单纯疱疹病毒2型ICP27_(377-513)核酸疫苗联合IL-15核酸疫苗免疫效果的观察

目的构建表达单纯疱疹病毒2型感染细胞蛋白27(infected cells protein 27,ICP27)的重组质粒pcDNA3.1-ICP27377-513并观察白细胞介素(IL)-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗的免疫效果。方法采用分子克隆技术构建pcDNA3.1-ICP27377-513重组质粒。将BALB/c雌性小鼠随机分为pcDNA3.1-ICP27377-513联合pcDNA3.1-IL-15(pIL-15)组、pcDNA3.1-ICP27377-513组、pcDNA3.1组和pIL-15组,共免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后28 d取血,用微量中和实验法检测血清中特异性中和抗体,ELISA法检测血清中IL-4、IL-2和干扰素-γ(IFN-γ)水平。阴道给予致死量HSV-2攻击小鼠,分别于接种后3 d、7 d和14 d收集阴道冲洗液,用荧光定量PCR法检测生殖道病毒载量。结果pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组中和抗体效价分别为40.00±8.16、28.67±4.47,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组IFN-γ、IL-4水平明显高于pcDNA3.1-ICP27377-513组(P<0.05),但IL-2水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。阴道给予致死量HSV-2攻击后,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组小鼠阴道冲洗液中病毒载量随着时间延长逐渐减低,pcDNA3.1-ICP27377-513联合pIL-15组和pcDNA3.1-ICP27377-513组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-15核酸疫苗联合HSV-2-ICP27377-513核酸疫苗对小鼠有较好的免疫保护作用。

IL-15的免疫调节功能及其相关疾病研究进展

IL-15作为免疫调控的关键分子,主要由髓系细胞分泌产生。IL-15在T细胞、自然杀伤细胞和记忆CD8+T细胞稳态和功能方面发挥重要作用,因其具有广泛表达、严格分泌的特性在多种免疫相关疾病中体现出良好的治疗潜能。IL-15与IL-15受体特异性结合后,激活下游JAK/STAT、Ras/Raf/MAPK及PI3K/AKT等多种信号通路,通过诱导细胞增殖、分化和凋亡,从而发挥抗肿瘤、抗感染等生物学效应。本文主要综述了IL-15在肿瘤、自身免疫疾病和神经精神疾病等中的作用与相关机制,并总结了以IL-15为潜在治疗靶点的小分子激动剂和抑制剂,以期为深入探究IL-15在免疫系统疾病中的发病机制和药物研究提供科学依据。

敲除CISH敲入并IL-15显著增强NK细胞抗肿瘤活性的研究

背景白细胞介素(interleukin,IL)-15是调节自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)功能的关键细胞因子,而CISH可负向调控IL-15信号通路,从而影响NK细胞功能。靶向CISH基因和IL-15基因对NK细胞进行基因编辑,可增强NK细胞抗肿瘤活性。目的探讨CISH基因、IL-15基因对NK细胞的细胞毒性的影响。方法采用AsCas12a Ultra基因编辑工具敲除CISH基因,并敲入IL-15基因,对NK细胞进行基因编辑,并通过基因测序检测CISH基因敲除效率,采用ELISA检测IL-15的表达,用LDH检测基因编辑后的NK细胞对H358细胞系的杀伤活性,评估CISH基因敲除、IL-15基因敲入对NK细胞抗肿瘤功能的影响。结果与对照组相比,CISH基因敲除组和CISH基因敲除+IL-15基因敲入组杀伤效率显著增强[E∶T=2∶1组,34.57%±6.32%vs 71.40%±5.81%和69.23%±4.28%,P<0.001]。结论敲除CISH基因可上调IL-15信号通路,增强NK细胞抗肿瘤活性。

