非小细胞肺癌微卫星(GT/CA)_(n)重复序列多态性的研究进展

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最主要的组织学类型,患者数量庞大且晚期患者疗效差,现有治疗手段虽取得巨大进展但仍面临挑战。肿瘤的发生伴随大量基因组序列的不稳定,(GT/CA)_(n)重复序列是一种常见的微卫星序列,参与了基因转录和DNA甲基化等调控过程。现有研究表明,NSCLC中(GT/CA)_(n)重复序列的多态性与EGFR、HO-1和HIF-1α基因的表达密切相关,可作为探索NSCLC发生发展的分子机制、开发诊疗预后分子标志物及相关表观遗传学研究的切入点。本文总结了NSCLC中微卫星(GT/CA)_(n)重复多态性的相关研究,希望能为NSCLC的相关研究提供参考。

中国5个民族mtDNA(CA)n重复的多态性

目的 探讨中国维族、汉族、黎族、瑶族、藏族mtDNA 514-523位置(CA)n重复遗传多态性。方法应用自行设计的引物对维族、汉族、黎族、瑶族各100名无关个体及42名藏族无关个体进行直接测序。结果 维族人群发现5种等位基因,黎族4种,瑶族3种,而汉族、藏族只观察到两种等位基因。结论 五个民族间mtDNA(CA)_n重复次数存在差异,与国外其他人群相比也有差异。

IFNγCA重复序列多态性与呼吸道合胞病毒毛细支气管炎易感性的关系

目的研究IFNγ基因第一内含子区CA重复序列多态性与RSV毛细支气管炎易感性的关系,探讨影响儿童发生RSV毛细支气管炎的宿主遗传因素。方法采用毛细管电泳法对168例RSV毛细支气管炎、215例非RSV肺炎住院患儿及88例健康儿童IFNγ基因第一内含子区CA重复序列进行检测,同时用ELISA方法测定50例RSV毛细支气管炎患儿、50例非RSV肺炎患儿血清IFN-γ的浓度,并采用呼吸评分法对RSV毛细支气管炎患儿进行RSV感染严重度的评估。结果①RSV毛细支气管炎组中(CA12)+/(CA12)+占8.93%,(CA12)+/(CA12)-占58.33%,(CA12)-/(CA12)-占32.74%,而非RSV肺炎组中(CA12)+/(CA12)+占19.53%,(CA12)+/(CA12)-占52.09%,(CA12)-/(CA12)-占28.37%,两组IFNγCA重复序列基因多态性差异有统计学意义(2χ=8.392,P=0.015)。②RSV毛细支气管炎患儿IFNγCA重复12次的频率为38.10%,低于非RSV肺炎组45.58%,差异有统计学意义(2χ=4.331,P=0.037)。③RSV毛细支气管炎组中血清IFNγ浓度(pg/ml)(M=6.22,P25=2.21,P75=18.34)低于非RSV肺炎组(M=10.07,P25=5.12,P75=29.67),差异有统计学意义(Z=2.096,P=0.036)。④IFNγCA重复12次的患儿血清IFNγ浓度高于CA重复非12次者,差异有统计学意义(P<0.05)。⑤IFNγCA重复12次的患儿临床呼吸评分(2.91±0.46)低于CA重复序列非12次者(3.0±0.43),差异有统计学意义(t=2.005,P=0.047)。结论IFNγ基因CA重复序列多态性与RSV毛细支气管炎易感性有关,当CA重复序列12次时其血清IFNγ水平较高,病情较轻,发展为重症RSV毛细支气管炎的可能性较低。

河南汉族人群线粒体DNA(CA)n重复子的多态性及法医学应用

目的：探讨河南汉族人群线粒体（mt）DNA514～523位置（CA）n重复子的遗传多态性及应用。方法：应用PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、银染技术，对河南汉族214例无关个体血样进行mtDNA（CA）n重复子分型。并对5例腐败肌肉及5例角化组织用Chelex-100、二硫苏糖醇（DTT）联合Chelex-100法和PCR缓冲液法分型技术效果进行比较。结果：河南汉族214例无关个体中检出4种等位基因，重复5～8次，基因差异度0．5013。腐败肌肉及角化组织用DTT联合Chelex-100法和PCR缓冲液法均分型成功。结论：mtDNA（CA）n重复子多态性在河南汉族人群具有一定的法医学应用价值，尤其对于腐败肌肉及角化组织。

