CD95在大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡过程中的作用(英文)

目的通过对大鼠急性脊髓损伤模型CD95的检测,以探讨CD95在脊髓损伤后细胞凋亡过程中的作用。方法Wistar雌性大鼠42只,使用改良Allen氏法制作急性脊髓损伤模型36只,采用HE,Nissl染色和免疫组化方法,检测了损伤后1,4,8,24,72h及7d的脊髓组织。结果损伤后4h,损伤段灰质可见CD95阳性细胞,8h达高峰。正常组未见CD95阳性细胞表达。高倍镜观察,阳性细胞具有凋亡细胞的特征。结论CD95蛋白可能在诱导脊髓损伤后神经细胞凋亡的过程中,发挥着重要作用。

IL-10对脊髓损伤后细胞凋亡和CD95作用的初步探讨

目的检查急性脊髓损伤(SCI)后细胞凋亡及CD95的表达,初步探讨白细胞介素10(IL10)对大鼠SCI后细胞凋亡的干预作用。方法将SD雄性大鼠48只随机分为假手术组(n=6)、损伤组(n=30)、治疗组(n=12)。使用改良Allen法制作脊髓损伤模型,分别手术后4h、8h、24h、72h及7d处死并取材(每时间点n=6)。治疗组损伤后30min给予IL10。应用HE染色、免疫组化及凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)对损伤脊髓组织进行检测。结果损伤后4h,损伤段灰质可见CD95及TUNEL阳性细胞。CD95阳性细胞表达于8h达高峰;TUNEL阳性细胞于24～72h达高峰。TUNEL阳性细胞主要见于神经元及胶质细胞,以胶质细胞为主。IL10治疗组的TUNEL阳性细胞数在8h、72h明显减少;免疫组化检测CD95表达降低。正常组未见CD95及TUNEL阳性细胞表达。结论SCI后CD95的表达可能在SCI后诱导细胞凋亡的过程中起重要作用;早期应用IL10能干预SCI后的细胞凋亡,但不减少CD95的表达。

乌司他丁对肾移植患者围手术期外周血T细胞亚群CD95表达以及血浆sICAM-1、IL-8水平的影响

目的观察乌司他丁对肾移植患者围手术期外周血T细胞亚群CD95表达及外周血细胞因子可溶性细胞间黏附分子1（sICAM-1）、白细胞介素8（IL-8）水平的影响,探讨其促进移植肾功能早期恢复的机制及对患者机体免疫功能的调节作用。方法择期肾移植患者51例,ASAⅡ~Ⅲ级,随机分成乌司他丁干预组（n=26）和对照组（n=25）。观察两组麻醉给药前,术后第7、14天外周血T细胞亚群CD95表达水平及外周血细胞因子水平的变化。结果两组患者肾移植术后第7、14天外周血T细胞亚群CD95表达水平及外周血细胞因子sICAM-1、IL-8水平较麻醉给药前前显著升高（P〈0.01）,在第7天时点最高,在第14天时点仍显著高于血管开放前水平（P〈0.05）;但乌司他丁组升高的幅度在第7、14天时点均对照组组小（P〈0.05）。结论肾移植患者围手术期外周血T细胞亚群CD95表达水平增高,CD95表达增加是肾移植患者免疫系统亢进的表现,乌司他丁能有效减少肾移植围术期CD95的表达,能够保护和恢复肾移植术后患者的细胞免疫功能。肾移植围术期血中促炎因子sICAM-1、IL-8水平显著增高,可能与肾缺血再灌注损伤有关。乌司他丁能有效减少肾移植围术期ICAM-1、IL-8的释放,对缺血再灌注损伤后的移植肾有保护作用。

腺病毒载体RNA干扰抑制Fas(CD95)表达作用

目的:观察串联表达Fas-shRNA的腺病毒载体pAdeno-X-siFas 1+siFas 2对脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导BALB/c鼠肝细胞Fas过表达的影响。方法:20只雄性BALB/c鼠随机分为:RNA干扰组(RNAi组)、腺病毒通用阴性对照组(HK组)、模型组(M组)和正常对照组(N组)。RNAi组于0 h、24 h经尾静脉注射腺病毒载体pAdeno-X-siFas 1+siFas 2两次,HK组尾静脉注射阴性腺病毒载体;M组尾静脉注射生理盐水;24 h后上述3组腹腔注射LPS/D-GalN;N组尾静脉和腹腔均注射生理盐水。注射LPS/D-GalN8 h后,麻醉并处死鼠取肝脏,冰冻切片荧光显微镜检测腺病毒转染率;Western Blot检测各组肝细胞Fas表达;RT-PCR检查Fas mRNA表达。结果:RNAi组和HK组腺病毒对肝细胞的转染率差异没有显著性(P=0.935);RNAi组与M组和HK组相比肝细胞Fas表达水平显著减少(P<0.01),其Fas mRNA水平也明显降低(P<0.01)。结论:串联重组腺病毒载体能有效转染肝细胞并抑制LPS/D-GalN诱导的BALB/c鼠肝细胞Fas基因的过表达。