IL-15细胞因子影响非肌层浸润型膀胱癌进展的机制

目的:探究IL-15对非肌层浸润性膀胱癌进展影响的作用机制。方法:在细胞模型上,使用IL-15细胞因子处理小鼠脾脏来源的淋巴细胞,将处理后的淋巴细胞和膀胱癌肿瘤细胞MB49、T24共培,通过MTT法检测细胞凋亡情况评价IL-15处理后的淋巴细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。在动物肿瘤模型上,使用硝酸银腐蚀小鼠膀胱,注射小鼠膀胱癌细胞MB49建立小鼠膀胱癌原位模型,分为空白组、IL-15组、IL-15和BCG联用组,治疗3周后比较不同组别的肿瘤重量,通过Q-PCR检测IL-15处理后脾脏淋巴细胞MHCⅠ、MHCⅡ、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达情况,使用免疫组化染色检测不同治疗方案肿瘤组织中CD8阳性T细胞的浸润情况。结果:IL-15处理后,IL15浓度为100ng/mL时,对照组细胞存活率(97.05±0.15)%,T24细胞存活率(36.6±0.40)%,MB49细胞存活率(35.3±0.7)%(MB49:t=3.627,P=0.0361;T24:t=3.642,P=0.0357),脾脏来源的淋巴细胞表现出对膀胱癌肿瘤细胞显著增强的细胞毒性,并且具有更高的MHCⅠ、MHCⅡ、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达(MHCI:P<0.0001,t=76.49;MHCⅡ:P<0.0001,t=101.2;TNFα:P<0.0001,t=70.99;IFN-γ:P<0.0001,t=116.9);使用IL-15或BCG和IL-15联合治疗,能够显著地抑制肿瘤进展,肿瘤组织中具有更多地CD8阳性T细胞浸润。结论:IL-15细胞因子通过诱导激活CD8阳性T细胞抑制膀胱癌肿瘤进展。

IL-2和IL-15协同调节T细胞的增殖和LAK细胞的杀伤活性

目的 探讨IL 2和IL 1 5在免疫调控和应答中的协同作用。方法 IL 2、IL 1 5和IL 2 +IL 1 5组刺激CTLL细胞的增殖 ,3 H TdR掺入法测cpm值 ;IL 2、IL 1 5和IL 2 +IL 1 5组诱导PBMC中NK和LAK细胞的发育 ,4h51 Cr释放实验检测对K5 6 2和LiBr细胞的杀伤活性。结果 IL 2和IL 1 5都能诱导CTLL细胞的增殖和NK、LAK细胞的杀伤活性 ,IL 2和IL 1 5可明显协同上调CTLL的增殖和LAK细胞的杀伤活性。结论 IL 2和IL 1 5在免疫调控和应答中有一定的协同作用 。

细胞因子IL-15、IL-16、IFN-γ及TGF-β在慢性乙型肝炎病毒感染者外周血中的表达及临床意义的研究

目的探讨HBV感染者外周血细胞因子IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β的表达水平变化的及临床意义。方法选择肝癌患者60例(HCC组)、肝硬化患者60例(LC组)、慢性乙型肝炎患者60例(CHB组)、慢性乙型肝炎病毒携带者60例(ASC组)和健康对照者40例(健康对照组),采用酶联免疫法检测细胞因子表达水平,运用聚合酶链反应检测HBV DNA载量,同时检测各项生化指标。结果随着患者病情加重,细胞因子IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β表达水平均呈逐渐升高的趋势,且在肝硬化患者中达到最大值。与健康对照组相比,不同临床类型HBV感染者细胞因子表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β在CHB患者外周血HBV DNA高载量组表达水平最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β可能参与了乙型肝炎的肝脏炎性损伤过程,且其表达水平与病毒量具有一定相关性。

重组HBcAg激活p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞IL-15的分泌

目的探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制。方法采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导分化为mDC,10μg/m L rhHBcAg刺激mDC 1~6 d;分别用25μmol/L磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002、1μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂SB203580、100 nmol/L c-Jun N末端激酶(JNK)信号通路抑制剂SP600125和150 nmol/L胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂U0126预处理1 h,再给予10μg/m L rhHBcAg刺激48 h。之后收集细胞和细胞培养上清,实时定量PCR检测IL-15 mRNA水平,ELISA检测IL-15蛋白水平,Western blot法检测PI3K/Akt和MAPK信号通路分子磷酸化水平。结果与rhHBcAg未刺激组比较,rhHBcAg刺激组IL-15 mRNA和蛋白水平显著升高;与rhHBcAg刺激组比较,p38抑制剂预处理组IL-15水平明显降低,但PI3K/Akt、JNK和ERK抑制剂预处理组IL-15水平未见显著性改变。结论 rhHBcAg通过p38MAPK信号通路上调外周血mDC IL-15的分泌。

