抗金黄色葡萄球菌IgY的酶解稳定性及活性研究

目的:考察抗金黄色葡萄球菌特异性IgY的酶解稳定性和酶解产物的活性。方法:以灭活的金黄色葡萄球菌免疫产蛋母鸡,抗体经水稀释及盐析分离纯化。抗体在不同条件下经胃蛋白酶或胰蛋白酶消化。抗体及酶解产物的特异性和活性分别用ELISA法和凝集法检测,酶解产物用SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。结果:免疫产生的抗体具有特异性,能与金黄色葡萄球菌凝集而抑制其生长。分离纯化后抗体纯度与标准IgY相近。IgY在pH<4时完全酶解;pH等于4时部分酶解生成Fab片断,具有特异性和凝集活性;pH>4时,抗体稳定,不发生酶解。结论:抗金黄色葡萄球菌特异性IgY及其酶解生成的Fab片断,具有特异性和抑菌活性,有望代替抗生素用于细菌感染性疾病的治疗。

抗轮状病毒IgY和Fab’的分离与纯化

抗轮状病毒IgY可用两步盐析结合凝胶过滤从蛋黄中分离出来,用SDS-PAGE检测其纯度可达到95%以上。纯的IgY经胃蛋白酶分解得到的抗体片断(Fab),经SDS-PAGE和MALDI质谱法测定,其纯度达到99%以上。结果表明,所设计的分离抗轮状病毒IgY和Fab的方法简单、有效。经ELISA法检测,Fab的活性仍保持在IgY原始活性的70%以上。

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备与性质研究

目的观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)抗体的含量、纯度、来源及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度;Western blot免疫印迹法测定该抗体来源;ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量13.3 mg/mL蛋黄液,抗体纯度达96%;免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性;IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论改良水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。

对虾鳗弧菌卵黄抗体(IgY)的制备及其对人工感染的保护研究

以纯培养的鳗弧菌作为抗原，探讨对虾鳗弧菌（Vibrio anguillarum）卵黄抗体（IgY）的制备技术，以及IgY在对虾体内的代谢及对人工感染和自然感染弧菌病的保护作用。结果表明：鳗弧菌对蛋鸡有较好的免疫原性，产蛋鸡经免疫后，血清与卵黄中很快出现抗体，而且卵黄中的抗体水平要高于血清中的抗体水平。IgY对鳗弧菌的感染有可靠的保护作用，IgY经口服后很快到达直肠，继而血淋巴、肝胰脏中也出现抗体，并可持续 12-24h；投喂IgY的试验组对虾在7d内的死亡率为15％，极显著地低于对照组对虾的同期死亡率（为60％）。

鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)分离纯化的研究

对鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的分离纯化进行了研究。工艺流程为:卵黄→8倍水稀释并搅拌10min→用HCl调pH至5.2后在4℃静置2h去沉淀→在上清夜中加入95%冰乙醇(-20℃)使终浓度为60%(v/v)→4℃搅拌20min后离心(22000r/min,4℃,25min)→收集沉淀并加入0.028mol/LNaCl溶液在4℃下过滤除去脂蛋白沉淀→收集的滤液用SDS-PAGE法进行纯化得纯度为98%的lgY。用大肠杆菌(E.coli)对其活性进行测定,效果良好,此方法能保持免疫球蛋白的活性。

抗加特纳杆菌卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究

目的观察鸡卵黄中抗加特纳杆菌抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法用阴道加特纳杆菌作为抗原免疫Leghorn鸡。通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY。双紫外光波长测定抗体含量 ,SDS -PAGE电泳检测抗体纯度。Westernblot免疫印迹法测定该抗体来源。ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量 12 .8mg/mL蛋黄液 ,抗体纯度达 95 %。免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。IgY具有良好的热稳定性 ,对酸碱具有一定的耐受力。结论WD水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY 。

