C2神经酰胺对帕金森病模型鼠多巴胺能神经元的保护作用

背景:C2神经酰胺可减少Alpha突触核蛋白(Alpha-Synuclein,α-Syn)寡聚体的形成,其作为蛋白磷酸酶2A激动剂在中枢神经系统对细胞老化具有重要调节作用。目的:探究C2神经酰胺对多巴胺能神经元的保护作用机制。方法:将25只C57BL/6系小鼠随机分为对照组、模型组及C2神经酰胺低、中、高剂量组,每组5只。除对照组之外,其他各组均通过左侧纹状体注射突变型A53Tα-Syn寡聚体建立帕金森病小鼠模型,在纹状体注射第30天后,3个C2神经酰胺各剂量组小鼠一次性经胃灌注溶于生理盐水中的各剂量C2神经酰胺(1,5,10μg/g),对照组及模型组同法灌注等量生理盐水,于造模后第30-90天,连续每天给药,共60 d,期间观察各组小鼠行为学变化。在纹状体注射第90天后,在适度麻醉条件下对各组小鼠灌注取脑,以免疫组织化学染色分析小鼠中脑黑质多巴胺能神经元的变化,以ELISA法检测小鼠中脑α-Syn寡聚化和磷酸化水平,并分析影响α-Syn磷酸化的相关酶活性变化。结果与结论:①C2神经酰胺对经纹状体注射的突变型A53Tα-Syn寡聚体所导致的小鼠帕金森病样运动障碍具有改善作用,且C2神经酰胺高剂量组对帕金森病模型鼠运动障碍的改善作用更为明显(P<0.01);②突变型A53Tα-Syn寡聚体致使小鼠中脑黑质多巴胺能神经元数目明显减少(P<0.01),而C2神经酰胺高剂量组黑质多巴胺能神经元数目则明显增多(P<0.01);③与模型组相比,C2神经酰胺高剂量组小鼠中脑内α-Syn寡聚体和磷酸化α-Syn水平明显降低(P<0.01),而神经酰胺的水平增高(P<0.05),蛋白磷酸酶2A活力明显上调(P<0.01);④上述数据说明,C2神经酰胺可通过改善小鼠中脑组织α-Syn的磷酸化修饰环境,缓解了由寡聚的α-Syn所诱导的神经毒性作用,保护了小鼠中脑黑质多巴胺能神经元数量的减少,从而减轻帕金森病的运动障碍程度。

网络信息时代C2组织结构的六维模型

从一般性组织结构的创新思路及指挥与控制(commandandcontrol,C2)方法空间模型出发,以决策权的分配程度、横向协调程度、交互程度、C2单元的规模大小、C2单元的数量及关系影响强度6个维度来描述网络信息时代C2组织结构内中心与边缘C2单元之间的关系。通过构建C2组织结构的六维模型,厘清信息共享在组织横纵向间的共享,决策权在不同层级之中有效赋能与分发,该组织结构在应对网络信息时代下不确定的战时环境时与传统结构相比更具备决胜优势。

多域多尺度分布式C2模型框架及海上搜救应用分析

传统的应急响应及搜救行动的指挥控制(Command and Control,C2)活动以经典理论OODA环为指导。该模式可以快速、有效地指导救援现场的组织指挥活动。但当事件规模较大,响应层级较高时,该模式失去效用。论文针对以上问题,结合C2活动过程机理的尺度关联性,运用PREA环&OODA环理论,建立了多域多尺度分布式C2模型框架。该模型在不同尺度(层级)的C2活动采用不同的理论指导,完整地描述了搜救C2活动从宏观到微观的指挥决策过程。论文将该模型应用分析至海上搜救领域,指导海上搜救行动。海上搜救的应用分析表明,多域多尺度分布式C2模型框架对海上应急救援指挥体系建设具有现实指导意义。

