利用UPLC-DAD-HRMS分析低温压榨鲜青花椒油贮藏期间的色素变化

旨在为低温压榨鲜青花椒油的工业生产、贮藏和质量控制提供借鉴,利用超高效液相色谱-二极管阵列检测器-高分辨质谱(UPLC-DAD-HRMS)技术对低温压榨鲜青花椒油中色素进行测定,并研究贮藏过程中光、氧、温度对低温压榨鲜青花椒油的色素含量和色泽L^(*)、a^(*)、b^(*)的影响。结果表明:从低温压榨鲜青花椒油中鉴定出32种叶绿素和10种类胡萝卜素;叶绿素中主要含有叶绿素a、C13^(2)-羟基-叶绿素a、叶绿素b和脱镁叶绿素a;类胡萝卜素中主要含有叶黄素和β-胡萝卜素;叶绿素总量为9.44mg/kg,类胡萝卜素总量为4.95mg/kg。贮藏过程中影响低温压榨鲜青花椒油中色素降解最主要的因素是光,其次是温度,氧气几乎没有影响。另外,a^(*)可以作为衡量低温压榨鲜青花椒油色素含量及色泽控制的指标。

GSDME在DADS诱导白血病K562细胞焦亡中的作用研究

目的:研究DADS(Diallyl disulfide, DADS)诱导K562细胞焦亡(pyroptosis)及其分子机制。方法:Western Blot检测Kasumi、K562、THP-1、HL-60、NB4细胞的Gasdermin家族蛋白E(Gasdermin E, GSDME)、Gasdermin家族蛋白D(Gasdermin D,GSDMD);甲基特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)法检测K562及NB4细胞GSDME基因启动子检测区甲基化情况;CCK-8检测DADS对K562细胞增殖活力的影响;Western Blot、LDH释放实验检测DADS处理K562细胞后GSDME、GSDME-N、IL-1β、Cleaved IL-1β蛋白表达水平及乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase, LDH)释放量变化;慢病毒转染技术构建GSDME敲低的稳转K562细胞株;Western Blot检测下调GSDME对DADS处理K562细胞GSDME-N端蛋白表达水平的影响。结果:Kasumi、K562、THP-1、HL-60、NB4中GSDME、GSDMD的蛋白表达水平存在差异;NB4细胞的GSDME基因启动子检测区甲基化扩增出阳性条带,而非甲基化扩增为阴性;K562细胞GSDME基因启动子检测区甲基化未能扩增出阳性条带,而非甲基化扩增为阳性;DADS处理后K562细胞的LDH释放量、GSDME-N、Cleaved-IL-1β蛋白均显著升高(P<0.01);与NC组相比,敲低组的K562细胞中mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);DADS处理后,NC组的GSDME-N蛋白水平明显上升(P<0.001),QD组GSDME-N蛋白的水平无显著差异(P>0.05);与NC-DADS组相比,经过DADS处理的QD组GSDME-N蛋白水平明显下降(P<0.001)。结论:DADS诱导K562细胞发生细胞焦亡,其分子机制可能与GSDME介导的焦亡通路有关。

不同品种苦荞UPLC-DAD-CAD指纹图谱和有效成分含量比较

建立13个不同品种苦荞麦的超高效液相-二极管阵列检测器-电雾式检测器(UPLC-DAD-CAD)指纹图谱,并测定4种主要成分含量,为科学评价和控制其质量提供可靠依据。采用ThermoFisher AccucoreTMC18色谱柱(3.0 mm×100mm,2.6μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱;检测波长为285nm;CAD检测器雾化温度为50℃,采集频率和过滤常数分别为10 Hz和5 s;采用夹角余弦法进行相似度评价,建立了苦荞麦UPLC-DAD-CAD特征指纹图谱共有模式。标定了20个电雾式检测共有峰与7个紫外检测共有峰,在CAD检测器中各品种间相似度均大于0.999,DAD检测器中各品种间相似度均大于0.948;同时指认了芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山奈酚4种主要成分,并以芦丁的峰面积为标准,计算了13个品种苦荞麦中山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山奈酚3种待测成分的响应比例值,结果信号响应均以CAD检测器较优。分析比较了4种成分在不同品种苦荞麦中的含量差异,结果表明生长在四川盆地的川荞1号、川荞2号、西荞1号和西荞2号4种黄酮含量相对较低,与其他大部分品种苦荞麦相比,皆存在统计学差异,而生长在海拔高光照强的云贵高原和川西高原的迪苦、黔荞和米荞4种黄酮含量相对较高。本研究首次使用UPLC-DAD-CAD方法建立了不同品种苦荞麦的指纹图谱并对其有效成分含量进行了测定,为苦荞麦的质量控制和资源评价奠定了基础。