抗轮状病毒IgY和Fab的研制

目的对抗轮状病毒(RV)IgY和胃蛋白酶水解片断Fab进行分离与纯化。方法免疫鸡得到抗HRVIgY,用两步盐析结合凝胶过滤将其从蛋黄中分离出来,纯的IgY经胃蛋白酶水解得抗体片断Fab。结果抗HRVIgY用SDS-PAGE检测纯度可达到95%以上。抗轮状病毒(RV)IgY和抗体片断Fab经SDS-PAGE和MALDIMS法测定,其纯度达到99%以上,经ELISA法检测,Fab的活性保持在Igy原始活性的70%以上。结论我们所设计的分离和纯化抗HRVIgY和Fab的方法简单、有效。

黄芩、黄柏提取液与抗-MRSA IgY体外抑菌活性的比较研究

目的:观察中药黄芩、黄柏提取液及其不同配伍液和抗-MRSA IgY对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体外抑菌活性。方法:采用二次煮沸法提取中药黄芩、黄柏;改良水稀释法提取卵黄中的IgY;采用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的琼脂稀释法测定中药黄芩、黄柏提取液及其不同配伍液和抗-MRSA IgY对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌体的最小抑菌浓度(MIC)。结果:中药黄芩提取液的MIC50为0.75mg/ml,MIC90为6.2mg/ml;黄柏MIC50 1.35mg/ml,MIC90为10.6mg/ml;黄芩:黄柏(1∶1)MIC50为0.174mg/ml,MIC90为1.4mg/ml;黄芩∶黄柏(1∶2)MIC50为0.34mg/ml,MIC90为2.74mg/ml;黄芩∶黄柏(2∶1)MIC50为0.093mg/ml,MIC90为0.74mg/ml;抗-MRSA IgY的MIC50分别为1∶8192,MIC90为1∶2048。结论:黄芩、黄柏提取液对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌均有较好的抑菌作用,其中黄芩比黄柏为好,两者有显著性差异;黄芩、黄柏配伍液中,以2∶1的配伍抑菌效果最好;抗-MRSA IgY对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有较好的抑菌效果。

药效营养品IgY在动物饲料与疾病防治中的应用

鸡卵黄免疫球蛋白(Ig Y)作为一种能够预防或控制细菌性和病毒性传染疾病的药效营养品而受到人们的极大关注。与哺乳动物的免疫球蛋白(Ig G)相比,Ig Y具有安全、高效、特异性强和制备简易等优势,可添加到动物饲料中,起到防治动物疾病的作用。文章概述了Ig Y作为药效营养品在陆生及水生动物饲料及疾病防治中的应用,并阐述了Ig Y存在的问题及未来前景。

抗牛多杀性巴氏杆菌高免卵黄抗体IgY的制备及间接血凝检测方法的建立

本研究通过自制牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋鸡,采用卡拉胶结合硫酸铵沉淀法提取卵黄抗体IgY,并采用间接血凝方法检测抗体效价。结果表明,抗原致敏红细胞的最佳浓度是800μg/mL,免疫后第7周抗体效价达到高峰,效价为1:1024,高效价持续5周开始下降,测定提取的IgY浓度为8.258mg/mL,无菌检测及动物安全性实验表明制备的卵黄抗体安全可靠。本研究制备了抗牛多杀性巴氏杆菌卵黄抗体,为防治由荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌所致的犊牛肺炎提供了新的手段。

重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡后血清抗体与IgY变化规律研究

研究采用重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡,探索特异性卵黄免疫球蛋白(IgY)的产生和变化规律。产蛋母鸡经免疫后每周收集所产蛋,分别提取IgY,测定血清抗体效价与抗体的产生量,ELISA定期检测卵黄中的抗体效价变化,Western blotting检测总IgY含量。以未免疫鸡IgY作阴性对照,作血清抗体与IgY变化的动态曲线。取三次免疫后的蛋鸡,解剖分离出各级卵泡,观察各级卵泡发育程度。ELISA结果显示:随着卵泡的生长,卵泡细胞分泌的IgY聚集到卵泡卵黄,卵泡卵黄中IgY的含量在逐渐增加。Western blotting显示:随免疫次数的增加,IgY含量增加。首免后第3天血清抗体被检出,以后逐渐上升,2周后达到高峰,维持到第8周后逐渐下降,到第15周仍可检出抗体。本研究表明:用重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡,卵黄和鸡血清中可持久保持高效价的特异性抗体,血液中的抗体传递到卵黄需要一定时间,卵黄IgY动态变化规律与血清抗体基本一致。