1个多发性椎间盘退行性变疾病家系Aggrecan基因串联重复多态性的分析

目的分析1个多发性椎间盘退行性变疾病(DDD)家系的聚合蛋白聚糖(Aggrecan)基因串联重复多态性(VNTR)。方法应用PCR技术检测家系成员血液中Aggrecan VNTR的分布情况。结果被检测的家系成员中未发现超过25次重复的等位基因者,家系患DDD成员Aggrecan基因VNTR分布:均为杂合子,且有1个等位基因≤20个重复序列。结论本家系中遗传因素是DDD的主要诱发因素,且可能与相对较小重复序列Aggrecan VNTR有关。

中国人D13S316位点CA重复序列的多态性分析

应用ＰＣＲ方法扩增Ｄ１３Ｓ３１６位点的ＣＡ重复序列，通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物，测定８０名正常中国人的多态频率，结果得到９种不同的等位片段，ＰＩＣ值为０．８０，表明该位点在中国人群中具有长度多态性；正常家系连锁结果呈孟得尔分离，因此，可用于Ｗｉｌｓｏｎ病家系的基因诊断。

冠心病患者雌激素受体β基因CA重复序列和G1082A多态性研究

目的:探讨雌激素受体β(Estrogen Receptor Beta,ERβ)CA重复序列和G1082A多态性与冠心病(CAD)的关系.方法:采用PCR-RFLP方法,检测260例男性冠心病患者ERβCA重复序列和G1082A多态性的分布,以260例体检合格者为对照组.结果:对照组中,以CA重复序列平均数22次为界,将重复序列基因分为短基因(<22)和长基因(≥22),分别以S和L表示;CA重复序列基因型SS,SL及LL的频率分别为0.248,0.456和0.296;G1082A基因型rr,Rr及RR的频率分别为0.430,0.420和0.150;基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05).在CAD组中,高血压、糖尿病、吸烟、高胆固醇血症等危险因素高于对照组(P<0.01);ERβ基因CA重复序列的SS及SL和G1082A多态性中rr及Rr基因型与CAD的相关主要危险因素均无显著性联系(P>0.05),而CA重复序列的LL基因型和G1082A多态性中RR基因型(突变纯合子)与CAD的发生有联系(P<0.01).但ERβCA重复序列和G1082A多态性与冠心病发生有关,LL和RR基因型人群患冠心病的危险性(OR)显著高于其它基因型的人群.结论:CA重复序列的LL基因型和G1082A的基因型中的突变纯合子(RR)发生冠心病可能性大于其他基因型.

一个遗传性凝血因子XⅢ缺乏症家系FXⅢA链基因5’-端短串联重复序列[AAAG]n多态性分析

目的:分析一个遗传性凝血因子XⅢ缺乏症家系FXⅢA基因5’-端非翻译区STR多态性,对该亚基的突变位点进行遗传分离分析。方法:应用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法技术分析一个经测序确诊的凝血因子XⅢ基因缺乏的家系的凝血因子XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn。结果:在该家系中检测出两种基因型,先证者及其弟XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn的基因型为L2/L2基因型,先证者的父亲、母亲及其妹的基因型为L1/L2,先证者的XⅢA链基因的突变位点分别与父源的L2和母源的L2位点连锁。结论:根据家系XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn与FXⅢA基因突变位点的连锁关系可确定突变的遗传分离特点。

