EGFP和CM-Dil示踪骨髓间充质干细胞构建组织工程骨的体内研究

目的:应用增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)和CM-Dil标记技术,观察组织工程骨在体内形成过程中种子细胞的变化和转归。方法:分别用EGFP慢病毒表达和CM-Dil染料的方法标记比格犬骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stemcells,BMSCs),MTT法检测标记细胞的体外增殖能力。BMSCs接种珊瑚支架体外成骨诱导7天后,将未标记组、EGFP组和CM-Dil组分别植入裸鼠背部皮下,空白支架作为阴性对照。术后4、8、12周取材,HE染色观察成骨情况,EGFP组采用GFP免疫组化、CM-Dil组冰冻切片荧光显微镜下示踪BMSCs在体内的变化。结果:两种标记技术能高效标记BMSCs,标记前后细胞的体外增殖无显著性差异(P>0.05)。细胞-支架复合物植入体内12周后有新生骨形成,标记细胞数量随时间延长而逐渐减少,12周后仍显示有部分标记细胞存活。结论:EGFP和CM-Di l可用于示踪组织工程种子细胞,通过示踪说明BMSCs在体内组织工程骨成骨过程中发挥了重要作用。

CM-Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究

目的建立人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cell，HAEC）的体外培养方法，并探讨氯甲基苯甲酰胺（CM—Dil）与4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC，收集第2代细胞，流式细胞仪检测CD29、CD34、CD44、CIM5和CD105的表达率，SP免疫化学法鉴定HAEC。CM—Dil与DAPI对HAEC进行体外标记，荧光倒置显微镜下观察1d、7d和14d的标记情况，台盼蓝染色检测细胞活力，CCK-8法检测细胞增殖以明确联合标记对体外培养HAEC生长特性的影响。结果HAEC贴壁培养后呈扁平多角形，CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的阳性率分别为99．64％、2．21％、32．41％、0．84％、36．70％，细胞角蛋白Keratin阳性表达。HAEC在cM—Dil和DAPI联合标记1d后，荧光显微镜下可观察到细胞膜和细胞核分别在不同波长下呈红色和蓝色荧光，标记率为100％；14d后，经传代培养的HAEC荧光强度与1d时相近，细胞形态无改变。台盼蓝染色显示标记细胞存活率为96．8％-98．9％，CCK-8检测标记细胞的增殖力较未标记组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CM—Dil和DAPI可有效标记HAEC，染色简单、无细胞毒性，荧光衰减较慢，可作为HAEC的标记及示踪方法。

人脐带间质干细胞的CM-Dil标记及其移植在急性肾损伤大鼠体内的示踪研究

目的:探讨人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSCs)用CM-Dil染料标记之后生物学特性及体内定位示踪情况。方法:采用脐带组织块贴壁培养法分离人脐带间质干细胞,用CM-Dil染料标记第3代hucMSCs;采用细胞计数法分析CM-Dil标记后hucMSCs的生长变化情况;通过活体成像仪观察CM-Dil染料标记的hucMSCs移植于急性肾损伤大鼠后的体内定位。结果:CM-Dil染料标记hucMSCs的效率很高;标记后的hucMSCs生长增殖能力没有发生明显变化;体内示踪可以观察到标记的hucMSCs。结论:CM-Dil标记不影响hucM-SCs的生长增殖特征,并且能够在体内示踪,为后续研究提供了实验基础。

荧光活性染料(CM-Dil)对人骨髓间充质干细胞增殖能力的影响

目的:体外分离、培养人骨髓间充质干细胞(human bone marrow derived mesenchymal stem cells,hBMSCs),探讨应用不同浓度氯甲基苯甲酰氨荧光染料(CM-Dil)对hBMSCs增殖力的影响。方法:采用Ficoll梯密度离心法分离、培养hBMSCs,并促进其分别向成骨细胞、脂肪细胞分化;应用不同浓度CM-Dil分别标记第3代hBMSCs,观察不同浓度标记下细胞的荧光强度、标记效率、活性和增殖能力。结果:采用Ficoll梯密度离心法获得的hBMSCs,成骨、成脂分化染色阳性。不同浓度CM-Dil(5、10、20、30μmol/L)在30 min内均可成功标记hBMSCs,24 h后观察标记效率均达到98%以上(P>0.05)。直到20μmol/L的标记浓度对细胞的活力、增殖能力仍没有影响(P>0.05)。结论:CM-Dil是一种简便、安全的标记骨髓间充质干细胞的方法。

A pilot proof-of-concept study of a modified device for one-step endoscopic ultrasound-guided biliary drainage in a new experimental biliary dilatation animal model

AIM: To evaluate the technical feasibility of a modified tapered metal tip and low profile introducer for one-step endoscopic ultrasound (EUS)-guided biliary drainage (EUS-BD) in a new experimental biliary dilatation porcine model.