APO－1／Fas（CD95）分子研究进展

ＡＰＯ－１／Ｒａｓ为Ｉ型跨膜糖蛋白，分子量４５ＫＤ，属于ＮＧＦ／ＴＮＦ受休家族，广泛分布于多种组织中，与之结合的配体及单克隆抗休均可诱导细胞凋亡。已发现ＡＰＯ－１／Ｆａｓ参与了胸腺细胞选择，ＣＴＬ效应、免疫应答调节等多项生理活动，与自身免疫疾病的发生联系密切，与肿瘤的生长和转移也潜在相关，提示ＡＰＯ－１／Ｆａｓ和相应配体的相互作用可能是机体维持自身稳定的一条重要途径。第五届国际白细胞抗原会议命名ＡＰＯ－１／Ｆａｓ为ＣＤ９５。

SYBR荧光实时定量PCR检测肝移植受者CD95和CD95L mRNA表达

目的检测肝移植受者外周血淋巴细胞CD95和CD95L mRNA的表达,并探讨其在移植肝急性排斥反应中的意义。方法采用SYBR荧光实时定量PCR法检测56例肝移植受者外周血淋巴细胞CD95和CD95L mRNA的表达。结果 CD95和CD95L mRNA在移植肝急性排斥患者外周血中的表达均显著升高(P<0．01),时间上平均早于血肝功能酶谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高2 d。结论 CD95和CD95L与移植肝急性排斥反应密切相关,CD95和CD95L mRNA可作为移植肝急性排斥反应发生的预测和诊断指标之一。

HIV感染对记忆型和处女型CD4^+T细胞上CD95的影响

目的 :了解 CD95在 HIV感染者记忆型和处女型 CD4 + T细胞表面的表达情况 ,探讨 Fas/ CD95在 HIV感染中的作用。方法 :采用流式细胞检测仪 (FACS)对 HIV感染者外周血 CD4 + T细胞表面 CD95、CD4 5 RA、CD4 5 RO的表达进行分析 ,用 EL ISA检测血清中 Fas水平。结果 :HIV感染后 ,血清 Fas水平随疾病的进展而逐渐升高 ,同时伴有处女型 T细胞表面 CD95表达增高以及记忆型 T细胞 CD95表达逐渐下降。结论 :Fas参与了 HIV的感染过程。研究 Fas和 CD95、CD4 5 RA、CD4 5 RO之间的关系 ,可以加深对 HIV致病机制的认识 ,并可了解疾病的进展情况和指导治疗。

肺结核患者血中CD95与PD-1,PD-L1的检测与分析

目的 研究肺结核病人外周血T淋巴细胞上CD95与程序性死亡因子-1（PD-1）及其配体PD-L1的表达情况,初步探讨其在肺结核发生发展中的意义.方法 采用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测63例初治活动性肺结核患者外周血T淋巴细胞上CD95与PD-1,PD-L1的表达水平,并与正常人对照,进行临床分析.结果 初治活动性肺结核患者外周血T淋巴细胞上CD95的表达率为（62.07±14.87）%,与正常对照组（35.74±10.14）%比较显著升高（t=8.515,P＜0.05）;PD-L1的表达率为（26.55±12.8）%,与正常对照组（18.56±6.46）%比较显著升高（t=3.127,P＜0.05）;而PD-1的表达率（13.64±9.10）%与正常对照组（28.71±7.06）%比较显著降低（t=-7.766,P＜0.05）;经相关性分析,初治活动性肺结核患者外周血T淋巴细胞上CD95与PD-1的表达水平呈正相关,差异具有统计学意义（r=0.279,P＜0.05）,CD95与PD-L1表达水平无确定相关性（r=-0.025,P＞0.05）.结论 CD95和PD-L1在肺结核病患者T淋巴细胞上的表达明显升高,这可能在肺结核病的发生、发展过程中起重要作用.

