BRE-AS启动子负调控区变异与启动子活性、母猪繁殖力的关系

[目的]本试验旨在研究BRE反义lncRNA(BRE antisense lncRNA,BRE-AS)基因启动子负调控区(PNRR)序列特征,以及变异位点多态性与母猪繁殖性状、启动子活性的关系。[方法]采用DNA测序法获得大白猪BRE-AS基因PNRR序列;利用池DNA测序筛选大白猪BRE-AS基因PNRR上的变异位点,DNA测序法进行基因分型;利用GLM模型进行变异位点多态性、单倍型与母猪繁殖性状的关联分析;利用荧光素酶报告系统分析变异对BRE-AS基因启动子活性的影响。[结果]大白猪BRE-AS基因的PNRR位于-952~-161 nt,长度792 bp。在大白猪BRE-AS基因PNRR的-794和-756 nt处发现了2个变异位点,分别将其命名为g.-794T>G和g.-756A>C。在大白猪群体中BRE-AS基因g.-794T>G位点有3种基因型,其中TT型为优势基因型(0.752),T为优势等位基因(0.863);在g.-756A>C位点有3种基因型,其中AA型为优势基因型(0.759),A为优势等位基因(0.868);2个变异位点形成3种合并基因型,其中TT/AA型为优势基因型(0.760),T-A为优势单倍型(0.869)。关联分析发现2个位点及其合并基因型均与母猪总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)和健仔数(NSP)等3个繁殖性状间显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)关联。荧光素酶活性分析发现G-C单倍型启动子活性极显著高于T-A单倍型(P<0.01)。[结论]BRE-AS是大白猪繁殖性状的候选基因,其PNRR上2个变异位点(g.-794T>G和g.-756A>C)通过影响启动子活性影响其母猪繁殖力。

野生热带灵芝Ganoderma tropicum(Jungh.) Bres.菌种分离与驯化研究

以新鲜的野生热带灵芝子实体为材料,经过表面消毒后,分别接种到米饭培养基、CA培养基和PDA培养基上.结果表明,在这3种供试培养基上均能获得纯化的菌丝体.米饭培养基上的菌丝体的生长速度最快;其次为PDA培养基;CA培养基的菌丝体生长最慢.对子实体、担孢子和菌丝体的形态特征进行了系统的形态学观察,证实所分离和驯化的菌种为热带灵芝[Ganoderma tropicum(Jungh.) Bres.].用木屑作为主要原料制备培养料对热带灵芝进行了驯化栽培,实验结果表明,冬季较低温条件下形成的子实体多为鹿角状畸形芝;而在2月份中旬以后较高温度下形成的子实体多为正常的掌状子实体.笔者据此认为,在海口地区,热带灵芝宜在春末至秋末气温较高的季节栽培.

LncRNA BRE-AS1在急性心肌梗死患者血清中表达及对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探究lncRNA BRE-AS1在急性心肌梗死(AMI)患者血清中表达和对缺氧/复氧(H/R)诱导心肌细胞AC16损伤的影响。方法QPCR检测AMI患者血清和H/R处理12 h、24 h、48 h后AC16细胞中lncRNA BRE-AS1表达;将lncRNA BRE-AS1 siRNA和对照siRNA转染至AC16细胞中,qPCR检测检测转染后细胞中lncRNA BRE-AS1表达;利用试剂盒检测细胞中氧化应激指标MDA、SOD和GSH-PX含量,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中p38/MAPK信号通路蛋白表达。结果与健康志愿者和常氧组AC16细胞相比,AMI患者血清和H/R处理12 h、24 h、48 h后细胞中lncRNA BRE-AS1表达显著增加(P<0.01)。与沉默对照组比较,沉默BRE-AS1组AC16细胞中lncRNA BRE-AS1表达显著降低(P<0.01)。与常氧组比较,H/R组AC16细胞中MDA含量、细胞凋亡率、p38/MAPK信号通路蛋白p-p38、p-ERK1/2表达显著增加,SOD和GSH-PX含量及细胞增殖能力显著降低(P<0.01);与H/R+沉默对照组比较,H/R+沉默BRE-AS1组AC16细胞中MDA含量、细胞凋亡率、p38/MAPK信号通路蛋白p-p38、p-ERK1/2表达显著降低,SOD和GSH-PX含量及细胞增殖能力显著增加(P<0.01)。结论LncRNA BRE-AS1在AMI患者血清中高表达,沉默lncRNA BRE-AS1能够抑制H/R诱导的心肌细胞损伤,其机制可能与抑制p38/MAPK信号通路有关。