腹腔镜下自体组织提拉法C2型子宫切除在早期宫颈癌治疗中的应用

目的探讨腹腔镜下自体组织提拉法C2型子宫切除在早期宫颈癌治疗中的安全性和有效性。方法回顾性分析2020年1月至2022年9月在安顺市人民医院妇科接受腹腔镜下自体组织提拉法C2型子宫切除术的43例早期宫颈癌患者的临床资料,记录手术时间、术中出血量、阴道切除长度、淋巴结切除数量、术中术后并发症、排气时间、住院时间、拔除尿管时间、术后病理情况、术后辅助治疗以及术后随访生存结局。结果43例患者中ⅠB1期15例,ⅠB2期15例,ⅡA1期13例;鳞癌37例,腺癌5例,腺鳞癌1例。手术时间为(186.28±23.40)min,术中出血量为(167.44±109.52)mL;术中发生输尿管损伤1例,术后发生淋巴漏2例。阴道切除长度为(3.08±0.41)cm,淋巴结切除数量为(26.98±10.48)枚,20例患者同时接受了腹主动脉旁淋巴结清扫术。术后随访截至2024年3月31日,1例患者于术后16个月复发,无死亡患者,累积总生存(OS)率为100.00%,累积无进展生存(PFS)率为97.06%。结论腹腔镜下自体组织提拉法C2型子宫切除术应用于早期宫颈癌的治疗,安全有效,简便易行,更好地遵从无瘤原则,肿瘤学预后较好,值得在临床推广应用。

颈椎退行性疾病患者后路椎管成形术前后动力位矢状面C7倾斜角、C2-C7 SVA和颈椎曲度变化及其意义

目的 观察颈椎退行性疾病患者后路椎管成形术前后动力位矢状面参数(C7倾斜角、C2-C7矢状面轴向距离和颈椎曲度)变化,分析术前颈椎动力位矢状面参数与颈椎后路椎管成形术治疗颈椎退行性疾病疗效的关系,为疗效预测提供新的参考指标。方法 纳入行颈椎后路椎管成形术并完成长期随访的颈椎退行性疾病患者44例,术前、术后3个月及末次随访时,对患者进行颈椎X线片检查,测量中立位及动力位的矢状面参数[C7倾斜角(C7S,C7 Slope)、C2-C7矢状面轴向距离(C2-C7 SVA)和颈椎曲度(CL,C2-C7 Cobb角)];对患者进行脊髓功能(JOA评分)、颈椎功能(NDI评分)评价。统计术后并发症(轴向症状、C5神经根麻痹、神经功能恶化)发生情况。根据颈椎X线片检查中测量的动力位矢状面参数值及手术前后变化值的中位数进行分组,将患者分为高值组与低值组。比较高值组与低值组手术后JOA评分、NDI评分。结果 与术前相比,末次随访时,颈椎中立位矢状面参数CL无明显变化,C2-C7 SVA数值与C4椎体前后径比值(r SVA)、C7S升高;颈椎动力位矢状面参数CL减低,r SVA、C7S升高。与术前比较,术后3个月及末次随访时,颈椎退行性疾病患者JOA评分升高,NDI评分降低(t分别为-8.124、-7.089,3.084、2.551,P均<0.05)。术后有22例(50%)患者出现轴性症状,有5例(11.36%)患者出现C5神经根麻痹症状。术前较小的过屈位CL、术前较大的过伸位CL、术前较小的过伸位r SVA、以及术后较大的过伸位CL和r SVA的患者,术后JOA评分更高,NDI评分更低(P均<0.05)。与术后未出现轴性症状的患者比较,出现轴性症状的患者术前中立位C7S、术前过伸位Cobb角及术前过伸位C7S均较小(P均<0.05)。结论 颈椎退行性疾病患者颈椎后路椎管成形术后颈椎动力位矢状面参数CL减低,r SVA、C7S升高;术前颈椎动力位矢状面参数与颈椎退行性疾病患者颈椎后路椎管成形术后脊髓功能、颈椎功能的恢复以及部分并发症的发生可能关。

