北京万寿路地区319例男性AR基因(CAG)n重复序列多态的研究

目的研究自然人群中老年男性雄激素受体(AR)基因CAG重复序列多态。方法使用DNA测序方法对319例老年男性AR基因外显子1 NH2端转录调节区内CAG重复序列长度进行测定。结果男性雄激素受体基因CAG重复数最短为8,最长为35。CAG重复数平均值为(22．70 ±3．66)。CAG重复数分布频率最多的为21(13．8％),22(15．7％),23(13．5％)和24(10．3％),共占 53．3％。结论自然人群中老年男性雄激素受体基因CAG重复序列呈现多态性,多数集中在21- 24,为进一步研究AR基因变异与疾病的关系提供依据。

雄激素受体基因第一外显子CAG重复序列长度多态性与男性膀胱癌的发生有关

目的:探讨人雄激素受体(AR)基因第一外显子CAG串联短重复序列(STR)多态性与男性膀胱癌发生之间的关系. 方法: 石蜡包埋的男性膀胱癌标本进行基因组DNA提取,PCR扩增,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,经银染显示单股DNA链片段长度. 根据标本的泳动度推算CAG STR的n值;选取代表性的标本产物直接测序,验证上述检测的准确性. 以男性阑尾炎标本作为参照组. 结果: 95例膀胱癌标本中有6例(6.3%)出现微卫星不稳定(MSI)现象,其中1例因正常组织过少而无法确定其产物的正常泳动位置,不做以下分析. 94例膀胱癌及相同例数参照标本的CAG STR n值范围分别为8～26和14～30,均数分别为20.07±3.12和21.06±3.39,两者有统计学意义(P<0.05). 结论: AR基因第一外显子CAG STR与男性膀胱癌的发生或(和)发展有关,CAG STR较短的男性个体患膀胱癌的危险性可能增加.

雄激素受体基因第一外显子CAG重复序列长度多态性与肺癌的关系

目的：探讨人雄激素受体（AR）基因第一外显子CAG串联短重复序列（STR）多态性与肺癌发生之间的关系。方法：共收集170例肺癌患者和248例参照个体的静脉血，提取基因组DNA，巢式PCR扩增AR基因，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染显示DNA链片段长度，根据标本的泳动度推算CAG STR的n值；选取代表性标本直接测序，验证上述检测的准确性。结果：52例男性肺癌及94例男性参照标本的CAG STR n值范围分别为14-29和14-30，均数分别为19．96±2．69和21．06±3．39，二者差别显著（P〈0．05）；男性肺癌患者组中〈55岁组和≥55岁组CAG STR n值分别为15-23和14-29，均数分别为18．85±2．28和20．63±2．71，二者差别显著（P〈0．05）。118例女性肺癌及154例参照标本上带的CAG STR n值范围分别为9-28和16-3l，均数分别为21．80±3．10和23．26±2．93，二者差别显著（P〈0．05）；下带的n值范围分别为9-24和14-27，均数分别为19．8±2．51和20．74±2．91，二者差别显著（P〈0．05）；女性肺癌患者组中〈55岁和≥55岁两组之间在CAG STR长度上无显著差别（P〉0．05）。结论：AR基因第一外显子CAG STR与肺癌的发生和／或发展有关，CAG STR较短的男性和女性个体患肺癌的危险性都增加；男性人群中，CAG STR较短可使肺癌的发生年龄提前。

基质金属蛋白酶-9基因二核苷酸重复序列多态标志ACn多态与2型糖尿病蛋白尿肾病相关

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因二核苷酸重复序列多态标志ACn与中国人2型糖尿病蛋白尿肾病的相关性。方法收集中国人2型糖尿病合并及非合并肾病患者245例,其中非肾病组(Non-DN) 78例,微量蛋白尿肾病组(DN-1)129例。显著蛋白尿肾病组(DN-2)38例；非糖尿病对照组83例。采用荧光染料FAM标记引物5′末端．将聚合酶链反应(PCR)产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用基因片段分析法检测个体MMP-9基因ACn的基因型,比较各组间基因型和等位基因频率。结果①共发现9种等位基因,ACn重复数目为16至24。其中以AC21等位基因最为常见,其他等位基因频率大小顺序依次为AC19＞AC20＞AC18。②DN-2组的AC18等位基因频率为11．8%,显著高于Non—DN组的3．8%(P=0．042,OR=3．7．95%CI 1．2～11．4)。③DN-1组的AC20等位基因频率为23．7%,显著低于Non—DN组的13．9%(P=0．016,OR=2．0,95%CI 1．1～3．6)。结论中国人MMP-9基因(AC)n重复数16至24,最常见等位基因为AC21。AC18等位基因可能是糖尿病发生显著蛋白尿肾病的风险因子．而AC20等位基因可能是防止糖尿病微量蛋白尿肾病发生的保护因子。因此,MMP-9基因微卫星多态可能是中国人2型糖尿病肾病的遗传标志。

