转录因子HNF1α基因c.493T>C位点突变对其蛋白质水平的影响

肝细胞核因子1α(hepatocyte nuclear factor 1α,HNF1α)作为一种转录因子在维持胰腺β细胞功能、肝脏脂质代谢等过程中发挥着重要的调控作用。该基因突变是导致青少年起病的成人型糖尿病(maturity onset diabetes of the young,MODY)3型的致病原因,目前已报道的该基因的突变位点众多,如P291fsinsC、P112L等常见的突变位点,但其具体的分子机制尚不清楚。本研究对前期工作中发现的1例携带有HNF1α基因c.493T>C位点突变的MODY3患者,通过应用Mutation Surveyor软件分析突变位点的致病性,构建HNF1α野生型和突变型真核表达质粒,采用Western blot检测两种质粒表达的HNF1α蛋白质的量和稳定性变化,结果发现Mutation Surveyor软件分析提示c.493T>C位点突变可能为致病性变异基因,Western blot显示突变型真核质粒表达的HNF1α蛋白质的量和稳定性均明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。上述结果表明c.493T>C(p.Trp165Arg)变异显著影响HNF1α的表达量及稳定性,可能为其导致疾病发生的原因,为后续深入探究MODY3的分子致病机制提供了新的方向。

TCF4基因突变致皮特-霍普金斯综合征2例报告并文献复习

目的总结分析2例特殊皮特-霍普金斯综合征(PTHS)患儿的临床特征和基因突变。方法对2例PTHS患儿的临床资料和基因测序结果进行回顾分析,并复习典型临床表现相关的病例报道及相关文献。结果2例PTHS患儿均为男性,表现为特殊面容,发育迟缓。头颅磁共振成像、脑电图、血液生化检查、外周血染色体、血尿遗传代谢筛查均无异常。第1例患儿2岁,基因测序结果显示转录因子4(TCF4)基因17外显子区域杂合变异,为首次报道致病的新发突变c.1504C>T,可导致氨基酸p.Q502*改变。第2例患儿10岁,基因测序结果显示TCF4基因12外显子区域新发变异,c.990G>A,可导致氨基酸p.Ser330=改变。检索到相关文献110篇,纳入文献复习15篇,报道40种TCF4基因突变,分别位于外显子7~19,涉及缺失突变、插入突变、无义突变、剪切突变和错义突变。结论2例首次报道的TCF4基因突变位点丰富了PTHS的基因变异谱,为临床诊断和遗传咨询提供依据。

1例KCNN4基因突变致脱水遗传性口型红细胞增多症的诊断及基因突变分析

脱水遗传性口型红细胞增多症(DHSt)是一种罕见的非免疫性先天性溶血性疾病,以离子转运异常造成的红细胞脱水为主要特征。临床上多数患者的症状比较轻微,不需要给予特殊治疗。本文报道1例青岛大学附属妇女儿童医院于2023年9月30日收治的以黄疸、贫血、脾大为主要临床表现的患儿,行基因检测发现患儿钾钙激活通道亚家族N成员4(KCNN4)基因突变并确诊为DHSt。KCNN4基因突变致DHSt报道少见,患儿早期诊断困难,容易误诊、漏诊,临床上对于自幼伴有溶血性贫血的患儿,可以尽早行基因检测协助诊断。

1例携带COL4A1基因突变的孕妇产前诊断及胎儿期宫内表型的推测

先证者为孕妇,有先天性智力障碍、双眼内聚、双足肌张力异常。既往孕一胎,磁共振提示胎儿颅内囊性病灶并终止妊娠。此次提取先证者外周血DNA行全外显子组测序初步确定候选致病基因,并行羊水穿刺提取胎儿DNA,行基因型与表型的相关性分析,提示先证者存在COL4A1:c.4745C>T杂合错义突变,是该家系中先天智力障碍、双眼内聚、双足肌张力异常以及胎儿期颅内囊性病变的遗传学原因,胎儿期颅内囊性病变为基底膜破裂出血所致,成年期表现为智力障碍。该点位突变为首次报道,本研究为该家系的遗传咨询和产前诊断提供了理论依据。