UPLC-DAD同时测定降血压类保健食品中20种非法添加化学药物

采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-DAD)建立同时测定辅助降血压类保健食品中20种非法添加化学药物的方法。采用Luna UPLC C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),以质量分数为0.2%的磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱。流速为0.21 mL/min,柱温为35℃,DAD扫描,检测波长为220 nm,各剂型样品经甲醇提取,通过保留时间和紫外吸收光谱定性,峰面积外标法定量。结果表明:20种药物成分能完全分离,在4~80μg/mL内线性关系良好,回收率为92.3%~104.1%,相对标准偏差(RSD)为1.3%~2.9%。1批阳性样品检出奈比洛尔、乐卡地平、拉西地平,并通过UPLC-MS/MS得到确证。建立的方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,能够达到快速检测降压类保健食品中非法添加化学成分的目的。

HPLC-DAD法测定苗药银丹心泰滴丸中原儿茶醛

目的:建立测定银丹心泰滴丸中原儿茶醛含量的方法。方法:采用HPLC-DAD法,色谱柱:Eclipse Plus C18(5μm, 250 mm×?4.6 mm),Agilent;流动相:0.1%磷酸溶液-甲醇(体积比85∶15);流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:278 nm;进样量:10μL。结果:原儿茶醛质量浓度在8.2995~41.4973μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为101.1%(RSD:1.5%,n=6)。结论:该定量方法准确可靠,重现性好,可用于银丹心泰滴丸的质量控制。

UPLC-DAD法测定人参再造丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种成分含量

目的 建立超高效液相色谱-二极管阵列检测器(UPLC-DAD)法测定人参再造丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种成分的含量。方法 采用Waters CORTECS UPLC C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm);以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min;检测波长为437 nm;柱温40 ℃。结果 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种成分分离度良好,在相应范围内线性关系良好,相关系数(r)均不低于0.999 7,平均回收率分别为92.5%、83.5%、94.3%、98.9%、106.8%,RSD(n=6)分别为2.0%、1.2%、2.6%、2.4%、2.4%。结论 UPLC-DAD法准确可靠、重复性好,可用于人参再造丸的质量控制。

HPLC-DAD波长切换法测定阿司匹林双嘧达莫片的含量及游离水杨酸

目的:建立HPLC-DAD波长切换法测定阿司匹林双嘧达莫片的含量及游离水杨酸的方法。方法:采用Agilent ZORBAX SB C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(20∶5∶5∶70)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长276 nm(阿司匹林)、284 nm(双嘧达莫)和303 nm(水杨酸)。结果:阿司匹林、双嘧达莫和游离水杨酸分别在38.37~383.71、9.60~96.05和1.02~10.21μg·mL^(-1)范围内线性关系良好。平均回收率分别为99.88%(RSD=0.23%)、99.01%(RSD=0.46%)和100.99%(RSD=0.75%)。本法与标准方法含量测定结果无明显差异。含量均匀度A+2.2S在4.7~6.4。结论:建立的含量测定方法,操作简单,更适用于阿司匹林双嘧达莫片的质量控制。

UPLC-DAD法同时测定不同产地黄芩中4种成分的含量

建立超高效液相色谱-二极管阵列检测器法(UPLC-DAD)测定不同产地黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等4个化学成分的含量。采用UPLC-DAD法,采用Endeavorsil C_(18)色谱柱(150.0 mm×2.1 mm,1.8μm),乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,检测波长为280 nm,流速0.3 mL/min^(-1),柱温为30℃。4个化合物分离度良好,呈现较好的线性关系(r>0.9998),平均加样回收率均在98.93%~99.72%,RSD≤2.13%。结果显示4个被测成分在不同产地及批次之间含量差异较大。该方法简单准确,省时高效,可为不同产地黄芩药材质量控制提供一定的科学依据。

