羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存研究进展

生发泡(germinal vesial,GV)期卵母细胞由于未形成极为敏感的纺锤体,对于冷冻卵母细胞以及长期保存地方家畜种质资源具有无可比拟的优势。研究人员对此进行了广泛的关注,基于此,本文综述了羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的意义,分析了目前羊GV期卵母细胞冷冻保存过程中存在的问题,总结了有效提高卵母细胞冷冻效率的一些解决方法,对提高羊GV期卵母细胞冷冻保存效率具有一定的借鉴与参考。

添加HA纳米颗粒对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力的影响

为了探究羟基磷灰石(HA)纳米颗粒对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响,试验以牛卵巢中GV期卵母细胞作为试验材料,将不同粒径的HA纳米颗粒添加到玻璃化冷冻液中,进行超声分散检测。首先,以卵母细胞存活率和成熟率为指标,将0、0.01%、0.05%、0.1%HA纳米颗粒分别添加到玻璃化冷冻液Ⅰ(VSⅠ)和玻璃化冷冻液Ⅱ(VSⅡ)中,不经冷冻直接进行毒性测试;然后,以形态正常率、成熟率、卵裂率和囊胚率为指标测定卵母细胞玻璃化冷冻后的发育能力;最后检测含有0.05%HA纳米颗粒的VSⅡ对冷冻后卵母细胞活性氧水平和线粒体膜电位水平的影响。结果表明:不同浓度HA纳米颗粒对牛GV期卵母细胞均无明显毒性;VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞冷冻后的形态正常率、成熟率、卵裂率、囊胚率显著高于VSⅠ+0.05%HA纳米颗粒组(P<0.05);VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞的活性氧水平显著低于VSⅡ组(P<0.05);VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞的线粒体膜电位水平显著高于VSⅡ组(P<0.05)。说明在VSⅡ中加入0.05%HA纳米颗粒能显著降低牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻后活性氧水平并提高其线粒体膜电位水平,从而可能降低了玻璃化冷冻对细胞的损伤。

GV-Noether环及其弱GV-内射模

给出了GV-Noether环的Cartan-Eilenberg-Bass定理.引进了弱GV-内射模并刻画了DW-环和VN正则环.特别地,证明了环R是VN正则环当且仅当任意弱GV-内射R-模是绝对纯R-模,当且仅当任意弱GV-内射R-模是余平坦R-模.给出了GV-Noether环的Megibben定理.通过提供一些例子区别Noether环,GV-Noether环和w-Noether环.

GV-平坦模

研究GV-平坦模及其盖包理论.利用GV-平坦模给出了DW-环和von Neumann正则环新的等价刻画;证明了任意模都有GV-平坦盖;环R是GV-凝聚环当且仅当任意R-模都有GV-平坦预包.通过具体例子区分了GV-平坦模和w-平坦模、GV-凝聚环和w-凝聚环.