长链非编码RNA BRE-AS1慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的构建长链非编码RNA BRE-AS1的慢病毒表达载体。方法利用重叠延伸PCR法构建出BRE-AS1的全长目的片段,将全长目的片段及慢病毒载体质粒pCDH-CMV-MCSEF1分别双酶切后进行连接,转化到感受态大肠杆菌后,通过DNA测序鉴定筛选出阳性菌落,提取目的质粒。利用目的质粒制备包装慢病毒,并感染肾细胞癌细胞系OS-RC-2,分别利用荧光显微镜和荧光实时定量PCR检测细胞中BRE-AS1是否过表达。结果重叠延伸PCR得到正确的BRE-AS1全长序列,经过双酶切、连接、转化、筛选及DNA测序,成功构建重组慢病毒载体质粒pCDHBRE-AS1。通过荧光显微镜检测,几乎所有经过嘌呤霉素筛选的OS-RC-2细胞均具有绿色荧光,显示其被重组慢病毒感染;荧光实时定量PCR显示,感染了pCDH-BRE-AS1慢病毒的OS-RC-2细胞中,BRE-AS1的表达水平上升了38.5倍。EdU插入实验显示BRE-AS1抑制肾癌细胞的增殖。结论本研究成功构建了BRE-AS1的慢病毒表达载体,并证明BRE-AS1能抑制肾癌细胞增殖。

Cry1Ac敏感和抗性小菜蛾bre-3和bre-5基因mRNA的表达差异研究

在室内选用Cry1Ac对小菜蛾Plutella xylostella 3龄幼虫进行抗性选育,获得相对抗性为356倍的抗性种群DBM1Ac-R品系。应用实时定量基因扩增荧光检测(real time quantitative PCR,real-time qPCR)技术检测敏感小菜蛾DBM1Ac-S和抗性小菜蛾DBM1Ac-R品系鞘糖脂(Glycosphingolipids,GSLs)合成酶基因bre-3和bre-5 mRNA在2龄、3龄、4龄和老熟幼虫、蛹及4龄中肠的表达情况。结果显示:bre-3和bre-5在两个品系的5个时期和4龄中肠均有表达,其中DBM1Ac-S品系的bre-3 mRNA在3龄、4龄和老熟幼虫的相对表达量显著高于DBM1Ac-R品系(P<0.05),分别为DBM1Ac-R品系的2.36、5.54和2.68倍;DBM1Ac-S品系的bre-5 mRNA在2龄至蛹期的相对表达量分别为DBM1Ac-R品系的1.19、3.13、1.78、1.75和1.65倍,其中由3龄到蛹期差异显著(P<0.05)。DBM1Ac-R品系3龄至老熟幼虫的bre-3和bre-5 mRNA相对表达量降低可能与小菜蛾长期的Cry1Ac汰选有一定的关系。比较同一种群、同一龄期(包括4龄中肠)的bre-3和bre-5 mRNA相对表达量差异时,发现bre-5相对表达量均高于bre-3。研究结果为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白受体之一GSLs的进一步研究提供了一定的基础。