HPLC-DAD法分析不同月份和干燥方式下银杏叶色素含量的变化规律

采用HPLC-DAD法研究了不同月份银杏叶色素含量的变化规律,并通过聚类分析和逼近理想值排序(TOPSIS)法评价了不同干燥方式对银杏叶色素含量的影响。研究结果表明:所建立的HPLC-DAD方法简单、准确、灵敏度高、重复性好;4~11月银杏叶色素含量存在明显差异,其中脱植基叶绿素a、脱镁叶绿酸盐a和β-胡萝卜素在4月份达到最高值,分别为(1762±121)、(628±32)和(482±45)μg/g,叶绿素a和b在5月份达到最高值,分别为(8701±571)和(3140±274)μg/g,叶黄素在7月份达到最高值,为(2057±104)μg/g。聚类分析结果表明:12种干燥方式可分为4类,冷冻干燥、40℃减压干燥、40℃常压干燥聚为A类,阴干聚为B类,100℃减压干燥和100℃常压干燥聚为D类,剩下6种干燥方式聚为C类。通过TOPSIS法分析发现:银杏叶干燥方式排名前5的依次为冷冻干燥、40℃减压干燥、40℃常压干燥、阴干和60℃常压干燥。综合考虑,40℃减压干燥是最适合于工业化生产的干燥方法,干燥速度快,且色素得到有效保护。

HPLC-DAD测定止咳平喘类中成药中12种化学药物

目的建立一种灵敏、可靠且能快速筛查止咳平喘类中成药中多种添加化学药物的检测方法。方法采用甲醇超声提取样品中止咳平喘类化学药物,并用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)测定其含量。采用Platisil ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.5%甲酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱,检测波长为250 nm,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃。结果12种化学药物在相应的浓度范围内与其对应峰面积呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999。样品平均回收率为98.6%~100.3%,RSD为1.3%~2.1%。应用该方法对10批次样品进行检测,均未检出阳性成分。结论本方法操作简便、快捷,精密度、稳定性、重复性好,能够达到快速检测止咳平喘类中成药中多种非法添加化学药物的目的。

HPLC-DAD法测定复方麻黄散中非法添加喹烯酮

建立了复方麻黄散中非法添加喹烯酮的HPLC-DAD检查方法。以C18柱为固定相,甲醇-水(60∶40,V∶V)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温30℃,二极管阵列检测器检测,采集波长范围为190~400 nm,提取波长为314 nm。通过液相色谱保留时间、紫外吸收光谱和峰纯度分析对非法添加物进行确认。结果表明,该色谱条件下喹烯酮与其他物质分离良好。喹烯酮在2.0~100.0μg/mL范围内线性关系良好,R2=0.9999。喹烯酮在复方麻黄散中的平均回收率为101.4%,RSD为0.5%;方法的检测限为0.25 g/kg。该方法简便,准确,可靠,可以用于检查复方麻黄散中非法添加喹烯酮。

HPLC-DAD法同时测定银翘解毒丸中7种成分的含量

目的建立HPLC-DAD法同时测定银翘解毒丸中绿原酸、连翘酯苷A、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、牛蒡苷及甘草酸的含量。方法采用色谱柱Agilent 5TC-C_(18)(2)250 mm×4.6 mm;流动相为乙腈:0.3%磷酸,梯度洗脱,流速:1.0 mL·min^(-1);柱温:30℃;进样量为10μL;检测波长:230 nm,340 nm。结果绿原酸、连翘酯苷A、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、牛蒡苷及甘草酸线性范围分别为11.6~231.6、11.2~223.2、1.9~37.1、1.7~31.2、5.1~102.5、12.2~244.4、10.2~203.7μg·mL^(-1),相关系数r均为1.0000;平均加样回收率96.6%~101.8%;RSD%1.12%~2.69%。结论该方法简单可行、稳定性强、灵敏度高,可用于银翘解毒丸的质量控制。