线粒体DNA ND4 12026基因突变与糖尿病

目的 研究线粒体DNAND412 0 2 6位点在中国上海地区非肥胖 2型糖尿病患者中的突变情况 ,并探讨该位点突变的临床特征。方法 采用PCR SSCP、PCR RFLP及PCR产物直接测序等技术检测线粒体DNAND4片段的突变情况。结果 发现 2 86例糖尿病患者血样中有 12例患者mtDNAND4基因上 12 0 2 6位点存在AtoG的点突变 ,导致异亮氨酸错义突变成缬氨酸 ,而在 2 42例非糖尿病对照组个体中仅 1例存在同样突变。对该位点突变的临床分析发现起病年龄低 ,5 8%有家族史 ,需要胰岛素治疗。结论 12 0 2 6位点AtoG的突变可能与糖尿病的发生有关 ,并有一定的临床特征。

徐州地区354例耳聋患者GJB2及SLC26A4基因突变筛查分析

目的从分子遗传学水平探讨徐州市重度及极重度感音神经性聋患者的病因学特点。方法采集徐州市特殊教育学校共354例重度或极重度感音神经性聋患者的血样,提取DNA,利用SNPscan技术对其GJB2和SLC26A4基因突变进行检测,分析基因突变检出率及突变形式。结果 354例患者中共165例(46.61%,165/354)检出GJB2或SLC26A4基因致病突变,其中108例(30.51%,108/354)检出GJB2基因突变,50例(14.12%,50/354)为复合杂合突变,58例(16.38%,58/354)为纯合突变,其中235delC基因纯合突变54例;57例(16.10%,57/354)检出SLC26A4基因突变,其中复合杂合突变37例(10.45%,37)354,纯合突变20例(5.65%,20/354),均为919-2A>G纯合突变。结论 GJB2及SLC26A4基因为徐州地区重度或极重度感音神经性聋人群中的常见致病基因,235delC为GJB2基因突变主要形式,919-2A>G为SLC26A4基因突变主要形式。

胰腺癌DPC4/Smad4基因突变及表达

目的:探讨胰腺癌DPC4/Smad4基因突变和表达的意义及临床应用价值,并分析了DPC4/Smad4基因表达与胰腺癌病理特征的关系。 方法:采用聚合酶链反应-单链构像多态性分析(PCR-SSCP)-银染技术和直接测序法检测了胰腺癌组织中DPC4/Smad4基因第8及第11外显子突变,并采用原位杂交方法检测DPC4/Smad4 mRNA的表达。 结果:23例胰腺癌中2例DPC4第8外显子DNA片段出现异常泳动带,1例DPC4第11外显子出现异常泳动带,突变率为13.04％。对其中阳性标本进行测序,1例表现为点突变。DPC4/Smad4 mRNA在胰腺癌组织表达的阳性率52.2％(12/23),较癌周胰腺组织90％(9/10)表达阳性率降低(P<0.05),随着胰腺癌分化程度不同,表达的阳性率不同,分化程度越差,表达率越低;分化程度越好,表达率越高,表明DPC4/Smad4基因表达与肿瘤的分化程度呈正相关,而与胰腺癌病理分期、淋巴结转移无显著相关(P>0.05),胰腺癌DPC4/Smad4 mRNA在Ⅰ,Ⅱ期表达率63.6％(7/11)与Ⅲ,Ⅳ期表达率41.7％(5/12)相近(P>0.05),伴有淋巴结转移胰腺癌DPC4/Smad4 mRNA表达率41.7％(5/12)与不伴有淋巴结转移者表达率63.6％(7/11)也相似(P>0.05)。 结论:胰腺组织与胰腺癌组织可存在DPC4/Smad4 mRNA表达的差异,DPC4/Smad4 mRNA的表达与胰腺癌分化程度相关。DPC4基因的失活在胰?

检测皮肤成纤维细胞cDNA确定Alport综合征COL4A5基因突变

目的 :检测、分析Alport患者Ⅳ型胶原α5链mRNA及其序列 ,试图建立一种简单、快捷的检测COL4A5基因突变的方法 ,同时明确基因突变对COL4A5基因转录的影响。方法 :取 2 1例X连锁显性遗传型Alport综合征患者和 2例对照的皮肤标本培养后提取成纤维细胞总RNA ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和直接测序的方法分析Ⅳ型胶原α5链mRNA。对于cDNA序列异常者 ,进而应用PCR和直接测序的方法分析COL4A5基因。结果 :成功进行了原代、传代皮肤成纤维细胞的培养并提取了总RNA ;直接测序揭示对照组Ⅳ型胶原α5链mRNA序列及已检测的 8例患者Ⅳ型胶原α5链 3′端mRNA序列与所发表的序列完全一致 ;通过RT PCR和直接测序发现了 4例新突变 ,并与从基因组DNA样本中检测到的突变相一致。结论 :通过分析皮肤成纤维细胞中Ⅳ型胶原α5链mRNA序列 ,可用以检测Alport综合征患者COL4A5基因突变 ,且本文报道的 4例突变均为新突变 ;

