非接触共培养体系下抑制ARPE-19中CAMKⅡ表达对HUVECs迁移和侵袭及管腔形成的影响

目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学分析差异基因参与的功能。使用transwell小室构建ARPE-19和HUVECs非接触共培养体系,根据实验干预措施分为:空白组:仅接种未共培养的HUVECs,无ARPE-19细胞;对照组:ARPE-19和HUVECs细胞均使用完全培养基进行共培养;AIP组(CAMKⅡ抑制组):ARPE-19使用含有AIP(160 nmol/L)的完全培养基,HUVECs使用完全培养基,进行共培养。检测HUVECs迁移、侵袭和管腔形成能力的变化,并通过Western blotting检测CAMKⅡ/AMPK/mTOR/VEGFA蛋白表达水平。结果:生信分析发现差异基因参与细胞生长与死亡和细胞运动等生物学过程。划痕和transwell迁移实验均表明AIP组的HUVECs相对迁移率均明显低于对照组(均P<0.05)。而侵袭和小管形成实验表明,AIP组的相对侵袭率和相对管腔形成率较对照组无明显改变(均P>0.05)。Western blotting结果表明AIP组CAMKⅡ、P-mTOR、VEGFA蛋白表达较对照组均明显下调,而P-AMPK蛋白表达较明显上调(均P<0.05)。结论:在非接触共培养体系下抑制ARPE-19细胞中CAMKⅡ表达可以显著降低HUVECs迁移能力,但不能改变侵袭和管腔形成能力,这可能是通过AMPK/mTOR/VEGFA信号通路实现的。

二苯乙烯苷调节ROS相关JNK通路对LPC诱导HUVECs损伤的作用

目的探讨从何首乌提取的二苯乙烯苷(TSG)对溶血卵磷脂(LPC)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养HUVECs,筛选溶血卵磷脂损伤内皮细胞的最适药物浓度,采用CCK-8检测细胞活力,透射电镜观察细胞形态,激光共聚焦显微镜检测和观察活性氧(ROS)水平,Western blot检测p-JNK蛋白的水平。结果 LPC能引起细胞损伤,并随质量浓度增加,细胞活力降低,其中10μg/mL LPC作用细胞后,与正常组比较细胞活力明显降低,细胞内空泡增多,线粒体肿胀,产生ROS的水平增高,p-JNK蛋白表达水平显著上调。经二苯乙烯苷预处理1 h后,二苯乙烯苷1.0μmol/L和10μmol/L组与溶血卵磷脂组比较,细胞活力增强,细胞内空泡减少,线粒体较完整,产生ROS水平降低,p-JNK蛋白表达量显著下调(P<0.05)。结论二苯乙烯苷具有降低溶血卵磷脂所致HUVECs的细胞损伤作用,其机制可能与调节ROS相关JNK通路有关。

大气颗粒物对A549和HUVECs细胞的毒性作用

比较了A549和HUVECs 2种细胞对颗粒物的敏感度,以探讨大气颗粒物粒径对生物活性的影响.采集北京市区PM10～2.5、PM2.5～0.1和PM0.1,将A549和HUVECs细胞暴露于不同浓度的颗粒物悬浮液24 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,并用LDH试剂盒测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)的含量.结果表明:随着染毒剂量的增大,细胞存活率逐渐降低,并且呈剂量-反应关系;培养液中LDH浓度呈剂量依赖型增加;当染毒剂量>200μg/mL时,PM0.1的细胞致死率大于PM10～2.5和PM2.5～0.1(P<0.01);同一粒径的颗粒物对HUVECs的毒性比A549略大,但无统计意义.因此,相对于粗颗粒物,细、超细颗粒物具有较大的细胞毒性,A549和HUVECs细胞对颗粒物的敏感度差异不显著.