SREBP2及PI3K/Akt/mTORC2在喉癌中的表达及相关性研究

目的探究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白C2(mTORC2)信号通路分子及人胆固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)分子在喉癌组织中的表达情况。方法选取本院2019年1月至2022年6月收治的原发性喉癌患者60例,取其肿瘤组织及癌旁组织样本,以免疫组织化学法测定PI3K、AKT、mTORC2及SREBP2表达情况并进行比较。结果肿瘤组织PI3K(88.3%vs.40.0%)、AKT(76.7%vs.31.7%)、mTORC2(78.3%vs.21.7%)、SERBP2(65.0%vs.8.3%)阳性表达率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。肿瘤直径大于或等于3 cm患者AKT、mTORC2、SERBP2阳性表达率高于肿瘤直径小于3 cm患者,差异均有统计学意义(P<0.05);临床分期Ⅲ~Ⅳ期患者AKT、SERBP2阳性表达率高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05);不同分化程度患者mTORC2、SERBP2阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。PI3K、AKT、mTORC2、SERBP2阳性表达患者2年生存率低于阴性表达患者,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论喉癌患者肿瘤组织中PI3K/AKT/mTORC2信号通路分子及SREBP2均呈高表达,与肿瘤直径、临床分期及分化程度有相关性,是潜在的喉癌靶向代谢重编程治疗的靶点。

敏捷C2组织生成及演进的度量与优化

指挥与控制(command and control,C2)组织敏捷性度量与优化是重要的研究领域。针对当前研究主要集中于组织设计方面导致范畴受限,以及方法本身不够系统全面的问题,提出从C2组织生成及演进角度开展相关研究,从而实现组织敏捷性的高效度量与优化。在对C2组织生成及演进、C2组织设计概念内涵进行辨析的基础上,分析了分层递阶视角下C2组织生成及演进的具体内容。分别分析了C2组织生成鲁棒性和演进适应性的作用原理、作用过程和具体分类。根据C2组织生成及演进的具体内容,分别进行生成鲁棒性和演进适应性的度量和优化。

缺氧条件下肺岩宁方抑制TC2N的表达对肺癌细胞培养基诱导的HUVEC细胞增殖、迁移侵袭和管腔形成的影响

目的探讨缺氧条件下肺岩宁方(FYN)对肺癌细胞培养基诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移侵袭和管腔形成的影响。方法使用不同浓度的肺岩宁方(200-6400μg·mL^(-1))处理HUVEC细胞,CCK-8法检测细胞存活率,计算其半数抑制浓度(IC_(50)),确定最佳干预浓度。使用A549细胞培养基在缺氧条件下诱导血管新生模型,将HUVEC细胞分为对照组(Control)、模型组(Model)、800μg·mL^(-1)肺岩宁方组(FYN)、100μg·mL^(-1)贝伐珠单抗组(Bevacizumab,阳性对照)、800μg·mL^(-1)肺岩宁方+慢病毒载体组(FYN+vector)、800μg·mL^(-1)肺岩宁方+TC2N过表达组(FYN+TC2N),每组设置6个复孔。分别检测细胞增殖、迁移与侵袭,管腔生成实验评价血管形成,qRT-qPCR检测HIF-1α、TC2N基因水平,Western blot法检测HIF-1α、TC2N、E-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达。结果肺岩宁方对HUVEC细胞的IC_(50)为893.00μg·mL^(-1);与对照组比较,模型组细胞存活率、细胞迁移与侵袭能力、管腔形成节点数、Vimentin、Snail、HIF-1α、TC2N基因及蛋白表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05);与模型组比较,肺岩宁方组与贝伐珠单抗组细胞存活率、细胞迁移与侵袭能力、管腔形成节点数、Vimentin、Snail、HIF-1α、TC2N基因及蛋白表达降低,E-cadherin表达升高(P<0.05);与肺岩宁方+慢病毒载体组比较,肺岩宁方+TC2N过表达组细胞存活率、细胞迁移与侵袭能力、管腔形成节点数、Vimentin、Snail、TC2N基因及蛋白表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05)。结论肺岩宁方可通过抑制TC2N的表达,抑制HUVEC细胞增殖、迁移、侵袭与血管生成。

