右美托咪定介导GDNF表达对脑损伤大鼠神经元突触损伤及肺功能保护机制

目的研究右美托咪定介导胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达对脑损伤大鼠神经元突触损伤及肺功能保护机制研究。方法75只雄性SPF级SD大鼠购自常州卡文斯实验动物有限公司,随机抽取15只作为健康组进行对照,剩余大鼠建立模型,建模成功后分为模型组、Dex组、GDNF组及联合组,各组15只。运用神经功能缺损(mNSS)评分检测神经功能缺损情况,水迷宫实验检测认知功能,苏木素-伊红(HE)染色观察脑、肺组织病理形态,TUNEL检测神经细胞凋亡,免疫印迹检测突触蛋白(SYN)1、脑源性神经营养因子(BDNF)表达。结果与健康组相比,模型组不同时间mNSS评分、穿越平台次数、SYN1、BDNF降低、凋亡率、逃避潜伏期、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、白细胞介素(IL)-8增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,Dex组、GDNF组与联合组不同时间mNSS评分、穿越平台次数、SYN1、BDNF增加,凋亡率、逃避潜伏期、NE、IL-8降低,差异显著(P<0.05),Dex组、GDNF组各指标对比无统计学差异(P>0.05),与Dex组、GDNF组相比,联合组不同时间mNSS评分、穿越平台次数、SYN1、BDNF增加,凋亡率、逃避潜伏期、NE、IL-8降低,差异显著(P<0.05)。肺组织:健康组肺组织正常;模型组可见肺泡腔及细支气管内中性粒细胞和纤维蛋白渗出,肺泡隔增宽,肺泡萎陷,肺泡壁破裂,肺泡腔融合;与模型组肺组织相比,Dex组、GDNF组及联合组肺组织均有所改善,且以联合组效果最为显著。脑组织:健康组脑组织正常;模型组脑组织发生水肿,神经元细胞核固缩;与模型组肺组织相比,Dex组、GDNF组及联合组脑组织均有所改善,且以联合组效果最为显著。结论右美托咪定通过促进GDNF表达,从而修复神经元突触损伤,抑制神经元细胞凋亡,改善肺功能及认知功能,发挥脑保护及肺保护的作用。

神经胶质细胞系衍生神经营养因子和雄激素受体在手术诱导隐睾小鼠睾丸管周细胞中的表达

【目的】探讨神经胶质细胞系衍生神经营养因子(GDNF)和雄激素受体(AR)在隐睾症小鼠睾丸管周细胞中的表达水平及对隐睾症导致生精功能障碍的理论意义。【方法】30只5周龄雄性ICR小鼠采用随机数字表法随机分配至6组中,随机抽取3组15只小鼠进行手术诱导隐睾,其余3组为作为对照组进行假手术处理。分别于4 d、7 d、14 d后取各组睾丸组织,然后测量睾丸体积、观察睾丸组织病理,提取各组睾丸管周细胞后利用免疫荧光、Re⁃al-Time PCR和蛋白质印记法检测AR和GDNF的mRNA和蛋白的表达。【结果】对照组4 d、7 d、14 d小鼠的睾丸体积分别为(125.58±19.22)mm^(3)、(123.45±20.12)mm^(3)、(140.09±13.62)mm^(3);睾丸各级生精细胞排列整齐、层次清楚,可见较多精子细胞,生精小管周围管周细胞形态规则,呈梭形围绕小管周围,细胞厚度均一;ARmRNA的表达量分别为1.00±0.05、1.06±0.07、1.19±0.13GDNFmRNA的表达量分别为1.00±0.04、1.09±0.05、1.10±0.07;AR蛋白的表达量分别为1.01±0.01、0.79±0.02、1.01±0.04;GDNF蛋白的浓度分别为(18.68±0.43)pg/mL、(14.39±0.36)pg/mL、(16.88±0.37)pg/mL。隐睾组4 d、7 d、14 d小鼠的睾丸体积分别为(115.64±3.91)mm^(3)、(69.51±14.97)mm^(3)、(44.86±5.56)mm^(3);睾丸各级生精细胞排列紊乱、层次不清、结构破坏,曲细精管周围管周细胞萎缩、弯曲断裂;ARmRNA的表达量分别为0.76±0.06、0.53±0.04、0.29±0.02;GDNFmRNA的表达量分别为0.72±0.05、0.42±0.02、0.30±0.03;AR蛋白的表达量分别为0.54±0.02、0.98±0.04、0.31±0.01;GDNF蛋白的浓度分别为(8.50±0.34)pg/mL、(17.44±0.32)pg/mL、(6.83±0.34)pg/mL。上述指标与对照组相比,除了4 d的睾丸体积差异无统计学意义(P>0.05),其他均有统计学差异(P<0.05)。对照组中3个时间点的睾丸体积、AR和GDNF的mRNA、蛋白表达量的差异无统计学意义(P>0.05),隐睾组3个时间点的睾丸体积、AR和GDNF的mRNA、蛋白表达量呈逐渐下降趋势且各组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】在手术诱导隐睾小鼠中,睾丸管周细胞的AR和GDNF的表达水平随着诱导时间的延长呈现显著下降。AR和GDNF在隐睾症介导睾丸管周细胞功能的损伤中有重要作用。本研究为阐明隐睾症导致生精功能障碍的机制研究提供理论基础。