褪黑素抑制H_(2)O_(2)诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激及凋亡标志蛋白质的表达

目的探讨褪黑素(MT)对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激机制与凋亡标志蛋白质的表达的影响。方法将HUVECs细胞分为空白组和H_(2)O_(2)(100、200、300、400、600和700 mmol/L)组,用CCK8法筛选出造模最佳浓度;为了明确MT对H_(2)O_(2)造成的氧化应激损伤的影响,将HUVECs细胞分为空白组、H_(2)O_(2)组和MT组。Western blot检测细胞中p-p65/p65、SOD2和cleaved-caspase 3的表达;试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)浓度;活性氧物质(ROS)染色检测HUVECs细胞内ROS浓度。结果相较于空白组,H_(2)O_(2)组细胞内的p-p65/p65和cleaved-caspase 3表达显著上升(P<0.001),SOD2表达明显下降(P<0.05);SOD活性(P<0.001)和CAT浓度(P<0.01)明显下降,MDA浓度明显上升(P<0.001);ROS含量显著升高(P<0.001)。相较于H_(2)O_(2)组,MT干预组细胞内的p-p65/p65(P<0.001)和cleaved-caspase 3表达(P<0.01)明显下调,SOD2表达明显增高(P<0.001);并且SOD活性(P<0.001)和CAT浓度上升(P<0.05),MDA浓度下降(P<0.001);从ROS染色的结果看来ROS含量有明显下降(P<0.001)。结论MT通过上调SOD2的表达、下调p-p65/p65和cleaved-caspase 3表达,发挥对H_(2)O_(2)介导的HUVECs氧化应激损伤的保护作用。

葛根素6″-O-木糖苷对ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤的影响

目的 探讨葛根素6″-O-木糖苷对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法 将HUVECs随机分为对照组、ox-LDL组及葛根素6″-O-木糖苷10、20、40μmol/L组,MTT法检测细胞活性,ELISA法检测白介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,试剂盒检测caspase-3活性,Western blot检测细胞间黏附分子(ICAM1)、血管细胞黏附分子(VCAM1)、cleaved caspase-3、p-p65、p-IκB-α表达。结果 与对照组比较,ox-LDL处理使HUVECs细胞活性降低(P<0.05),caspase-3活性及IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05),cleaved caspase-3、ICAM1、VCAM1、p-p65、p-IκB-α蛋白表达升高(P<0.05);与ox-LDL组比较,葛根素6″-O-木糖苷能改善以上指标(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论 葛根素6″-O-木糖苷能抵抗ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤,包括提高细胞活性、抑制细胞凋亡和炎症,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 观察前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的影响，探讨其对HUVECs的保护作用机制。方法 体外培养HUVECs细胞系ECV304，以10μmol／L卡托普利或10、1、0．1、0．01μmol／L前荷叶碱作用于HUVECs，30min后再加入AngⅡ1μmol／L，光镜下观察细胞形态，MTT法观察前荷叶碱对HUVECs活性的影响，比色法测定NO、总一氧化氮合酶（tNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）水平，流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果 与对照组比较，AngⅡ能明显诱导HUVECs的凋亡（P〈0．01），10μmol／L卡托普利及0．01～10μmol／L前荷叶碱可明显改善内皮细胞形态，组织活性明显升高（P〈0．05），能增加HUVECs释放NO及生成tNOS（P〈0．05），但对iNOS影响不大，使AngⅡ诱导的HUVECs凋亡细胞数明显减少（P〈0．05）。结论 前荷叶碱通过增加NO生成而抑制AngⅡ诱导的HUVECs凋亡，从而发挥可能的内皮保护功能。

AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞建立高血压损伤模型

目的:采用高血压发病因子血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立高血压损伤模型。方法:使用不同浓度(0.01、0.10、1.00μmol/L和10.00μmol/L)AngⅡ诱导HUVECs不同时间(3、6、9、12 h和24 h),通过考察HUVECs形态、活性、功能、微观结构及凋亡程度来评价HUVECs损伤程度,同时采用交叉设计方差分析和多重比较方法得到AngⅡ最适诱导浓度和最佳诱导时间。结果:AngⅡ呈浓度依赖式诱导HUVECs损伤,最佳诱导条件为1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h,此时HUVECs活性为44.85%、NO含量为43.57μmol/L、总一氧化氮合酶活力为6.99 U/mg pro、内皮型一氧化氮合酶活力为1.89 U/mg pro、丙二醛含量为7.46 nmol/mL、超氧化物歧化酶活力为27.29 U/mg pro、细胞凋亡率为41.5%,微观结构显示核膜皱缩,核仁消失,胞浆内出现大量空泡状结构,线粒体或细小或肿胀,粗面内质网扩张数目较少,部分核糖体丢失,平面内质网扩张,但细胞未解体,仍然保持细胞结构。结论:1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h可以成功诱导HUVECs建立高血压损伤模型。