鸡蛋黄抗体(IgY)的分离与研究

以鸡白痢沙门氏菌灭活苗,鸡新城疫(NDV)油剂灭活苗,传染性法氏囊炎(IBDV)油剂灭活苗,分别免疫接种健康母鸡.用异丙醇——丙酮法,分离提取高免鸡鸡蛋的蛋黄抗体(IgY)·经凝集试验,血球凝集抑制试验(HI)和琼脂扩散试验(AGP)检测蛋黄抗体(IgY)的抗体滴度,结果分别均高于血清的抗体滴度.另外,还以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)监测比较了蛋黄抗体(IgY),血清和蛋黄液,结果表明,IgY的抗体球蛋白纯度均高于血清和蛋黄液.

抗生殖器疱疹病毒卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究

检测了鸡卵黄中抗生殖器疱疹病毒(HSV-2)抗体的产量、纯度、来源及稳定性。采用生殖器疱疹病毒(HSV-2)作为抗原免疫广州黄村鸡。通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY。双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度。Western blot免疫印迹法测定该抗体来源。ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果,蛋黄液中抗体质量浓度13.6g.L-1,抗体纯度达96.2%。免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。WD水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。

IgY的冻融法脱脂条件研究

目的 寻求IgY的最佳脱脂条件.方法 用人IgG免疫产蛋母鸡,待蛋黄中抗体效价达1：64以上时,选用不同的稀释度、酸碱度、冻融次数、离心力等条件分离IgY.测定除脂率、效价、蛋白含量,以确定最佳脱脂条件.结果 稀释度为1：7,pH为5.2,冻融1～2次,离心力大于或等于3 000 g,离心20min以上,其除脂率可超过98%,IgY的特异性抗体效价未降低,蛋白含量平均为8.033 mg/ml.结论 用冻融法分离IgY能有效去除蛋黄液中的脂肪,此工艺便于批量生产低脂IgY产品.

抗金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌IgY的制备及临床疗效观察

目的 制备抗金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌鸡卵黄IgG（IgY），并观察其治疗急性咽炎的临床疗效。方法 将金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌混合免疫母鸡，使用水稀释法、超滤法、西曲溴胺除脂法和硫酸铵盐析法提取、纯化IgY后，经全面检定，对110例急性咽炎进行临床疗效观察，治疗组60例，使用0．2％IgY口腔喷剂治疗7d；对照组50例，口服双黄连胶囊7d。结果 IgY粗提物和纯化物纯度分别为41．6％和96．0％，效价分别达1：1024和1：8192；IgY粗提物在pH2．07-11．71条件下7d，效价基本不变；2．5—10．0mg／ml的纯化物抑制率为20．81％-68．11％。治疗组治愈率为26．67％，显效率为36．37％，有效率为30．00％，无效率为6．67％，总有效率为93．33％；对照组治愈率为12．00％，显效率为18．00％，有效率为44．00％，无效率为26．00％，总有效率为74．00％，差异有非常显著意义（P〈0．005）。治疗组未见毒副作用。结论 金黄色葡萄球菌及溶血性链球菌能够诱导母鸡产生特异性抗体，治疗急性咽炎疗效显著、安全：

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒IgY的制备

利用猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗超量免疫母鸡,用水稀释法和硫酸铵沉淀法分离纯化IgY抗体,并用间接ELISA方法测抗体效价。结果表明:母鸡初次免疫后10d即有抗体产生,初次免疫75d后IgY效价可达1:10000,最高可达1:12800并能持续7～10d。IgY蛋白含量为10.64mg/mL蛋黄。IgY纯度达90%以上。