大鼠固定脑前、内皮质与尾壳核间联系——Dil荧光标记观察

以Dil荧光染料为示踪剂,在固定后的大鼠脑研究脑组织前、内皮质与尾壳核间局部定位联系。结果表明:32区在嘴侧冠状切面上标记纤维分布于尾壳核的全切面,继而分布于内侧和腹侧。25区与之类似,但更为腹侧些。24区前部分布于内侧,后部分布于背内侧部。运动皮质:前肢区主要分布于背外侧份,后肢区主要分砸于背内侧部。除前肢区外其他各区均见少量标记纤维经胼胝体入对侧尾壳核。活鼠注射,在同侧尾状核内可见少最终末样纤维。

汽车ESC系统DIL/HIL仿真平台设计

全面准确地标定与测试是开发车辆电子稳定控制(electronic stability control,ESC)系统的关键环节。车辆控制过程是典型的强非线性系统,建立精确的车辆模型比较困难,驾驶员模型也很难准确模拟紧急工况下驾驶员的真实反应。在仿真系统中将难以精确建模的液压制动系统、ESC压力调节单元、转向及电子节气门装置采用真实硬件,并在试验平台中嵌入真实驾驶员,基于Matlab/Simulink/dSPACE环境和车辆动力学软件veDYNA,开发硬件在环(hardware-in-the-loop,HIL)和驾驶员在环(driver-in-the-loop,DIL)的仿真试验平台,并在此平台上对所设计的ESC系统进行仿真试验研究。试验结果表明,所设计的DIL/HIL仿真平台可以大幅提高ESC系统的开发效率和测试准确性。

CM-Dil标记人牙龈间充质干细胞在大鼠颅骨缺损修复模型中的示踪研究

目的:探讨氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)荧光染料体外标记人牙龈间充质干细胞(hGMSCs)对其增殖、分化能力的影响以及在体内荧光标记持续时间。方法:组织块法原代培养hGMSCs,采用流式细胞术检测间充质干细胞表面标志物,然后以CM-Dil标记hGMSCs,CCK-8检测标记后细胞的增殖;标记及未标记的细胞进行成骨及成脂诱导培养21 d后,分别进行茜素红染色和油红O染色。大鼠颅骨缺损实验检测CM-Dil标记的hGMSCs体内标记效果。结果:原代培养的hGMSCs高表达CD105、CD90和CD73,而阴性表达CD14、CD34、CD19、CD45和人类白细胞DR抗原(HLA-DR),符合间充质干细胞表面特征。与对照组相比,CM-Dil并不影响hGMSCs的增殖和成骨、成脂分化能力(P>0.05)。体内移植的CM-Dil标记hGMSCs在第8周时仍可检测到红色荧光。结论:CM-Dil在体外标记hGMSCs不会影响hGMSCs的干细胞特性,且体内标记时间长达8周,可作为干细胞体内标记示踪的方法之一。

体外CM-DIL标记骨髓源性内皮祖细胞在胶原海绵上的研究

目的观察CM-DIL体外标记兔骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)的可行性及其在胶原海绵上的生长情况。方法用Percoll分离液的方法分离、培养EPCs,并进行鉴定;观察CM-DIL标记后的EPCs与胶原海绵的生物相容性,HE染色评价EPCs的生长情况。结果CM-DIL标记EPCs的细胞膜为红色,分离培养的EPCs其表面标志物CD31和CD34表达均为阳性,种植于胶原海绵上的EPCs可存活,并沿胶原海绵支架生长。结论CM-DIL可作为体外标记EPCs的方法,胶原海绵可作为一种较为理想的组织工程学支架材料。