藏红花素对乳腺癌血管生成作用的实验研究

目的探讨藏红花素(Crocin)对乳腺癌血管生成作用及可能机制。方法 MTT法检测Crocin对人乳腺癌细胞MDA-MB-231及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖抑制作用,并筛选出合适的Crocin浓度;流式细胞术检测Crocin对MDA-MB-231细胞凋亡和周期的影响;Transwell及小管形成实验检测Crocin对HUVEC细胞迁移和小管形成的抑制作用;构建乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型,给予7次Crocin(5 mg/ml)治疗,免疫组化检测Crocin治疗后裸鼠移植瘤组织中CD34及Ki-67的表达。结果 MTT法检测显示,Crocin对乳腺癌细胞MDA-MB-231有显著的增殖抑制作用(P<0.05),其48 h的半数抑制浓度(IC50)为5.0 mg/ml;而Crocin作用24 h时对HUVEC细胞有轻度增殖抑制作用,但不呈剂量依赖性,当Crocin作用48 h和72 h时,其增殖抑制作用明显增加,呈剂量依赖性,其48 h的IC50为5.97 mg/ml。流式细胞仪检测显示,Crocin可诱导MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.05),还可诱导细胞阻滞于G2/M期,呈剂量依赖性(P<0.05)。Transwell及小管形成实验显示,Crocin可抑制HUVEC细胞迁移(P<0.05)和小管形成(P<0.05),均呈剂量依赖性。裸鼠皮下移植瘤实验显示,Crocin5.0 mg/ml治疗后,治疗组较空白对照组移植瘤生长缓慢。空白对照组与治疗组CD34表达量分别为26.00±2.65和14.67±4.16(P<0.05),Ki-67表达量分别为502.67±88.48和262.67±75.08,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Crocin具有一定的抗血管生成作用,可能与其可以在体内抑制肿瘤细胞增殖、降低微血管密度,在体外可抑制血管内皮细胞增殖、迁移和小管形成的作用相关,具体的分子机制还有待进一步研究。

lncRNA PVT1沉默对高糖诱导的血管内皮细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响

目的:探讨抑制lncRNA PVT1对高糖诱导的血管内皮细胞的增殖,凋亡和氧化应激的影响。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为四组:对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(30 mmol/L葡萄糖),高糖+siNC组(30 mmol/L葡萄糖+siNC,细胞转染阴性对照组),高糖+siPVT1组(30 mmol/L葡萄糖+siPVT1,抑制lncRNA PVT1组)。采用荧光定量PCR的方法检测转染后PVT1的表达水平。MTT检测siPVT1(短片段干扰RNA PVT1)对高糖诱导的HUVECs细胞增殖能力的影响。流式细胞术检测siPVT1对高糖诱导的HUVECs细胞ROS和凋亡水平。Western blot检测HUVECs细胞中凋亡相关蛋白如Bax,Bcl-2和cleaved-caspase-3的表达水平。结果:与对照组比较,转染siPVT1后,PVT1的表达水平显著降低(P<0.05)。MTT结果显示,与对照组比较,培养24 h和48 h后高糖组中HUVECs细胞增殖活力均显著降低,与高糖+siNC组(阴性对照组)比较,培养24 h和48 h后,高糖+siPVT1组中的HUVECs细胞增殖活力显著增加(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,与对照组比较,高糖组HUVECs细胞中ROS和凋亡率均显著增加;和高糖+siNC组比较,高糖+siPVT1组中HUVECs细胞中ROS和凋亡率均有减少(P<0.05)。Western blot结果表明,与对照组比较,高糖组中cleaved-caspase-3和Bax表达水平均显著上调,Bcl-2的表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01)。与高糖+siNC组比较,高糖+siPVT1组cleaved-caspase-3和Bax表达水平显著下调,Bcl-2的表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论:抑制lncRNA PVT1可以显著增加高糖诱导的HUVECs细胞增殖活力,减轻氧化应激,抑制细胞凋亡。