HPLC-DAD/ELSD法测定当归-黄芪药对不同配比下主要有效成分的含量

本文旨在建立高效、快速和精度高的方法测定当归-黄芪药对中主要有效成分阿魏酸、黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量,并探讨当归与黄芪按不同比例配伍时二者中主要有效成分的变化趋势。采用加热回流提取法制备当归、黄芪按5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5比例配伍下的供试品溶液。选用SinoChromODS-AP(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈和0.2%冰醋酸溶液为流动相梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,柱温25℃,选择DAD检测器测定阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷,检测波长为260 nm和310 nm,黄芪甲苷的测定选择ELSD检测器。结果表明:所建立的检测方法线性关系良好,三种指标性成分加样回收率RSD%<3.0%,含量测定发现,黄芪甲苷、阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量随着当归、黄芪配比不同而发生变化。故HPLC-DAD/ELSD法检测操作快速、准确、简便、精密度高且重复性好,本研究初步揭示了当归-黄芪药对不同配比时的主要活性成分变化,为进一步探讨当归-黄芪配伍协同增效的药理学作用提供参考。

鸡蛋中阿莫西林残留HPLC-DAD检测方法的建立

为了能够准确地测定鸡蛋中阿莫西林的残留,本试验建立了高效液相色谱-二级管阵列检测器(HPLC-DAD)方法来检测鸡蛋中阿莫西林残留。采用乙腈沉淀蛋白提取鸡蛋液中的阿莫西林,以超纯水饱和的二氯甲烷作为进一步萃取纯化的溶剂,0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=5.5)和乙腈溶液为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为230 nm,样品进样量为20μL,柱温为30℃的色谱条件对鸡蛋中阿莫西林残留进行检测。结果显示,阿莫西林的质量浓度范围为0.05~100.00μg/mL,与峰面积具有良好的线性关系(R 2=0.9998);该方法的重复性、精密度和稳定性均良好,相对标准偏差在2.0%以内;平均加样回收率介于82.89%~89.92%,相对标准偏差介于1.68%~2.71%;阿莫西林检测限为0.025μg/mL,定量限为0.050μg/mL。结果表明,本试验所建立的HPLC-DAD方法操作过程简便、稳定性好、灵敏度高,可适用于鸡蛋中阿莫西林残留的准确检测。

DADS通过RORα/β-catenin抑制人胃癌MGC803细胞侵袭与EMT

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)通过RORα/β-catenin信号对人胃癌MGC803细胞迁移侵袭与上皮-间质转化(EMT)的影响。方法MGC803细胞实验分为MGC803组、DADS组、SR1078组、SR1078+DADS组。MTT检测细胞增殖能力;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭能力。Western blotting与免疫荧光检测RORα/β-catenin信号与EMT相关分子表达情况,免疫共沉淀检测RORα蛋白与β-catenin蛋白结合能力,相差显微镜观察细胞形态改变。结果与MGC803组比较,DADS组、SR1078组细胞增殖能力分别呈时间依赖性降低(P<0.05);细胞迁移与侵袭能力降低(P<0.05);RORα蛋白与E-cadherin明显上调(P<0.05),而核内β-catenin、转化生长因子-β1、Rac1与Vimentin表达下调(P<0.05);RORα与β-catenin结合明显减少(P<0.05);长梭形细胞减少,异型性降低(P<0.05)。SR1078+DADS组的上述指标结果更明显(P<0.05)。结论DADS通过RORα/β-catenin信号抑制人胃癌MGC803细胞增殖、迁移侵袭与EMT,提示DADS与SR1078的作用相似。

HPLC-DAD法同时测定莪棱胶囊中5种活性成分含量

目的:建立一种同时测定莪棱胶囊中5种活性成分含量的方法。方法:采用Agilent C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),切换检测波长进行梯度洗脱(230 nm,0~15 min,15%A;280 nm,15~16 min,15%A→21%A,16~32 min,21%A,32~45 min,21%A→55%A;270 nm,45~68 min,55%A→85%A);流速1.0 mL/min;柱温30℃;进样体积10μL。结果:莪棱胶囊中5种活性成分在相应浓度范围内线性关系良好(R>0.9990);芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、丹酚酸B和丹参酮ⅡA的平均回收率分别为100.53%(RSD=0.41%)、98.91%(RSD=1.26%)、98.56%(RSD=0.53%)、100.03%(RSD=0.93%)和99.54%(RSD=0.99%),精密度、稳定性、重复性良好,RSD值均小于2%。结论:该研究建立的含量测定方法快速、简便、准确,可成为莪棱胶囊质量控制的一种有效方法。