一个遗传性凝血因子XⅢ缺乏症家系FXⅢA链基因5’-端短串联重复序列[AAAG]n多态性分析

目的:分析一个遗传性凝血因子XⅢ缺乏症家系FXⅢA基因5’-端非翻译区STR多态性,对该亚基的突变位点进行遗传分离分析。方法:应用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法技术分析一个经测序确诊的凝血因子XⅢ基因缺乏的家系的凝血因子XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn。结果:在该家系中检测出两种基因型,先证者及其弟XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn的基因型为L2/L2基因型,先证者的父亲、母亲及其妹的基因型为L1/L2,先证者的XⅢA链基因的突变位点分别与父源的L2和母源的L2位点连锁。结论:根据家系XⅢA亚基基因5’-端侧翼非翻译区短串联重复序列AAAGn与FXⅢA基因突变位点的连锁关系可确定突变的遗传分离特点。

更年期后女性代谢综合征患者AR基因(CAG)n多态性的研究

目的:研究更年期后女性代谢综合征患者雄激素受体基因(CAG)n重复序列多态性。方法:使用DNA测序方法对150例更年期后健康女性和代谢综合征患者AR基因外显子1 NH2端转录调节区内(CAG)n重复序列长度进行测定。结果:1.健康女性AR基因(CAG)n重复数最短为18,最长为34,平均值为23.34±2.44;2.代谢综合征女性AR基因(CAG)n重复数最短为8,最长为29,重复数平均值为22.29±2.82;3.代谢综合征组(CAG)n重复数与健康女性组之间(CAG)n重复序列多态性有差异(P=0.030)。结论:1.更年期后女性AR基因(CAG)n重复序列长度存在多态性;2.更年期后女性代谢综合征组AR基因外显子INH2转录调节区(CAG)n的重复数小于健康对照组。

健康更年期后女性AR基因(CAG)n多态性的调查

目的研究健康更年期后女性雄激素受体基因(CAG)n重复序列多态性。方法使用DNA测序方法对60例更年期后健康女性AR基因外显子1 NH2端转录调节区内(CAG)n重复序列长度进行测定。结果(1)健康更年期后女性AR基因(cAG)n重复数最短为18,最长为34,平均值为23.34±2.44;(2)更年期后女性(CAG)n重复序列多态性与育龄妇女有差异(P>0.05)。结论(1)健康更年期后女性AR基因(CAG)n重复序列长度存在多态性;(2)健康更年期后女性AR基因(CAG)n的重复数大于育龄期女性。

CAG重复序列对中国脊髓小脑共济失调2型患者发病年龄的影响

目的:脊髓小脑共济失调2型(spinocerebellar ataxia type 2,SCA2)是世界上最常见的常染色体显性遗传的共济失调之一。多篇报道显示某些含polyQ基因的CAG重复序列可能影响SCA2患者的发病年龄(age at onset,AAO),但在中国SCA2患者中进行研究的较少。因此,本研究旨在探讨CAG重复序列的长度对中国SCA2患者AAO的影响。方法:纳入119例SCA2患者,根据其主要表型分为2组:17例来自9个帕金森综合征家庭的SCA2患者作为帕金森病-SCA2(Parkinson.s disease-SCA2,PD-SAC2)组,91例来自66个SCA2家庭和11例散发的SCA2患者作为共济失调-SAC2(ataxia-SCA2,A-SCA2)组。使用荧光PCR筛查ATXN2和其他含m6(CAG)n基因中CAG重复序列的长度。采用Spearman.s等级相关的方法分析含m6(CAG)n基因中CAG重复序列的长度与AAO的相关性,采用回归分析评估CAG重复序列的长度对AAO变异的贡献,采用t检验比较PD-SAC2组与A-SCA2组间含m6(CAG)n基因中CAG重复序列的长度。结果:ATXN2基因中含较长CAG重复序列的等位基因的CAG重复序列的长度与SCA2的AAO呈负相关(R=-0.251,P<0.05),可解释41.7%的AAO变异。AAO与ATXN7基因中含较短CAG重复序列的等位基因(R=-0.251,P=0.006)及TBP基因中含较长CAG重复序列的等位基因(R=-0.197,P=0.034)的CAG重复序列的长度均呈负相关。在携带含CAG重复序列的ATXN3、CACNA1A、ATXN7、TBP和RAI1基因的SCA2患者中也检测到AAO延迟的趋势。此外,ATXN7基因和ATXN2基因的CAG重复序列的长度在A-SCA2组和PD-SCA2组之间的差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:ATXN2中的CAG重复序列是影响中国SCA2患者AAO的主要遗传因素。ATXN3、CACNA1A、ATXN7、TBP和RAI1基因的CAG重复序列的长度可能是与SCA2的AAO相关的因素。ATXN7基因中的CAG重复序列的长度可能是SCA2患者表现为帕金森综合征的影响因素之一。

