甲醛灭活型间嵌合脊髓灰质炎病毒免疫原性的研究

应用基因工程重组技术构建了脊髓灰质炎型间嵌合病毒xF_(233)(I/Ⅲ型)。经浓缩、提纯及甲醛灭活3天和12天,虽然其细胞感染力已全部丧失,但仍能诱导家兔产生高效价的抗-Mahoney和抗-Leon血清中和抗体。说明xF_(233)有可能作为灭活疫苗的候选株。

甲醛灭活猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液的最佳条件研究

为探究甲醛对猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液最佳的灭活条件,本试验采用10%的甲醛溶液与猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液混匀,使甲醛终浓度分别达到0.05%、0.07%、0.10%、0.15%、0.20%,在4~8℃下经过不同时间的灭活,通过对灭活液不同时间点的无菌检验及灭活检验,综合判定灭活效果。结果显示:猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液在甲醛终浓度为0.07%时灭活72h,或甲醛终浓度为0.10%和0.15%时灭活60h,或甲醛终浓度为0.20%时灭活48h,均取得可靠的灭活效果。考虑到甲醛的毒副作用,笔者认为4~8℃下用0.07%甲醛终浓度灭活72h是比较理想的灭活条件。

基因Ⅰ型猪乙型脑炎灭活疫苗免疫原性评价

为了评估猪基因Ⅰ型乙型脑炎病毒YA1株、CZ株灭活疫苗的免疫原性,通过将YA1株、CZ株乙脑病毒分别在乳鼠脑内连续传代,获得了高病毒含量的鼠脑病毒液。将佐剂ISA206分别与灭活的YA1株、CZ株乙脑病毒液混合,制备成鼠脑灭活苗。将YA1株、CZ株鼠脑灭活苗以及HW1株商品化鼠脑灭活苗分别免疫接种小鼠、豚鼠、仔猪,采用间接ELISA试验、血凝抑制试验、病毒中和试验以及攻毒保护试验分别检测IgG抗体、血凝抑制抗体、中和抗体的的产生情况以及疫苗对小鼠的攻毒保护率。结果显示YA1株、CZ株灭活苗在小鼠和仔猪上产生的IgG抗体、在豚鼠上产生的血凝抑制抗体、在仔猪上产生的中和抗体以及对小鼠的攻毒保护率均高于HW1株。结果表明乙脑病毒YA1株、CZ株灭活苗的免疫原性优于HW1株,其中CZ株灭活苗的免疫原性最优。

两种不同灭活剂对基因Ⅶ型新城疫病毒灭活效果的影响研究

本试验采用甲醛及β-丙内酯(BPL)对基因Ⅶ型新城疫病毒N07株进行不同时间的灭活处理,检验灭活效果,并将灭活后的病毒液乳化配苗,进行安全性和效力检验。结果表明:0.2%甲醛溶液37℃下作用16 h可将病毒液彻底灭活,血凝性降低;1∶2 000的β-丙内酯2~8℃下作用16~48 h可将病毒液彻底灭活,并保持良好的血凝性;将两种方法灭活的病毒液乳化配苗,接种SPF鸡,安全性良好,无不良反应;效力检验:新城疫HI抗体分别为1∶2^(8.0)和1∶2^(7.7),用N07毒株攻毒,均能100%保护。

三种不同灭活剂对猪细小病毒和猪圆环病毒的灭活效果研究

使用不同浓度的甲醛、β-丙内酯(BPL)、二乙烯亚胺(BEI)对猪细小病毒(S-1株)、猪圆环病毒2型(JSM株)进行灭活处理,采用灭活检验试验[血凝(HA)试验和IFA试验]和无菌检验试验检测不同时间段采集的灭活样品,研究不同灭活剂对猪细小病毒和猪圆环病毒的灭活效果,筛选最佳灭活条件。结果表明:盲传3代后,在37℃条件下,0.2%的甲醛灭活48 h、36 h可彻底灭活S-1株和JSM株;在32℃条件下,BEI终浓度为0.1%时,对S-1株和JSM株的最佳灭活时间分别是84 h和60 h;在4℃条件下,BPL对S-1株和JSM株的灭活终浓度分别为0.03%、0.05%,灭活时间分别为72 h、48 h。HA试验结果显示:使用甲醛灭活后,猪细小病毒血凝效价由2^(11)下降至2~6—2~5;使用BPL与BEI灭活对PPV血凝活性无明显影响。灭活终止程序中,BEI需要添加总体积10%的硫代硫酸钠,BPL在37℃、2 h即可完全水解。本研究最佳灭活条件为:在4℃条件下,终浓度为0.05%的BPL灭活48 h。

