学龄前儿童接种肠道病毒71型(EV71)疫苗状况及家长对其接种意愿影响因素

目的:分析学龄前儿童接种肠道病毒71型(EV71)疫苗状况及家长对其接种意愿影响因素。方法:研究选取本区2022年1月至2023年12月行健康体检学龄前儿童300例为研究对象,采集其疫苗接种状况,采用单因素及Logistic回归分析家长对学龄前儿童接种意愿影响因素。结果:300例学龄前儿童中,接种EV71型疫苗儿童71例,接种率23.67%。学龄前儿童EV71型疫苗接种情况单因素分析结果显示,学龄前儿童EV71型疫苗接种情况与性别、年龄、少儿医保、足月分娩、出生体质量、儿童来源以及是否顺产等因素无统计学意义(P>0.05);学龄前儿童家长对EV71型疫苗接种意愿单因素分析结果显示,学龄前接种EV71型疫苗儿童与未接种疫苗儿童的家长对手足口病认知程度、对EV71型疫苗了解程度、家长学历、家庭月收入等差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示,家长对手足口病认知程度、对EV71型疫苗了解程度、家长学历、家庭月收入是影响其接种意愿的独立影响因素(P<0.05)。结论:学龄前儿童EV71疫苗接种率相对较低,家长对手足口病及EV71疫苗的了解程度、家长学历以及家庭月收入等是影响家长对学龄前儿童接种EV71疫苗意愿的独立影响因素。

HPLC-UV法检测EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液相关抗原纯度的方法建立与评价

为建立一种准确可靠的高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)方法,检测EV71-CA16二价手足口病(HFMD)灭活疫苗原液中的相关抗原,肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)的纯度。本文采用Waters体积排阻色谱柱(SEC,UltrahydrogelTM 2507.8×300 mm,6μm),流动相为0.01 mol/L的PBS中再加入0.1 mol/L氯化钠溶液,等度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长280 nm,进样量50μL,柱温21℃,进行EV71与CA16病毒原液的纯度检测,并对该方法的检测限、拖尾因子、专属性、重复性及检测范围进行验证。结果显示,2种抗原的灵敏度溶液的信噪比(S/N)分别为37.053和47.710,均远大于3,各试样的拖尾因子均小于3;CA16原液和EV71原液经HPLC分离纯化后的目标抗原峰馏分经SDS-PAGE和Western-Blot特异性鉴定,结果显示,色谱峰样品组成分别为CA16和EV71的2种病毒衣壳的结构蛋白,表明本检测方法专属性高。不同浓度的EV71与CA16病毒抗原经多次检测后,各浓度条件下的峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,重复性良好。不同抗原浓度批样品检测结果显示,CA16原液抗原浓度在89 U/mL~26398 U/mL之间,EV71原液抗原浓度在170 U/mL~9074 U/mL之间时,2种抗原溶液经多次检测统计显示峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,本方法在该抗原浓度范围内准确可靠,适用于EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液中病毒抗原纯度的检测。

直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效

目的观察直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效。方法选取2019年8月—2022年8月贵州水矿控股集团有限公司总医院CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿85例,按照随机数表法分为观察组(42例)和对照组(43例),其中对照组患儿给予利巴韦林治疗,观察组患儿给予直肠滴入中药治疗。对比两组患儿治疗前后口腔疱疹、发热、皮疹等症状的评分,治疗前后患儿炎症因子、免疫指标水平及两组患儿治疗后不良反应发生率。结果治疗前,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分均降低,并且治疗后观察组患儿的以上症状评分低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α均降低,并且治疗后观察组患儿的以上降低幅度大于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿CD4^(+)、CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均升高,CD8^(+)水平降低,并且治疗后观察组患儿的变化幅度大于对照组(P<0.05);观察组患儿不良反应发生率为4.76%,对照组患儿不良反应发生率为18.60%,观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论给予CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿直肠滴入中药治疗,能减轻患儿临床症状及炎性反应,改善免疫功能,且不良反应少,值得借鉴。