梨小食心虫GmolNPC2的基因克隆、表达谱及配体结合特征

【目的】本研究旨在为深入研究梨小食心虫Grapholita molesta尼曼-匹克C2型蛋白(Niemann-Pick type C2 protein,NPC2)GmolNPC2的嗅觉感受功能提供理论参考。【方法】基于梨小食心虫触角转录组数据,利用RT-PCR扩增GmolNPC 2的cDNA全长序列,进行系统进化分析和3D结构模型预测;利用RT-qPCR检测GmolNPC 2在梨小食心虫不同发育阶段(卵、1-5龄幼虫、蛹和雌雄成虫)、3日龄雌雄成虫不同组织(触角、去除触角的头、胸、腹、足和翅)中的相对表达量;利用荧光竞争结合实验测定重组GmolNPC2蛋白对包括6种性信息素和38种寄主植物挥发化合物在内的44种气味配体的抑制常数K i值,分析结合能力;通过分子对接模拟实验计算GmolNPC2与不同气味配体的结合能,预测蛋白和配体相互作用的关键氨基酸残基。【结果】获得梨小食心虫GmolNPC 2(GenBanK登录号:OQ054801)的cDNA全长序列,开放阅读框(ORF)长438 bp,编码145个氨基酸;多序列比对发现GmolNPC2具有昆虫NPC2典型的结构特征;系统进化分析表明已知鳞翅目(Lepidoptera)昆虫的NPC2s聚类至2个分枝,GmolNPC2与大豆食心虫Leguminivora glycinivorella、红铃虫Pectinophora gossypiella和烟草天蛾Manduca sexta等的NPC2氨基酸序列一致性较高并聚类至同一分枝。RT-qPCR检测结果表明,GmolNPC 2在梨小食心虫雄成虫和卵中的表达量显著高于其他发育阶段的;GmolNPC 2在3日龄雌雄成虫翅中的表达量最高,在触角中的次之,在胸、腹和足中的最低。重组蛋白GmolNPC2的结合谱较窄,仅能够结合44种气味配体中的17种,对其中的乙酸-顺-8-十二碳烯酯、苯甲醇和乙酸-顺-3-己烯酯表现出强烈的结合能力,K i值分别为(4.117±0.046),(4.845±0.079)和(3.979±0.167)μmol/L。分子对接模拟结果显示,GmolNPC2与不同气味配体之间的结合能存在差异,与上述荧光结合实验的结果较一致。疏水性氨基酸残基和氢键在GmolNPC2结合不同气味配体中发挥着重要作用。【结论】GmolNPC2具有昆虫NPC2家族的保守结构,在卵和成虫以及成虫翅和触角中的表达量较高,推测其参与梨小食心虫的多种生理过程。重组蛋白GmolNPC2能够选择性地结合性信息素和寄主植物挥发化合物,表明GmolNPC2参与对挥发性信息物质的识别和运输。

叉头框蛋白C2、淋巴管内皮透明质酸受体-1的表达与皮肤鳞状细胞癌生物学特性的相关性

目的探讨叉头框蛋白C2(FoxC2)和淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)与皮肤鳞状细胞癌生物学特性的相关性。方法收集2013年10月至2021年1月在江苏大学附属医院收治的44例原发性皮肤鳞状细胞癌病人,采用免疫组织化学染色检测FoxC2、LYVE-1的表达情况,LYVE-1的表达情况用微淋巴管密度(MLVD)表示。结果FoxC2在皮肤鳞状细胞癌淋巴结转移组、中低分化组的高表达率[88.88%(8/9)、88.88%(16/18)]明显高于无淋巴结转移组、高分化组[42.85%(15/35)、26.92%(7/26)](均P<0.05)。LYVE-1在皮肤鳞状细胞癌淋巴结转移组、中低分化组的表达(13.31±6.23、14.28±4.42)明显高于无淋巴结转移组、高分化组(8.67±4.33、6.39±2.09)(均P<0.05)。FoxC2、LYVE-1的表达情况与病人的年龄、性别、肿瘤长径无关(均P>0.05)。FoxC2与LYVE-1的表达呈正相关(r=0.55,P<0.01)结论FoxC2及LYVE-1参与调控皮肤鳞状细胞癌生长及淋巴结转移,此结果为临床诊断及治疗皮肤鳞状细胞癌提供新的策略。

