本研究旨在对芦花鸡的干扰素诱导的跨膜蛋白-3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)基因进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中鸡IFITM3基因序列(登录号:NM_001350061.1)设计特异性引物,利用RT-PCR技术对芦花鸡IFITM...本研究旨在对芦花鸡的干扰素诱导的跨膜蛋白-3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)基因进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中鸡IFITM3基因序列(登录号:NM_001350061.1)设计特异性引物,利用RT-PCR技术对芦花鸡IFITM3基因进行克隆、测序和生物信息学分析。结果表明,芦花鸡IFITM3基因片段大小为414bp,与GenBank中发表的鸡IFITM3基因序列(登录号:NM_001350061.1)同源性为99.9%;编码137个氨基酸。IFITM3基因理论分子质量为14.95ku,理论等电点(pI)为6.89,不稳定系数为33.98,脂肪系数为103.14,平均疏水指数为0.300,存在3个明显的疏水区,无信号肽,存在2个跨膜区,分别位于第46-68、101-123位氨基酸处;二级结构预测显示,IFITN3蛋白主要以无规则卷曲为主,存在多个α-螺旋和β-折叠区域。本研究成功克隆了芦花鸡IFITM3基因,为进一步研究IFITM3蛋白功能及阐明其抗病毒分子机制奠定了理论基础。展开更多
干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)在机体抗病毒和抗炎等方面发挥重要作用。为深入研究山羊IFITM3在病毒感染中的分子作用机制,对获得的海南黑山羊IFITM3基因进行了序列分析并采用RT-qPCR方法进...干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)在机体抗病毒和抗炎等方面发挥重要作用。为深入研究山羊IFITM3在病毒感染中的分子作用机制,对获得的海南黑山羊IFITM3基因进行了序列分析并采用RT-qPCR方法进行了其组织特异性表达的检测,利用原核表达的IFITM3蛋白制备了多克隆抗体,并进行IFITM3在黑山羊组织中分布的研究。结果显示,该基因表现出种属内保守性和种属间差异性,编码蛋白由147个氨基酸组成,存在2个潜在跨膜区,不含信号肽。成功构建pET-32a(+)-IFITM3表达载体并表达了35 ku重组蛋白,免疫家兔后,经ELISA和Western-blot检测,获得的多克隆抗体特异性好。组织特异性表达的检测结果表明,IFITM3在心脏表达水平最高,大脑和胸腺表达量最低。IFITM3在心肌细胞、肝细胞、脾网状内皮细胞、肺支气管上皮细胞、肾小管上皮细胞、大脑皮质、胸腺髓质、肠系膜淋巴结皮质淋巴细胞、胃底腺细胞和肠腺细胞中均有分布。研究结果为深入探讨IFITM3在山羊疾病中的分子作用机制提供了基础数据。展开更多
干扰素诱导的跨膜蛋白3(Interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)敲除小鼠(Ifitm3^-/^-小鼠)感染流感病毒后,表现出更为严重的病理损伤和死亡率。最近的研究发现,IFITM3蛋白表达也会影响机体针对流感病毒的适应性免疫反应...干扰素诱导的跨膜蛋白3(Interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)敲除小鼠(Ifitm3^-/^-小鼠)感染流感病毒后,表现出更为严重的病理损伤和死亡率。最近的研究发现,IFITM3蛋白表达也会影响机体针对流感病毒的适应性免疫反应效果。由于空间效应,纵膈淋巴结在机体抵抗流感病毒急性期感染的适应性免疫应答过程中发挥重要功能,本研究欲探究使用流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/H1N1进行感染后,野生型和Ifitm3^-/^-小鼠的纵膈淋巴结中与免疫相关的差异表达基因。本研究对流感病毒PR8感染后第3d的纵膈淋巴结进行RNA-Seq测序。高通量测序共检测到有1312个差异表达基因,其中上调和下调差异表达基因分别为904和408个。这些差异表达基因主要参与炎症反应与细胞凋亡信号通路、T细胞和B细胞受体信号通路、T细胞和B细胞激活与细胞因子分泌等信号通路。采用荧光定量PCR对部分免疫相关的差异表达基因进行验证,结果与RNA-Seq测序结果一致。本研究为进一步阐明IFITM3在适应性免疫应答中拮抗流感病毒的分子机制奠定了基础。展开更多
目的探讨干扰素诱导的跨膜蛋白3(Interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)在流感病毒感染过程中对肺组织NLRP3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎症小体活化的调控作用,为流感的防...目的探讨干扰素诱导的跨膜蛋白3(Interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)在流感病毒感染过程中对肺组织NLRP3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎症小体活化的调控作用,为流感的防治提供新的思路。方法构建IFITM3敲除小鼠(Ifitm3^(-/-)小鼠),用A/AiCHi/1968/2(H3N2)病毒分别感染Ifitm3^(-/-)小鼠与野生型小鼠,连续14 d记录体重变化并计算存活率。在感染后第0、1、3和5 d采集小鼠肺组织,通过病理组织切片考察小鼠肺组织的病理损伤,采用Western blot、RT-qPCR、Elisa法检测小鼠肺组织的NLRP3炎症小体激活状况。采用SPSS 20.0软件进行独立样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果经A/AiCHi/1968/2(H3N2)病毒感染后,Ifitm3^(-/-)小鼠相比野生型小鼠表现出高的死亡率和更严重的肺组织炎症反应。较野生型小鼠而言,Ifitm3^(-/-)小鼠肺组织中NLRP3炎症小体效应蛋白NLRP3和caspase-1的基因和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),同时NLRP3炎症小体下游因子IL-1β的mRNA拷贝数及分泌含量亦明显升高(P<0.05)。结论敲除IFITM3基因促使流感病毒感染小鼠肺组织NLRP3炎症小体的活化程度升高,首次发现在流感病毒感染时IFITM3参与了NLRP3炎症小体活化的调控过程,为IFITM3拮抗流感病毒的分子机制提供了新的线索。展开更多