鸡胚法分离福建省甲型H1N1流感病毒及分离株特征

目的建立甲型H1N1流感病毒鸡胚分离方法,了解病毒分离株特征,为疫苗制备和开展实验室常规监测等奠定基础。方法呼吸道标本接种鸡胚尿囊腔;血凝(HA)法测定收获的尿囊液中病毒滴度;逆转录PCR法检测病毒亚型特异性。使用甲醛灭活鸡胚分离物,灭活效果采用鸡胚接种法评价。血凝抑制(HI)实验检测急性期和恢复期血清,评价检测病毒感染后的免疫应答情况。结果从13份患者的呼吸道标本中分离出12株甲型H1N1流感病毒。多数病毒可在第二次传代鸡胚中分离到。病毒分离株的血凝滴度较低,为1∶1～16。阳性分离物再次接种鸡胚无法显著提高其HA效价。同鸡和人"O"型红血球比较,使用豚鼠红细胞可得到更高的血凝滴度。1‰甲醛可在24h内完全灭活病毒,但同时病毒的HA效价显著降低。病毒感染后,恢复期的HI滴度较急性期有2～16倍升高,HI抗体4倍增长需要约3w时间。结论鸡胚分离可应用于甲型H1N1流感病毒的分离,病毒的HA滴度较低。尽管甲醛可迅速灭活病毒,但灭活后病毒抗原血凝效价难以维持。病毒感染后,特异性血凝抗体产生较慢,同时滴度较低。基层实验室采用豚鼠血球更适合于病毒的HA滴度测定。

甲醛和β-丙内酯灭活柯萨奇病毒A组16型效果比较

柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）是人手足口病的主要病原体，尽管多数病毒引起的临床症状较轻，但最近一些研究表明CoxA16也像EV71一样能引发严重的疾病，

不同灭活剂对柯萨奇病毒A组16型免疫原性的影响

目的评价甲醛及β-丙内酯对纯化柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)灭活效果及免疫原性的影响。方法将制备的CV-A16-168病毒液经浓缩、纯化后,用不同浓度甲醛(1∶400、1∶2000、1∶4000、1∶8000)及β-丙内酯(1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000)灭活,CV-A16抗原ELISA检测试剂盒检测抗原含量,确定最适灭活浓度。用1∶4000甲醛及1∶2000β-丙内酯灭活CV-A16-168,按抗原含量分别制备为640和320 U/mL,加入Al(OH)3佐剂,制备灭活CV-A16-168实验疫苗,免疫BALB/c小鼠2次,间隔28 d,于首次免疫后28、35 d采血分离血清,采用体外微量中和试验检测小鼠血清中和抗体效价,流式细胞术检测血清细胞因子水平。将甲醛灭活和β-丙内酯灭活实验疫苗分别腹腔注射5只BALB/c雌鼠和雄鼠2次,间隔28 d,初免后7 d,雌雄小鼠合笼,怀孕后取出单独饲养,待乳鼠出生48 h内,分别用CV-A16-G10株(原型株,A基因型)、CV-A16-154株(B基因型)及CVA16-G20株(B基因型)进行1000 LD50的病毒株颅内注射,观察21 d乳鼠的临床症状及生存情况。结果1∶4000甲醛37℃3 d及1∶2000β-丙内酯4℃24 h均可完全灭活CV-A16-168。小鼠经灭活CV-A16-168实验疫苗免疫后,血清中和抗体阳转率均达到100%,甲醛灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶7131.55和1∶5042.77,平均增长42.2和45.3倍;β-丙内酯灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶10085.54和1∶6208.38,平均增长42.2和48.5倍;不同灭活剂处理的相同抗原含量间抗体GMT差异无统计学意义(P均>0.05),但组内二次免疫间的抗体GMT差异有统计学意义(P<0.001);甲醛和β-丙内酯灭活实验疫苗免疫小鼠后均诱导产生IFNγ,抗原含量640与320 U/mL组比较,有显著升高(P<0.001)。乳鼠经CV-A16不同基因型毒株攻毒,观察21 d后,全部存活,母传抗体可对不同基因型毒株颅内注射攻毒的乳鼠产生100%的保护。结论1∶4000甲醛及1∶2000β-丙内酯均可完全灭活CV-A16,灭活后的免疫原性无显著差异,为CV-A16灭活疫苗的开发及研究奠定了基础。