大鼠固定脑双侧脑桥尾侧网状核间联系的研究-Dil荧光标记法

本文用Di1荧光染料作轴突示踪剂,主要在大鼠死后固定脑组织上研究双侧脑桥尾侧网状核间联系。结果发现:大量标记纤维聚集成小束,自一侧脑桥尾侧网状核越过中线至对侧同名核,标记纤维呈桔红色、强荧光,直径约1-2微米,纤维主要集中该核的腹侧区。当这些纤维达对侧网状结构内的脑桥尾侧网状部位,其中有些纤维分为上升、下降技。下降纤维行于两侧网状结构的内侧部,同侧约可追踪4-7毫米,对侧约2毫米左右,纤维在下降过程中逐渐减少。活体注射后,可见少量越过中线纤维,并在两侧网状结构内侧部见到少量纤维和散在的终末样纤维。双侧锥体束内均见大量标记纤维,除少数例子外,对侧荧光强度强于同侧。少量交叉纤维入对侧锥体束后入脑桥尾侧网状核。本文还对新近使用于神经解剖研究的荧光染料Dil的优、缺点进行了探讨。

CM-Dil体外标记脂肪基质干细胞及其在脂肪移植裸鼠模型体内示踪研究

目的探讨CM-Dil对脂肪基质干细胞(ADSCs)的体外标记及其在脂肪移植裸鼠模型的体内示踪。方法采用贴壁培养法分离、纯化、扩增ADSCs。取第3代细胞进行CD29、CD31免疫组化染色,用流式细胞仪检测细胞阳性率;对第3代细胞进行成骨、成脂诱导,鉴定其成骨成脂多向分化潜能。CM-Dil体外标记ADSCs,并用荧光显微镜检测。6周龄雌性BALB/c裸鼠制备脂肪移植裸鼠模型,将标记CM-Dil的ADSCs脂肪移植复合体移植入裸鼠背部皮下,移植后4周取脂肪移植物制备冰冻切片,荧光显微镜观察ADSCs的分布情况。结果脂肪组织中分离培养的ADSCs呈梭形生长,CD29表达阳性细胞比例为84.52%±4.91%,CD31表达阳性细胞比例为2.13%±0.95%,ADSCs能够分化为成脂细胞和成骨细胞。荧光显微镜显示,CM-Dil标记的ADSCs在裸鼠脂肪移植中表达阳性。结论CM-Dil能够体外标记ADSCs,可用于ADSCs在脂肪移植裸鼠模型的体内示踪,ADSCs可能参与了脂肪移植后的组织重建。

慢性丙肝患者DIL-4和Jagged-1的检测分析

目的探讨Notch信号通路的两种配体DIL-4和Jagged-1与慢性丙型肝炎的关系。方法采集慢性丙型肝炎患者及健康对照组的新鲜空腹抗凝血,分离单个核细胞,提取RNA,反转录为c DNA,应用实时定量RT-PCR技术检测DIL-4和Jagged-1。结果慢性丙型肝炎患者组和正常对照组相比较,DIL-4和Jagged-1测定水平均明显升高,具有显著性差异,P<0.05。结论 Notch配体在慢性丙型肝炎中明显升高,且转氨酶越高,Notch配体检测水平越高,Notch配体与慢性丙型肝炎存在相关性。

蒙古国地利山岩刻所见唐与漠北交通及交往

蒙古国中戈壁省额勒济特苏木地利山地区发现的唐代汉文摩崖岩刻表明,该处彼时为草原交通线上的重要节点,《新唐书·地理志》所载出塞北渡碛至回鹘牙帐城的路线“回鹘道东道”(即“参天可汗道”)就经过此地。岩刻文字为麟德二年唐羁縻漠北时期所刻,证实了传世史料中该年唐高宗封禅泰山并邀请漠北铁勒诸部首领前来的历史事件,可以反映唐朝与北方游牧民族的交流互动以及唐政府对漠北羁縻州府的管控情况。

基于位移影响线曲率的小半径弯桥损伤识别

为了获取尽量全面的数据和减少对初始数据的依赖,在拟静力状态下测得弯梁桥竖向位移影响线(DIL),通过二次差分获得影响线的曲率.结合缺口平滑技术构造损伤指标,来实现对该类结构的损伤识别.以某三跨小半径弯梁桥为研究对象,建立相关数值模型来验证该方法的正确性及特点;对低速加载、支座预偏心及抗扭支座布置等对识别结果的影响进行分析.结果表明:对于小半径弯梁桥,该方法利用较少的测点,不依赖损伤前的数据,适用于多损伤识别;控制加载速度在一定范围内可以满足对损伤定位的需求;支点预偏心、设立抗扭支承等构造措施对损伤定位没有影响,损伤指标数值相对变小.