Interferon-inducible transmembrane protein 3(IFITM3)inhibits influenza virus infection by blocking viral membrane fusion,but the exact mechanism remains elusive.Here,we investigated the function and key region of IFIT...Interferon-inducible transmembrane protein 3(IFITM3)inhibits influenza virus infection by blocking viral membrane fusion,but the exact mechanism remains elusive.Here,we investigated the function and key region of IFITM3 in blocking influenza virus entry mediated by hemagglutinin(HA).The restriction of IFITM3 on HAmediated viral entry was confirmed by pseudovirus harboring HA protein from H5 and H7 influenza viruses.Subcellular co-localization and immunocoprecipitation analyses revealed that IFITM3 partially co-located with the full-length HA protein and could directly interact with HA_(2) subunit but not HA_(1) subunit of H5 and H7 virus.Truncated analyses showed that the transmembrane domain of the IFITM3 and HA_(2) subunit might play an important role in their interaction.Finally,this interaction of IFITM3 was also verified with HA_(2) subunits from other subtypes of influenza A virus and influenza B virus.Overall,our data demonstrate for the first time a direct interaction between IFITM3 and influenza HA protein via the transmembrane domain,providing a new perspective for further exploring the biological significance of IFITM3 restriction on influenza virus infection or HA-mediated antagonism or escape.展开更多
文摘本研究旨在对芦花鸡的干扰素诱导的跨膜蛋白-3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)基因进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中鸡IFITM3基因序列(登录号:NM_001350061.1)设计特异性引物,利用RT-PCR技术对芦花鸡IFITM3基因进行克隆、测序和生物信息学分析。结果表明,芦花鸡IFITM3基因片段大小为414bp,与GenBank中发表的鸡IFITM3基因序列(登录号:NM_001350061.1)同源性为99.9%;编码137个氨基酸。IFITM3基因理论分子质量为14.95ku,理论等电点(pI)为6.89,不稳定系数为33.98,脂肪系数为103.14,平均疏水指数为0.300,存在3个明显的疏水区,无信号肽,存在2个跨膜区,分别位于第46-68、101-123位氨基酸处;二级结构预测显示,IFITN3蛋白主要以无规则卷曲为主,存在多个α-螺旋和β-折叠区域。本研究成功克隆了芦花鸡IFITM3基因,为进一步研究IFITM3蛋白功能及阐明其抗病毒分子机制奠定了理论基础。
文摘干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)在机体抗病毒和抗炎等方面发挥重要作用。为深入研究山羊IFITM3在病毒感染中的分子作用机制,对获得的海南黑山羊IFITM3基因进行了序列分析并采用RT-qPCR方法进行了其组织特异性表达的检测,利用原核表达的IFITM3蛋白制备了多克隆抗体,并进行IFITM3在黑山羊组织中分布的研究。结果显示,该基因表现出种属内保守性和种属间差异性,编码蛋白由147个氨基酸组成,存在2个潜在跨膜区,不含信号肽。成功构建pET-32a(+)-IFITM3表达载体并表达了35 ku重组蛋白,免疫家兔后,经ELISA和Western-blot检测,获得的多克隆抗体特异性好。组织特异性表达的检测结果表明,IFITM3在心脏表达水平最高,大脑和胸腺表达量最低。IFITM3在心肌细胞、肝细胞、脾网状内皮细胞、肺支气管上皮细胞、肾小管上皮细胞、大脑皮质、胸腺髓质、肠系膜淋巴结皮质淋巴细胞、胃底腺细胞和肠腺细胞中均有分布。研究结果为深入探讨IFITM3在山羊疾病中的分子作用机制提供了基础数据。