针刺百会、曲鬓穴对急性期脑出血大鼠的影响及其作用机制研究

目的 观察针刺百会、曲鬓穴对急性期脑出血(ICH)大鼠白细胞分化抗原36(CD36)、Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨针刺治疗脑出血的作用机制。方法 选择144只Wistar雄性大鼠,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、针刺组、抑制剂组4组,每组36只,每组按1、3、7 d时间点再分为3个亚组,每组12只。采用立体定位自体血注入法建立ICH大鼠模型。模型组仅接受ICH模型制备,不进行任何治疗;假手术组接受类似模型组各项手术操作,但不进行注血制作;抑制剂组造模后6 h,腹腔注射TLR4抑制剂TAK242,3 mg/kg,1次/d,连续5 d;造模12 h后,针刺组各亚组开始接受针刺治疗,穴位选择百会穴(顶骨正中)、右侧曲鬓穴,采用透刺方法,进针深度20 mm,以100 r/min小幅度捻转,持续捻转2 min,每间隔5 min捻针1次,共留针30 min,期间捻转3次,1次/d,针刺组各亚组分别治疗1、3、7 d。分别于治疗后第1、3、7天,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经功能;检测脑组织血肿体积;采用Western blot法检测脑组织CD36、TLR4蛋白表达水平;采用免疫荧光法观察CD36、TLR4在星形胶质细胞中的表达。结果 (1) mNSS评分:与假手术组同一时间点比较,模型组、针刺组、抑制剂组治疗后1、3、7 d mNSS评分均明显升高(P<0.05);与模型组同一时间点比较,针刺组、抑制剂组治疗后1、3、7 d mNSS评分均明显降低(P<0.05);与针刺组同一时间点比较,抑制剂组治疗后1 d mNSS评分明显降低(P<0.05)。(2)血肿体积:与模型组同一时间点比较,针刺组、抑制剂组治疗后3、7 d脑血肿体积均明显降低,抑制剂组治疗后1、3、7 d脑血肿体积明显降低(P<0.05);与针刺组同一时间点比较,抑制剂组治疗后1、3、7 d脑血肿体积明显降低(P<0.05)。(3) CD36、TLR4蛋白表达水平:与假手术组同一时间点比较,模型组、针刺组、抑制剂组治疗后1、3、7 d CD36、TLR4蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组同一时间点比较,针刺组、抑制剂组治疗后1、3、7 d CD36蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),针刺组、抑制剂组治疗后3、7 d TLR4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与针刺组比较,抑制剂组治疗后1、3、7 d CD36蛋白表达水平均明显升高,TLR4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。(4) CD36、TLR4在GFAP中的表达水平:假手术组大鼠脑组织内可见少量CD36、TLR4表达。与假手术组同一时间点比较,模型组治疗后1、3、7 d CD36、TLR4在GFAP表达均明显增加(P<0.05);与模型组同一时间点比较,抑制剂组、针刺组治疗后1、3、7 d CD36在GFAP表达明显增加,TLR4在GFAP表达明显降低(P<0.05)。结论 针刺百会、曲鬓穴可以改善急性期ICH大鼠神经功能,减轻脑出血血肿体积,可能与促进CD36蛋白表达、抑制TLR4蛋白表达有关。

新型GV5000宽频诱导发光测试仪的研制及其应用于筛分无色小颗粒合成钻石和天然钻石

天然钻石中普遍含有聚合氮以及复杂的生长结构,而合成钻石不含氮或含少量单氮并有典型的与合成条件有关的生长结构,利用此类性质可对天然和合成钻石进行区分。但对粒度细小或镶嵌复杂的钻石样品进行检测时,现有仪器由于局限性难以实现有效测量。本文研制了一种新型宝石发光性测试装置——宽频诱导发光测试仪(GV5000),通过对激发光源和滤光片、结构设计和测试方式的研发,实现了可同时观察多个小颗粒样品(最小为0.002 ct)的荧光特征和磷光特征,建立了一种以发光特征差异性作为筛分条件快速、准确筛分无色小颗粒天然钻石和合成钻石的分析方法。应用本方法测试了9015粒样品,并通过红外光谱、光致发光光谱等方法对筛查结果进行验证,表明97%的天然钻石具有蓝白色荧光并无磷光,而合成钻石的发光特征明显区别于天然钻石。本方法避免了样品大小和形状的影响,提高了小颗粒钻石鉴定的准确度和检测效率,对天然钻石的筛查率可达97%,对合成钻石的筛查率可达100%。

猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻后的体外成熟

本研究旨在探索建立猪GV（Germinal visiele）期卵母细胞的冷冻保存方法。用抽吸法采集屠宰猪卵巢中直径为2—5mm及〉5mm的卵泡卵母细胞，再用切割法采集直径〈2mm的卵泡卵母细胞。结果表明，切割法所获卵母细胞数及每只卵巢平均采卵数均显著高于抽吸法（P〈0．05）；但切割法所获卵母细胞可用率仅为33．8％，显著低于抽吸法67．5％的可用率（P〈0．05）。用抽吸法采集直径为2—5mm的卵泡卵母细胞，进行体外成熟和玻璃化冷冻研究。4组成熟培养结果表明，卵母细胞在添加激素和猪卵泡液（pFF）的成熟培养液中培养24h后转入无激素、无卵泡液的基础培养液中继续培养20h，体外成熟率达78．9％，显著高于另外3组（P〈0．05）。以EFS40作为玻璃化冷冻液，比较细管法和OPS（Open pulled straw）法对猪GV期卵母细胞的冷冻效果，从冻后形态正常率来看，两种方法间无统计学差异（P〉0．05）；但OPS法冷冻猪GV期卵母细胞的冻后存活率和体外成熟率均显著高于细管法（P〈0．05）。