GDNF对局灶性脑缺血大鼠SVZ和SGZ细胞增殖及学习记忆的影响

目的 观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠SVZ和SGZ细胞增殖的影响。方法 大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,立体定位下侧脑室注射GDNF,应用5 -溴脱氧尿核苷(Brd U )标记分裂细胞,观察模型组、GDNF组大鼠SVZ和SGZ神经干细胞的增殖,同时应用Y迷宫监测大鼠学习记忆能力。结果 局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠GDNF组神经干细胞增殖明显增加,Brd U免疫阳性细胞数与相应对照组比较,差异有显著性意义(P<0 .0 5 )。GDNF组大鼠学习和记忆能力与相应对照组比较,差异有显著性(P<0 .0 5 )。结论 GDNF可增强局灶性脑缺血SVZ和SGZ细胞增殖能力,外源性GDNF可加速中枢神经损伤的修复。

胶质细胞系源性神经营养因子/胶质细胞系源性神经营养因子受体信号通路在乳鼠先天性巨结肠相关性小肠结肠炎中的作用实验研究

目的:探讨胶质细胞系源性神经营养因子/胶质细胞系源性神经营养因子受体(GDNF/GFRα1)通路在乳鼠先天性巨结肠(HD)相关性小肠结肠炎(HAEC)中的作用研究。方法:21日龄内皮素受体(Ednrb)基因敲除乳鼠为HD模型组(实验组),同日龄野生型乳鼠为对照组,8只/组。取结肠组织,按照形态将实验组乳鼠结肠组织分为狭窄段、扩张段,对照组乳鼠结肠组织分为远段、近段。采用苏木精-伊红(HE)染色法评判两组肠管炎症程度;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测两组结肠组织白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫印迹法(WB)分别检测GDNF/GFRα1信号通路相关基因[GDNF、GFRα1、酪氨酸酶受体(RET)、核转录因子kappaBp65(NF-κBp65)、TNF-α]蛋白水平。结果:HE染色结果显示HAEC主要发生在结肠扩张段;ELISA法结果显示,与实验组乳鼠狭窄段肠管比较,扩张段肠管IL-10水平显著降低、TNF-α水平显著升高(均P<0.05);WB法结果显示,与实验组乳鼠狭窄段肠管比较,扩张段肠管GDNF、GFRα1、RET蛋白水平显著降低,NF-κBp65、TNF-α蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论:HD模型乳鼠结肠扩张段炎症程度较为严重,机制可能与GDNF/GFRα1信号通路受抑制,肠神经免疫调节系统异常有关。

Type-B monoamine oxidase inhibitors in neurological diseases:clinical applications based on preclinical findings