HPLC-DAD法快速测定生态纺织品中13种致癌染料

采用配备二极管阵列检测器的高效液相色谱仪快速测定纺织品中13种致癌染料,对测试的萃取条件、色谱条件分别进行优化,探究得到最优萃取条件为超声提取温度70℃,超声提取时间30 min,较优色谱条件选择流动相为10 mmoL/L乙酸铵水溶液-甲醇-乙腈,柱温为40℃,在此条件下可以得到目标物分离度较好、目标峰峰形较好的色谱图。

HPLC多波长切换指纹图谱结合化学计量学研究白术土炒前后成分变化规律

目的 建立测定白术、土白术水溶性和脂溶性成分的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)多波长切换指纹图谱,结合化学计量学研究白术土炒前后成分变化规律。方法 建立白术、土白术水溶性及脂溶性成分的HPLC-DAD多波长切换指纹图谱测定方法,测定17批白术和17批土白术的HPLC指纹图谱,采用相似度评价、聚类分析、OPLS-DA分析进行统计分析。结果 白术指纹图谱中共标定9个共有峰,土白术指纹图谱中共标定10个共有峰。指认了新绿原酸、绿原酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ及苍术酮6个成分,土炒后1号峰、4号峰(白术内酯Ⅲ)、8号峰(白术内酯Ⅱ)峰面积增加,2号峰(新绿原酸)、3号峰(绿原酸)、5号峰、6号峰、7号峰、9号峰(白术内酯Ⅰ)、10号峰(苍术酮)土炒后峰面积均降低。结论 所建立指纹图谱方法能够系统地分析白术土炒前后化学成分的变化规律,可为进一步规范白术土炒工艺,制定土白术专属性质量标准,研究土白术炮制原理提供实验基础。

香芪生乳合剂的HPLC指纹图谱建立

目的:建立香芪生乳合剂HPLC-DAD法指纹图谱分析方法。方法:采用ACE EXCEL C_(18)-AR(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为203 nm,进样量为10μL。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(版本2004A)”分别对10批香芪生乳合剂的指纹图谱进行相似度评价,将对照图谱与单味药材进行色谱峰匹配,确定共有峰归属,结合混合标准溶液图谱对其共有峰成分进行指认。结果:10批香芪生乳合剂指纹图谱与对照图谱的相似度大于0.96,有36个共有峰,所有共有峰都能归属到单味药材。结论:建立的香芪生乳合剂HPLC指纹图谱可体现该复方中药制剂中多类成分的整体特征,为该制剂的质量控制提供方法依据。

杂色鲍DAD1的克隆及在发育、弧菌感染、高温和缺氧下的表达分析

抗细胞凋亡因子(DAD1)是细胞凋亡的负调控因子。在杂色鲍转录组测序的基础上,通过RACE的方法,获得了杂色鲍DAD1基因的全长c DNA,命名为HdDAD1。该序列全长553 bp,开放阅读框339 bp,编码112个氨基酸。编码蛋白具有保守的DAD功能域和3段跨膜区。实时定量PCR结果表明,HdDAD1在杂色鲍所检测组织中均有表达,消化道、鳃、血细胞、粘液腺和肾脏中表达量最高。同样,HdDAD1在发育各阶段均有表达,幼虫阶段表达量最高,原肠胚次之,其他胚胎发育阶段和稚鲍表达量最低。HdDAD1能够响应细菌感染、高温和缺氧应激。在弧菌注射12 h后,表达量显著上升。当水温由最适的25°C上升到28°C时,HdDAD1表达量升高;在31°C持续4和96 h时HdDAD1表达量显著上升。在低氧处理4和96 h时,HdDAD1的表达量也显著上升。