高速铁路桥梁施工中的裂缝成因及抗裂措施研究

裂缝是高速铁路桥梁施工中常见的质量问题,严重影响着桥梁的结构性能和使用寿命。为减少高速铁路桥梁施工过程中裂缝出现的概率,提高桥梁结构的抗裂性能,文章从设计、混凝土收缩、荷载等方面对桥梁混凝土结构裂缝的成因进行了分析,并研究了纤维对混凝土抗裂性的影响,发现通过添加纤维,能明显减少混凝土裂缝的数量,提高抗裂能力,且混凝土加入不同类型的纤维时,抗裂效果存在明显差异,其中效果最好的为改性聚丙烯纤维。通过在混凝土中加入纤维,能减小混凝土的塑性收缩应力,延迟塑性收缩应力峰值出现的时间。

保乳手术与改良根治术治疗早期乳腺癌患者的临床效果比较

目的 比较保乳手术与改良根治术治疗早期乳腺癌患者的临床效果。方法 选取兰陵县人民医院2021年1月至2023年1月收治的46例早期乳腺癌患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各23例。对照组采用改良根治术治疗,观察组采用保乳手术治疗。比较两组手术相关指标、并发症发生情况及术后生活质量。结果 观察组手术持续时间、住院时间、切口长度短于对照组,术中出血量少于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。观察组并发症总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。观察组健康调查量表36各项评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 早期乳腺癌患者采用保乳手术及改良根治术治疗均可获得一定效果,但保乳手术创伤更小,术后并发症更少,手术相关指标更优。

抗凋亡蛋白BRE、TNFR1和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达及Reversine对其的影响

目的研究抗凋亡蛋白BRE、TNFR1蛋白和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达,并观察Reversine对其表达的影响。方法 24只昆明小鼠随机分为6组:第1组不作任何处理;第2组皮下注射0.1 mLCCl4/oil2,4 h后处死取肝组织;第3组皮下注射0.1 mL CCl4/oil4,8 h后处死;第4组皮下注射0.1 mL CCl4/oil,每周2次,连续注射6周,停止用药后15 d处死;第56、组方法同第4组,停止注射CCl4后分别用Reversine 501、00mg/(kg.d)皮下注射15 d,15 d后进行免疫组织化学检测,对BRE、TNFR1和Beclin1 3种蛋白的表达进行分析。结果免疫组化结果发现BRE、TNFR1和Beclin1 3种蛋白在CCl4诱肝纤维化过程中的表达明显上升,而经过纤维化抑制剂Reversine的处理后3种蛋白的表达下降至正常小鼠肝的水平。结论 BRE、TNFR1和Beclin1 3种应激反应分子可能在肝纤维化与肝炎发病中起重要作用,它们有可能成为肝病诊断标志物和治疗肝脏疾病的重要靶点。

神经管过表达BRE基因促进体节形成和分化

目的探讨BRE基因对鸡胚胎早期体节发育的作用。方法显微注射法将含有BRE基因的质粒注射入HH10期鸡胚神经管,活体胚胎细胞电穿孔方法转染半侧神经管,以另一侧为正常对照侧,原位杂交及免疫荧光法观察过表达BRE基因后体节的发育。结果 BRE基因在鸡胚表达始于神经板,而后高表达在脑泡、神经管及体节。过表达BRE基因后,神经管形态及PAX7和FGF8表达与对照侧相比无明显异常,而实验侧体节PAX7标记发现生皮肌节较大,FGF8表达与对照侧相比无明显异常。结论过表达BRE基因对体节的形成和分化有促进作用,其机制可能与PAX7相关。

lncRNA BRE-AS1调控Wnt/β-catenin信号通路影响宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭和凋亡的实验研究

