骨髓内皮细胞分泌的抑制CFU-F生长的因子(英文)

为探讨骨髓微环境中内皮细胞调节造血的可能机制 ,本实验研究了骨髓内皮细胞无血清条件培养液(BMEC CM )及其不同分子量组分对骨髓成纤维祖细胞 (CFU F)生长的作用。在体外培养条件下 ,收集人和小鼠纯骨髓内皮细胞无血清条件培养液 ,应用连续超滤技术从其中制备出分子量 >10kD ,3- 10kD和 <3kD三种组分 ,进行骨髓CFU F集落形成实验 ,检测这些条件培养液及其超滤组分的作用。结果显示 ,人和小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液和分子量 <3kD超滤组分都抑制CFU F的生长 ,但是分子量 >10kD和 3- 10kD组分却不产生这种效应。两种条件培养液及其 <3kD组分不仅减少CFU F集落形成数 ,同时也使集落变小 ,而且 ,<3kD组分与CFU F集落数之间有明显的负相关浓度依赖性关系。这些结果提示 ,骨髓内皮细胞至少能分泌一种分子量小于 3kD的对骨髓CFU F生长有抑制作用的细胞因子。

人参蜂王浆对正常和照射豚鼠造血免疫器官CFU-F影响的实验研究

骨髓及脾细胞体外培养中加不同浓度人参蜂王浆后培养8～12天,计数基质祖细胞集落(CFU-F)数。发现实验组形成的CFU-F小型集落明显高于对照组。培养1Gy照射的骨髓细胞,加入3.10^(-1)～3.10^(-3)g/ml人参蜂王浆后,细胞呈融合生长,认为人参蜂王浆对骨髓和脾细胞体外培养形成的小型CFU-F有成集落刺激作用,而对大型集落则相反。

放射损伤小鼠骨髓VEGF、CFU-GM、CFU-F的变化及川芎嗪对其影响的研究

目的:探讨放射损伤小鼠骨髓血管内皮细胞生长因子(VEGF)、骨髓粒巨噬细胞集落形成单位(GFU-GM)数和骨髓成纤维细胞集落成单位(CFU-F)的变化意义及川芎嗪对其的影响。方法:健康昆明小鼠经6.0Gy60Coγ照射后,立即喂饲川芎嗪并设对照组和正常组,分别于第3、7、14、21天检测其骨髓VEGF、CFU-GM和CFU-F的变化。结果:照射后第3、7、14 d骨髓VEGF表达水平显著降低,但川芎嗪组高于对照组;随着时间推移骨髓VEGF表达水平逐渐恢复,照射后第21 d川芎嗪组已恢复正常(P>0.05),而照射组仍低于正常组。照射后骨髓CFU-GM和CFU-F明显受到抑制,但川芎嗪组显示了良好的保护作用。结论:放射损伤后小鼠骨髓VEGF的表达变化在造血功能的恢复过程中起重要作用;川芎嗪具有改善骨髓造血功能的作用。

人类脐血与正常骨髓CFU-F特性的比较研究

用液体培养法对１４份人类脐血和１０份正常骨髓ＣＦＵ－Ｆ的生长特性、形态学、细胞化学及超微结构等进行了比较研究，结果除生长特性及集落数不同外，两者无明显差异。说明脐血含有基质细胞。在脐血ＣＦＵ－Ｆ培养中，还发现一种来源、性质不明的细胞。

骨髓CFU-F体内、体外成骨功能研究

目的：研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系，为临床应用奠定基础。方法：采用Ｌｉｕｒｉａ多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术、Ｇｏｍｏｒｉ染色和Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色技术。结果：移植物在肾被膜下形成软骨细胞团及骨基质；在β－ＧＰ存在下，骨髓基质ＣＦＵ－Ｆ体外培养可见形成钙化的骨板。结论：骨髓基质ＣＦＵ－Ｆ为基质多能干细胞，能增生分化为成骨以及造血诱导微环境所必需的各种基质细胞系。