Type-B monoamine oxidase inhibitors,encompassing selegiline,rasagiline,and safinamide,are available to treat Parkinson's disease.These drugs ameliorate motor symptoms and improve motor fluctuation in the advanced stages of the disease.There is also evidence suppo rting the benefit of type-B monoamine oxidase inhibitors on non-motor symptoms of Parkinson's disease,such as mood deflection,cognitive impairment,sleep disturbances,and fatigue.Preclinical studies indicate that type-B monoamine oxidase inhibitors hold a strong neuroprotective potential in Parkinson's disease and other neurodegenerative diseases for reducing oxidative stress and stimulating the production and release of neurotrophic factors,particularly glial cell line-derived neurotrophic factor,which suppo rt dopaminergic neurons.Besides,safinamide may interfere with neurodegenerative mechanisms,countera cting excessive glutamate overdrive in basal ganglia motor circuit and reducing death from excitotoxicity.Due to the dual mechanism of action,the new generation of type-B monoamine oxidase inhibitors,including safinamide,is gaining interest in other neurological pathologies,and many supporting preclinical studies are now available.The potential fields of application concern epilepsy,Duchenne muscular dystrophy,multiple scle rosis,and above all,ischemic brain injury.The purpose of this review is to investigate the preclinical and clinical pharmacology of selegiline,rasagiline,and safinamide in Parkinson's disease and beyond,focusing on possible future therapeutic applications.

FSH对仔猪睾丸支持细胞增殖和GDNF表达的调节

以原代培养的仔猪睾丸支持细胞(SC)为试验模型,研究了FSH对SC胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达及其增殖的影响。结果显示,外源性添加FSH可促进GDNF蛋白表达,而且这种促进作用具有浓度和时间依赖关系,GDNF蛋白水平随着FSH浓度的增加而升高,当FSH浓度为50 ng/mL时,GDNF水平达到最高,然后逐渐降低;FSH(50 ng/mL)作用30 min,可显著促进GDNF蛋白的表达(P<0.05),当FSH作用1 h时,GDNF蛋白水平达到最高,随后逐渐降低。FSH可以时间-剂量依赖性促进SC增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,FSH(50 ng/mL)作用30 min时,PCNA的表达显著增加(P<0.05),作用1 h达极显著水平(P<0.01),至2 h时,PCNA蛋白的表达水平达到最高,随后逐渐降低。提示,FSH可在体外条件下通过刺激SC表达GDNF进而促进其增殖。

电针大肠俞募穴对功能性便秘小鼠结肠组织GDNF表达的影响

目的探讨电针大肠俞募穴治疗功能性便秘的作用机制。方法 32只小鼠随机分为对照组、模型组、针刺组和EGC抑制组。采用复方地芬诺酯灌胃造模法,电针刺激天枢、大肠俞,每次30min,共治疗5次。运用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交技术,观察电针治疗前后结肠组织上皮细胞形态学改变,结肠组织中GDNF蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组比较,模型组结肠组织GDNF蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。电针刺激大肠俞募穴可提高结肠中GDNF蛋白及其mRNA的表达水平(P<0.05),光镜和电镜发现针刺可修复受损上皮细胞,进而改善肠道传输功能。EGC抑制组结肠中GDNF蛋白表达与模型组比较无显著性差异(P>0.05),与针刺组比较显著降低(P<0.05),GDNF mRNA的表达水平高于模型组(P<0.05),低于针刺组,但差异无统计学意义(P>0.05)。光镜和电镜下EGC抑制组结肠组织形态改变较为严重。结论电针刺激大肠俞募穴可提高EGC细胞中GDNF蛋白及其mRNA的表达水平,修复受损结肠上皮细胞,进而改善肠道传输功能。

GDNF及其受体Ret在腺样囊性癌嗜神经侵袭和细胞增殖中作用的初步研究

目的:探讨胶质细胞源性神经生长因子GDNF及其受体Ret的表达在涎腺腺样囊性癌(SACC)嗜神经侵袭和细胞增殖中的作用。方法:应用S-P法对42例SACC、5例腺泡细胞癌、5例正常涎腺组织中GDNF和Ret的表达进行检测。结果:GDNF在SACC肿瘤细胞的胞浆、肿瘤周围的神经纤维和正常腺体的导管中呈阳性表达,而在腺泡细胞癌和正常腺泡组织中均不表达。Ret在SACC肿瘤细胞的胞浆和正常的导管上皮细胞中呈阳性表达,在神经纤维中弱阳性或不表达,腺泡细胞癌中不表达。Ki-67在SACC细胞的胞核中呈阳性表达,靠近神经和远离神经的肿瘤细胞中阳性表达并无差异。有神经侵袭组Ki-67的阳性表达高于无神经侵袭组,但无统计学差异。GDNF与Ret表达间呈正相关(r=0.489,P<0.05),但GDNF与Ki-67的表达间无明显相关性(r=0.278,P>0.05)。结论:GDNF及其受体Ret在SACC中高表达,GDNF在周围神经组织内也高表达,提示SACC中存在GDNF的自分泌,GDNF和Ret可能在SACC嗜神经侵袭中发挥重要作用。此外,SACC细胞的增殖活性与神经侵袭的发生、GDNF的表达间关系可能不大。