IL-2+IL-15组合培养方案对乳腺癌患者外周血中NK细胞体外扩增的效果

目的:观察IL-2+IL-15组合体外培养方案对于NK、NKT和T细胞亚群的比例、表型、杀伤肿瘤细胞活性与黏附活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采集天津医科大学附属肿瘤医院生物治疗科2012年5月至2012年7月期间收治的5例乳腺癌患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),用IL-2+IL-15联合培养方案进行培养,观察培养15 d后细胞的扩增倍数和淋巴细胞亚群比例变化,流式细胞术检测细胞免疫表型、细胞表面受体的表达,LDH释放法和CD107a释放法检测不同细胞亚群对于HLA匹配或不匹配的靶肿瘤细胞系的杀伤活性,活细胞工作站检测总扩增产物对于不同靶肿瘤细胞系的黏附作用。结果:与扩增前相比,IL-2+IL-15培养方案扩增15 d后,NK细胞[(36.74±17.10)%vs(16.34±3.12)%,P<0.05]、NKT细胞[(24.88±12.34)%vs(4.06±2.05)%,P<0.05]比例显著增加,CD4+T细胞和Treg细胞比例显著降低(P<0.05),CD8+T细胞比例显著升高(P<0.05);NK细胞表面活化受体NKp30[(92.38±7.19)%vs(32.14±17.64)%,P<0.05]、NKp44[(74.26±16.28)%vs(1.94±1.60)%,P<0.05]、NKG2D[(98.58±1.28)%vs(66.50±24.84)%,P<0.05]的表达率均显著升高,CD16表达率显著降低[(85.12±7.66)%vs(95.60±2.53)%,P<0.05];NKT细胞、T细胞表面活化受体DNAM-1和NKG2D明显升高(P<0.05)。总扩增产物、NK细胞和NKT细胞对HLA不匹配的靶肿瘤细胞的杀伤率均显著高于HLA匹配靶细胞系的杀伤(P<0.05);在共孵育至84 min时,与HLA匹配的靶肿瘤细胞系相比,总扩增产物细胞与HLA不匹配的靶细胞系黏附结合数目显著增多[(4.80±0.53)vs(2.25±0.35)个,P<0.05]。结论:IL-2+IL-15组合方案在扩增NK细胞的同时,也能够有效扩增NKT细胞,即可以扩增CD56+细胞群。并且,扩增产物主要以不受HLA限制的NK细胞杀伤活性为主来杀伤肿瘤细胞。

猪IL-15与PRRS病毒GP5基因核酸疫苗免疫效力

通过分子克隆技术构建了表达猪白细胞介素(IL)-15及猪繁殖呼吸综合症(PRRSV)病毒GP5基因重组核酸疫苗。以小鼠为试验模型,利用猪IL-15作为分子佐剂并检测其对表达PRRS病毒GP5基因核酸疫苗的免疫增强作用。结果表明,猪IL-15与GP5试验组小鼠抗体水平和T淋巴细胞亚群数量均高于PBS对照组及GP5基因单独免疫组,表明猪IL-15对核酸疫苗可有效增强PRRS病毒GP5基因的免疫效果,证实了其佐剂效应。

