶在HK-2细胞中表达,其可能通过促进AQP2蛋白的磷酸化影响HK-2细胞的活性、迁移等生物学特征,从而改善肾脏水代谢失衡,为肾性水肿的治疗提供新的分子机制和治疗靶点。