不同螺纹C2椎弓根拉力螺钉系统固定治疗枢椎环骨折的有限元分析

目的:比较半螺纹、双螺纹、全螺纹C2椎弓根拉力螺钉系统固定治疗枢椎环骨折的生物力学特性,为临床选择椎弓根螺钉提供参考.方法:获取1名28岁健康成年男性志愿者的C0~C3节段薄层CT扫描数据,建立正常颈椎C0~C3节段三维六面体网格有限元原始模型.参照既往枢椎环骨折C2椎弓根骨折分型,通过弱化网格单元强度的方法在原始模型上建立A、B、C三种枢椎环骨折模型:A型骨折模型,双侧椎弓根对称性骨折;B型骨折模型,单侧上关节突及椎体后壁骨折,伴对侧椎弓根骨折;C型骨折模型,双侧上关节突骨折,伴椎体后壁骨折.分别用单螺纹、双螺纹及全螺纹椎弓根拉力螺钉系统模拟固定C2-3节段,在模型枕骨髁部施加50N垂直向下压力模拟头颅重力,同时施加1.5N·m力矩使模型加载前屈、后伸、侧屈及旋转四种生理载荷,比较各固定模型在各工况下节点路径上的位移及应力分布情况.结果:固定A型骨折模型后,单螺纹螺钉在各工况下节点路径上的最大位移均小于双螺纹螺钉和全螺纹螺钉;固定B型骨折模型后,单螺纹及双螺纹螺钉各工况下节点路径上的最大位移小于全螺纹螺钉,单螺纹螺钉在前屈、后伸工况下节点路径上的最大位移小于双螺纹螺钉,在侧屈及旋转工况下节点路径上的最大位移大于双螺纹螺钉;固定C型骨折模型后,单螺纹螺钉各工况下节点路径各方向上的最大位移均大于双螺纹螺钉和全螺纹螺钉.固定不同类型骨折的应力极值,A型骨折模型,单螺纹螺钉的应力极值最小,全螺纹螺钉在前屈及后伸工况下应力极值大于双螺纹螺钉,侧曲与旋转小于双螺纹螺钉;B型骨折模型,除旋转工况外,单螺纹螺钉的应力极值均最小;C型骨折模型,单螺纹螺钉的应力极值最小,全螺纹螺钉的应力极值最大.单螺纹螺钉应力主要集中在骨折断端附近及尾端钉帽与椎体表面接触区域,应力极值在骨折断端螺杆处;双螺纹螺钉和全螺纹螺钉应力主要集中在头端螺纹与尾端螺纹,钉帽与椎体后表面接触部位应力较小,应力极值在尾端螺纹与骨皮质交接处.结论:单螺纹螺钉固定B型骨折椎体后壁及上关节突一侧及C型骨折的生物力学效果更佳;双螺纹螺钉固定A型骨折及B型骨折椎弓根骨折一侧生物力学效果更好;全螺纹螺钉在固定所有骨折类型的生物力学性能均不及单螺纹和双螺纹螺钉.