细胞松弛素B对绵羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响

本试验通过玻璃化冷冻前细胞松弛素B(CB)预处理来分析CB对绵羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻/解冻后发育潜力的影响。分别从细胞毒性检测、冷冻检测和CB不同浓度(6.0、7.5和9.0μg/ml)处理3个方面进行试验。试验结果表明毒性检验中CB处理组和未处理组卵母细胞的成熟率都显著低于对照组(P<0.05),但相互之间差异不显著;玻璃化冷冻后,卵母细胞成熟率显著低于未冷冻组(P<0.05),玻璃化冷冻CB处理组和未处理组卵母细胞体外成熟培养后成熟率之间差异不显著(P>0.05);不同CB浓度处理后9.0μg/ml组卵母细胞的成熟率显著高于对照组(P<0.05)。

4℃保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

为了探明雌性动物死亡后GV期卵的可利用性,本研究将ICR系雌性小鼠处死,尸体在4～6℃下分别保存16h、24h和48h,取其卵巢GV期卵,体外成熟后,应用常规法进行体外受精或透明带切割法体外受精,获得2细胞期胚,通过体外培养或胚胎移植观察其发育能力。结果显示,4～6℃下保存16h和24h处理组的体外受精率(分别为31%、33%和21%、24%)与来自新鲜的带有颗粒细胞卵的体外受精率(33%)相比无显著差异。与其相比,保存48h处理组的GV卵已丧失发育能力。此外,体外受精中获得的2细胞胚经体外培养,16h处理组和24h处理组的囊胚率(60%、61%和72%、83%)与新鲜GV期卵处理组的囊胚率(72%)相比差异不显著。获得的2细胞胚经胚胎移植可得到正常幼鼠。上述结果表明,如果雌性小鼠死亡后立即在冷藏温度下(4～6℃)保存,其体内的GV卵在24h以内仍保持发育能力。

GV-半群的结构

定义一类映射,用此类映射描述GV-半群的结构,进一步认识GV-半群的结构.利用此类映射,给出GV-半群同态和同构的性质.

GV-理想与素子模

利用w-算子理论,给出了唯一分解整环中GV-理想的等价刻画.证明了在唯一分解整环R中,I=Ra1+…+Ran∈GV(R),当且仅当N=R(a1,…,an)是F=R(n)(n≥2)的秩为1的素子模,当且仅当N=R(a1,…,an)是F=R(n)(n≥2)的秩为1的极大子模.定义了w-模中子模的w-根.作为所得结果的应用,讨论了唯一分解整环中有限生成自由模的循环子模的w-根.

小鼠GV期卵母细胞的提取及其核质比分析

目的:提取小鼠GV(germinal vesicle,GV)期卵母细胞并分析其核质比。方法:用挤压法从卵巢中分离获得GV期卵母细胞,放入DEPC-NS液体快速清除颗粒细胞,获得GV期卵母细胞裸卵,并计算其核质比。结果:用挤压法分离获得的GV期卵母细胞有一完整球形核,核膜明显,含有单个折光的核仁,胞浆中心稍变黑并呈颗粒状,共51枚,测得其卵径为(40.940±3.341)μm,核径为(15.020±2.236)μm,其核质比为0.054±0.019。结论:用挤压法加DEPC-NS液体可快速破坏颗粒细胞之间的连接,便于迅速获得GV期卵母细胞裸卵;小鼠GV期卵母细胞的核质比为0.054±0.019,与其它物种同时相核质比在相同范围内,提示核质比是卵母细胞发育成熟的重要指标。

深层巩膜切除联合Healon GV注入治疗开角型青光眼

目的 观察深层巩膜切除联合玻璃酸钠 (HealonGV)注入对开角型青光眼的近期治疗效果。方法 对 15例 19眼原发性开角型青光眼患者行深层巩膜切除联合浅巩膜瓣下HealonGV注入 ,术后观察视力变化、眼压、前房反应和滤过泡情况。结果 术前眼压为 (2 7 6± 8 1)mmHg ,术后 3个月为 (15 2± 4 7)mmHg ,差异有显著性 (P <0 0 0 1) ,平均眼压下降幅度为 44 9% (12 4mmHg)。术后发生浅前房、前房积血各 1例 1眼 ,未观察到严重并发症。所有病例术前与术后 1d、7d、3个月视力统计学差异无显著性。结论 深层巩膜切除联合HealonGV注入能有效降低开角型青光眼患者眼压 ,且并发症少 ,视力恢复快 。

GV-半群上的GV-逆半群同余

讨论了GV-半群S=(Y;Sα)上的GV-逆半群同余与Sα上的π-群同余的关系,并把讨论结果应用到完全正则半群上.