目的:探讨lncRNA BRE-AS1对宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测人子宫颈上皮永生化细胞系H8和宫颈癌细胞系SiHa中lncRNA BRE-AS1的表达水平。将对数生长期的SiHa细胞分为未转染组(正常培养)、阴性对照组(转染空载体)和lncRNA BRE-AS1组(转染lncRNA BRE-AS1表达载体),采用实时荧光定量PCR检测各细胞中lncRNA BRE-AS1的表达水平,噻唑蓝法检测细胞增殖能力,平板克隆实验细胞克隆形成能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,免疫印迹法检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和c-Myc的表达。结果:与人子宫颈上皮永生化细胞系H8相比,宫颈癌细胞系SiHa中lncRNA BRE-AS1的表达水平明显降低(P<0.01)。与未转染组相比,lncRNA BRE-AS1组细胞中lncRNA BRE-AS1的表达水平和细胞凋亡率明显升高,且细胞增殖活力、克隆形成率、穿膜细胞数和细胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、MMP-2蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);而阴性对照组和未转染组相比,上述指标均未见明显改变(P>0.05)。结论:lncRNA BRE-AS1可抑制宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

抗黄矮病小麦新品系YW243的选育和细胞分子生物学鉴定

以小麦 -中间偃麦草二体异附加系 L1的衍生系 PP9- 1为黄矮病抗源 ,从 [( PP9- 1/陕 7859/ /丰抗 8号 ) F1× ( 3×丰抗 13号 / Khapli) F4 ]杂交组合 F2 代花药培养再生植株中选育出一个抗黄矮病小麦新品系 YW2 4 3。经黄矮病毒田间接种鉴定 ,细胞学分析 ,GISH和 RFL P分子标记检测 ,结果表明 :该系高抗黄矮病毒 GPV、 GAV株系 ,体细胞染色体数目为 2 n=4 2 ,花粉母细胞减数分裂中期 染色体构型为 2 n=2 1 ,遗传上稳定 ,是小麦 -中间偃麦草 7DS· 7DL- 7XL易位系 ,易位发生在 7DL的端部 ,携有一对来自中间偃麦草的 BYDV抗性基因。中国农科院植保所鉴定结果同时表明 :YW2 4 3兼抗小麦黄矮病、白粉病、条锈病、秆锈病和叶锈病等 5种病害 ,是一个优良多抗材料。

洞庭湖区41个平垸行洪退田还湖堤垸钉螺扩散调查

目的 查明平垸行洪、退田还湖(双退)堤垸钉螺扩散情况并了解其规律。方法 对4 1个双退废弃堤垸采取系统抽样结合环境抽查法设线设框进行现场调查。结果 4 1个平退垸中,发现9个垸内有钉螺分布,钉螺分布面积10 79.74 hm2 ,较平退前2 10 .34hm2 增加了86 9.4 hm2 ,为平退前的5 .13倍;受长江水系影响的平退废垸钉螺扩散速度快,省内入湖水系平退废垸尚未发现钉螺扩散。结论 洞庭湖区部分平垸行洪、退田还湖堤垸钉螺正在以较快的速度扩散。

树头发提取物抑菌作用研究

用树头发(pterula umbrinella Bres.)的乙醇水溶液提取物对三种细菌、两种酵母菌和两种霉菌进行抑菌研究。结果表明,树头发提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、赤酵母、黑曲霉和桔青霉等都有抑制作用,对上述供试菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.5%、0.5%、1.0%、3.0%、3.0%、2.5%、2.5%;热处理对提取物的抑菌效果无影响。

藏雪鸡的人工饲养与繁殖初报

报道了原产地为西藏自治区白朗县马乡地区 (海拔 4 50 0m以上 )的藏雪鸡 (Tetraogallustibetanus)在人工条件下 (在拉萨市区海拔 36 50m)为期 4年的饲养繁殖情况 。

浸虫法测定5种农药对甘蓝蚜的室内毒力

通过采用浸虫法,对甘蓝蚜室内毒力测定结果表明,阿维菌素、吡虫啉、毒死蜱、苏云菌.薄荷10%乳油和苏云菌.薄荷3%乳油,处理24h后LD50分别为0.962 1、2.103 6、9.442 1、996.397和2 283.659 2;处理48h后LD50分别为0.005 1、0.018 3、0.274 9、86.465 1和91.725 6;处理72h后LD50分别0.000 3、0.001 3、0.024 6、0.741 0和24.804 4。