老年人外周血淋巴细胞的凋亡及CD28和CD95的表达

目的通过对健康老年人与健康成年人外周血淋巴细胞的凋亡率及CD28和CD95表达水平的比较性研究,观察衰老对淋巴细胞凋亡的影响,以及CD28和CD95与淋巴细胞凋亡的关系。方法将实验对象分为2组:成年组(25～59岁)与老年组(60～90岁)各20例,采用免疫荧光标记流式细胞术检测外周血淋巴细胞CD28和CD95的水平;Annexin-V-FITC/PI双染色流式细胞术测定地塞米松诱导的淋巴细胞凋亡。结果老年组:淋巴细胞凋亡率〔(14.90±4.12)%〕显著高于成年组〔(8.12±3.12)%〕;CD28+CD95-〔(8.80±4.86)%〕及CD28+〔(36.31±10.38)%〕均明显低于成年组〔(23.09±3.48)%、(52.29±4.90)%〕,而CD28-CD95+〔(53.23±8.28)%〕、CD95+〔(80.25±7.19)%〕及CD28-〔(63.69±10.38)%〕明显高于成年组〔(33.58±4.72)%、(63.18±4.12)%、(47.71±4.90)%〕;CD28+CD95+在两组间差异无统计学意义。淋巴细胞凋亡率与CD28(CD28+)呈负相关,与CD95(CD95+)呈正相关。结论老年人淋巴细胞凋亡率上升;CD28+表达下降,CD28-、CD95+表达上升;淋巴细胞的凋亡率与CD28+、CD95+有相关性。提示老化导致老年人淋巴细胞凋亡增加,CD28和CD95的变化与淋巴细胞凋亡密切相关。

慢性肝炎组织中CD95（Fas／APO－1）抗原的分布及其意义

ＣＤ９５（Ｆａｓ／ＡＰＯ－１）是存在于细胞表面介导细胞凋亡的膜受体分子，属于ＴＮＦＲ／ＮＧＦＲ超家族的成员。本文用免疫组织化学法研究Ｆａｓ抗原在乙型和丙型肝炎病毒引起的慢性肝炎肝组织中的分布，探讨细胞凋亡启动因子Ｆａｓ在病毒性肝炎发病机制中的作用。结果显示，Ｆａｓ抗原表达阳性细胞在肝小叶中多呈散在或灶状分布于肝小叶周边靠近汇管区的碎屑样坏死区内，周围有淋巴细胞浸润，但也有少数病例Ｆａｓ抗原表达在肝小叶内呈弥漫分布，一般局限于某个肝小叶。Ｆａｓ抗原仅表达于肝细胞浆和／或胞膜上且呈细颗粒状均匀分布，核内未见表达，但其表达的肝细胞又仅限于核心抗原阳性和／或ＨＢｘＡｇ阳性的肝细胞。随着慢性肝炎组织炎症活动性的增加及纤维化程度的增力。，Ｆａｓ抗原表达的阳性率也显著增加（Ｐ＜０．０５）。Ｆａｓ抗原表达阳性的病例在活检时的血清ＡＬＴ浓度（８３．５±２７．４ＩＵ／ｍｌ）明显高于该抗原表达阴性者（２６．５±１８．７ＩＵ／ｍｌ）（Ｐ＜０．００１），而与患者的年龄和性别无关。结论：Ｆａｓ抗原表达的阳性率与慢性肝炎的活动度及肝纤维化的程度相关；Ｆａｓ杭原表达阳性的病例血清ＡＬＴ水平高，提示Ｆａｓ高表达于病变较严重的组织；Ｆａｓ抗原?

类风湿关节炎survivin,CD95及PTEN相关信号分子研究进展

类风湿关节炎是一种以关节滑膜浸润性增生、炎症反复发作及关节软骨和骨质破坏为主要病理改变的慢性自身免疫性疾病,凋亡抑制、过度增殖并侵袭关节软骨及骨质是类风湿关节炎的主要分子机制。本文对survivin、CD95、PTEN及其他基因的生物学特性,以及其对类风湿性关节炎病情进展和疾病调控中的作用进行综述。

