IHC与FISH在乳腺癌HER2蛋白表达和基因扩增检测中的应用

目的比较免疫组织化学法(immunohistochemisity,IHC)和荧光原位杂交法(fluorescence in situ hybridization,FISH)在乳腺癌患者中检测人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)的应用。方法2019年2月至2022年1月本院收治158例乳腺癌患者作为研究对象,均采用IHC和FISH检测HER2的蛋白表达和基因扩增情况,比较两种方法的检测结果和一致性。结果IHC结果显示158例患者中HER2(1+)、HER2(2+)、HER2(3+)分别为5例(3.16%)、97例(61.39%)、56例(35.44%),FISH结果显示HER2扩增73例(46.20%),未扩增85例(53.80%),其中,HER2(1+)患者FISH均显示未扩增,阴性符合率为100%;HER2(3+)患者FISH均显示扩增,阳性符合率为100%;97例HER2(2+)患者FISH显示扩增17例,阳性符合率为17.52%。两种方法检测HER2一致性较好且具有统计学意义(Kappa值=0.775,P<0.05)。结论HIC与FISH在乳腺癌患者HER2表达检测中一致性较好,可在临床推广使用,必要时需结合两种方法检测。

IHC、FISH、qRT-PCR检测NSCLC ALK融合基因的对比分析

目的对比分析免疫组化(IHC)、荧光原位杂交(FISH)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌(NSCLC)ALK融合基因情况。方法收集453例NSCLC标本。随机选取IHC检测的ALK融合基因不同表达程度标本40例[ALK(-)、(+)、(2+)、(3+)标本各10例],采用FISH和qRT-PCR法分别检测各组ALK融合基因表达水平,并进行一致性分析。结果IHC与FISH、qRT-PCR的ALK融合基因检测结果比较,IHC ALK(-)/(3+)与FISH、qRT-PCR检测结果一致率均为100%,具有高度一致性(r=0.781、r=0.740,P<0.05)。FISH与qRT-PCR的检测结果一致率为97.5%,具有高度一致性(r=0.943,P<0.05)。结论FISH、qRT-PCR法与IHC法检测在不同表达程度ALK融合基因样本中检测结果存在差别,IHC敏感性更高。FISH、qRT-PCR法在ALK融合基因样本的检测结果具有高度一致性。

微滴式数字PCR与IHC联合FISH对乳腺癌新辅助化疗前后HER-2检测的分析

目的分析乳腺癌患者在新辅助化疗前后,采用微滴式数字PCR、IHC联合FISH检测人表皮生长因子受体2(epithelial growth factor receptor-2,HER-2)变化的价值。方法筛选96例乳腺癌患者均自2020年1月~2022年1月入院实施新辅助化疗,在化疗前后采用微滴式数字PCR(设为观察组)、IHC联合FISH法(设为对照组)检测HER-2变化,分析两种方案检测结果、与金标准符合率。结果化疗前,观察组检测显示阳性为46(47.92%)例,阴性为50(52.08%)例;对照组检测显示阳性为42(43.75%)例,阴性为54(56.25%)例,两组检测结果显示对比无明显差异(P>0.05),符合率为96.88%、98.96%;化疗后,观察组检测显示阳性为44(45.83%)例,阴性为52(54.17%)例;对照组检测显示阳性为40(41.67%)例,阴性为56(58.33%)例,两组检测结果显示对比无明显差异(P>0.05),符合率为98.96%、98.96%。结论将微滴式数字PCR与IHC联合FISH法应用在乳腺癌新辅助化疗前后HER-2检测过程中,两种方案与金标准符合率较高,可有效弥补常规检测不足之处,并为临床疾病的诊断提供丰富参考,值得借鉴。