EV71阳性手足口病患儿131例临床特征及其EV71疫苗接种的预防效果

目的分析EV71阳性手足口病患儿临床特征及其EV71疫苗接种情况,探索重症发生和接种EV71疫苗的预防效果的关系。方法回顾性分析昆明市儿童医院2020年1月1日至2022年12月31日确诊的131例EV71阳性手足口病患儿临床资料,选取临床确诊手足口病患者的粪便做肠道病毒核酸检测,对结果为肠道病毒通用型阳性并且EV71阳性手足口病患儿的临床病例资料及其EV71疫苗接种情况进行分析。结果检出的131例阳性病例中包括116例轻症和15例重症,其中80例接受电话咨询其EV71疫苗接种情况的患儿中,17例接种疫苗,63例未接种疫苗,接种疫苗的患儿皆为轻症患者,未接种疫苗的患儿中有6例为重症患者。2020至2022年,每年4~9月为EV71阳性手足口病检出率高峰期(χ^(2)=125.705,P=0.000),小于1岁及大于5岁患儿阳性检出率高于1~5岁年龄段患儿(χ^(2)=8.765,P=0.033),男女阳性检出率无明显差异(χ^(2)=1.221,P=0.269)。结论接种EV71疫苗对减少重症病例出现具有重要意义。结合目前云南昆明地区该疫苗接种率仍然偏低的情况,提示相关机构仍需继续加大EV71疫苗接种的宣传力度。

小儿豉翘清热颗粒联合重组人干扰素喷雾剂治疗EV71感染手足口病患儿的疗效及对核因子-κB、炎症因子的影响

目的:研究小儿豉翘清热颗粒联合重组人干扰素(rhIFN)-α2b喷雾剂治疗EV71病毒感染手足口病(HFMD)患儿疗效及对核因子-κB(NF-κB)、炎症因子的影响。方法:回顾性分析我院收治的130例被EV71病毒感染的轻症HFMD患儿的临床资料及随访资料,根据治疗方法不同将患儿分为对照组和观察组各65例,对照组采用rhIFN-α2b治疗,观察组在对照组治疗基础上加用小儿豉翘清热颗粒治疗,比较两组患儿临床疗效,症状消退时间,治疗前后NF-κB、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10水平变化,肝肾功指标及药物不良反应。结果:与对照组比较,观察组临床疗效更高(P<0.05);观察组症状消退时间均短于对照组(P<0.05);与治疗前比较,两组患儿治疗后血清NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-10水平均有所降低,且观察组低于对照组(P<0.05);两组患儿治疗前后丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)水平均为正常范围,但观察组治疗前后肝肾功能指标差值低于对照组(P<0.05);两组患儿均未发现明显药物不良反应。结论:小儿豉翘清热颗粒联合rhIFN-α2b喷雾剂治疗EV71病毒致儿童HFMD,能够有效提高治疗疗效,降低NF-κB、炎症因子,且对肝肾功能指标影响小,安全性高,值得临床推广应用。

外泌体包裹的miR-19b抑制EV71复制的影响

[目的]探讨外泌体包裹的miR-19b对EV71病毒复制的影响,为EV71病毒的miRNA防治药物的开发提供参考.[方法]将游离的miR-19b-cy3.5分子和转染miR-19b-cy3.5的HT29细胞分泌的外泌体分别处理T98G细胞,观察进入细胞的效率;分别提取未处理的、转染mimic-n.c.和转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体,并给予T98G细胞孵育后,检测细胞内miR-19b的表达;分别以60 mg/L转染mimic-n.c.的HT29细胞分泌的外泌体、60 mg/L和40 mg/L转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体孵育T98G细胞并感染EV71病毒,检测病毒RNA载量;将携带包裹的miR-19b-cy3.5的HT29细胞来源的外泌体,通过尾静脉注射小鼠检测miR-19b在小鼠各个器官中的表达.[结果]miR-19b-cy3.5能够通过外泌体的形式进入T98G细胞中,而游离的miR-19b-cy3.5无法进入细胞;转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体在处理T98G细胞后,胞内miR-19b高表达,同时,外泌体处理后的T98G细胞中EV71病毒RNA复制量显著降低;动物实验中,外泌体包裹的miR-19b能够在小鼠的脑、肝及肺有效表达.[结论]外泌体包裹的miR-19b能够有效进入靶细胞中,并且可以抑制靶细胞中EV71病毒的复制;同时,外泌体包裹的miR-19b能够有效进入小鼠脑、肝以及肺等组织中并表达.