潞党参对光老化小鼠皮肤中IL-6、TNF-α、IL-15含量及IL-15、IL-15R共表达的影响

目的研究潞党参对光老化小鼠皮肤组织中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-15及IL-15与IL-15R共表达的影响。方法将40只小鼠随机分成4组,分别是空白对照组、模型对照组、阳性对照组(VE组)和中药剂量组。对空白对照组采取正常饲养,对阳性对照组(VE组)、中药剂量组和模型对照组制备光老化模型。模型对照组和空白对照组给生理盐水,中药剂量组给相应剂量药液,阳性对照组(VE组)给予维生素E滴剂,于造模前30 min灌胃。造模完成后,采用酶联免疫吸附法(Elisa法)检测组织中IL-6、TNF-α、IL-15含量的表达水平,采用免疫荧光双标记法检测IL-15与IL-15R共表达的水平。结果酶联免疫吸附法中,比照空白对照组,模型对照组皮肤组织中IL-6、TNF-α、IL-15含量的表达水平显著上升(P<0.01);比照模型对照组,中药剂量组皮肤组织中IL-6、TNF-α、IL-15含量的表达水平显著下降(P<0.01)。免疫荧光双标记法中,IL-15和IL-15R在各个组中均有阳性表达,其中在模型组中的表达水平最高,在中药剂量组的表达水平较模型对照组中表达水平低。结论潞党参在皮肤光老化过程中具有保护作用。

慢性HBV感染者血清IL-15和IL-16水平与HBV DNA载量的关系及临床意义探讨

目的探讨HBV感染者外周血IL-15和IL-16水平变化及其与HBV DNA载量的相关性。方法选择肝癌(HCC组)60例,肝硬化(LC组)60例,慢性乙型肝炎(CHB组)60例,乙型肝炎病毒携带者(ASC组)60例和健康人40例,采用酶联免疫法检测IL-15和IL-16水平,采用聚合酶链反应法检测HBV DNA载量。结果随着患者病情加重,血清IL-15和IL-16水平均呈逐渐升高的趋势,且在肝硬化患者中达到最大值,分别是(222.89±96.95)ng/ml和(109.77±11.96)ng/ml,显著高于其他各组(P<0.01);与健康人比,各种HBV感染者血清细胞因子水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);在CHB患者,外周血HBV DNA高载量组IL-15和IL-16水平最高,分别是(86.67±15.92)ng/ml和(41.64±7.30)ng/ml,显著高于低载量组(P<0.05)。结论 IL-15和IL-16可能参与了乙型肝炎的肝脏炎性损伤过程。

斯氏艾美耳球虫MIC-5与兔IL-15基因在真核细胞中的共表达

【目的】构建能在真核细胞中共表达斯氏艾美耳球虫微线蛋白5(MIC-5)和兔IL-15重组载体,为进一步研究抗斯氏艾美耳球虫的免疫调节性DNA疫苗奠定基础。【方法】将斯氏艾美耳球虫MIC-5和兔IL-15基因,克隆到真核双表达载体pBudce4.1中,应用脂质体介导法将构建的重组质粒pB-MIC-5-IL-15转染BHK-21细胞。在转染后,用RT-PCR法和间接免疫荧光试验(IFA)分别检测MIC-5和IL-15基因在BHK-21细胞中的转录和表达情况。【结果】在重组质粒pB-MIC-5-IL-15转染BHK-21细胞24 h后即可检测到MIC-5、IL-15基因进行了转录;在转染36、48、72h后,MIC-5和IL-15基因可同时在BHK-21细胞中表达。【结论】成功构建了含有斯氏艾美耳球虫MIC-5和兔IL-15基因的重组载体,实现了两种基因在真核细胞中的共表达,为抗斯氏艾美耳球虫的免疫调节性DNA疫苗研制奠定了基础。