C2碳力学性质与电子结构的第一性原理研究

新型碳同素异形体的预报及其结构性质研究对设计新型超硬材料具有重要意义。基于第一性原理方法,报道了一种新型碳同素异形体C2碳。C2碳是一种正交晶系的晶体,晶体结构属于C222_(1)空间群。通过弹性常数计算分析了C2碳的力学稳定性;通过声子结构计算分析了C2碳的动力学稳定性;通过能带结构和态密度计算分析了C2碳的电子结构;通过强度和硬度性质计算分析了C2碳的力学性质。计算得到,C2碳具有1.875 eV的禁带宽度,硬度达到85.40 GPa,是一种兼具超硬特性及宽禁带半导体特性的碳同素异形体。

承载C2列控系统的境外铁路无线通信系统技术探讨

近年来中国铁路“走出去”建设项目越来越多,但项目所在国家的GSM-R 900 MHz频段大多已被当地运营商占用,清频成本极为昂贵。在“一带一路”境外铁路建设背景下,针对LTE-M、TETRA、数字无线列调等铁路常用无线通信技术,对工作频段、业务需求及功能、设备制造及应用情况、速度适应能力等方面进行分析,提出境外铁路在满足承载CTCS-2级列控系统以及其他铁路业务前提下,可以采用的铁路无线通信系统推荐方案,为中国铁路无线通信技术标准的国际化应用提供重要参考。

醛酮还原酶1C2在肿瘤中的研究进展

醛酮还原酶1C2(AKR1C2)是一种依赖还原型辅酶Ⅱ(NADPH)将醛和酮的羟基还原为相应的醇的醛酮还原酶(AKRs),其具备3-α-羟基类固醇脱氢酶活性,能够以高亲和力结合胆汁酸。在三磷酸吡啶核苷酸存在的情况下,可将二氢睾酮还原成3α-二醇(3α-diol);但在氧化因子NAD+存在的情况下,又可将3α-二醇氧化为5α-二氢睾酮。AKR1C2在正常组织中含量极低,但在恶性肿瘤组织中表达异常,且与癌症患者的肿瘤特征和长期生存高度相关。AKR1C2作为对人体药物代谢和毒素解毒至关重要的一种酶,在化疗药物耐受性的敏感性方面具有重要作用。然而,以前关于AKR1C2在不同恶性肿瘤中的确切意义的研究结果不一致且存在争议,甚至不知道其是促癌因子或抑癌因子。因此本文主要就AKR1C2的功能,在肿瘤发生发展及在肿瘤化疗药物耐受性等方面进行综述。

比较掌侧锁定接骨板与外固定支架治疗桡骨远端C2/C3型骨折的效果

目的 比较掌侧锁定接骨板与外固定支架治疗桡骨远端C2/C3型骨折患者的效果。方法 选取2019年1月-2022年4月收治的桡骨远端C2/C3型骨折72例,以随机数字表法分成观察组(36例)与对照组(36例),对照组给予外固定支架治疗,观察组给予掌侧锁定接骨板治疗,比较两组围术期指标、影像学指标、腕关节活动度、握力、腕关节功能及并发症。结果 观察组手术时间、住院时间、骨折愈合时间较对照组更长(P<0.05),术中出血量更多(P<0.05);两组术后桡骨高度、掌倾角、尺偏角增大(P<0.05),观察组较对照组更大(P<0.05);两组术后腕关节背伸、旋前、旋后活动度增大(P<0.05),观察组较对照组更大(P<0.05);两组术后握力提高(P<0.05),观察组较对照组更高(P<0.05);两组术后腕关节患者自行评估量表(PRWE)评分降低(P<0.05),观察组较对照组更低(P<0.05);观察组(13.89%)并发症发生率与对照组(8.33%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 与外固定支架相比,桡骨远端C2/C3型骨折患者采用掌侧锁定接骨板治疗,能够改善影像学指标、腕关节活动度,提高患者握力及腕关节功能,但该术式创伤大、恢复慢,临床上可根据具体情况进行选择。