肾移植术后急性排斥受者外周血中CD95定量表达水平的动态观察

目的监测肾移植术后急性排斥受者外周血中T淋巴细胞表面CD95定量表达的动态变化。方法采集肾移植受者不同时间段的抗凝静脉血与相应荧光标记的单克隆抗体反应,用双色流式细胞术定量分析T淋巴细胞表面CD95的表达量,同时分析健康对照组CD95的定量表达。结果健康成人T淋巴细胞表面CD05的表达量为(6 226.5±2 162.3)分子/细胞,无性别及年龄差异(P>0.05);肾移植术后稳定组受者CD95的表达量为(7 323.4±1 769.8)分子/细胞,与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。肾移植受者在术后出现急性排斥时CD95表达水平明显升高[(23 107.4±10 517.7)分子/细胞],免疫冲击治疗后呈下降趋势,至治疗2个月后CD95的表达水平与稳定组差异已无统计学意义(P>0.05)。结论CD95参与了肾移植术后急性排斥反应的免疫过程,其表达水平可作为肾移植术后受者急性排斥反应的辅助诊断指标,且在评估治疗效果中具有重要意义。

老年人外周血淋巴细胞CD28及CD95表达变化研究

目的通过对老年人与成年人外周血淋巴细胞CD28及CD95表达水平的比较性研究，观察淋巴细胞凋亡在免疫衰老中的作用。方法采用免疫荧光标记流式细胞术，分析成年组（20-59岁）与老年组（60-90岁）各20例的外周血淋巴细胞表型水平。结果老年组CD28^＋CD95^-[（8.80±4、86）％]及CD28^＋细胞[（36．32±10．38）％]明显低于成年组[（23.09±3．48）％、（52．29±4、90）％]（P〈0.01），而CD28^-CD95^＋[（53．23±8．28）％]、CD95^＋[（80．25±7、19）％]及CD28^-细胞[（63．68±10、38）％]明显高于成年组[（33．58±4．72）％、（63．18±4．12）％、（47.71±4．90）％]（P〈0．01）。结论老年人CD28^＋表达随年龄增长而下降。CD28^-及CD95^＋表达随年龄增长而上升。提示淋巴细胞凋亡在免疫衰老中可能具有重要作用。

肝细胞癌患者外周血CD95和OX40L的表达

目的:研究肝细胞癌(HCC)患者外周血CD95和OX40L mRNA的表达情况,并探讨其临床意义。方法:将研究对象的淋巴细胞与相应荧光标记的单克隆抗体反应,经洗涤、固定后,应用双色流式细胞术分析T淋巴细胞表面CD95+CD3+的表达量。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法检测外周血单个核细胞共刺激分子OX40L mRNA的表达水平。结果:HCC患者外周血CD95+CD3+的表达水平明显高于健康对照组,差异有统计学意义([34±20)%vs(20±7)%,t=2.960,P<0.01];HCC患者外周血单个核细胞OX40L mRNA表达水平明显低于健康对照组,差异有统计学意义(0.46±0.36vs0.86±0.70,t=2.302,P<0.05)。结论:HCC患者外周血CD95及OX40L分子的异常表达在HCC的发生中起重要作用。

慢性乙型肝炎患者外周血CD8^+T细胞CD95表达的研究

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T细胞CD95分子的表达水平,了解CD95分子表达与炎症进展的关系。方法采集37例慢性乙型肝炎患者及健康对照者外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),用流式细胞术检测外周血CD8+T细胞CD95分子的表达情况。结果高病毒载量组和低病毒载量组CD8+T细胞CD95的表达均显著高于健康对照组(P<0.05);CD95的表达及CD8+T细胞频率之间存在负相关关系(r=-0.3486)。结论慢性乙型肝炎患者CD95的高表达可能促进了CD8+T细胞的凋亡,使CD8+T细胞的抗病毒作用减弱,可能与HBV持续感染、慢性乙型肝炎的形成机制有关。

CD95、Bcl-2和TGF-α表达在慢性肾衰及血液透析患者的临床应用

目的:分析慢性肾功能衰竭患者及血液透析前后CD95抗原(Fas)、抗细胞凋亡因子(Bcl-2)蛋白及转化生长因子-α(TGF-α)含量变化及相互关系。方法:采用流式细胞术及放射免疫分析,分别测定患者血液透析(HD)前后外周血单个核细胞中CD95、Bcl-2阳性细胞数及血清转化生长因子-α的表达。结果:透析组、非透析组CD95明显高于对照组。Bcl-2与TGF-α含量均明显低于对照组(P<0.01)。HD后CD95表达明显高于HD前(P<0.05),Bcl-2蛋白在HD前后无显著性差异(P>0.05)。结论:CD95、Bcl-2及TGF-α表达在慢性肾功能衰竭及血液透析过程中起重要作用。