IL-12、IL-15对急性髓系白血病患者骨髓来源CD34+白血病细胞转化为NK细胞作用研究

目的应用细胞因子组合体外诱导CD34+白血病细胞转化为自然杀伤(NK)细胞,探讨白介素(IL)-12、IL-15对NK细胞分化增殖、细胞活性、细胞毒作用以及Granzyme B、TNF-α和IFN-γ基因表达的作用。方法提取26例2016年8月至2017年11月初治高白细胞血症急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞(BM-MNC),应用A组(SCF、IL-7、IL-12、IL-15)、B组(SCF、IL-7、IL-2、IL-15)两组细胞因子组合分别体外诱导分化5周,流式细胞术检测NK细胞比例及活化标志,实时定量PCR(QPCR)检测两组NK细胞Granzyme B、TNF-α、IFN-γ等基因的表达水平; CCK-8法分别检测两组NK细胞对患者来源白血病细胞和K562细胞的杀伤率。结果 A组NK细胞比例为(71. 22±2. 25)%,显著高于B组的(56. 32±3. 97)%(P <0. 05)。A组细胞增殖倍数与B组比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。A组NK细胞活化标志CD69+、NKp46+、NKG2D+NK细胞比例分别为(70. 72±3. 62)%、(70. 30±3. 45)%、(72. 75±3. 89)%,均显著高于B组的(59. 98±2. 86)%、(60. 38±2. 84)%和(62. 30±4. 25)%(P <0. 05)。Granzyme B、TNF-α和IFN-γ基因的表达水平较诱导前患者BM-MNC显著升高,A组上述基因表达水平分别为13. 36±1. 54、9. 38±0. 51和6. 26±0. 25,均显著高于B组的9. 82±1. 21、7. 06±0. 52和4. 28±0. 23(P <0. 05)。在效靶比为10∶1时,A组NK细胞对K562细胞和患者来源白血病细胞的杀伤率分别为(62. 20±2. 36)%和(70. 78±2. 54)%,均显著高于B组的(56. 77±3. 81)%和(62. 95±1. 94)%(P <0. 05);且相同效靶比时A、B两组NK细胞对患者来源白血病细胞的杀伤率显著高于K562细胞(P <0. 05)。结论 CD34+白血病细胞可在体外诱导分化为NK细胞,且具有杀伤活性。联合应用IL-12、1L-15细胞因子组合能够诱导分化的NK细胞活性,提高对白血病细胞的杀伤率以及Granzyme B、TNF-α和IFN-γ基因表达水平,且诱导分化的NK细胞对白血病细胞的杀伤具有同体特异性。

IL-15通过Bcl-xl抑制CD4^+CD25^+调节性T细胞凋亡

目的探讨IL-15抑制CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)凋亡的作用及机制,为临床应用IL-15提供理论依据。方法采用免疫磁性细胞分离法分离人外周血中的Tregs,流式细胞仪检测该细胞纯度。将Tregs细胞培养液中加入Dynabeads CD3/CD28T cell expander,依据是否加入细胞因子分为三组:对照组(不加入任何细胞因子);IL-2组(100U/ml)和IL-15组(50ng/ml)。流式细胞仪检测细胞凋亡率,3H-TdR掺入法检测细胞因子存在下Tregs抑制CD4+CD25-效应T细胞(Teff)增殖的免疫功能,Western-blot法检测细胞内Bcl-2、Bcl-xl及p-Bad(ser112)的变化。结果分选后Tregs纯度为95.2%,胞内因子染色Foxp3在Tregs中的表达率为94.2%。IL-2组和IL-15组的细胞凋亡率(即凋亡细胞与细胞总数之比)分别为(11.32±0.43)%和(9.89±5.38)%,二者之间无显著性差异,但均显著低于对照组(87.12±1.43)%,P<0.001。在细胞因子存在的情况下,IL-2组活化的Teff增殖较对照组和IL-15组显著性强,P<0.001;此时Tregs抑制Teff增殖的功能较对照组和IL-15组下降,P<0.001;而在IL-15存在的情况下,IL-15组活化的Teff增殖与对照组比较,无显著性差异,P>0.05,并且IL-15组Tregs对Teff增殖的抑制作用与对照组比较无显著性差异,P>0.05。Western-Blot显示三组TregsBcl-2表达水平相当;但是IL-2组和IL-15组的Bcl-xl和p-Bad(ser112)表达较对照组显著性上调。结论 IL-15能抑制Tregs凋亡,其作用与IL-2相当,其机制可能是通过上调Bcl-xl的表达和Bad(ser112)的磷酸化,而且IL-15存在的情况下,Tregs抑制功能明显比IL-2存在时强。