NGF/GDNF基因修饰神经干细胞移植对AD模型鼠行为学的疗效

目的 观察NGF GDNF基因修饰神经干细胞 (NSC)单独和联合移植对AD模型鼠的学习记忆改善作用。 方法 单侧切断SD大鼠穹窿海马伞 (FF)制备AD模型鼠。术后 8～ 10d ,侧脑室移植基因修饰及未修饰的NSC。移植后 2周 ,进行Morris水迷宫行为学检测。 结果 NGF组和NGF +GDNF组的后 3个时间段的平均逃避潜伏期较损伤组和NSC组明显缩短 (P <0 0 1) ;平台象限游泳距离百分比明显增高 (P <0 0 1) ;GDNF组的平台象限游泳距离百分比高于NSC组 (P <0 0 1) ,但平均逃避潜伏期与NSC组无明显差异。 结论 NGF GDNF基因修饰NSC单独和联合移植对AD模型鼠的行为学有不同程度的疗效 ,其中NGF组和NGF +GDNF组疗效较好 ,但后者并未优于前者 。

电针对鱼藤酮诱导的帕金森病模型大鼠黑质GDNF mRNA表达的影响

目的探讨电针对鱼藤酮诱导的帕金森病(PD)模型大鼠黑质GDNF mRNA表达的影响及作用机制。方法 40只大鼠按照随机分组的原则分为空白组、假手术组、模型组、电针组,每组10只。持续4 w给模型组和电针组大鼠颈背部皮下注射鱼藤酮(2 mg·kg-1·d-1)以诱导其黑质多巴胺能神经元丢失,电针组选取"风府"、"太冲"两穴,频率20 Hz,电压2～4 V,连续波,每日1次,每次20 min,7 d为1疗程,连续治疗3个疗程;其余各组不行针刺。采用半定量RT-PCR方法检测,观察黑质GDNF mRNA表达变化。结果长期低剂量颈背部皮下注射鱼藤酮可诱导大鼠出现行为学的改变;模型组大鼠黑质GDNF mRNA表达减少,与空白组、假手术组比较有显著差异(P<0.01);电针组大鼠黑质GDNF mRNA表达增加,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。结论电针治疗不仅可以减轻鱼藤酮引起的大鼠行为学异常,而且可以促进PD模型大鼠黑质GDNF mRNA的表达,修复营养DA能神经元,延缓PD的发病进程。

针刺对实验性脑出血大鼠脑组织GDNF和nestin表达的影响

目的:探讨急性脑出血后胶质源性神经生长因子(GDNF)和巢蛋白(nestin)的动态表达及针刺的干预作用。方法:选取健康的雄性Wistar大鼠160只,随机分为模型组、模型加针刺组(针刺组)、模型加忆立福组(西药组)3组。每组又分为6h、24h、48h、72h和168h5个时相点,每个时相点有10只大鼠,空白对照组10只,其余制备脑出血大鼠模型,运用免疫组化等方法检测各组大鼠脑组织中GDNF和nestin阳性细胞的表达以及针刺治疗对它们的影响。结果:模型组6h出现GDNF阳性细胞表达增加,1天时达高峰,7天时仍有表达,针刺组与模型组、西药组相比有统计学意义(P<0.01);模型组6h出现nestin阳性表达增加,2天时达高峰,7天时仍有表达,针刺组与模型组、西药组相比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:针刺通过调控神经营养因子GDNF和神经干细胞nestin的表达,增加神经干细胞增殖分化能力,这可能是针刺"百会"透"曲鬓"改善脑出血大鼠神经功能缺损症状和大鼠脑组织超微结构,治疗急性脑出血神经重塑的机制之一。