VLP固定对桡骨远端C2/C3型骨折腕关节活动度、握力、尺骨变异的改善作用

目的 探究掌侧锁定接骨板(Volar locking plate,VLP)固定对桡骨远端C2/C3型骨折腕关节活动度、握力、尺骨变异的改善作用。方法 选取2019年6月-2022年11月收治的82例桡骨远端C2/C3型骨折患者资料,根据治疗方式分为观察组(47例)和对照组(35例),观察组使用VLP固定治疗,对照组使用外固定架治疗。比较两组手术时间、术中失血量、骨折愈合时间、腕关节活动度(掌屈度、背伸度、旋前度、旋后度)、握力、桡骨远端形态(掌倾角、尺倾角、尺骨变异)、术后并发症。结果 观察组手术时间长于对照组,术中失血量多于对照组,骨折愈合时间短于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);术后6个月,观察组患侧腕关节掌屈度、背伸度、旋前度、旋后度、握力均大于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);术后6个月,观察组患侧掌倾角、尺倾角均大于对照组,尺骨变异小于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);两组术后并发症发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 VLP固定有助于改善桡骨远端C2/C3型骨折腕关节活动度、握力,减少尺骨变异,具有较高安全性。

玉米ZmC2s基因家族鉴定及ZmC2-15耐热功能分析

鉴定玉米ZmC2s基因家族成员,分析其遗传变异与玉米耐热性的关联性,为明确其在玉米耐热方面的功能和分子机制奠定基础。使用C2蛋白结构域PF00168,利用hmmsearch从玉米全基因组中搜索ZmC2s基因家族成员,分析其编码蛋白质等电点和分子量、系统进化和基因家族复制。使用候选基因关联分析的方法,对ZmC2s基因自然变异位点与玉米苗期耐热性进行关联分析,发现玉米ZmC2s基因家族重要的耐热候选基因。使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法鉴定与玉米苗期耐热性最显著相关的ZmC2候选基因ZmC2-15在胁迫和激素处理下的基因相对表达水平,在玉米原生质体瞬时表达系统中鉴定ZmC2-15-GFP的亚细胞表达部位,以及获得过表达ZmC2-15的转基因拟南芥并分析其耐热性。从玉米参考基因组B73中共鉴定出95个玉米ZmC2s基因,根据其物理坐标的先后顺序,将95个玉米ZmC2s基因命名为ZmC2-1~ZmC2-95。其蛋白长度为130~2141,等电点为4.1~10.8,分子量为14.1~230.1。通过构建玉米、水稻和高粱基因组C2基因的进化树,发现C2基因可以分为3个大的聚类分支,每个聚类分支又可以细分为2个小的聚类分支。分析玉米、水稻和玉米、高粱的全基因组共线性数据,发现了59个ZmC2s基因在水稻和高粱基因组均有一一对应的复制基因。ZmC2s基因家族关联分析表明ZmC2-15/60/91是重要的玉米耐热候选基因(P≤0.001,MLM),其中ZmC2-15与玉米苗期耐热性最显著相关(P≤0.000,01,MLM),且该基因的表达量在多种逆境胁迫处理下上调表达。亚细胞定位分析表明ZmC2-15表达定位于细胞质、核膜和内质网。过表达ZmC2-15的转基因拟南芥提高了植物耐热性。ZmC2-15可作为调控玉米耐热性的重要候选基因。

肺鳞状细胞癌组织中Flap-核酸内切酶1和复制因子C2的表达及临床意义

目的探讨肺鳞状细胞癌组织中Flap-核酸内切酶1(Flap-endonuclease 1,FEN1)和复制因子C2(replication factor C2,RFC2)的表达及其临床意义。方法采用生物信息学方法分析FEN1、RFC2在肺鳞状细胞癌组织中的表达;采用免疫组化法检测80例肺鳞状细胞癌及癌旁组织中FEN1和RFC2蛋白的表达,利用RT-PCR法检测两者mRNA表达并分析相关性,分析FEN1、RFC2与临床病理特征的关系;收集患者随访资料,绘制患者的生存曲线。结果FEN1和RFC2在肺鳞状细胞癌组织中的高表达率分别为77.50%(62/80)、70.00%(56/80),在癌旁组织中的高表达率分别为42.50%(34/80)、32.50%(26/80),与公共数据库分析结果一致。RT-PCR结果显示,肺鳞状细胞癌组织中RFC2、FEN1 mRNA表达均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01);相关性分析结果显示,两者的表达存在明显正相关。不同TNM分期患者的FEN1、RFC2蛋白表达差异有统计学意义,是否存在胸膜侵犯与RFC2蛋白的表达差异有关。FEN1、RFC2高表达肺鳞状细胞癌患者的总生存期均低于低表达组。单因素分析结果表明:RFC2高表达、FEN1高表达、TNM分期与肺鳞状细胞癌患者的预后有关;多因素分析结果表明:TNM分期、FEN1和RFC2高表达是影响肺鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素。结论FEN1和RFC2有助于评估肺鳞状细胞癌患者的预后,两者之间存在协同作用,可能成为新的肿瘤标志物。