第10号染色体上CA重复序列的多态性与阿尔茨海默病的相关性研究

目的 近年的研究报道显示在第10号染色体上有多个位点与阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)相关,其中10q23—25区域是个研究的热点。我们的目的是想在这个区域找到与AD相关的位点或基因。方法 我们采用病例一对照方法在日本人群中研究D10S583上游16kb的CA重复序列的多态性和载脂蛋白E基因与AD相关性,病例组139人,健康对照组171人。结果 在AD病例组和正常对照组中等位基因206携带者的频率分别是41.9％和19％,其差别有显著性(X^2=18.46,P<0.0001,RR=3.06,95％CI=1.82～5.15);而208携带者的频率在AD组中是46.0％,在对照组中是70.8％,其差别有显著性(X^2=19.41,P<0.0001,RR=0.35,95％CI=0.22～0.56)。结论 CA重复序列等位基因206的频率与AD呈正相关,而208则呈负相关,这个结果支持在10q23—25区域有AD候选基因的论点。根据报道还有其他多个AD假定候选基因被定位在这个区域,因此值得对这个区域进行深入研究。

D13S133位点CA重复序列在正常中国人群的多态性分布

目的研究Ｄ１３Ｓ１３３位点ＣＡ重复序列在正常中国人群的多态性分布。方法：应用ＰＣＲ扩增该位点的ＣＡ重复序列，通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物，测定６０个正常中国人的等位片段。结果：共检测到１５种不同长度的等位片段，多态信息含量（ＰＩＣ值）为０．８８１。结论：该位点在中国人群中具有长度多态性，且其多态性分布与西方人群存在明显差异。

中国人群eNOS基因内含子13微卫星多态性的初步研究

目的 :为研究eNOS基因内含子 13上的微卫星序列与妊高症的相关性。方法 :采用PCR-PAGE与银染相结合的方法 ,研究其多态性。结果 :得到含有该微卫星序列的DNA片段。结论 :证实在中国人群中eNOS基因内含子 13上的确存在一个CA重复的多态性微卫星序列 ,从而为研究该位点与妊高症的相关性提供了技术支持和理论依据。

广西地区正常人群SCA3/MJD基因多态性研究

目的探讨广西地区汉族正常人群SCA3/MJD基因(CAG)n重复拷贝数的正常变异范围。方法应用荧光PCR及毛细管电泳片段长度分析对广西75名正常人SCA3/MJD基因(CAG)n重复拷贝数进行分析。结果广西地区SCA3/MJD基因(CAG)n在正常人群中的变异范围为13～34个拷贝,集中于13个拷贝,其等位基因频率为52.00%,杂合频率为69.33%,共17种等位基因。结论 SCA3/MJD基因(CAG)n重复序列在广西正常人群中呈现多态性,SCA3/MJD基因(CAG)n重复拷贝数正常变异范围存在地区差异。

腐败及角化组织的DNA提取及mtDNA(CA)n重复子分型

目的建立腐败及角化组织的mtDNA(CA)n重复子分型方法。方法收集腐败肌肉、指(趾)甲及毛干各10份,采用Chelex-100法、含有DTT的Chelex-100处理法及PCR缓冲液处理法三种方法提取DNA,经PCR扩增,PAG电泳分离、银染技术进行mtDNA(CA)n重复子分型。结果10份腐败肌肉用3种方法提取DNA均获得分型成功;10份指(趾)甲及毛干,用Chelex-100法提取DNA,只有1份指甲分型成功,用含有DTT的Chelex-100处理法及PCR缓冲液处理法提取DNA均获得分型成功。结论用本文建立的方法提取DNA适用于腐败及角化组织的mtDNA(CA)n重复子分型检验,在法医学上具有一定的应用价值。

膀胱移行细胞癌基因组(CA)n重复序列不稳定性的研究

目的 探讨膀胱移行细胞癌基因组 (CA)n重复序列不稳定性与肿瘤生物学特性的相关性。方法 2 6例膀胱移行细胞癌肿瘤基因组DNA ,Inter SSRPCR扩增 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果 PCR扩增产物约 2 0多种 ,片段大小为 1 0 4～ 1 2 0 0bp ,带型的差异主要是增加或减少 ;染色增强或减弱 ,不稳定系数与肿瘤的分级呈正相关。结论 膀胱移行细胞癌基因组中平均有 1 2 .8%的 (CA)n重复序列DNA片段与正常组织基因组有差异 ,肿瘤分级越高差异越大。