鸡IL-15基因的分子克隆及其有关特性的研究

实验应用聚合酶链式反应技术从鸡脾淋巴细胞中克隆得到了白细胞介素_15基因 ,序列分析表明与已发表的鸡白细胞介素_15基因完全一致。核苷酸序列和推导的氨基酸序列与牛的最接近 ,同源性分别为 46 %和 31%。与哺乳动物白细胞介素_15序列类似 ,有 4个高度保守的半胱氨酸残基。同时本研究也用此方法对鸡脾脏、法氏囊、胸腺、哈德氏腺和盲肠扁桃体等淋巴器官的淋巴细胞中鸡白细胞介素_15mRNA的表达进行了研究 ,结果表明这些器官的淋巴细胞均表达mRNA。本实验还用有丝分裂原ConA对鸡脾淋巴细胞进行活化 ,观察活化的淋巴细胞表达白细胞介素_15mRNA的情况 。

IL-2、IL-7和IL-15联合对T细胞的体外扩增效应

为了建立一种快速有效的体外T细胞扩增方法,本研究比较了不同培养条件对T细胞增殖及其功能和特性的影响。取外周血T细胞,用自体的树突状细胞(DC)和EB病毒转化的B细胞进行周期性刺激,用细胞增殖试验、PI和AnnexinV双标记流式细胞术、Cr释放测定及ELISPOT试验分别测定不同培养条件下细胞的增殖程度、IFN-γ分泌细胞的频率、抗原特异性T细胞的杀伤活力、细胞的凋亡状态和分化能力。结果显示:T细胞在周期性刺激后,用CD3/28微珠的短期扩增效应最好,但多轮刺激后联合应用IL-2,IL-7和IL-15对细胞的扩增最强。Cr释放试验表明,CD3/28微珠扩增的T细胞不具有杀伤活力,高浓度IL-2诱导的T细胞杀伤活性最强,其次为联合应用IL-2,IL-7和IL-15。ELISPOT显示不同培养条件诱导出的分泌IFN-γ的T细胞频率从高到低依此为高浓度IL-2>联合应用IL-2,IL-7和Il-15>低浓度的IL-2>CD3/28微珠。细胞表型分析显示高浓度IL-2和联合应用IL-2,IL-7和Il-15扩增的细胞含有较高比例的CD3+CD8+T细胞。对细胞的凋亡测定表明联合应用IL-2,IL-7和IL-15获得的T细胞的存活率最高,处于凋亡早期的细胞比例最低。细胞增殖试验显示联合应用IL-2,IL-7和IL-15扩增的细胞分化能力最强。结论:本研究建立了一种快速有效地体外扩增T细胞的方法,其中联合应用IL-2,IL-7和IL-15对T细胞的扩增最显著,获得的T细胞存活率最高,分化能力最强,该细胞同时也含有较高频率的IFN-γ分泌细胞且表现出较强的杀伤活力。

重组质粒pcDNA3.1-IL-15转染对小鼠骨髓DC上表面分子的表达及功能的影响

目的: 探讨重组质粒pcDNA3. 1 IL- 15对小鼠骨髓树突状细胞(DC)表面共刺激分子的表达及免疫功能的影响。方法: 构建真核表达质粒pcDNA3. 1 IL- 15, 以其转染小鼠骨髓DC。用流式细胞仪检测转染的DC表面CD40、CD80及CD86的表达, 并分析转染的DC刺激脾淋巴细胞中CD4+、CD8+ T细胞亚群的变化。用MTT比色法检测转染的DC刺激T细胞增殖的作用。用ELISA法检测T细胞产生IFN- γ的水平。结果: pcDNA3. 1- IL- 15转染的DC表面CD40、CD80及CD86的表达均有不同程度的升高。重组质粒转染的DC可诱导小鼠脾淋巴细胞中CD4+、CD8+ T细胞增殖, 但CD4+ /CD8+ T细胞的比值降低。结论: 重组质粒pcDNA3. 1 -IL- 15转染可提高DC表面共刺激分子的表达并增强其免疫功能。