浙江省非小细胞肺癌患者EGFR基因与EML4-ALK融合基因突变的检测及其临床特征

目的 :检测中国人非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因和棘皮动物微管相关蛋白样-4与渐变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因的突变情况,同时分析这两种基因与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)临床病理特征的关系。方法 :采用PCR扩增和基因测序法检测252例NSCLCs EGFR基因外显子19和21的突变情况,real-time PCR法检测EML4-ALK融合基因的突变情况,分析突变与临床特征的关系。结果:252例非小细胞肺癌组织标本EGFR的突变率为38.8%(98例),其中19外显子突变率为15.8%(40例),21外显子突变率为23.0%(58例)。EGFR突变的患者多为女性、无吸烟史和腺癌(P<0.05),与患者年龄无关(P>0.05)。252例非小细胞肺癌组织标本中,EML4-ALK融合基因突变率4.7%(12例)。EML4-ALK基因突变患者多为女性和年龄较小者(P<0.05),与患者吸烟史和病理类型无关(P>0.05)。没有检测到EGFR和EML4-ALK的突变共存情况。结论:中国人中NSCLCs的EGFR突变率较高,在使用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗前进行EGFR基因突变检测很有必要。EML4-ALK基因突变代表了NSCLC另一种分子亚型,这为临床NSCLC患者的治疗提供了一种新的选择方案。EML4-ALK融合基因突变与EGFR突变共存是罕见的现象。

94例非综合征性耳聋患儿基因突变结果分析

目的分析非综合征性听力障碍儿童耳聋基因突变情况,从分子水平探究该人群聋病的遗传病因和特点,为早期诊断、治疗及预防先天性和遗传性耳聋提供科学依据。方法采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,对天津市儿童听力障碍诊治中心诊断的94例非综合征性听力障碍儿童进行常见耳聋基因(GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体12Sr RNA)共20个突变位点的检测,并对检测结果及听力学资料进行统计学分析。结果94例研究对象皆为中度、重度及极重度感音神经性耳聋,其中双侧听力下降组73例,单侧听力下降组21例。94例患儿中31例(32.98%,31/94)检出携带耳聋易感基因突变,单基因纯合突变13例,单基因复合杂合突变9例,单杂合突变9例,其中双侧听力下降组耳聋基因阳性率(42.47%)明显高于单侧听力下降组(0.00%)(χ~2=13.31,P<0.01)。GJB2基因、SLC26A4基因、GJB3基因及12Sr RNA的突变检出率分别为17.02%、15.96%、0.00%和0.00%。GJB2阳性例数16例,皆位于双侧听力下降组,其中纯合突变8例,复合杂合突变5例,杂合突变3例。SLC26A4(PDS)基因阳性例数15例,皆位于双侧听力下降组,其中纯合突变者5例(皆位于IVS7-2A>G位点),复合杂合突变者4例,杂合突变者6例。双耳听力下降组的GJB2基因阳性检出率(21.92%)高于单耳听力下降组(0.00%)(P<0.05);SLC26A4基因阳性检出率两组间比较无明显差别(20.55%,0.00%)(P>0.05)。结论遗传因素在非综合征性耳聋的致聋病因中所占比例较高,双侧聋遗传性高于单侧聋,对于双侧耳聋及耳聋基因阳性患儿定期进行听力学随访意义重大,耳聋基因筛查是对常规听力学筛查的有效补充,可为降低出生缺陷的三级预防措施提供理论和实践依据。

细胞色素氧化酶CYP3A4基因突变与表型研究进展

细胞色素P450 3A4在许多内源性及外源性化合物的氧化及还原代谢 中起关键作用,对CYP3A4基因表达的研究具有重要意义。本文对CYP3A4基 因突变及其表型特征加以总结。