影响家长对学龄前儿童接种EV71疫苗意愿的因素

目的 分析家长对学龄前儿童接种肠道病毒71型(EV71)疫苗意愿的影响因素。方法 前瞻性选取郑州市第七人民医院2022年1—5月就诊的136例学龄前儿童家长作为研究对象,通过调查问卷方式,统计家长的接种疫苗意愿情况,并分析影响因素。结果 136例家长中同意小儿接种者81例(59.56%);不同受教育程度、家庭年收入、获得育儿信息途径、手足口病为严重传染性疾病认知状况、知道EV71疫苗能预防EV71引发首手足口病状况、知道EV71疫苗状况、孩子患手足口病状况、孩子过敏体质状况、疫苗安全担忧状况、疫苗自费状况、疫苗不良反应状况、疫苗预防疾病认可状况的学龄前儿童家长EV71疫苗接种意愿不同(P<0.05);经logistic回归模型分析结果显示,家长高中及以下受教育程度、家庭年收入<5万、孩子过敏体质、有疫苗安全担忧、疫苗自费、疫苗有不良反应、不认可疫苗预防疾病为学龄前儿童家长EV71疫苗接种意愿的独立危险因素,而家长从手机APP获得育儿信息、知道手足口病为严重传染疾病、知道EV71疫苗能预防EV71引发手足口病、知道EV71疫苗、孩子有患手足口病史为学龄前儿童家长EV71疫苗接种意愿的保护因素(P<0.05)。结论 学龄前儿童家长EV71疫苗接种意愿有待提高,且受家长受教育程度、家庭年收入、家长获得育儿信息途径、手足口病为严重传染性疾病认知状况、知道EV71疫苗能预防EV71引发手足口病状况、知道EV71疫苗状况、孩子过敏体质、有疫苗安全担忧、疫苗自费、疫苗有不良反应、不认可疫苗预防疾病、孩子有手足口病史等因素影响。

2010—2019年肇庆市手足口病流行特征及EV71疫苗接种效果分析

目的:分析肇庆市2010—2019年手足口病流行特征及肠道病毒71(EV71)型疫苗接种效果,为完善手足口病防控策略提供科学依据。方法:收集手足口病病例资料和EV71型疫苗接种情况,采用描述性流行病学方法分析三间分布、病原构成和疫苗接种情况,保护效果采用疫苗保护效力评价。结果:肇庆市2010—2019年手足口病年均报告发病率为314.77/10万,发病以≤5岁儿童为主。肇庆市2016—2019年EV71疫苗估算接种率为6.80%,疫苗推广后报告发病率、重症比例较低,接种EV71疫苗是EV71所致手足口病的保护因素,总保护效果为92.70%。结论:EV71疫苗上市后肇庆市手足口病发病率有所下降,但仍处于较高水平,目标儿童疫苗估算接种率较低,应推广及时全程接种EV71疫苗,并加强重点人群手足口病知识健康宣教和病原学监测。

2010—2020年马尾区手足口病流行病学特征及EV71疫苗接种效果分析

目的通过探讨福州市马尾区手足口病流行特征与肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)疫苗接种的效果,为寻找更有效的防控策略提供科学依据。方法收集2010年1月1日—2020年12月31日马尾区手足口病疫情监测数据和2017—2020年EV71疫苗接种资料,采用描述性流行病学方法进行流行特征和疫苗接种效果分析。结果2010—2020年马尾区报告手足口病总共5482例,重症54例,死亡1例,年均发病率为206.82/10万。除2020年外,其余年份发病高峰为每年4—7月和9—10月;男性发病率高于女性,发病年龄主要聚集在3岁以下(占68.88%),发病人群以散居儿童和幼托儿童为主;感染的病毒类型主要为其他肠道病毒,不同年份病原构成比差异有统计学意义(χ^(2)=165.06,P<0.001)。2017—2020年马尾区接种EV71疫苗共11231剂次,平均估算接种率为10.63%,总体接种率偏低。结论福州市马尾区手足口病疫情防控形势仍旧严峻,相关部门需在发病高峰、重点场所对低龄儿童有针对性开展健康宣教工作;疫苗接种能有效降低发病率和重症发生率,建议通过多渠道提高疫苗接种率。

