MISⅡR启动子的克隆及其组织特异性鉴定

目的克隆苗勒氏管抑制物Ⅱ型受体启动子(mullerian inhibiting substance typeⅡreceptor promoter,MISⅡRpr)并鉴定其在卵巢器官中的特异性表达活性。方法利用PCR从C57BL/6小鼠基因组中扩增苗勒氏管抑制物Ⅱ型受体启动子并将其克隆入载体pMD18-T,测序正确后将其亚克隆入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体。将重组质粒pGL3-Basic/MISⅡRpr分别转染卵巢癌细胞系SKOV3、HT-8910,宫颈癌细胞系Hela、Si Ha,绿猴肾细胞系COS-7,乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶在上述细胞系中的活性,以确定克隆的苗勒氏管抑制物Ⅱ型受体启动子是否具有卵巢特异性活性。结果构建的pGL3-Basic/MISⅡRpr质粒用SacⅠ和EcoRⅠ双酶切,片段大小分别为600 bp和1 000 bp,证明MISⅡRpr插入正确。重组质粒转染卵巢细胞系SK-OV3、HT-8910,荧光素酶高表达;对照细胞HT-29等转染后,荧光素酶低表达。结论克隆得到的MISⅡRpr具有明显的卵巢特异性活性。可以利用MISⅡRpr进行相关基因的卵巢特异性表达。