GDNF在慢性应激和老化致小鼠行为与认知损伤中的作用

目的:探讨慢性应激对不同月龄小鼠空间学习记忆功能的影响,以及小鼠前脑皮层和海马胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的作用。方法:采用多因素慢性应激动物模型,通过旷场试验和Morris水迷宫试验,检测不同月龄小鼠行为及空间学习记忆能力,并检测GDNF在小鼠脑海马和前脑皮层的表达。结果:与青年(2月龄)小鼠比较,老年(15月龄)小鼠的自发活动和探究行为明显减少,空间学习记忆能力明显降低(P<0.05,P<0.01),且海马CA3区、齿状回和前脑皮层GDNF表达明显下降(P<0.05,P<0.01);在慢性应激后,与对照组比较,青年和老年应激组小鼠的自发活动和探究行为显著减少,空间学习记忆能力显著降低(P<0.05,P<0.01),且小鼠前脑皮层和海马GDNF表达显著下降(P<0.05,P<0.01),老年应激小鼠变化更加显著。结论:脑的老化和慢性应激导致小鼠行为及空间学习记忆功能改变,可能与海马和前脑皮层神经元GDNF表达的变化密切相关。

GDNF转基因成纤维细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠模型

为了观察表达胶质细胞系源性神经营养因子 (GDNF)的基因工程细胞在脑内移植后对帕金森病大鼠的治疗作用 ,将 6-羟基多巴胺脑内定位单侧 (损伤侧 )注射制备大鼠帕金森病模型。随机将动物分为实验组 (2 0只 )和对照组 (15只 ) ,分别植入GDNF和 Lac Z转基因的原代培养大鼠成纤维细胞于损伤侧纹状体内 ,动态观察动物单侧旋转行为以及多巴胺及其代谢产物 3 ,4-二羟苯乙酸和高香草酸含量的变化。结果表明 :实验组帕金森病大鼠单侧旋转行为明显减少 ,为移植前旋转圈数的 (64 .8± 5 .8) % (P<0 .0 5 ) ;其纹状体内多巴胺含量显著提高 ,恢复至移植前水平的 (14 .5± 2 .2 ) % (P<0 .0 5 ) ,而对照组仅为 (1.92± 0 .15 ) % ;转基因细胞在脑内可存活 1年以上。本研究结果提示 GDNF基因治疗对大鼠帕金森病具有潜在的临床应用价值。

周围神经损伤后外源性GDNF对神经元的保护作用

采用硅管套接大鼠切断的坐骨神经模型 ,局部给予胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) ,应用尼氏染色、酶组织化学染色方法 ,观察到外源性GDNF能减少脊髓修复侧前角运动神经元死亡的数目 ,降低脊髓前角运动神经元及脊神经节感觉神经元中胆碱酯酶 (CHE)及酸性磷酸酶 (ACP)变化的幅度。这表明外源性GDNF能保护周围神经切断后引起的神经元损伤。

以GDNF为核心的哺乳动物精原干细胞调控网络

睾丸中的胶质细胞源神经营养因子由支持细胞、管周细胞、精母细胞和球形精子合成和分泌,是调节精原干细胞自我更新和分化的关键因子;GDNF通过与SSCs膜上受体GFRα1结合形成GDNF-GFRα1复合物,再结合并活化RET,最后激活MAPK、SFK和PI3K-AKT信号通路并达到调控SSCs自我更新和分化的目的。

重组大鼠质粒pEGFP-GDNF的构建及真核细胞转染

目的 构建携带大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因的真核细胞表达载体,为应用GDNF进行如帕金森综合征之类的神经元退化性疾病的基因治疗打基础。方法 采用RT- PCR方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出该基因的c DNA序列,并克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体p EGFP- C1中,对重组质粒p EGFP- GDNF进一步鉴定。采用电转及阳离子脂质体将重组质粒p EGFP- GDNF转染至SH- SY5 Y细胞。结果 大鼠GDNF c DNA已正确地克隆到真核表达载体p EGFP- C1中,而构建成重组大鼠质粒p EGFP-GDNF。GDNF基因可稳定表达在细胞中。结论 真核细胞表达载体p EGFP- GDNF以及表达GDNF工程细胞SH-SY5 Y的成功构建,为进一步开展GDNF基因治疗PD等中枢神经系统疾病奠定了基础。