OSA1基因多态性与EV71所致中枢神经系统感染的关系

目的分析EV71引起的中枢神经系统感染过程中,其感染机制是否与OSA1基因多态性存在关系,为临床预防感染制定相关措施提供参考。方法收集2018年3月至2021年10月在本院就诊的EV71感染者,以及体检健康儿资料,使用SNP scan分析OAS1 rs2660和rs1131454 SNP分型。结果本次研究共收集86名EV71感染患儿纳入至观察组,另外收集60名健康体检患儿纳入至对照组。rs2660、rs1131454的基因型和等位基因分布之间比较,P>0.05。在OAS1 rs2660基因SNP方面,与轻度组进行比较,受累组与之比较存在显著差异(P<0.05),其中受累组AG基因型频率明显更高,OR为2.27,95%CI分布范围为1.07~4.85,受累组GG基因型频率明显更低,OR为0.27,95%CI分布范围为0.08~0.97。而受累组OAS1基因SNP与对照组进行对比无显著差异(P>0.05)。结论OAS1基因rs2660 SNP与CNS参与EV71感染的易感性。携带OAS1的儿童rs2660 AG基因型在EV71感染后存在CNS受累风险性更高。

外周血中抗EV71 VP1特异性抗体分泌细胞检测方法的建立

目的应用酶联免疫斑点(ELISPOT)技术,建立一种检测外周血中抗EV71VP1特异性抗体分泌细胞的方法,并评价该方法在检测EV71感染诊断中的应用价值。方法无菌分离外周血中单个核细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测外周血VP1抗原特异性抗体分泌细胞的参数:包括抗原最佳包被浓度、反应体系中细胞浓度以及HRP标记抗体工作浓度的确定,与ELISA比较,检测方法的敏感性和特异性。结果当抗原包被浓度为20μg/mL时,不同细胞浓度反应曲线最稳定;细胞浓度为5×10^(6)/mL时,不同包被浓度形成的斑点数适量,易于计数;HRP标记抗体释稀度为1:10000时,背景最浅容易识别。ELISPOT敏感性为90.0%,特异性96.7%。与ELISA检测抗EV71抗体方法比较,ELISPOT优于ELISA。结论该方法有较高的特异性和灵敏度,有望成为诊断EV71感染的一种理想方法。

以EV71抗原检测方法验证浅析生物制品生物效价检测方法学验证

目的:本文以对生物制品生物效价检测进行规范的《中国药典》2020年版新增9401指导原则为标准进行EV71抗原检测方法的验证,进一步浅析生物制品生物活性/效价检测的方法学验证。方法:依据《中国药典》2020年版9401指导原则,结合EV71抗原检测方法特点及验证目的对其进行专属性、相对准确度、精密度、线性和范围5个方面进行方法学验证。结果:EV71抗原检测方法专属性强,6个效价水平几何变异系数为4.7%~13.0%,均小于15%,相对偏倚为-6.05%~9.03%,均在±15%范围内,定量范围为225%~31%,线性回归相关系数为0.999 5,5方面验证均符合要求,且适用于该检测方法的使用。结论:本原则可具体指导生物学检测方法验证,在对不同检测方法进行验证时,根据检测目的、方法的原理、方法的技术特点、被检物的成分等设计具体方案。

2013-2019年柳州市手足口病病原学监测结果及肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的 分析2013-2019年柳州市手足口病病原学监测结果,掌握该地区手足口病的病原组成以及肠道病毒71型(EV71)的分子流行病学特征,为当地手足口病的防控提供科学依据。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RTPCR)对收集的手足口病病例标本进行病原学检测。对重症或死亡病例的病原进行分型检测,选取2017年的5例EV71阳性手足口病重症或死亡病例标本进行VP1基因序列测定和特征分析。结果 2013-2019年柳州市共检测6 038例手足口病病例标本,肠道病毒通用型阳性标本4 210例(69.73%),其中EV71阳性659例(15.65%)、柯萨奇病毒A16型(Cox A16)阳性1 159例(27.53%)、其他肠道病毒阳性2 392例(56.82%)。2013年、2015年、2017年、2019年以其他肠道病毒为主(阳性率均>50.00%),2014年以EV71和其他肠道病毒为主,2016年、2018年以Cox A16和其他肠道病毒为主。2014-2019年重症或死亡病例的病原学分型显示,重症或死亡病例的主要病原是EV71、Cox A16、柯萨奇病毒A6型(Cox A6)、柯萨奇病毒A2型(Cox A2)。2017年该市手足口病重症或死亡病例中分离到的5株EV71毒株的病原基因亚型均为C4a亚型,毒株序列之间的核苷酸同源性为95.20%~100.00%,氨基酸同源性为97.50%~100.00%。结论 2013-2019年柳州市手足口病的优势病原发生了变化,主要病原由EV71逐渐转变为Cox A16和其他肠道病毒。引发重症或死亡病例的病原主要有EV71、Cox A16、Cox A6、Cox A2,EV71的优势基因型为C4a亚型。今后应进一步加强病原监测和相关分子流行病学研究,为落实手足口病综合性防控措施提供依据。