荧光原位杂交（FISH）技术与免疫组织化学（IHC）技术应用于乳腺癌患者Her2基因检测的评价

目的探讨采用荧光原住杂交（FISH）技术检测乳腺癌患者中的Her2基因与免疫组织化学（IHC）检测Her2基因的结果的一致性以及导致两者差异的可能原因；了解荆州地区乳腺癌患者中Her2基因的分布。方法以FISH方法，对55例免疫组织化学分别为（3＋），（2＋），（1＋）和阴性（-）的乳腺癌新鲜石蜡切片标本进行Her2基因的检测。结果55例标本中，有16例采用FISH方法检测出Her2基因的表达；12例Her2基因表达（3＋）的标本中11例检测出Her2基因；7例Her2基因表达（2＋）的标本中5例检测出Her2基因；10例Her2基因表达（1＋）的标本中未检测出Her2基因；26例Her2基因表达（-）的标本中未栓测出Her2基因。结论初步筛查Her2基因状态可以首选免疫组织化学方法，对于IHC（2＋）的标本，应该行FISH确诊。

PET、RT-PCR、IHC方法检测肿瘤转移灶的比较

目的 :评价PET、RT PCR、IHC三种方法检测肿瘤转移灶的价值。材料和方法 :对 11例恶性肿瘤患者分别进行FDG PET全身扫描、骨髓组织标本的RT PCR、IHC检测。结果 :PET、RT PCR、IHC三种方法的阳性率分别为 81.8%、72 .7%、5 4.5 %。PET、RT PCR检测转移灶的灵敏度均高于IHC ;PET与RT PCR之间无差别 ,但是FDG PET能显示病灶的位置和范围。结论 :FDG PET是一种对肿瘤转移灶有价值影像学检查。

FISH和IHC检测HER2基因及蛋白在乳腺癌诊治中的应用

目的对比研究免疫组织化学（IHC）与荧光原位杂交（FISH）方法检测乳腺癌中C-erbB-2蛋白表达和HER2基因扩增,评估两种方法的实际应用价值。方法 IHC和FISH法分别检测58例乳腺癌组织中C-erbB-2蛋白表达和HER2基因扩增状况,并进行一致性分析。结果IHC检测蛋白阳性2＋和3＋共22例,占总病例的37.9%,58例乳腺癌中FISH检测出HER2基因扩增17例,占29.3%。IHC检测C-erbB-2蛋白3＋的12例中11例HER2基因扩增阳性,1例无扩增;C-erbB-2蛋白2＋者10例,其中5例可见HER2基因扩增;C-erbB-2蛋白1＋者11例HER2基因扩增仅1例。C-erbB-2蛋白阴性病例共25例均未检测到基因扩增。结果显示IHC检测C-erbB-2蛋白与FISH检测HER2基因扩增状态有较高的一致性（k=0.681,P〈0.01）,C-erbB-2蛋白阴性和3＋标本与HER2基因扩增阳性率比较差异无统计学意义（P〉0.05）;而C-erbB-2蛋白1＋和2＋病例与其HER2基因扩增差异具有统计学意义（P〈0.05）。结果 IHC检测C-erbB-2蛋白强阳性（3＋）和阴性（0）与HER2基因扩增有较高的一致性,可作为临床是否应用Herceptin治疗的依据,而C-erbB-2蛋白2＋和1＋病例必须进一步行HER2基因扩增检测。

IHC和FISH检测乳腺癌HER-2与ER、PR、淋巴结转移的相关性

采用免疫组化(IHC)法与荧光原位杂交(FISH)法检测110例乳腺癌手术标本。结果显示,在雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达阳性的标本中IHC法检测人类表皮生长因子受体2(HER-2)蛋白表达()分别为28.36%、37.84%,明显低于ER、PR表达阴性标本HER-2蛋白()表达74.42%、63.89%;在ER、PR表达阳性的标本中有HER-2基因扩增分别为22.39%、24.32%,明显低于ER、PR表达阴性标本46.51%、47.22%;伴有淋巴结转移的HER-2蛋白表达()为62.86%,明显高于不伴淋巴结转移HER-2蛋白表达()38.67%;伴有淋巴结转移的HER-2基因扩增为38.10%,而不伴有淋巴结转移的HER-2基因扩增为27.94%,两者相比无明显差异。