IL-2和IL-15刺激脐血NK细胞对K562/Jurkat细胞的杀伤活性研究

本研究旨在探讨脐血(cord blood,CB)NK细胞的杀伤功能及细胞因子IL-2和IL-15对NK细胞杀伤K562/Jurkat细胞活性的影响。采用autoMACS及CD3阴选后CD56阳选两步免疫磁珠分选法从脐血单个核细胞纯化NK细胞,分选后NK细胞用流式细胞仪测定纯度,通过IL-2及IL-2和IL-15两种细胞因子组合培养3天,用LDH释放法检测培养前后脐血NK细胞对白血病细胞株K562和Jurkat的细胞毒活性(效靶比10∶1),并记录不同细胞因子培养体系条件下NK细胞的生长状况。结果表明,CB-MNC中CD3-CD56+细胞含量为(14.88±9.2)%,分选后CD3-CD56+细胞含量为(92.39±0.8)%;培养3天后,IL-2组NK细胞形成集落数为148.60±13.0,IL-2复合IL-15组NK细胞形成集落数为831.80±23.0,两者比较,有显著性差异;以K562为靶细胞时,新鲜纯化CB-NK的杀伤活性为(27.76±8.8)%,IL-2组杀伤活性为(61.9±9.1)%,IL-2复合IL-15组杀伤活性为(87.62±3.7)%,差别有统计学意义;以Jurkat为靶细胞时,新鲜纯化CB-NK细胞的杀伤活性为(29.32±2.5)%,IL-2组杀伤活性为(69.43±4.4)%,IL-2复合IL-15组杀伤活性为(92.95±3.2)%,差别有统计学意义。结论:脐血新鲜纯化NK细胞对K562、Jurkat细胞有一定的杀伤作用,但自发细胞毒活性较低,IL-2/IL-15刺激后杀伤活性显著提高,IL-15复合IL-2对促进脐血NK细胞的生长和提高其细胞毒活性明显优于单用IL-2。

猪霍乱沙门菌SC500运载TGEVS与猪IL-15融合基因疫苗的稳定性及免疫安全性

为研究猪霍乱沙门菌SC500作为TGEV S与IL-15融合基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15运载体的稳定性与免疫安全性,将外源表达质粒pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15及空载体质粒pCC-neo、pCI-neo转化SC500,采用体外增殖试验研究不同质粒在SC500中的稳定性,携带质粒的SC500对ST细胞的黏附率、侵袭力和增殖能力的影响;采用BALB/c小鼠口服免疫试验研究表达质粒在体内的稳定性及SC500对小鼠的安全性。结果显示:外源目的基因影响表达载体在运载体内的稳定性,就载体类型而言,对pCI-neo的影响大于对pCC-neo的影响;携带目的基因的外源质粒影响SC500对ST细胞的黏附率和侵袭率,pCC-neo影响大于pCI-neo;外源质粒影响SC500在小鼠体内的增殖能力,pCC-neo影响大于pCI-neo;SC500在体内的增殖中,其所运载的质粒具有一定的稳定性。结果表明,利用SC500运载基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15免疫小鼠具有相对的稳定性和免疫安全性。

IL-15诱导CD4^+CD25^- T细胞向CD4^+CD25^+调节性T细胞转化的机制探讨

目的初步探讨IL-15诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)转化的机制。方法采用免疫磁性细胞分离法分离人外周血中的CD4+CD25-T细胞,依据加入细胞因子不同分为4组:对照组、IL-15组、拮抗1组、拮抗2组,其中后3组均于培养的第1天加入IL-15,而拮抗1组和拮抗2组分别于培养第1、3天加入STAT5a封闭性肽。流式细胞仪检测细胞表型变化,3H-TdR掺入法检测IL-15诱导产生的Tregs抑制CD4+CD25-效应T细胞(Teff)增殖的免疫功能,Western blot法检测细胞内p-STAT5的变化。结果与对照组比较,IL-15能诱导CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达上调,IL-15诱导生成的Tregs具有较天然Tregs稍弱的免疫抑制功能。Western blot检测结果显示,IL-15组p-STAT5表达较对照组明显上调。加入STAT5a封闭性肽后,拮抗1组和拮抗2组中CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达下调,但拮抗2组[细胞表型分别为(47.9±6.0)%、(20.7±3.4)%]改变较拮抗1组[细胞表型分别为(30.7±8.5)%、(9.2±2.2)%]改变轻微。结论IL-15能诱导CD4+CD25-T细胞向Tregs转化,其机制可能是上调p-STAT5的表达。