检测EV71和EV-U的TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR的建立

目的建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。方法利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。结果用TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR法检测CoxA16、CoxB2、EV71病毒和其他人类病毒RNA,证实其特异性为100%;对EV71和EV-U的检测灵敏度均达到102拷贝/μl;将EV71和EV-U的RNA标准品进行重复性实验,其批内、批间变异系数分别为0.97%～2.02%和0.89%～2.13%。结论本方法灵敏度较高,特异性强,重复性好,适用于手足口病的临床检测。

急性弛缓性麻痹病例中EV71感染情况及病毒特征分析

目的分析近10年来福建省急性弛缓性麻痹(AFP)病例中EV71感染情况及病毒变异特征。方法应用描述流行病学分析AFP病例中EV71感染病例流行病学特征及临床表现特点,分析EV71病毒VP1区核苷酸与氨基酸同源性阐析病毒变异特征与趋势。结果根据EV71分离阳性数及AFP病例报告率推算,2003-2012年6月福建省15岁以下儿童EV71相关AFP病例平均发病率为2.24/1 000万,2008年以来呈上升趋势。AFP病例或其健康接触者分离的EV71病毒散在分布于9个设区市,以5-6月份多发,76.0%(19/25)为3岁以下儿童,男童为女童1.5倍。90.91%(20/22)的病例在麻痹前有发热,以单侧肢体麻痹(63.6%,14/22)为主,5例麻痹前有典型的手足口病表现,发病60d随访时2例仍残留麻痹。25例病毒株均属于C4基因型,除2003年分离毒株为C4b亚型外,其余均属于C4a亚型,2009-2011年病毒株间同源性高,与2008年安徽阜阳的代表株间同源性也较高,可能具有同一来源,并呈流行态势。结论利用完善的AFP监测系统,分析EV71相关AFP病例发病情况及分离株病毒的特征可以从另一侧面反映EV71流行强度及趋势。

EV71可感染幼龄中缅树鼩

树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究。该文研究了肠道病毒EV71对幼年中缅树鼩的感染特点,探索建立EV71感染树鼩动物模型及替代灵长类动物的可行性。实验分别采用灌胃、滴鼻和尾静脉注射3种方式,感染3月龄树鼩,定期观察动物临床症状和血常规变化和定期采集血液和粪便样品,并使用中和抗体试验、reverse transcription-PCR(RT-PCR)和Real-TimePCR等技术,检测相关样品中和抗体效价、病毒核酸及载量变化。结合组织病理学检查,分析感染病变特点。研究结果发现,实验组树鼩体温在第4天前后开始升高,白细胞、淋巴细胞也有类似趋势;3种攻毒方式均可检测到病毒载量,峰值出现在第10天前后,灌胃途径尤为明显,血清的最大中和抗体效价为1:16。感染EV71病毒的树鼩2周左右出现急性松弛性瘫痪,大体解剖发现伴有尿潴留症状,组织病理学检查发现在脑、肺、肠、脾脏、肾脏等部位发生病变。结果表明,EV71病毒通过灌胃、滴鼻和静脉注射3种方式均可以感染中缅树鼩,并使之出现神经系统及相关病变,该实验为将来研究EV71感染树鼩致病机理、建立手足口病树鼩动物模型奠定了理论基础。

EV71型手足口病乳鼠动物模型的建立及免疫、内分泌及病理特征研究

目的建立EV71型手足口病乳鼠动物模型并进行免疫、致病特性研究。方法将临床分离的EV71病毒株经蚀斑纯化,3T3细胞适应,乳鼠驯化,最终获得1株能致死7日龄乳鼠的EV71毒株,命名为BJ09/07(GenBank Accession NO.JQ319054,EV71-BJ)。EV71-BJ感染7日龄ICR乳鼠后,观测临床疾病得分、体质量变化、死亡率并测定病毒载量、免疫分子、内分泌水平、组织病理损伤等病毒、免疫、内分泌、病理指标。结果 EV71-BJ毒株感染7日龄ICR乳鼠,其病毒毒力为150 LD50/ml,感染后不同时期肌肉病毒载量均高于脑中,至第4天达到高峰,后不断下降。至感染后第6天发病达高峰时做病理检测,相对于脑组织,肌肉中有更严重的淋巴细胞浸润,引起更严重的炎性分子升高。肌肉研磨液和血清中MCP-1、IFN-γ、IL-6和TNF-α显著升高,而肾上腺素和皮质醇未见明显变化。结论初步建立了EV71型手足口病乳鼠动物模型,为药物筛选、疫苗研发及免疫机理研究奠定了基础。