雄激素受体基因CAG多态性与迟发性性腺功能减退症的相关性研究

目的:研究雄激素受体基因(AR)重复序列(CAG)n多态性与迟发性性腺功能减退症(LOH)的关系,探讨LOH的发病机制。方法:共调查1 000例40～70岁中老年男性,其中19例迟发性性腺功能减退症患者,随机抽取127例正常健康中老年男性,测定甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG)、血清总睾酮(TT)、游离睾酮(fT),测量身高、体重、腰围(WC)、血压,并采用DNA测序方法进行AR基因外显子1氨基端转录调节区(CAG)n重复序列长度测定,比较两组各指标之间的差异。结果:(CAG)n重复次数为15～32(23.05±2.95)。正常健康中老年男性的体重指数(BMI)、FBG较LOH患者显著下降(P<0.01),而TG、TT及fT较LOH患者显著升高(P<0.01)。正常健康中老年男性AR基因(CAG)n重复数为22.54±3.06;LOH患者AR基因(CAG)n重复数为23.23±2.24;LOH患者(CAG)n重复数略高于正常健康人群,但两者比较无统计学意义(P=0.946)。(CAG)n重复长度显示:长组(n≥22)AR基因(CAG)n在LOH组和正常健康中老年男性组的频率分别为73.68%和48.82%(P<0.05)。相关分析显示:TT、fT与(CAG)n重复序列无明显相关性(r=0.04和r=0.025,P>0.05)。结论:LOH男性AR基因(CAG)n重复序列呈现多态性,长(CAG)n重复多态可能是LOH发病的遗传因素,但仍需进一步扩大样本量证实。

雄激素受体基因CAG多态性对前列腺癌恶性程度的影响

目的检测正常人群、前列腺癌（PCa）低危和高危组雄激素受体（AR）基因（CAG）n微卫星多态性,探讨该重复序列长度对PCa恶性程度的影响。方法应用PCR和双链循环DNA测序技术,对98例正常人群（对照组）和95例经前列腺穿刺活检证实为PCa的患者,进行外周血标本（CAG）n串联重复序列检测,分析该微卫星多态性与PCa恶性程度的影响。结果 PCa组CAG重复序列为15-31,平均（23.21±3.07）;参照组重复序列为14-34,平均（24.20±3.50）,两者比较差异具有显著统计学意义（P〈0.05）。根据PCa患者肿瘤Gleason评分进行分级,≤7分为低危,共68例,≥8分为高危,27例。低危组的CAG重复序列为18-31,平均（23.65±2.92）,高危组CAG重复序列为15-27,平均（22.11±3.21）,两者比较差异具有统计学意义（P〈0.05）,高危组与参照组比较差异具有显著统计学意义（P〈0.01）。结论受试者AR基因（CAG）n重复序列呈现多态性,该重复序列长度与PCa的发生有关,较短的CAG重复序列预示发生PCa的可能性较大,恶性程度更高。