IHC联合FISH 检测胃癌中HER2与CK8/18、p53、CEA的表达及其相关性研究

目的 探讨IHC联合FISH检测胃癌中HER2及其与CK8/18、p53、CEA表达的相关性研究。方法 以我院2017-01-2018-06月收治的120例胃癌手术患者为研究对象,分别采用免疫组织化学(IHC)检测胃癌组织中HER2蛋白表达情况与荧光原位杂交技术(FISH)检测胃癌组织中HER2基因扩增情况,并采用IHC方法检测胃癌组织中CK8/18、p53、CEA蛋白的表达情况,分析HER2与CK8/18、p53、CEA表达的相关性。结果 120例胃癌组织中HER2表达水平,IHC检测结果显示为HER2蛋白过表达(3+)的阳性率为11. 7%(14/120),FISH检测结果显示HER2基因扩增的阳性率为17. 5%(21/120);HER2基因扩增与CK8/18、p53及CEA蛋白的表达越高,则胃癌发生淋巴结转移及浸润深度的概率越大(P<0. 05);HER2基因扩增与CK8/18、p53及CEA蛋白的表达呈正相关(P<0. 05)。结论 胃癌HER2基因扩增与CK8/18、p53及CEA蛋白的表达与其是否发生淋巴结转移及浸润深度有关,可作为患者病情严重程度与预后的一个有效评估指标。

IHC－66对离体豚鼠心房肌的影响

ＩＨＣ－６６（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）对离体豚鼠心房肌能明显抑制收缩性，肾上腺素诱发的自律性，延长功能不应期，降低兴奋性；可明显抑制其正阶梯现象，降低右心房自发性搏动频率。结果表明，ＩＨＣ－６６的抗心律失常作用可能与其抑制Ｃａ２＋、Ｎａ＋的跨膜转运有关。

FISH与IHC用于乳腺癌HER-2检测的相关性分析

目的探讨荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)两种方法检测HER-2与乳腺癌的相关性。方法收集50例手术切除的乳腺癌标本,FISH法检测细胞扩增情况,IHC法检测细胞膜上HER-2蛋白表达情况,对两种检测结果的一致性进行统计分析。结果 FISH法与IHC法检测结果阳性的符合率为86.96%。结论 FISH和ICH两项技术具有良好的一致性,且FISH对HER-2基因扩增更具敏感性,可作为确诊HER-2基因状态的方法。

高通量测序数据再分析在识别结直肠癌患者ERBB2扩增中的价值

目的评估未涵盖即ERBB2拷贝数变异(copynumbervariation,CNV)分析的高通量测序(highthroughput sequencing,HTS)数据再分析在识别结直肠癌患者ERBB2扩增中的价值。方法回顾性分析经病理活检确诊为结直肠癌并接受外周血cfDNA高通量测序样本的检测数据252例。根据经免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和/或荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)判断为ERBB2未扩增样本的HTS数据,计算17号染色体(Chr17)reads数占总reads数的比例范围,初步确定其为识别ERBB2扩增的阈值。根据初步阈值筛选可疑阳性样本,通过数字PCR、IHC和FISH进行验证。结果89例经IHC和/或FISH判定为ERBB2未扩增样本的Chr17 reads数与总reads数的比值为0.239±0.192(0.188~0.299)。以均数的1.25倍0.298作为识别ERBB2扩增的阈值分析其余163例样本数据,发现7例疑似阳性,比值为0.302~0.853。其中5例经IHC和/或FISH判定为阳性,6例经数字PCR验证为阳性,Chr17 reads与总reads数的比值与ERBB2/EIF2C1比值成正相关,相关性好(r2=0.909)。结论再分析未涵盖ERBB2 CNV分析的HTS数据可以初步识别结直肠癌患者的ERBB2扩增。

IHC-66对离体豚鼠心肌细胞慢反应电活动的影响

目的：为进一步观察ＩＨＣ－６６的电生理特性，探讨其抗心律失常的作用机制。方法：采用离体豚鼠窦房结、乳头状肌及部分除极化乳头状肌标本，观察了３，６－ｄｉ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）－ｄｉｂｅｎｚｏｐｙｒｉｏｄｏｎｉｕｍｏｆｆｅｒｉｃＥＤＴＡ（ＩＨＣ－６６）对不同类型心肌细胞电活动的影响。结果：ＩＨＣ－６６１０μｍｏｌ·Ｌ－１使窦房结细胞动作电位４相除极速率（ＳＰ４）降低１１．４２％、增加动作电位复极９０％时程（ＡＰＤ９０）１８％、降低零相最大上升速率（Ｖｍａｘ）４７％、使部分除极化乳头状肌细胞动作电位（ＡＰ）之ＡＰＤ９０、动作电位复极５０％时程（ＡＰＤ５０）分别缩短９％、１３％，Ｖｍａｘ降低５８％，同时，ＩＨＣ－６６（１０、３０、５０μｍｏｌ·Ｌ－１）呈剂量依赖性降低Ｂａ２＋（２ｍｍｏｌ·Ｌ－１）诱发的自发性动作电位振幅（ＡＰＡ）与Ｖｍａｘ，缩短ＡＰＤ５０、ＡＰＤ９０，明显减慢自发性电活动的频率。结论：ＩＨＣ－６６的电生理学作用与其对慢内相电流的阻滞有关。