海带多糖L01对人脐静脉内皮细胞表达和分泌t-PA的影响

目的:利用人脐静脉内皮细胞体外培养模型,探讨肾上腺素刺激状态下海带多糖L01对内皮细胞的保护作用,以及其对其分泌的组织型纤溶酶原激活物(t-PA)的影响,从内皮细胞抗血栓功能方面探讨海带多糖L01对心血管系统的保护作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞系ECV-304,用肾上腺素刺激24h、48h、72h采样,ELISA法测定HUVECs培养上清液中的t-PA含量,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HUVEC细胞内t-PA mRNA的表达,其扩增产物经电泳后密度扫描及半定量分析。结果:肾上腺素模型组HUVECs培养液中t-PA(24h、48h)含量明显增加,;单给海带多糖对HUVECs t-PA分泌无影响。海带多糖L01在肾上腺素刺激下给药24h,48h后t-PA抗原分泌明显降低(P<0.01),且具有一定的量效关系,但HUVECst-PAmRNA表达各组均无明显差异。结论:肾上腺素可刺激内皮细胞分泌t-PA抗原,海带多糖L01对血管内皮具有一定的保护作用,减少肾上腺素刺激下HUVECs分泌t-PA,而对t-PAmRNA表达无明显影响。

姜黄素对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究姜黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:以体外培养的HUVECs细胞为研究对象,建立H2O2损伤模型,观察姜黄素对H2O2诱导HUVECs损伤模型细胞形态以及培养液中LDH活力、NO和MDA含量的影响。结果:经姜黄素预处理的HUVECs能显著改善H2O2对细胞形态学的损伤,姜黄素中、高剂量可明显降低培养液中LDH活力;姜黄素高剂量能显著提高培养液中NO含量,降低MDA含量。结论:姜黄素对H2O2诱导HUVECs损伤具有一定保护作用。

小檗碱对脂多糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨小檗碱（berberine，BBR）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的人脐静脉血管内皮细胞humanumbilical vein endothelial cells，HUVECs）损伤的影响。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞，不同浓度（1．25、2．5、5．0μmol／L）da檗碱预孵24h后加入5μg／mLLPS再刺激24h，采用EDU染色法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡率，Westernblot法检测磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白表达水平。结果LPS作用后HUVECs损伤明显，细胞活性明显降低，G2/M期细胞比例减少，凋亡细胞增加，p-JNK的表达增加；经过BBR预处理后，细胞活性恢复，G2/M期细胞比例增加，凋亡细胞减少，p-JNK的表达下降，并呈剂量依赖关系。结论小檗碱可有效地减轻LPS诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤，其机制可能与减少凋亡和降低JNK的磷酸化水平有关。

苜蓿素对LPS诱导HUVECs炎症反应的消除作用

【目的】研究苜蓿素对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症损伤的保护作用。【方法】以HUVECs为研究对象,用MTT法确定苜蓿素的处理浓度,用酶联免疫分析法确定LPS建模浓度以及检测HUVECs炎症相关因子(TNF-α、iNOS、COX-2、IL-1、IL-6)表达,用Western-blot法测定NF-κB和MAPK信号通路蛋白(β-Actin、P65、IKB、P-P65、P-IKB、P38、JNK、ERK1/2、P-P38、P-JNK、P-ERK1/2)表达。【结果】不同浓度的LPS均能促进TNF-α的表达(P<0.01),其中LPS浓度在2.5~7.5μg/mL时TNF-α的表达量最高,选用2.5μg/mL作为建模浓度,在该浓度下LPS促进炎症相关因子和炎症相关通路蛋白表达(P<0.01),而作为阳性对照辛伐他汀能抑制LPS诱导的炎症相关因子和炎症相关通路蛋白表达(P<0.01);苜蓿素浓度在3μg/mL之内对HUVECs活性无显著差异,因而选用3、2、1μg/mL作为苜蓿素高、中、低剂量组;苜蓿素高、中、低剂量组均能下调LPS诱导的炎症相关因子和炎症相关通路蛋白表达(P<0.01),而且苜蓿素对炎症相关因子的抑制效果弱于辛伐他汀,而对炎症相关通路蛋白的抑制效果强于辛伐他汀,各炎症相关因子表达随苜蓿素浓度升高而降低(P<0.01),炎症相关通路蛋白表达情况也有这个下降趋势。【结论】苜蓿素能够通过抑制NF-κB和MAPK信号通路消除LPS对HUVECs诱导的炎症损伤。