狄斯瓦螨VdesNPC2b蛋白的基因克隆、原核表达及其与寄主幼虫信息素结合机制研究

【目的】研究狄斯瓦螨Varroa destructor尼曼匹克C2型蛋白(Niemann-Pick type C2 protein,NPC2)VdesNPC2b与狄斯瓦螨寄主蜜蜂幼虫信息素油酸甲酯和β-罗勒烯的结合特性和机制,阐明VdesNPC2b在狄斯瓦螨寄主识别中的功能,为狄斯瓦螨生物防治提供理论依据。【方法】扩增狄斯瓦螨VdesNPC2b开放读码框(ORF)并进行生物信息学分析;基于pET-30a质粒构建原核表达载体,通过原核表达和亲和层析获得VdesNPC2b重组蛋白。利用荧光竞争结合实验检测VdesNPC2b与蜜蜂幼虫信息素油酸甲酯和β-罗勒烯的结合力,并通过荧光光谱变温实验测定22和32℃下VdesNPC2b与油酸甲酯和β-罗勒烯结合力变化来分析结合机制。采用SWISS-MODLE软件对VdesNPC2b进行同源建模,采用MVD软件对VdesNPC2b和β-罗勒烯进行分子对接模拟,初步分析VdesNPC2b与β-罗勒烯结合的关键氨基酸位点。【结果】VdesNPC2b(GenBank登录号:OR463903)的ORF全长531 bp,编码176个氨基酸,VdesNPC2b N端有一个16个氨基酸残基的信号肽。荧光竞争结合试验结果显示,VdesNPC2b与油酸甲酯和β-罗勒烯解离常数KD值分别为2.89和3.49μmol/L,结合过程为动态猝灭,维持VdesNPC2b与油酸甲酯和β-罗勒烯的相互作用力为疏水作用力。同源建模显示VdesNPC2b的二级结构主要为β-折叠,内部存在1个潜在的配基结合腔,VdesNPC2b与β-罗勒烯结合的关键氨基酸位点是Leu68,Ile103和Phe107等。【结论】狄斯瓦螨通过VdesNPC2b结合寄主蜜蜂幼虫长链酯类信息素油酸甲酯和挥发性的β-罗勒烯协同进行宿主定位和识别。

百脉根不定根发育相关基因LcC2DP1的克隆与功能初步分析

为研究百脉根(Lotus corniculatus L.)C2钙依赖蛋白激酶基因LcC2DP1在不定根形成过程中的功能,通过RACE法从百脉根中克隆LcC2DP1基因,利用qRT-PCR检测其时空表达模式,并通过农杆菌介导的瞬时表达系统在百脉根中过量表达LcC2DP1并鉴定其功能。结果显示:LcC2DP1基因全长705 bp,编码235个氨基酸,分子质量为25.95 ku,与蒺藜苜蓿同源性最高(82%);在百脉根不定根分化过程中持续表达,表达部位为根、茎和叶片;与野生型亲本(WT)相比,转LcC2DP1基因百脉根(TP)的不定根分化提前1~2 d;在不定根分化的9~15 d,其总根长分别是WT的168%、155%,根体积分别是WT的249%、161%,根尖数分别是WT的156%、137%。TP百脉根的总根长(P<0.01)、根体积(P<0.01)和根尖数(P<0.05)表现出一定的发育优势,表明LcC2DP1基因可能与百脉根不定根发育调控相关。