幺半群的GV──逆半直积和圈积

本文给出两个幺半群的半直积和圈积是ＧＶ─逆么半群的充要条件．讨论ＧＶ─逆半直积的结构．

深层巩膜切除联合Healon GV注入对开角型青光眼近期疗效观察

目的 观察深层巩膜切除联合 Healon GV注入对开角型青光眼的近期治疗效果。方法 对 12例 (16只眼 )原发性开角型青光眼患者行深层巩膜切除联合 Healon GV注入手术 ,术后观察视力变化、眼压、前房反应和滤过泡情况。结果 术前平均眼压为 2 7.5± 6 .2 mm Hg,术后 3个月平均眼压为 15 .0± 5 .3m m Hg,差异有显著性(P <0 .0 1) ,平均眼压下降幅度为 45 .5 %(12 .5 mm Hg)。单纯手术治疗术后眼压控制≤ 2 1mm Hg者 10只眼(6 2 .5 %) ,需加用局部降眼压药物方可控制眼压者 5只眼 (31.3%)。术后发生浅前房、前房积血各 1例 ,未观察到脉络膜脱离、黄斑水肿、白内障及眼内炎等严重并发症的发生 ,所有病例术前与术后 1、7天 ,3月视力统计学差异无显著性。结论 深层巩膜切除联合 Healon GV注入能有效降低开角型青光眼患者眼内压 ,且并发症少 ,视力恢复快 ,是一种很有临床应用前景的抗青光眼术式。

室温下保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

将ICR系雌性小鼠处死并在10℃、15℃、20℃和25℃下依次保存8、14、24和48h后,采集其体内的卵巢GV期卵,采用常规方法进行体外成熟和体外受精,获得的2细胞期胚经体外培养或胚胎移植观察其发育能力。其结果,在10℃下保存24h、15℃下保存14h、20℃下保存8h和25℃下保存4h后,其体内附有卵丘细胞的GV卵的体外成熟-体外受精后的2细胞率分别为14%、9%、10%和10%,随着保存温度的提高和保存时间的延长,带有颗粒细胞GV期卵的比率明显降低,同时其GV期卵经体外成熟及体外受精后的2细胞率明显降低。在20℃下保存24h和25℃下保存14h时,难以获得形态正常的GV期卵;体外受精获得的2细胞期胚经体外培养,总体上有64%的胚胎发育至扩张囊胚,未见有保存温度和保存时间的显著影响,且利用在15℃保存8h后的GV卵获得2细胞期胚的移植获得正常新生小鼠。上述结果表明,雌性动物室温条件下死亡后,若能短时间及时采集其体内GV期卵并体外成熟、体外受精,体外培养及胚胎移植技术,就有可能获得新生后代。

奶牛GV期卵母细胞OPS法和GMP法超低温冷冻效果

采用OPS管和GMP管对GV期的牛的卵母细胞进行玻璃化冷冻。在不同的前处理液中平衡5min,然后在冷冻液(EFS30,EFS40,EDFS30或EDFS40)中平衡30s,进行OPS法和GMP法玻璃化冷冻保存。结果显示,OPS法用EFS40液和EDFS40液冷冻后形态正常卵率为69.6%和76.1%,2组差异显著(P<0.05),成熟率最高达19.2%和33.3%,2组差异显著(P<0.05);GMP法用EFS40液和EDFS40液冷冻后形态正常卵率最高达75.6%和80.8%,2组差异显著(P<0.05),成熟率最高达15.6%和34.9%,2组差异显著(P<0.05)。而采用EDFS40液,OPS法和GMP法对GV期卵母细胞体外发育的影响差异均不显著,但GMP法的冷冻效率较高。表明采用EDFS40液GMP法对GV期卵母细胞的冷冻效率优于OPS法。

GV-半群的若干兴致

本文将完全正则半群上的一些性质推广到GV-半群,最后证明了核关系K为同余格C(S)上的完全∩-同余。

GV-逆半直积的同余

给出了ＧＶ－逆半直积的最小群同余和最大幂等分离同余。