洛伐他汀对血管内皮细胞与平滑肌细胞增殖调节作用的对比实验研究

目的探讨洛伐他汀对人血管内皮细胞与平滑肌细胞的调节作用及其调节差异性。方法配制含不同浓度洛伐他汀的培养基f0、0．001、O．01、0，1、1、10μmol／L），分别于96孔板中进行人脐静脉内皮细胞（HUVECs）与血管平滑肌细胞（VSMCs）培养，在培养24、72、120h后以MTT法对两种细胞进行细胞活性及增殖情况评估。结果培养24h，0．1μmol／L的洛伐他汀对HUVECs存在明显的促进增殖作用；培养72h，1斗mol／L的洛伐他汀对HUVECs存在明显的促进增殖作用；培养120h后，O．001、0．01、0．1、1μmol／L的洛伐他汀与对照组相比HUVECs增殖活性无明显差异，10μmol／L的洛伐他汀表现出明显的增殖抑制作用。培养24h和120h，各浓度组洛伐他汀对VSMCs的增殖无显著调节作用；培养72h，0．001、0．01、1、10μmol／L的洛伐他汀对VSMCs的增殖存在部分抑制作用，未发现剂量相关规律性。结论洛伐他汀对人血管内皮细胞增殖存在双向调节作用，与浓度相关。体外浓度0.1、1μmol／L时可以表现出明显的促进增殖作用，浓度达10μmol／L时则表现出抑制作用。相同浓度下，洛伐他汀无促进VSMCs增殖的作用，并且存在部分抑制VSMCs增殖的作用。

重组梅毒螺旋体蛋白Tp47通过诱导uPA增加血管内皮细胞通透性

目的探讨重组梅毒螺旋体蛋白Tp47(rTpp47)对单核-巨噬细胞系THP-1合成尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)的调控及其对人脐静脉/血管内皮细胞(HUVECs)通透性的影响。方法用rTpp47刺激THP-1细胞24 h后,分别收集细胞培养上清和THP-1细胞,用ELISA和Western blot检测THP-1细胞表达的uPA含量;用THP-1细胞培养上清刺激人单层血管内皮细胞后,使用FITC-葡聚糖评价单层内皮细胞通透性的变化,用Western blot检测uPA对HUVECs细胞紧密连接蛋白claudin-5表达的影响以及PKC信号通路是否参与rTpp47诱导的THP-1细胞表达uPA。结果重组蛋白rTpp47刺激THP-1细胞合成和分泌的uPA显著高于对照组(P<0.05,P<0.001);用rTpp47与THP-1细胞共培养24 h后收集的细胞培养上清刺激单层血管内皮细胞12和24 h,实验组血管内皮细胞相对通透性显著高于对照组(P<0.05,P<0.0001);uPA活性抑制剂阿米洛利(amiloride)抑制了rTpp47刺激THP-1细胞分泌uPA(P<0.0001),改善了rTpp47对HUVECs的claudin-5蛋白表达的抑制作用(P<0.05),抑制了rTpp47诱导的THP-1细胞表达蛋白激酶C(PKC)的磷酸化(P<0.05)。结论重组蛋白rTpp47可能通过激活PKC信号通路刺激THP-1细胞合成和分泌的uPA,uPA作用于血管内皮细胞,可能导致血管内皮细胞通透性升高。

橙皮素对血管内皮细胞NO分泌功能的影响

考察了橙皮素对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）NO分泌功能的影响，探讨其作用机制。为此采用DAN法测定HUVECs分泌NO的水平，用人乳腺癌MCF-7细胞（雌激素受体阳性）促增殖实验和报告基因模型实验评价橙皮素的雌激素样活性。结果显示在内源雌激素水平较低的条件下，橙皮素在12.5-100μmoVL浓度范围内，能够促进HUVECs分泌NO，并呈剂量依赖性。此作用能够被雌激素受体拮抗剂ICI182，780和放线菌素D阻断。橙皮素与E2同时作用时，HUVECs分泌NO水平较两者单独作用时显著下降。而在内源雌激素水平较高的条件下，橙皮素抑制HUVECs分泌NO。橙皮素能够促进MCF-7细胞增殖，并且能够被ICI182，780完全阻断，同时，橙皮素能够部分拮抗E2对MCF-7细胞的促增殖作用。另外，橙皮素能够诱导ERa控制的报告基因表达。从而可认为橙皮素属于雌激素受体部分激动剂，对血管内皮细胞NO分泌功能具有调节作用，其机理涉及雌激素受体信号途径和基因转录调节。