POU3F4基因突变致内耳畸形人工耳蜗术后脑脊液漏的观察及处理

目的探讨POU3F4基因突变导致的IP-Ⅲ型内耳畸形患者人工耳蜗植入术后脑脊液漏并发其他并发症的护理观察与处理。方法收集解放军总医院第一医学中心耳鼻咽喉头颈外科收治的8例IP-Ⅲ内耳畸形患儿。入院后行基因检测明确分子病因,经颞骨CT及颅脑核磁检查后均提示内耳结构异常,发育畸形,按Sennarolu内耳畸形分类符合IP-Ⅲ型,排除各项绝对禁忌症后在全麻下行人工耳蜗植入+编程术,术后根据患者病情变化给予相对应处置措施。结果8例患者除一例未行基因检查外,7例均在POU3F4基因上明确了致病突变。6例患者术中均发生镫井喷,1例患者术后出现脑脊液漏、肺部感染、脑膜炎等严重并发症。结论POU3F4基因突变导致的内耳畸形IP-Ⅲ患者接受人工耳蜗植入术时脑脊液漏的发生率高,术中修补及术后早期发现都是避免严重并发症发生的要素。针对此类患者,临床护理中需对患者术后的体温变化、隐匿性脑脊液漏及脑脊液漏并发脑膜炎进行更严密的观察,降低脑脊液漏及其他相关并发症的发生率。

大前庭水管综合征家系SLC26A4基因突变分析

目的通过对6个大前庭水管综合征(largevestibularaqueductsyndrome,LVAS)家系SLC26A4基因突变的分析,明确家系中大前庭水管综合征患者SLC26A4的突变类型和突变形式,探讨其突变来源和传递规律。方法收集6个大前庭水管综合征核心家系(仅包括父母和其子女的家系)资料及血样,提取基因组DNA,利用聚合酶链反应的方法对大前庭水管综合征患者及家系成员进行SLC26A4基因的全序列扩增,扩增产物纯化后测序。运用DNAStar或BioEdit等软件进行生物信息学分析、比对。结果6个大前庭水管综合征家系中的12名患者均发现SLC26A4的双等位基因突变,共发现6种突变类型,其中3种为国际上尚未报道的突变,分别为G209E、E303Q和1746delG。家系389、1332、1440和1748的患者为同胞,基因型相同,分别为G209E/G209E,IVS7-2>G/IVS7-2>G,IVS7-2>G/1746delG,H723R/E303Q,患者父母均为单个等位基因突变的携带者。673和701家系的两名患者为亲子关系,基因型不同,673和其同为患者的父亲673-1的基因型分别为IVS7-2>G/H723R和IVS7-2>G/IVS7-2>G,其母亲673-2的内耳结构正常,为H723R的携带者;701和其同为患者的母亲的基因型分别为IVS7-2>G/N392Y和IVS7-2>G/IVS7-2>G,其父亲内耳结构正常,基因型为N392Y/wt。患者673和701的两个突变等位基因分别来自于父亲和母亲。结论本研究发现了6种SLC26A4基因的突变,明确了6个大前庭水管综合征家系患者SLC26A4基因的突变类型及传递方式,并对患者和携带者婚配所育后代的发病率进行了估计,有助于控制和降低大前庭水管综合征患儿的出生率。

^(32)P标记测定Glut_4基因突变的核酸序列分析

本实验采用了单链构型多态法（PCR-SSCP）筛选非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）病人的葡萄糖转运子（Glut_4）基因突变，进行临床基因诊断，探讨NIDDM的遗传异质性与其临床表现型的特点。选择一对（Glut_4）基因外显子4a的侧翼引物，对90例非胰岛素依赖型糖尿病患者外周淋巴组织基因组的DNA进行PCR扩增，该产物经SSCP方法发现有一例异常带型，显示了电泳的泳动变位，并应用同位素^(32)P标记，进行了核酸序列分析，对NIDDM患者进行临床基因诊断有助于阐明NIDDM的病因学，

ERBB4基因突变与ERBB4蛋白表达在黏膜和肢端黑色素瘤中的临床意义

目的分析中国黏膜和肢端黑色素瘤中ERBB4基因突变、ERBB4蛋白表达情况及临床意义。方法收集59例中国黑色素瘤患者(33例黏膜黑色素瘤,26例肢端黑色素瘤)组织标本,采用PCR扩增和基因测序法检测ERBB4基因第18～23外显子突变,免疫组化法检测ERBB4蛋白的表达。结果 ERBB4基因在黏膜黑色素瘤患者中突变率为12.1%(4/33),在肢端黑色素瘤中为7.7%(2/26);ERBB4蛋白在黏膜黑色素瘤中阳性率为84.8%(28/33),在肢端黑色素瘤中为76.9%(20/26)。ERBB4蛋白阳性表达患者的总生存期显著长于ERBB4蛋白阴性表达患者(P=0.011)。结论中国黏膜和肢端黑色素瘤患者的ERBB4基因突变率较高,检测ERBB4蛋白表达情况有助于判断其预后。