RP-HPLC法测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸的含量

目的测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸(IsoAsp)含量。方法采用ISOQUANT誖异天冬氨酸检测试剂盒结合反相高效液相色谱法测定样品中IsoAsp含量,采用Phenomenex Synergi 4μm Hydro RP-80 C18色谱柱(150 mm×3 mm,4μm),以7.9 mmol/L磷酸二氢钾-1.1 mmol/L磷酸氢二钾-10%甲醇为流动相A,以甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速为0.43 mL/min。结果对照品和3批原液中IsoAsp含量相近(0.30～0.32 mol/mol sCD95-Fc),3批成品中IsoAsp含量明显增高(0.51～0.53 mol/mol sCD95-Fc);25℃和37℃处理24 h后成品中IsoAsp含量无明显变化,60℃处理后明显增加。结论该法适用于可溶性CD95-Fc融合蛋白中IsoAsp含量检测,高温处理可加快样品中IsoAsp生成。

抗CD95单克隆抗体诱导的活化T细胞凋亡时转录因子nur77的表达

以抗ＣＤ９５的特异性单克隆抗体（ＣＨ－１１）诱导人Ｔ细胞Ｊｕｒｋａｔ细胞系发生凋亡，Ｊｕｒｋａｔ细胞在发生凋亡过程中出现典型的ＤＮＡ梯形片段化，以荧光染料（ＰＩ）标记的流式细胞学技术对于发生凋亡的细胞进行定量测定，证实发生凋亡的细胞百分比在各个时间点上为６．１％～４３．５％之间。以电泳泳动迁移率（ＥＭＳＡ）对于发生凋亡的细胞核中转录因子ｎｕｒ７７的表达进行了研究，发现以抗ＣＤ９５单克隆抗体诱导的活化Ｔ细胞发生凋亡时，ｎｕｒ７７转录因子表达水平有显著提高。研究结果对了解细胞凋亡时的信号转导与分子生物学机制具有重要意义。

IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血细胞毒性T淋巴细胞CD95表达及其凋亡率影响的实验研究

探讨IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血细胞毒性T淋巴细胞(CTL)CD95表达及其凋亡率的影响。分离 26例乙型肝炎患者(其中慢性乙型肝炎16例,慢性重型乙型肝炎10例)和20例健康献血员外周血单个核细胞 (PBMC),在IFNα-2a作用前后通过流式细胞仪分别检测PBMC中CTL CD95的表达及其凋亡率。结果表明,乙型肝炎患者外周血CTL存在活化诱导的细胞死亡(AICD)现象,而IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血CTL CD95表达及 CTL凋亡率并无影响。

乳腺癌组织中TCR-ζ链的表达及外周血中CD8^+CD28^+和CD8^+CD28^-、CD95表达临床意义

目的分析TCR-ζ链在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集2015年5月~2017年8月延安大学附属医院(以下简称“我院”)经过手术及病理证实的乳腺癌患者30例(对应肿瘤组织标本,癌旁组织),收集同期来我院体检及治疗健康人群、乳腺纤维腺瘤、乳腺囊性增生病各30例作为对照,采用流式细胞技术对乳腺癌组织、癌旁组织及正常乳腺组织TCR-ζ链进行检测,并且检测乳腺癌患者血清CD8+CD28+和CD8+CD28-、CD95、TCR-ζ链的表达,分析乳腺癌组织、正常乳腺组织及癌旁组织TCRζ链的表达;外周血中各组CD8+CD28+和CD8+CD28-、CD95、TCR-ζ链表达对比及外周血、癌组织中TCRζ链表达与乳腺癌病理特征的关系。结果正常乳腺组织、癌旁组织、乳腺癌组织TCR-ζ链相对表达量差异有统计学意义(P < 0.05),其中癌旁组织、乳腺组织表达水平均高于正常乳腺组织(P < 0.05)。外周血中CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD95、TCR-ζ链等免疫指标在乳腺癌、乳腺纤维腺瘤、乳腺囊性增生病四种类型患者间差异有统计学意义(P < 0.05),其中乳腺癌患者血清CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD95、TCR-ζ链表达水平高于乳腺纤维腺瘤、乳腺囊性增生病及健康人群相应水平,差异有统计学意义(P < 0.05);外周血TCR-ζ链表达水平与癌原发灶大小、淋巴结是否转移、手术前后及CA125水平关系分析差异有统计学意义(P < 0.05)。结论检测外周血TCR-ζ链对乳腺癌患者进行提前筛选、诊断或了解患者病情状况,其在临床上是非常有意义的指标。