MicroRNA-126对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨microRNA-126(miR-126)对卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵袭能力的影响,及其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外血管形成能力的影响。方法:利用脂质体瞬时转染miR-126 mimics、mimics NC于SKOV3细胞。Real-time PCR法检测卵巢癌组织及转染前后SKOV3细胞中miR-126的表达,Tanswell小室检测SKOV3细胞的迁移和侵袭情况。分离培养原代HUVECs,利用三维小管形成实验检测HUVECs体外血管形成情况。结果:卵巢癌组织中miR-126的相对表达量(0.29±0.38)显著低于正常卵巢上皮组织(1.18±0.47)(P<0.01)。miR-126 mimics组SKOV3细胞的miR-126相对表达量(5.15±1.00)显著高于未处理组(1.07±0.27)、NC组(0.99±0.20)。转染后,SKOV3细胞的迁移和侵袭能力均显著降低,但HUVECs三维成管数无显著变化。结论:miR-126表达上调能抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外迁移和侵袭能力,miR-126低表达可能与卵巢癌的疾病进展有关。

GLP-1（7-36）对高糖状态下人脐静脉内皮细胞活性的影响及其机制的初步研究

目的：研究GLP-1（7-36）对高糖培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）活性的影响及相关机制.方法：正糖（5mmol/l）和高糖（33mmol/l）环境下培养的HUVECs分别加入不同浓度的GLP-1（7-36）（0nmol/l,0.3nmol/l,3nmol/l,30nmol/l）并干预不同时间（24h,48h,72h）后行MTT检测细胞活力.选择某个合适的GLP-1（7-36）干预浓度和时间后继续行一氧化氮（NO）浓度检测.结果：①高糖培养48h、72h分别较正糖培养48h、72h细胞活力下降（p〈0.05）,②高糖培养环境下经3 nmol/l、30nmol/l浓度 GLP-1（7-36）分别干预48h、72h后较高糖对照组细胞活力显著增加（p〈0.01）,而正常糖培养环境下分别加入不同浓度GLP-1（7-36）干预不同时间后均与正糖对照组细胞活力无差异,③高糖培养48h较正糖培养下细胞培养上清液中NO的量下降,高糖组加入3nmol/l的GLP-1（7-36）后NO的量增加,正糖组中加入3nmol/l的GLP-1（7-36）后NO产量不变.结论：GLP-1（7-36）可以改善高糖引起的HUVECs活力的下降,且该保护作用与NO相关.

IL-35对可溶性CD40配体诱导血管内皮细胞损伤的影响

目的探索深静脉血栓(DVT)患者外周血可溶性CD40配体(sCD40L)和白细胞介素(IL)-35浓度,并研究IL-35对sCD40L诱导血管内皮细胞损伤的保护作用。方法收集深静脉血栓急性期患者30例(DVT组)、健康对照者30名(HC组)外周静脉血3 mL。ELISA检测外周血清IL-35、sCD40L、IL-1β、IL-18的水平;体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)并分为3组,对照组(磷酸盐缓冲液)、sCD40L组(25μg/mL sCD40L)、IL-35组(20 ng/mL IL-35和25μg/mL sCD40L);CCK8法检测HUVECs的活力;ELISA检测细胞培养上清IL-1β、IL-18的水平;Western blot检测细胞GSDMD-N、cleaved caspase-1蛋白的表达。结果DVT患者外周血IL-35水平显著低于对照者,sCD40L、IL-1β、IL-18的水平显著高于对照者(P<0.05)。DVT患者外周血IL-35与sCD40L呈负相关。体外实验表明:IL-35能抑制sCD40L诱导内皮细胞活力的损伤,降低sCD40L组细胞培养上清IL-1β、IL-18的水平,以及细胞GSDMD-N、cleaved caspase-1蛋白的表达。结论DVT患者外周血IL-35水平降低,sCD40L水平升高。IL-35对sCD40L诱导血管内皮细胞损伤具有保护作用,可能影响血栓形成。

Long-term stimulation of angiotensin Ⅱ induced endothelial senescence and dysfunction

Objective Vascular endothelial cells senescence is one of major risk factors for atherosclerotic diseases,which can be induced by endogenous peptides,such as angiotensin Ⅱ(Ang Ⅱ).However,the effect of chronic Ang Ⅱ stimulation on endothelial senescence remains unknown.Therefore,this study aims to investigate the changes in morphology and function of human umbilical vein endothelial cells(HUVECs)in response to the chronic stimulation of Ang Ⅱ.