文摘干扰素诱导的跨膜蛋白3(Interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)敲除小鼠(Ifitm3^-/^-小鼠)感染流感病毒后,表现出更为严重的病理损伤和死亡率。最近的研究发现,IFITM3蛋白表达也会影响机体针对流感病毒的适应性免疫反应效果。由于空间效应,纵膈淋巴结在机体抵抗流感病毒急性期感染的适应性免疫应答过程中发挥重要功能,本研究欲探究使用流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/H1N1进行感染后,野生型和Ifitm3^-/^-小鼠的纵膈淋巴结中与免疫相关的差异表达基因。本研究对流感病毒PR8感染后第3d的纵膈淋巴结进行RNA-Seq测序。高通量测序共检测到有1312个差异表达基因,其中上调和下调差异表达基因分别为904和408个。这些差异表达基因主要参与炎症反应与细胞凋亡信号通路、T细胞和B细胞受体信号通路、T细胞和B细胞激活与细胞因子分泌等信号通路。采用荧光定量PCR对部分免疫相关的差异表达基因进行验证,结果与RNA-Seq测序结果一致。本研究为进一步阐明IFITM3在适应性免疫应答中拮抗流感病毒的分子机制奠定了基础。
文摘目的探讨干扰素诱导的跨膜蛋白3(Interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)在流感病毒感染过程中对肺组织NLRP3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎症小体活化的调控作用,为流感的防治提供新的思路。方法构建IFITM3敲除小鼠(Ifitm3^(-/-)小鼠),用A/AiCHi/1968/2(H3N2)病毒分别感染Ifitm3^(-/-)小鼠与野生型小鼠,连续14 d记录体重变化并计算存活率。在感染后第0、1、3和5 d采集小鼠肺组织,通过病理组织切片考察小鼠肺组织的病理损伤,采用Western blot、RT-qPCR、Elisa法检测小鼠肺组织的NLRP3炎症小体激活状况。采用SPSS 20.0软件进行独立样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果经A/AiCHi/1968/2(H3N2)病毒感染后,Ifitm3^(-/-)小鼠相比野生型小鼠表现出高的死亡率和更严重的肺组织炎症反应。较野生型小鼠而言,Ifitm3^(-/-)小鼠肺组织中NLRP3炎症小体效应蛋白NLRP3和caspase-1的基因和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),同时NLRP3炎症小体下游因子IL-1β的mRNA拷贝数及分泌含量亦明显升高(P<0.05)。结论敲除IFITM3基因促使流感病毒感染小鼠肺组织NLRP3炎症小体的活化程度升高,首次发现在流感病毒感染时IFITM3参与了NLRP3炎症小体活化的调控过程,为IFITM3拮抗流感病毒的分子机制提供了新的线索。
基金supported by the National Natural Science Foundation of China (31702210, 31972719)the CAMS Innovation Fund for Medical Sciences (2020–12M-5-001)
文摘Interferon-inducible transmembrane protein 3(IFITM3)inhibits influenza virus infection by blocking viral membrane fusion,but the exact mechanism remains elusive.Here,we investigated the function and key region of IFITM3 in blocking influenza virus entry mediated by hemagglutinin(HA).The restriction of IFITM3 on HAmediated viral entry was confirmed by pseudovirus harboring HA protein from H5 and H7 influenza viruses.Subcellular co-localization and immunocoprecipitation analyses revealed that IFITM3 partially co-located with the full-length HA protein and could directly interact with HA_(2) subunit but not HA_(1) subunit of H5 and H7 virus.Truncated analyses showed that the transmembrane domain of the IFITM3 and HA_(2) subunit might play an important role in their interaction.Finally,this interaction of IFITM3 was also verified with HA_(2) subunits from other subtypes of influenza A virus and influenza B virus.Overall,our data demonstrate for the first time a direct interaction between IFITM3 and influenza HA protein via the transmembrane domain,providing a new perspective for further exploring the biological significance of IFITM3 restriction on influenza virus infection or HA-mediated antagonism or escape.