人骨髓基质细胞上清液对原代白血病细胞的杀伤作用及CFU-F生成的影响

观察了人胎骨髓基质细胞上清液对6例白血病患者骨髓原代白血病细胞存活程度及CFU-F形成的影响。结果表明。骨髓基质细胞上清液对原代白血病细胞具有杀伤作用(p<0.002—0.001)。同时发现基质细胞上清液还能促进CFU-F的形成(p<0.01-0.001)。本文还对上述变化的可能机制进行了讨论。

造血微环境与造血机能ⅩⅩⅨ.骨髓CFU-f的放射敏感性测定及其亚群分类探讨

本文依据集落细胞密度进行了豚鼠骨髓CFU-f的剂量—存活曲线测定。结合有关放射生物学资料的分析和集落形态观察,证明该CFU-f为非均一性群体,可区分为致密型(D_0=2.17 Gy,N=1.14)和疏松型(D_0=4.09 Gy,N=1.13)等两个放射敏感性不同的亚群。这一结果对于加深理解CFU-f的放射生物学特性和放射损伤与修复规律,探讨CFU-f的亚群分类有着重要意义。

豚鼠骨髓滋养层对CFU-F的影响及其最佳作用时间的研究

本文研究了受60Gy照射的豚鼠骨髓细胞作滋养层对正常小鼠骨髓细胞造血基质祖细胞(CFU-F)体外培养成集落的影响,优选了滋养层与骨髓细胞的最佳作用时间。种植骨髓细胞当天或次日添加滋养层细胞后继续培养7～10天则CFU-F数最多;种植骨髓细胞当天加滋养层而次日通过换液去掉未贴壁细胞则CFU-F数最低;骨髓细胞培养4天后再加滋养细胞则不起成集落刺激作用;不论在集落数及集落所含细胞数上,加滋养层者都比不加者为多。

rhG-CSF对小鼠骨髓间充质干细胞的动员作用

为了研究rhG-CSF体内应用对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的动员作用,将30只小鼠随机分为2组:rhG-CSF组和对照组,分别给予皮下注射rhG-CSF80μg/(kg.d)和等量生理盐水,连续5天,在最后1次注射后分别于6,12和168小时取小鼠骨髓和外周血,以1×106单个核细胞(MNC)接种于12孔培养板14天,对形成的成纤维细胞集落(CFU-F)进行计数,用胰蛋白酶消化后应用流式细胞术测定表面抗原并进行成脂,成骨诱导。结果表明:rhG-CSF组骨髓形成的CFU-F数均较对照组明显增加(p<0.01)。6小时取材较12小时,168小时取材形成的CFU-F数目多(p<0.01),12小时与168小时CFU-F差异无统计学意义。流式细胞术检测骨髓CFU-F显示CD34-、CD133-、CD90+、CD105+,骨髓CFU-F具有成脂、成骨分化的能力。rhG-CSF组6小时取材外周血具有类似骨髓的CFU-F,出现的频率为(0.50±0.11)×10-6,与对照组比较差异有显著性(p<0.05)。结论:rhG-CSF可使小鼠骨髓间充质干细胞增殖加速,但时间短暂,其高峰在rhG-CSF应用5天后的6小时内。rhG-CSF对小鼠间充质干细胞也有动员能力,但作用较弱。

小鼠骨髓基质祖细胞低剂量辐射效应研究

采用体外液体单层和半固体培养方法，研究小鼠骨髓细胞在受到0、25、50、75、100mGy照射后，骨髓基质祖细胞的形成、特性及功能变化。结果表明：各照射组CFU－F有不同程度增多，50、75mGy组有显著意义；CFU－F基质层对粒系祖细胞集落形成单位（CFU－GM）的支持作用明显增加；CFU－F基质层对骨髓细胞的粘附能力在50、75mGy组有显著提高。结论是骨髓基质祖细胞低剂量照射时具有兴奋效应。