ND-IBD双价卵黄抗体(IgY)的精制与应用

对ND、IBD双价卵黄液通过海藻酸钠-辛酸两步法提取,平均获得卵黄抗体(IgY)9.95mg/mL,平均纯度为77.26%,IBD抗体活性回收率达68.33%,ND抗体活性回收率为42.33%。人工感染IBD、ND试验,治愈率为分别为86.6%和80%以上;临床治疗IBD试验,治愈率为97.2%。本法经济简便,快速,不损害抗体,回收率高,疗效好,也可用于其它IgY抗体的提纯精制,具有较高的推广价值。

鸡ND-IBD卵黄抗体(IgY)的精制与应用

对ND、IBD双价卵黄液通过海藻酸钠-辛酸两步法提取,平均获得卵黄抗体(IgY)9.95mg/mL,平均纯度为77.26%,IBD抗体活性回收率达68.33%,ND抗体活性回收率为42.33%。人工感染IBD、ND试验,治愈率为分别为86.6%和80%以上;临床治疗IBD试验,治愈率为97.2%。本法经济简便,快速,不损害抗体,回收率高,疗效好,也可用于其它IgY抗体的提纯精制,具有较高的推广价值。

Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离鉴定及其高免卵黄抗体的制备

为了确定山东某养殖场疑似患有鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis,DVH)病死鸭的病原,并针对该病原制备高效且安全的卵黄抗体(antibody of yolk,IgY),试验无菌采集病死鸭肝脏组织样品,通过细菌检测、病毒的分离与增殖、特异性基因的RT-PCR鉴定与序列分析及动物回归试验确定病原,采用Reed-Muench法计算半数致死量(LD_(50)),并针对病原制备油乳剂灭活苗,按照免疫程序将其免疫产蛋鸡,收集免疫鸡的鸡蛋,采用生理盐水法提取IgY,测定IgY的中和效价,最后进行动物被动免疫试验,探究IgY对攻毒雏鸭的免疫保护作用。结果表明:将病死鸭肝脏组织划线接种于营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基,培养后均无细菌生长,病死鸭肝脏组织和增殖尿囊液均扩增出Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)特异性基因片段,目的基因与GenBank中的9株DHV-Ⅰ参考株的相应基因序列的相似性为99.1%~99.2%,确定分离出1株DHV-Ⅰ,命名为SD,分离株SD对9日龄鸭胚的LD_(50)为1×10^(-8.25)/0.2 mL。将分离株重新接种健康雏鸭,出现DVH典型的症状,死亡率为100%,提取死亡雏鸭肝脏组织中的病毒RNA,经RT-PCR后能扩增出目的条带,测序结果与分离株SD一致。制备的油乳剂灭活苗稳定性良好,30 min内不分层,雏鸭注射后14 d内生长无异常。制备的IgY抗体中和效价为1∶256,注射IgY后第1~5天攻毒,10 d后的保护率为87.5%~100%,注射IgY后第7天攻毒,10 d后的保护率为75%。说明从发病鸭群肝脏组织中分离出1株高致病性的DHV-Ⅰ,制备的油乳剂灭活苗免疫蛋鸡后获得高效价IgY,对攻毒雏鸭具有很好的免疫保护作用。

酪蛋白和乳球蛋白的抗体及酶标物制备研究

选用牛乳中的β-酪蛋白(β-CN)和β-乳球蛋白(β-Lg)为抗原对鸡体免疫,从鸡卵黄中用水稀释法及亲和色谱(HiTrapTM IgY Purification HP)纯化特异性鸡卵黄抗体(IgY)。PAGE电泳分析IgY纯度高达90%,ELISA效价为1:4096。用过碘酸钠氧化法进行抗原的过氧化物酶(HRP)标记,HRP与β-CN和β-Lg的分子个数比分别为1:1和1.5:1的标记效果最好,β-CN-HRP和β-Lg-HRP的效价高达1:640,其ELISA工作浓度分别为1:80和1:40。特异性IgY和酶标抗原为特异检测牛乳蛋白的酶联免疫吸附(ELISA)分析提供必要条件。