反义HLA-A2和GDNF共表达逆转录病毒载体的构建和鉴定

为构建GDNF和反义HLA -A2共表达的逆转录病毒载体,将人GDNF酶切片段(XhoI/SalI)克隆于逆转录病毒载体pLNCX2 的XhoI位点,再将HLA A2cDNA片段反向克隆于上述重组载体的HindIII/SalI位点,对其作酶切鉴定和测序后转染PA317包装细胞系进行病毒的包装。收获重组病毒感染的NIH3T3并进行病毒滴度的测定,GDNF及HLA- A2表达的RT -PCR检测,进一步感染人胚肺成纤维细胞,观察GDNF分泌情况。结果表明:GDNF和反义HLA -A2两片段的序列和插入方向完全正确,包装后获得的重组病毒的平均滴度为5×105 CFU/ml。RT PCR显示:在小鼠源性的PA317细胞中有人GDNF和HLA A2的表达,ELISA法测得病毒感染人胚肺成纤维细胞上清液中GDNF含量为450pg/ml。通过本实验,我们获得能共表达GDNF和反义HLA -A2的重组逆转录病毒,其转染的人成纤维细胞具有合成GDNF的能力。

慢病毒介导新型Tet-On系统调控大鼠GDNF和TH双基因表达对帕金森病大鼠的实验研究

目的观察改良Tet-On系统修饰慢病毒(Lv-TH-GDNF)目的基因的表达调控及纹状体内直接转移对帕金森病(PD)大鼠的作用。方法 1用Lv-TH-GDNF与rt TA2s-M2病毒感染He La细胞,免疫印迹法检测强力霉素(Dox)对TH、GDNF基因表达的调控。2用Lv-TH-GDNF与rt TA2sM2病毒共同注射到PD大鼠患侧纹状体,Dox诱导目的基因表达。通过观察阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为、黑质多巴胺能神经元数量、患侧纹状体DA、DOPAC含量评估Lv-THGDNF治疗效应;通过移植侧纹状体内TH与GDNF蛋白量评估外源基因在体内的表达。结果 1在体外He La细胞实验,仅Dox阳性组见TH、GDNF蛋白条带。2在动物体内实验,病毒移植4周后,与PBS对照组相比,仅病毒+Dox组大鼠旋转行为明显改善(P<0.01),损伤侧黑质致密部TH阳性细胞数、纹状体DA、DOPAC含量及TH和GDNF蛋白量明显增高(P<0.01)。结论新型Tet-On系统修饰的Lv-THGDNF目的基因表达受四环素类抗生素调控,在体外实验未见基础活动,且纹状体内直接转移对PD大鼠有一定治疗作用。

大鼠局灶性脑缺血再灌注后GDNF mRNA及其蛋白表达的变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质脑源性神经营养因子(GDNF)mRNA和蛋白的表达变化。方法采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠(MCAO)模型,用原位杂交法和免疫组化法观察脑缺血后3、6、12 h及1、3、7 d共6个时间点GDNF mRNA及其蛋白的表达变化。结果缺血半暗带GDNF mRNA及其蛋白的表达均于缺血灌注后3 h开始明显上升,6 h达高峰,12 h表达开始减弱(P<0.05或P<0.01),3 d后降至正常水平。结论脑缺血再灌注后缺血半暗带GDNF mRNA及蛋白表达均明显增加可能参与了脑缺血后神经保护。

组蛋白高乙酰化介导的Egr-1结合促进gdnf基因高转录

目的探讨大鼠C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区组蛋白H3K9高乙酰化引发该基因高转录的机制。方法采用Ch IP-PCR技术检测了大鼠C6星形胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞中gdnf基因启动子II区转录因子Egr-1结合位点处H3K9的乙酰化水平以及Egr-1与该启动子的结合能力;利用Real-time PCR和Ch IP-PCR技术,检测了组蛋白乙酰基转移酶抑制剂姜黄素(Curcumin)和去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)处理对C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区Egr-1结合位点处H3K9的乙酰化水平、Egr-1与之的结合能力以及该基因转录水平的影响。结果较之正常星形胶质细胞,C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区Egr-1结合位点处H3K9的乙酰化水平显著升高,并且Egr-1与之的结合能力也显著升高(P<0.01)。当Curcumin显著降低了Egr-1结合位点处H3K9乙酰化水平时,Egr-1与启动子II区的结合量以及gdnf基因m RNA的表达量都显著下调(P<0.05);而当TSA显著升高了Egr-1结合位点处H3K9乙酰化水平时,Egr-1与启动子II区的结合量以及gdnf基因m RNA的表达量都显著升高(P<0.05)。结论在大鼠C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区H3K9高乙酰化介导的Egr-1结合量升高可能是其高转录的原因。