SLC26A4基因突变在耳聋疾病中的作用

研究表明,大前庭水管综合征（enlargement of vestibular aqueduct,EVA）和Pendred综合征（pendrend syndrome,PS）的发病与SLC26A4基因密切相关。SLC26A4基因最先由Everett等[1]在一个PS家系中定位克隆,并被命名为PDS基因。后续研究发现该基因突变也可引起非综合征型聋（DFNB4）[2]。由于PDS基因与溶质蛋白家族SLC26其他成员的结构和功能类似,

发根DNA检测Alport综合征COL4A5基因突变

目的:通过发根DNA提取分析Alport综合征(Alportsyndrome,AS)一家系中COL4A5基因突变,试图通过该方法简化AS家系的收集工作和推广COL4A5基因检测。方法:通过PCR和直接测序的方法,对先证者外周血DNACOL4A5基因所有51个外显子及其相邻内含子的DNA序列进行检测。发现突变位点后,提取6份该家系成员发根部DNA进行该突变位点检测。结果:①成功地从发根部提取DNA,进行了PCR和直接测序。②在COL4A5基因第50号外显子4944位点发现一错义突变,碱基G被T取代,导致其编码1648位氨基酸由色氨酸变为半胱氨酸(4944G>TW1648C),男性患者为纯合突变,女性患者为杂合突变,正常家系成员和92例对照中均未发现此位点异常,说明W1648C为引起该家系临床病变的突变位点,并非多态性位点。在性连锁Alport综合征中,COL4A5基因此突变位点为首次报道。结论:通过毛发收集、DNA提取,可使家系收集工作更为简便易行,可帮助未开展基因检测的地区进行基因诊断。本研究通过发根DNA提取检测Alport综合征一家系中新的COL4A5基因突变,遗传方式符合性连锁显性遗传。

基因突变和转基因技术评价TLR-4信号受体在流体切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因转录激活中的作用

用基因突变和转基因技术 ,评价 TL R- 4信号受体在层流低切应力刺激诱导血管内皮细胞 IL - 8基因转录激活中的作用。RT- PCR、Northern杂交和免疫荧光细胞化学染色均显示脐静脉血管内皮细胞表达 TL R- 4,同时RT- PCR和 Northern杂交显示 ,层流切应力刺激 1h后血管内皮细胞 TL R- 4表达增强。用 RT- PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变 TL R- 4c DNA,用 PCR技术从其基因组 DNA中扩增出 IL- 8上游调控序列 ,分别克隆于真核表达质粒 pc DNA3和绿色荧光增强蛋白报告基因 p EGFP1质粒 ,构建出重组 TL R- 4缺失突变基因真核表达质粒 pc DNA3 - m TL R4和 IL - 8报告基因表达质粒 p EGFP1- IL 8U SCS。用 p EGFP1- IL 8U SCS转染或 pc D-NA3 - m TL R4和 p EGFP1- IL8U SCS共转染 ECV3 0 4细胞 ,4.2 dyne/ cm2层流切应力刺激 3 h后 ,流式细胞仪观察荧光蛋白表达强度变化。用 p EGFP1- IL 8U SCS转染细胞 ,经层流切应力刺激 3 h后荧光蛋白表达增强 ( 1.0 6∶2 .71) ,同样用 pc DNA3 - m TL R4和 p EGFP1- IL8U SCS共转染细胞 ,层流切应力刺激 3 h后荧光蛋白表达未明显增强。提示 TL R4/ NF-κB信号传导通路可能介导层流切应力诱导血管内皮细胞 IL -

鼻咽癌患者的Smad2/4基因突变分析

利用PCR-SSCP银染技术对30例鼻咽癌患者的Smad2/4基因的所有外显子进行突变分析,以探讨Smad2/4基因与鼻咽癌发病的可能相互关系。结果在所有病例的所有外显子上没有发现任何类型的突变。Smad2/4基因可能不是鼻咽癌的易感基因,TGF-β/Smad2/4信号通路可能不参与鼻咽癌的发病。