醋酸铅对小鼠骨髓间充质干细胞生长的影响

目的:探讨醋酸铅对小鼠骨髓间充质干细胞生长的影响。方法:体外培养法培养小鼠骨髓间充质干细胞,加入40、60和100μmol.L-1醋酸铅,观察其对间充质干细胞成集落(CFU-F)能力的影响及其变化规律。结果:醋酸铅浓度40、60和100μmol.L-1时的成集落率分别为(3.30±0.20)、(2.40±0.10)和(1.57±0.21)/105,与对照组成集落率[(4.20±0.20)/105)]比较差异有显著性(P<0.05);醋酸铅各浓度组间比较,CFU-F集落率差异有显著性(P<0.05),剂量-效应关系分析醋酸铅浓度与CFU-F集落率呈负相关关系(r=-0.960,P<0.01)。体外培养6 d时,对照组集落中细胞多呈现梭形,加铅组细胞多呈不规则形状或圆形。结论:醋酸铅可明显抑制体外培养的骨髓间充质干细胞的成集落率生长并随剂量的增大抑制作用明显增强。

骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的 :观察成纤维细胞集落形成单位 (CFU- F)贴壁层的形成、体外传代培养、扩增的情况 ,研究各阶段 (CFU- F)对粒 -单核细胞集落形成单位 (CFU- GM)和红细胞集落形成单位 (CFU- E)生长及细胞因子对造血的支持作用 ,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力。方法 :利用改进的液体培养法 ,培养骨髓基质细胞并传代 ,利用甲基纤维素半固体培养法 ,培养人骨髓细胞 ,观察 CFU- GM、CFU- E集落数。结果 :人骨髓基质细胞在体外可以传代培养 4代并能扩增 2 8倍 ,其中 F3代对 CFU- GM和 CFU-E的促进增殖作用最强 ,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强。结论

鸡贫血因子病的血液病理学变化

本实验用鸡贫血病毒（ＣＡＶ）感染１日龄健康ＡＡ雏鸡，以未感染雏鸡为对照，在感染后７、１４、２１、２８、３５、４２日龄检测其外周血液各种血细胞数量、血红蛋白含量、红细胞压积、红细胞平均体积（ＭＣＶ）、红细胞平均血红蛋白量（ＭＣＨ）、红细胞平均血红蛋白浓度（ＭＣＨＣ）；骨髓红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）、粒单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）、基质成纤维祖细胞（ＣＦＵ－Ｆ）的增殖功能；血清因子和胸腺集落刺激因子（ＣＳＦ）对造血祖细胞增殖功能影响；骨髓造血细胞分化功能；骨髓造血细胞和基质糖类含量；骨髓造血组织病理形态变化。结果发现，感染鸡骨髓红系、粒单系造血祖细胞增殖功能和细胞的分化功能明显降低或呈现障碍，血清中造血生长因子明显降低或抑制因子异常增多；骨髓造血组织酸性粘多糖和ＰＡＳ阳性细胞减少，基质酸性粘多糖增多和中性粘多糖减少；外周全血细胞减少，呈现正色素性贫血、白细胞和血栓细胞减少症。

豚鼠淋巴结基质祖细胞的实验研究

豚鼠淋巴结单个核细胞体外单层培养形成CFU—F集落,其种植的细胞数与成集落数呈良好的线性关系;淋巴结基质祖细胞的Do值为2.8Gy,n值1.5;低浓度(10μg/ml)PHA对集落形成有一定的刺激效应,高浓度(40μg/ml)可抑制集落的形成;经对集落大小、所含细胞数及密度进行比较,说明CFU—F是非均质的,可能因存在不同的亚群。

培养条件对小鼠骨髓基质集落形成细胞在体外生长的影响

对一些可能影响小鼠CFU—f集落形成率的因素进行了研究。这些因素包括培养基、血清、培养皿、小鼠品系以及培养容器中的氧浓度。研究发现,在诸因素中以氧浓度最为关键。用含5％O_2、5％CO_2及90％N_2的混合气体代替含5％CO_2空气不仅使CFU—f的集落形成率明显提高,而且可减轻其它因素对细胞生长的影响。用燃烛法消耗空气中的氧虽可使某些肿瘤细胞系在软琼脂中形成集落,但不利于CFU—f生长。