EV71与CA16双价灭活疫苗诱导小鼠免疫原性研究

目的评价EV71和CA16双价灭活疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答。方法分别应用EV71和CA16双价疫苗、EV71和CA16单价疫苗按单针、两针(0,14 d)的程序免疫小鼠,采用细胞病变法检测血清第1针免疫后21 d时中和抗体效价,应用LUMINEX液相芯片技术检测小鼠脾单个核细胞体外经抗原刺激分泌细胞因子的水平。结果双价疫苗与EV71单价疫苗单针、两针免疫相比,EV71中和抗体几何平均值相近(118.8∶84.0;159.5∶156.8,P>0.05)。双价疫苗与CA16单价疫苗单针免疫诱导的CA16中和抗体均为阴性;两针免疫CA16中和抗体几何平均值一致(30.0∶26.9,P>0.05)。加强免疫7 d后,小鼠脾MNC经EV71抗原刺激,双价疫苗较EV71单价疫苗诱导Th2类细胞因子IL-4、5、6、10和炎症因子TNF-α的分泌水平显著增高(P=0.020,P=0.027,P=0.038,P=0.019,P=0.026);MNC经CA16抗原刺激,双价疫苗与CA16单价疫苗相比诱导细胞因子水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论双价疫苗可诱导与单价疫苗相似的中和抗体应答水平,并可提高Th2类细胞因子应答,研究为EV71和CA16双价灭活疫苗的研发提供了实验依据。

SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR测定肠道病毒71型(EV71)RNA拷贝数方法的建立

目的建立SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定实验动物等来源的EV71病毒RNA。方法运用EV71VP1保守区引物,优化real time RT-PCR条件,运用NASBA方法扩增EV71病毒RNA,计算拷贝数,经10倍系列稀释做出标准曲线,作为EV71病毒RNA定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100copies/μL,PCR扩增效率达到99.5%。结论 SYBRGreenⅠ荧光染料实时定量PCR法测定EV71病毒RNA拷贝数的方法敏感性高、稳定性好,可用于EV71病毒RNA载量的定量测定。

NSE、MBP和S-100β蛋白在重症EV71脑炎中的临床应用价值

目的:测定重症EV71脑炎患儿脑脊液和血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、髓鞘碱性蛋白(MBP)和S-100β蛋白的含量,探讨其在EV71脑损伤中的评估价值。方法:采用ELISA法测定25例EV71脑炎患儿(脑炎组,重症16例,危重症9例)急性期脑脊液和血清中NSE、MBP、S-100β蛋白含量,并与10例健康儿童(对照组)进行比较。结果:(1)血清与脑脊液的NSE、MBP、S-100β含量经直线相关分析,r值分别为0.806,0.671,0.802(均P<0.01);(2)脑炎组血清NSE(7.46±2.74)ng/mL、S-100β(529.85±192.90)pg/mL,显著高于对照组血清NSE(4.13±0.68)ng/mL、S-100β(325.61±63.14)pg/mL(均P<0.01),脑炎组血清MBP(1.45±0.79)ng/mL与对照组血清MBP(1.22±0.56)ng/mL的含量差异无显著性(P=0.409);(3)与对照组相比,危重症组血清NSE、MBP和S-100β含量显著增高,NSE(10.34±1.50)ng/mL(P<0.01),MBP(1.95±0.48)ng/mL(P<0.05),S-100β(744.31±101.57)pg/mL(P<0.01),重症组血清NSE、S-100β含量增高,NSE(5.80±1.70)ng/mL(P<0.05)、S-100β(409.22±104.50)pg/mL(P<0.05)。(4)与重症患儿相比,危重症患儿血清NSE、MBP、S-100β含量明显增高(均P<0.01)。结论:NSE、MBP、S-100β水平与病情严重程度有关,检测其血清含量有助于EV71感染后脑损伤的病情评估。