HD基因和UCHL-1基因多态性与Huntington病关系的研究

目的探讨Huntington病患者发病年龄与HD基因和UCHL-1基因S18Y多态性相关情况。方法应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测两个HD家系(53人)、6例非家系HD患者和51名正常对照组HD基因CAG重复次数;应用聚合酶链式反应-限制性内切酶分析(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术检测UCHL-1基因S18Y多态性的分布情况。结果在两个家系中确诊了5例HD病人,在其有高度遗传风险的子女中发现4例症状前患者。UCHL-1基因S18Y多态性的基因型和等位基因分布频率在两个家系和正常对照组中无统计学差异(SY型基因型在三种基因型中最常见,频率>50%)。非家系患者中未见YY基因型,SS基因型多于SY型,S等位基因多于Y型,与正常对照组差别有统计学意义。多元线性回归研究显示11例病人发病年龄变异的15.6%是由其UCHL-1基因S18Y多态性造成的。CAG重复次数可解释发病年龄变异的71.4%。结论HD基因CAG重复次数是决定患者发病年龄变异的最主要因素,但不是唯一因素。UCHL-1基因S18Y多态性是HD的调节基因,对发病年龄有微弱的调节作用,提示UCHL-1可能参与HD的发病机制。

雄激素受体基因CAG多态性对男性激素避孕有效性影响的研究

目的:分析应用肌注十一酸睾酮酯(TU)进行激素避孕的男性志愿者中起反应者与不起反应者雄激素受体(AR)基因(CAG)n微卫星多态性,并探讨该多态性对激素避孕效果的影响。方法:29例TU不起反应者和34例起反应者分别作为试验组和对照组,应用PCR和DNA测序技术对两组外周血标本进行CAG重复数测定,分析该微卫星多态性对激素避孕效果的影响。结果:试验组和对照组CAG重复数的均数分别为23.62和22.97,均数比较差异无显著性(P>0.05)。短组CAG(n≤22)在试验组和对照组的分布分别为51.7%、50.0%;长组CAG(n>22)在试验组和对照组分布分别为48.3%、50.0%,长短组分布相同。CAG重复数与精子密度之间未见相关性。在FSH浓度>0.2IU/L组中,CAG重复数>22的受试者达到无精子症的机会是其他受试者的1.5倍。结论:受试者AR基因(CAG)n重复数呈多态性,但不反应组与反应组之间不具有显著性差异,AR基因CAG重复数或其他因素与男性激素避孕效果之间的关系有待进一步探讨。

中国男性雄激素受体基因(CAG)n重复多态性的初步研究

目的 研究正常中国男性雄激素受体 (androgen receptor,AR)基因 (CAG) n重复序列的多态性。方法 应用 DNA测序基础上的 [α- 3 2 P]d CTP掺入不对称 PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)方法 ,对 10 7名正常男性 AR基因的 (CAG) n重复数进行测定。结果 AR基因 (CAG) n序列在正常男性人群中呈现重复多态性 ,其重复范围为 11～ 2 9,集中于 2 0～2 4,以 2 2最多。结论 AR基因 (CAG) n序列在正常男性人群中呈现重复多态性 ,为今后进一步研究其病理学及遗传学意义打下基础。

前列腺癌与雄激素受体基因(CAG)n重复多态性的关系

目的 探讨前列腺癌 (PC)与雄激素受体 (AR)基因 (CAG)n重复多态性的关系。 方法 应用DNA双链循环测序方法对 34例PC组织与癌旁正常组织、2例PC患者外周血白细胞内的AR基因 (CAG)n重复数进行测定。 结果 同一PC患者的癌组织与癌旁正常组织 (CAG)n重复数相同 ;36例患者癌组织AR基因 (CAG)n呈重复多态性 ,平均 2 0 .0 6 ,显著低于正常组织 ,差别有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;不同分化程度的癌组织 (CAG)n重复数差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。 结论 AR基因 (CAG)n重复数改变的体细胞突变在PC癌细胞中罕见 。

广西地区正常人群SCA3/MJD基因多态性研究

目的探讨广西地区汉族正常人群SCA3/MJD基因(CAG)n重复拷贝数的正常变异范围。方法应用荧光PCR及毛细管电泳片段长度分析对广西75名正常人SCA3/MJD基因(CAG)n重复拷贝数进行分析。结果广西地区SCA3/MJD基因(CAG)n在正常人群中的变异范围为13～34个拷贝,集中于13个拷贝,其等位基因频率为52.00%,杂合频率为69.33%,共17种等位基因。结论 SCA3/MJD基因(CAG)n重复序列在广西正常人群中呈现多态性,SCA3/MJD基因(CAG)n重复拷贝数正常变异范围存在地区差异。