姬松茸对正常小鼠骨髓造血干、祖细胞的影响

采用干、祖细胞培养等技术,观察姬松茸粗多糖(ABPS)对正常小鼠骨髓造血的影响。结果表明,ABPS 0.1、0.4g/kg/d×5d,ip能显著促进正常小鼠骨髓粒—单系祖细胞、成纤维祖细胞和多能造血干细胞的增殖(P<0.01),且0.4g/kg的作用较0.1g/kg更显著(P<0.05或0.01);ABPS 0.1g/kg亦能促进正常小鼠骨髓红系祖细胞的增殖(P<0.05),但0.4g/kg则使CFU—E产率有下降趋势(P>0.05)。

小鼠骨髓基质成纤维细胞与成骨关系的实验研究

目的 :研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系。方法 :Luria多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术。结果 :移植物在移植处形成软骨细胞团及骨基质。结论 :骨髓基质成纤维细胞集落形成细胞 ( CFU-F)为基质多能干细胞 。

1，25-(OH)2D3在促进大鼠外周血间充质干细胞扩增中的作用

目的:探讨大鼠外周血中是否存在非黏附间充质干细胞(MSCs)以及1,25-(OH)2D3能否刺激它们形成成纤维细胞集落形成单位(CFU-f)。方法:从大鼠外周血中分离单核粒细胞(PBMGC)组份,在缺乏和添加10-8mol/L1,25-(OH)2D3条件下进行贴壁培养。培养至4天和8天时,将未贴壁细胞转移到新的培养皿中继续培养,即:"pour-off"培养,培养16天形成的细胞进行亚甲基蓝染色,计数CFU-f数目,并对4天"pour-off"培养形成的细胞进行免疫细胞化学染色。结果:PBMGC培养及4天和8天非黏附PBMGC培养都能形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3能够明显地促进它们形成CFU-f。非黏附细胞形成的克隆表达波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原,而不表达Ⅰ型胶原。结论:大鼠外周血中存在非黏附MSCs,在体外培养能够形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3具有促进外周血MSC扩增的作用。

全反式维甲酸对骨髓纤维细胞的影响

通过纤维细胞集落(CFU-F)的培养,观察了急性早幼粒细胞性白血病(APL)的CFU-F,结果APL 患者较正常骨髓明显低下(4.3±1.63/2×10~5细胞)(n=9);完全缓解后则上升达正常水平(12.4±2.55/2×10~5)。体外试验,维甲酸(RA)加入CFU-F 培养系后,CFU-F 下降为3.11±1.24/2×10~5细胞,明显低于对照组8.5±1.57/2×10~5(P<0.05)。提示RA 对骨髓纤维细胞有抑制作用,此结果可能为RA 治疗骨髓纤维化提供初步依据。

自体骨髓基质细胞回输促进急性白血病病人化疗后骨髓造血恢复的研究

目的通过回输成纤维集落生成单位(CFU-F)促进骨髓实质细胞造血恢复。减轻白血病化疗的副作用,促进骨髓损伤早日恢复。方法选取经明确诊断的AML患者化疗回输组前后行自身对照,化疗回输前及后采骨髓行红系造血祖细胞(BFU-E)、粒、巨系集落生成单位(CFU-GM)培养,观察化疗回输前后的外周血象。结果化疗回输CFU-F后第3周,其BFU-E、CFU-GM数明显高于化疗回输前的水平(P<0.05),同时高于单纯化疗组第3周测得的BFU-E和CFU-GM数(P<0.05)。结论体外扩增造血基质细胞于化疗自体回输方法,促进了病人造血恢复,对预防和减轻化疗药物造成的骨髓损伤,缩短化疗间期,加大化疗药物剂量,具有理论意义和应用价值。