PCR方法分析(CA)n重复改变的实验局限性

ＰＣＲ方法分析（ＣＡ）ｎ重复改变的实验局限性近来的研究表明，微卫星位点的遗传不稳定性作为某些癌症的基本特征，如ＨＮＰＣＣ（遗传性非息肉性结肠癌）。因此，许多实验室都应用ＰＣＲ来研究（ＣＡ）ｎ重复序列的变化。为了分析那些与肿瘤细胞不同的，不是单克隆或寡...

性激素结合球蛋白基因启动子(TAAAA)n重复多态与卵巢早衰的关联性

目的探讨性激素结合球蛋白(SHBG)基因启动子(TAAAA)n重复多态与卵巢早衰(POF)的关联性。方法应用聚合酶链反应及变性聚丙烯酰胺凝胶分离技术检测75例POF患者及167例卵巢功能正常的对照女性SHBG基因启动子(TAAAA)n多态性,比较并分析其在两组中的重复情况。结果 POF组和对照组的SHBG基因启动子(TAAAA)n重复范围分别为6~11次和4~10次,两组等位基因均值分别为(7.85±1.31)和(7.24±1.60),差异有统计学意义(P<0.05)。SHBG基因(TAAAA)n长重复多态(n≥8)在POF组和对照组分布分别为32.0%和20.4%,SHBG基因(TAAAA)n短重复多态(n<8)在POF组和对照组中的分布分别为68.0%和79.6%,长、短多态分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SHBG基因启动子(TAAAA)n多态可能与POF发病有关。

HSD11B2基因多态性与胎儿发育的关系

目的探讨正常妊娠HSD11B2基因多态性与胎儿发育的关系。方法用基因测序方法检测HSD11B2启动子/G-209A、G-194C、G-151A及G-126 A基因多态性。用PCR-毛细管电泳方法检测187对正常妊娠母血及脐血HSD11B2基因1号内含子{CA}n微卫星多态性。结果 1、本研究中33例汉族人群HSD11B2启动子/G-209A、G-194C、G-151A及G-126 A位点均为野生型GG纯合子;2、新生儿出生体质量及孕晚期B超下体格参数指标在母血组和脐血组HSD11B2基因1号内含子{CA}n基因型SS、SL、LL组或者SS+SL、LL组之间差异不显著(P>0.05)。在考虑分娩孕周、胎儿性别、孕妇孕前BMI、孕妇分娩体质量、年龄为混杂因素的情况下,母血及脐血HSD11B2基因1号内含子{CA}n基因型与新生儿出生体质量及孕晚期B超下胎儿体格参数指标之间的关系,均未见相关性(P>0.05)。结论正常妊娠母体及胎儿HSD11B2基因多态性与胎儿发育指标不相关。

肾上腺髓质素的基因多态性与原发性高血压的关系

目的 探讨肾上腺髓质素基因 (ADM)微卫星多态性 (CA重复序列 )与原发性高血压的关系。方法 应用聚合酶链反应技术 (PCR) ,检测 196例正常人和 2 4 5例原发性高血压患者的ADM基因型 ,同时测定生化指标。采用放射免疫法测定 6 2例不同基因型的高血压患者的血清ADM水平。结果 正常对照组与原发性高血压组ADM等位基因型频率分布有显著差异 (χ2 =10 92 ,P <0 0 5 ) ,在 4种等位基因 (11,13,14 ,19)中 ,19值在原发性高血压组中所占比例显著高于正常对照组 (χ2 =7 5 8,P <0 0 5 )。不同基因型 11与 11,11与 13,11与 14 ,11与 19,13与 13,13与 14 ,13与 19,14与 14 ,14与 19的血清ADM水平 ,无明显差异。结论 ADM基因多态性可能与原发性高血压发生的倾向性有关。