高压功率LDMOS的场极板击穿电压分析

提高 LDMOS的一个关键步骤是加场极板以降低其表面击穿电压。文中分析了加场极板后的 LDMOS击穿电压模式 ,指出了场极板的分压作用和场极板边界的影响 。

锡林刺辊速比与生条质量关系的试验探讨

探讨梳棉机锡林刺辊速比对生条质量的影响。采用切断称重法和Uster AFIS单纤维测试仪对不同速比条件下所加工的生条进行了伸直度、棉结、杂质、长度及短绒的检测,结果显示:锡林与刺辊速比为1.19时较有利于生条中纤维的伸直;锡林与刺辊的速比为1.79和1.98时,较有利于棉结和杂质的去除;锡林与刺辊速比为2.55时,较有利于短绒的减少;在确保纤维正常分梳和转移的条件下,适当提高速比有利于产品质量的提高。总体上锡林与刺辊速比为1.79和1.98时,有利于生条质量的改善。

静态图像编码研究进展

多媒体及 Internet的迅速发展导致了对图像编码技术更高的要求 .首先以波形编码、第二代编码技术和分形编码技术为线索对静态图像编码技术的发展及编码技术中所存在的一些问题进行了讨论 ,并从图像编解码的观点讨论了图像在有噪信道上传输的误码率情况和适应于网上传输的一些图像编码技术 ;同时对即将成为新的静态图像编码标准的 JPEG- 2 0 0 0的目标、编码机制、ROI编码的 Maxshift方法以及对码流的直接操作等情况进行了讨论 .尽管压缩效果一直是任何编码方案所追求的目标 ,但其它特性 ,像基于内容的编码、可分级性编码以及鲁棒性编码等也是选择一个好的编码方案时应该考虑的 ,据此最后对图像编码技术的发展方向进行了展望 .

转录因子ABP9基因过表达对植物生长发育的影响分析

【研究目的】为分析玉米ABA/逆境响应转录因子ABP9基因过量表达对植物生长发育的影响以利用该基因开展抗逆分子育种。【方法】本研究构建了35S启动子驱动ABP9组成型表达的植物表达载体,获得了过表达ABP9基因的拟南芥转基因株系,并在正常生长条件下,比较了转基因植株和野生型在种子萌发、营养生长和生殖生长阶段的形态和生理变化,分析了可能的分子机制。【结果】结果表明,正常生长条件下,转基因植株与野生型相比表现出萌发,幼苗生长以及开花阶段的生长抑制;气孔开度减小,叶片内源ABA含量降低;ABA信号传导基因表达增强,而ABA合成基因表达降低;而且这些效应在ABP9基因表达相对较强的转基因株系中表现更明显。【结论】说明ABP9基因过量在正常生长条件下即诱导转基因植株产生耐逆反应,抑制植株的生长发育。因此,在利用ABP9基因进行转基因抗逆育种时须考虑控制ABP9基因适时适量表达。

树头发的成分分析

采用反相高效液相色谱法、蒽酮比色法分别对树头发的氨基酸、水溶性维生素、可溶性糖等成分进行分析。结果表明,除色氨酸被水解破坏而未检出外,树头发蛋白中含有16种氨基酸,9种必需氨基酸,其氨基酸的总含量达179.652μg/mg,总必需氨基酸含量为63.546μg/mg,必需氨基酸含量占总含量的35.37%;树头发中可溶性糖含量为2.93%,粗纤维含量为7.55%,维生素的含量:维生素C1.484mg/g,烟酸1.096mg/g,维生素B10.586mg/g,维生素B20.096mg/g.