CISH、IHC联合检测胃腺癌EGFR、HER2基因状态及其临床意义

目的比较显色原位杂交(CISH)与免疫组织化学(IHC)检测胃腺癌表皮生长因子(EGFR)及表皮生长因子受体2(HER2)的基因状态。方法 CISH及IHC检测85例胃腺癌组织EGFR、HER2基因扩增及蛋白表达。结果 EGFR蛋白表达阳性29例,其中表达(3+)的4例中,4例基因扩增;表达(2+)的11例中,8例基因扩增;表达(1+)的14例中,1例基因扩增。HER2蛋白表达阳性13例,其中表达(3+)的4例中,4例基因扩增;表达(2+)的6例中,5例基因扩增;表达(1+)的3例中,无基因扩增。EGFR、HER2蛋白表达及基因扩增无相关性。结论 IHC检测蛋白表达仅(3+)与CISH检测基因扩增有较好一致性,CISH检测基因状态有较好特异性。

自动IHC染色机核心控制算法的研究与实现

重点介绍了项目组最新研究出的一种自动IHC染色机核心控制算法。给出了自动IHC染色机的基本原理,叙述了控制算法的流程与实现技术。经临床试用表明,采用该算法的控制软件能够满足各种IHC染色实验的要求,显著提高实验效率。

IHC-66对犬心室肌和浦顷野纤维的电生理作用

目的:观察IHC66(3,6dimethylaminodibenzopyriodoniumofferricEDTA)对离体犬心室肌与浦顷野纤维的电生理影响。方法:采用心肌细胞内玻璃微电极技术。结果:IHC66可缩短犬心室肌动作电位复极20%和50%的时程,降低动作电位零相最大除极速率、缩短浦顷野纤维APD50。在较高浓度时,IHC66还降低犬心室肌与浦顷野纤维动作电位振幅和延长动作电位APD90。结论:IHC66对犬心室肌细胞APD20和Vmax的抑制作用明显较浦顷野纤维强,对浦顷野纤维动作电位Vmax呈现频率依赖性抑制作用。

3，6－二［二甲氨基］－二苯骈碘杂环枸橼酸盐（IHC－65）的镇痛和镇静作用

采用扭体、热板及足跖刺激法，对碘杂环－６５（ＩＨＣ－６５）的镇痛作用进行了研究。结果表明：ｉｖＩＨＣ－６５３．７５和７．５ｍｇ／ｋｇ对小鼠扭体反应均有抑制作用（Ｐ＜０．０５和ｐ＜０．０１），并能显著提高热板法致痛小鼠的痛阈值。作用开始时间均为给药后３０ｍｉｎ，作用维持时间分别为３０和９０ｍｉｎ，但对足跖刺激法致痛小鼠痛阈无明显影响。ｉｃｖＩＨＣ－６５７．５μｇ／只，１５和３０ｍｉｎ后也有镇痛作用，提示其镇痛作用部位在中枢，此外ｉｐＩＨＣ－６５还能明显减少小鼠自发活动次数。

IHC二抗放大检测系统质控片的制备及评价

目的本研究分别采用不同表面修饰方法处理的玻璃载玻片为基质,以一抗为对象制备二抗放大检测系统质控片。方法将小鼠IgG作为探针固定在玻片上,采用二抗放大检测系统对不同质控片的吸附结合效果进行评价。结果戊二醛预处理的载玻片和硅烷化预处理的载玻片对蛋白吸附较好,反应活性高。结论通过不同二抗放大检测系统的比较表明,MaxVisionTM和EliVisionTMSuper放大检测系统的检测灵敏度高,检测范围宽。EliVisionTMSuper放大检测系统的显示灰度值与检测对象浓度的对数值线性化程度最高。