膨化技术及其在食品工业中的应用

膨化技术作为一种新型食品生产技术,正逐步在食品工业中得到广泛的应用。本文就现在国内常用的油炸膨化技术、挤压膨化技术、微波膨化技术、低温气漉膨化技术和CO_2膨化技术予以阐述。

基于强度折减的拉格朗日差分方法分析土坡稳定性

运用连续介质显式拉格朗日有限差分方法,通过逐步折减土体的抗剪强度,来分析土坡稳定的安全系数。实例计算表明,强度折减系数达到某一数值时,土坡顶点的水平位移会快速增加。根据这一现象,提出了界定土坡破坏的坡顶位移增量标准。即坡顶位移增量与折减系数增量之比大于系数sc为土坡破坏,并建议了sc的取值。这样可避免强度采用折减方法分析土坡稳定时,以不收敛等"模糊"概念作为土坡破坏状态的判别标准,具有物理意义明确、客观具体、便于数值计算等特点。与瑞典圆弧法、简化Bishop法及Spencer法比较可见,这些方法的潜在滑动面形状相似、位置十分接近,说明本文方法及"破坏"状态的判别标准是合适的。文中对剪胀角的影响进行了讨论,得到"不考虑"剪胀性的关联流动法则会高估土坡稳定安全系数的结论。

内镜下扩张治疗复杂型上消化道狭窄34例报告

目的探讨应用内镜下探条或(和)球囊扩张治疗复杂型上消化道狭窄的方法和疗效。方法对34例各种原因所致的复杂型上消化道狭窄患者,根据狭窄的具体情况在内镜下用探条或(和)球囊对狭窄部进行扩张,观察比较扩张前、后的疗效。结果34例病人共扩张86次,平均每例扩张2.5次,最少1次,最多6次。单用探条扩张26例、水囊扩张18例、ABD气囊扩张5例、探条联合球囊扩张37例。其中显效14例,占41.2%;有效18例,占52.9%;无效2例,占5.8%。结论内镜下扩张治疗复杂型上消化道狭窄,其方法安全,简便,费用低廉,患者恢复快,可反复进行,疗效满意。

耐水硅酸盐膨胀型防火涂料的研究

优选出防火性能优良的以水玻璃为基料的膨胀型防火涂料的配方，添加了硅氧烷树脂，以改进涂层的耐水性。

论中国区域性土的分布和岩土性质的形成

广阔的中国大地上分布着各种具有地区特点的“区域性土”:北部的黄土、南部的红土、中部的老粘土以及东南近海的海洋软土(包括沿海的软土)。它们和一般粘性土的工程特性不同,故而人们有时称之为“特殊土”。笔者曾分别对它们的工程特性和基本性质进行过研究。本文对这些“区域性土”的物理力学、物理化学和微观分析的测试成果作了系统归纳,并对这些“区域性土”的分布规律和工程特性的形成进行了综合研究。研究表明我国“区域性土”地理分布和独特的工程特性的形成,完全取决于我国的气候条件和地理地质环境。

两种荧光标记物对中枢神经系统内源性神经干细胞的标记效果比较

目的观察DIL和DAPI两种不同的标记物对中枢神经系统内源性神经干细胞的标记效果。方法清洁级健康成年SD大鼠36只,随机分为实验组(DIL组,DAPI组)和对照组(DMSO组,PBS组)。使用立体定位仪,向实验组大鼠侧脑室注入0.2%DIL或10μg/ml DAPI各10μl,对照组大鼠侧脑室相应注入DMSO或PBS各10μl。注射后2h和24h对动物进行神经功能损伤评分(NSS)。采用激光共聚焦显微镜观察注射后1、3、7d脑室及脊髓颈、胸、腰段室管膜细胞的荧光标记情况,对目标区域荧光强度进行半定量分析,并对不同组别和时间点的脑室及脊髓标本测定结果进行比较。结果注射DIL及DAPI后2h,大鼠NSS评分很低,与相应对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),24h后基本恢复正常。DIL注射后1d,侧脑室及各节段的脊髓室管膜细胞胞质均显示红色荧光,一直持续到注射后7d。DAPI注射后1d,侧脑室内标记的细胞核形态清晰,呈蓝色,脑室脉络丛大量细胞亦可见蓝色荧光标记,但脊髓各节段室管膜区的细胞均未见蓝色荧光,注射后3、7d的情况与1d类似。两种试剂标记后,目标区域内各时间点的荧光强度差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DIL可对内源性神经干细胞的细胞质进行标记,适合作为侧脑室和脊髓室管膜内源性神经干细胞的标记物。DAPI可标记细胞核,适合用于侧脑室内源性神经干细胞的标记。脑室注射荧光染料对动物影响小,是一项相对安全的操作。