雄激素受体基因多态性与男性冠心病关系的研究

目的研究雄激素受体(androgenrecceptor,AR)基因外显子1区CAG多态性与男性冠心病(coronaryarterydisease,CAD)及其危险因素的关系。方法所有入选病例均接受冠状动脉造影和常规生化检查,CAD严重程度采用冠脉狭窄≥50%的支数(0～3)及相应的GS评分进行评估,外周血AR转录激活区CAG重复序列的长度采用PCR法测定。结果CAG重复长度界于13～30之间,CAG重复≥24次者为长AR基因组,<24次者为短AR基因组。与长AR基因组比较:短AR基因组患者具有较低的平均体质指数(BMI)(t=-3.024,P=0.005)和较低水平的高密度脂蛋白(HDL)(t=-2.610,P=0.010);短AR基因组出现明显冠脉狭窄的可能性较大(χ2=4.82,P=0.028),GS(Gensiniscore,GS)较高(M-W检验,z=-2.644,P=0.008)。Spearman相关分析表明,AR基因CAG长度和GS显著负相关(r=-0.230,P=0.010),这种相关性独立于年龄、BMI、LDL、UA和HDL之外(偏相关系数r=-0.250,P=0.006)。结论具有短AR基因者与更加严重的冠心病相关,提示CAG多态性与男性CAG病情发展相关,AR表达增多,雄激素敏感性增高是男性CAD发病率较高的原因之一。

MEF2A基因第11外显子CAG三联核苷酸重复序列多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的相关性研究

目的探讨肌细胞增强因子2A（MEF2A）基因第11外显子CAG三联核苷酸重复序列[（CAG）n]多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的相关性。方法对温州医科大学附属台州医院神经内科自2010年6月至2014年12月收治的205例首发急性大动脉粥样硬化性脑梗死患者（脑梗死组）及同期体检正常的192例健康志愿者r对照组），采用聚合酶链反应产物直接测序技术（PCR-SBT）检测MEF2A基因第11外显子区域的基因多态性，分析其中（CnG）n多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的相关性。结果在脑梗死组与对照组朋E尼A基因第11外显子区域均可检测到多种（CAG）n，重复序列数目主要集中在9～11个，且脑梗死组与对照组之间（CAG）n多态性分布差异有统计学意义（X^2=8．547，P=-0．036）；（CAG）9在脑梗死组中比例明显高于对照组，差异有统计学意义萨6．650，P=-0．010）。排除相关混杂因素后，Logistic回归分析显示收缩压及（CAG）9（OR=1．401，辟0．017。95％CI：1．063-1．847）是动脉粥样硬化性脑梗死发生的独立危险因素。结论MEF2A基因第11外显子（CAG）n多态性与动脉粥样硬化性脑梗死相关，（CAG）9可能是其易患基因之一。

CTLA-4基因多态性调节溃疡性结肠炎患者CTLA-4 mRNA稳定性和蛋白水平

目的 研究细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T-lymphocyte associated antigen 4,CTLA-4）基因3＇非转录区（AT）n重复序列多态性对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）患者CTLA-4mRNA稳定性和基因表达的影响.方法 采用实时定量PCR方法检测膜型CTLA-4（full length CTLA-4,flCTLA-4）和可溶性CTLA-4（soluble CTLA-4,sCTLA-4）mRNA表达,半衰期法分析其mRNA稳定性.免疫组化检测flCTLA-4蛋白表达.酶联免疫吸附实验测定sCTLA-4蛋白水平.荧光PCR-毛细管电泳技术检测300例UC患者和700名健康对照者CTLA-4基因（AT）n重复序列多态性.结果 活动期UC患者肠黏膜sCTLA-4 mRNA的表达显著低于缓解期UC患者（P=0.004）.在UC患者中,（AT）n重复序列长等位基因携带者表达低水平的flCTLA-4和sCTLA-4 mRNA以及sCTLA-4蛋白（均P＜0.01）.携带长等位基因的UC患者CTLA-4 mRNA的稳定性明显降低.UC患者CTLA-4基因（AT）n重复序列长等位基因携带者（≥116 bp）频率显著高于正常对照组（P＜0.01）,且与广泛型结肠炎相关（P=0.008）.结论 UC患者CTLA-4基因（AT）n重复序列多态性与CTLA-4基因表达水平相关,携带（AT）n重复序列长等位基因的UC患者CTLA-4 mRNA及蛋白的表达降低,提示CTLA-4基因在UC遗传免疫发病机制中起重要作用.