ADH1B与ALDH2在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨乙醇脱氢酶1B(alcohol dehydrogenase 1B,ADH1B)与乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法选取2017年05月至2019年10月期间在滁州市第一人民医院接受根治性切除的132例胃癌患者为研究对象,通过免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC)检测ADH1B与ALDH2在胃癌及癌旁组织中的表达。分析ADH1B、ALDH2表达与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier曲线评估两者表达在胃癌中的预后价值。单、多变量Cox回归分析用于确定胃癌患者的独立预后因素。结果对132例组织样本的IHC分析显示ADH1B(41.5%vs 58.5%,χ^(2)=9.594,P=0.002)与ALDH2(38.8%vs 61.2%,χ^(2)=16.716,P<0.001)在胃癌组织中的阳性表达率显著低于其癌旁组织。与高表达组相比,ADH1B低表达在T_(3)-T_(4)期(χ^(2)=5.572,P=0.018)、pTNMⅢ期肿瘤(χ^(2)=4.675,P=0.031)中更为常见,淋巴血管侵犯率更高(χ^(2)=4.566,P=0.033)。ALDH2在低分化癌(χ^(2)=4.261,P=0.039)和pTNMⅢ期胃癌(χ^(2)=5.877,P=0.015)中表达更低,淋巴结转移率(χ^(2)=5.491,P=0.019)较高表达者更为频繁。生存分析表明ADH1B与ALDH2低表达是胃癌患者预后不良的标志。ADH1B低、高表达患者的3年总体生存(Overall survival,OS)率分别为52.3%和73.9%(χ^(2)=6.900,P=0.009),ALDH2低、高表达患者的3年OS率分别为49.8%和74.4%(χ^(2)=8.665,P=0.003)。ADH1B(HR=2.115,95%CI:1.133-3.946,P=0.019)与ALDH2低表达(HR=2.296,95%CI:1.207-4.367,P=0.011)是胃癌患者的独立预后因素。结论ADH1B与ALDH2在胃癌组织中呈明显低表达,两者可能是预测肿瘤进展与患者预后的分子标志物。

IHC-66对豚鼠心室乳头状肌细胞缺氧与再给氧后跨膜电活动的影响

目的观察IHC-66对缺氧与再给氧后，豚鼠心室乳头状肌细胞电活动的影响，探讨其抗心律失常的机制。方法采用常规玻璃微电极技术，以离休豚鼠心室乳头肌为标本，研究IHC-66对豚鼠心室乳头肌细胞动作电位各参数的影响。结果IHC-66（10～30μmol·L-1）可呈现出浓度依赖性的对抗缺氧引起的动作电位时程（APD）的缩短。此外，IHC-66（10μmol·L-1）还可部分拮抗吡那地尔（pinacidil50μmol·L-1）缩短APD的作用，并可部分减少缺氧造成的豚鼠心室乳头状肌细胞组织中ATP水平的下降。结论IHC-66对缺氧与再给氧后豚鼠心室乳头状肌细胞电活动的影响，可能与其对K+-ATP通道的阻滞并部分减少心肌细胞ATP的消耗有关。

IHC-66对豚鼠心肌细胞电生理特性的影响

目的：为进一步研究ＩＨＣ－６６抗心律失常作用的电生理机制。方法：采用细胞内微电极技术，研究了ＩＨＣ－６６对豚鼠心肌细胞电活动的影响。结果：ＩＨＣ－６６可缩短心室肌细胞动作电位复极５０％时程（ＡＤＰ５０），大剂量时降低动作电位零相最大上升速率。但可延长心房肌细胞动作电位时程。对Ｃｄ２＋影响下的心室肌细胞电活动的作用较对Ｍｎ２＋影响下的电活动更为显著。但对乌头碱（ａｃｏｎｉｔｉｎｅ，ＡＣ）诱发的异常电活动无明显对抗作用。结论：ＩＨＣ－６６对豚鼠心肌细胞电生理的作用与其影响了Ｃａ２＋、Ｎａ＋、Ｋ＋的跨膜转运有关。