炒麦芽含药血清对MMQ大鼠垂体瘤细胞NGF、PRL分泌的影响

目的了解炒麦芽含药血清对体外培养的MMQ大鼠垂体瘤细胞神经生长因子(NGF)、催乳素(PRL)分泌表达的影响。方法应用血清药理学的方法,以不同剂量、15%给药比例的家兔炒麦芽含药血清和阳性对照药物溴隐停含药血清及正常血清对体外培养的MMQ大鼠垂体瘤细胞进行干预,连续检测4d,以放射免疫法检测细胞培养液上清中NGF和PRL分泌量,并对实验结果进行统计分析。结果炒麦芽各剂量含药血清组、溴隐停组与空白对照组相比培养液中NGF和PRL含量具有显著性差异(P<0.05),其中,正常血清组和空白对照组之间无统计学意义(P>0.05)。随炒麦芽含药血清剂量的增加,MMQ垂体瘤细胞NGF分泌量逐渐升高,并伴随着PRL分泌量逐渐下降,炒麦芽剂量、NGF、PRL分泌量三者间呈显著相关(P<0.05);阳性对照药物溴隐停含药血清对NGF和PRL的分泌均具有抑制作用(P<0.01)。结论低剂量炒麦芽促进PRL分泌和高剂量炒麦芽抑制PRL分泌的双向调控机制可能是通过影响NGF分泌实现的,溴隐停抑制PRL激素分泌的原因可能与NGF分泌无关。

微小RNA-374-5p对大鼠垂体泌乳素腺瘤细胞系 MMQ增殖、凋亡、侵袭的影响及其机制

目的观察微小RNA-374-5p(miR-374-5p)对大鼠垂体泌乳素腺瘤细胞系MMQ增殖、凋亡、侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法将对数生长期MMQ细胞分为A、B、C、D组。A组加入常规培养基,B组加入miR-374-5p类似物,C组加入miR-374-5p抑制剂,D组加入miR-374-5p类似物和miR-374-5p抑制剂。各组培养0、24、48、72 h时,酶标仪在490 nm波长处检测各组细胞光密度值(OD值,以OD值表示细胞增殖能力)。各组细胞培养72 h时,离心收集细胞,加入Annexin V-FITC和PI染色,流式细胞仪检测Annexin V染色阳性细胞百分数和PI染色阳性细胞百分数(以Annexin V染色阳性细胞百分数和PI染色阳性细胞百分数表示细胞凋亡能力)。各组细胞培养72 h时,采用实时定量PCR法检测各组细胞侵袭相关基因[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、蜗牛家族转录阻遏物1(Snail)、波形蛋白(Vimentin),以侵袭相关基因mRNA的相对表达量表示细胞侵袭能力]及垂体肿瘤转化基因(PTTG)mRNA。将野生型(WT)PTTG荧光素酶载体和突变型(mut)PTTG荧光素酶载体分别与microRNA-NC或miR-374-5p类似物共转染至MMQ细胞,记为NC-WT组、NC-mut组、WT组、mut组,转染72 h后,使用双荧光素酶报告基因检测系统检测细胞上清液中荧光素酶活性。结果与A、D组相比,培养24、48、72 h时,B组细胞增殖能力显著降低(P均<0.05),C组细胞增殖能力显著升高(P均<0.05)。A、B、C、D组Annexin V染色阳性细胞百分数分别为3.7%±1.4%、17.6%±5.3%、3.4%±1.5%、4.5%±1.4%,PI染色阳性细胞百分数分别为2.4%±0.9%、11.2%±3.7%、2.5%±1.2%、2.7%±0.9%,其中B组Annexin V染色阳性细胞百分数和PI染色阳性细胞百分数与A、C、D组相比,P均<0.05。与A、D组相比,B组细胞E-cadherin mRNA、PTTG mRNA相对表达量显著降低(P均<0.05),N-cadherin mRNA相对表达量显著升高(P均<0.05)。NC-WT组、NC-mut组、WT组、mut组荧光素酶活性分别为13.2±2.6、15.3±3.2、4.7±1.6、14.3±3.5,其中WT组荧光素酶活性与其他各组相比,P均<0.05。结论miR-374-5p可抑制MMQ细胞增殖、诱导凋亡并抑制侵袭相关基因表达,PTTG是其调控靶基因。

O^6-环己基甲基鸟嘌呤对垂体瘤细胞系MMQ细胞增殖、凋亡、周期的影响及其机制

目的 观察不同浓度O6-环己基甲基鸟嘌呤对垂体瘤细胞系MMQ细胞增殖、凋亡、周期的影响,并探讨其可能机制.方法 取对数生长期MMQ细胞2 mL,接种于6孔板中.加入0.4、4μmol的O6-环己基甲基鸟嘌呤和二甲基亚砜(分别计为A、B、C组).细胞增殖实验检测细胞OD490值,流式细胞技术测算细胞Annexin V阳性百分数、PI阳性百分数及S期、G1期细胞比例,蛋白印迹实验检测细胞Cdk2、p21、p27蛋白.结果 与C组比较,A、B组培养24、48、72 h的OD490值降低(P均<0.05).与C组比较,A组Annexin V阳性百分数、PI阳性百分数升高(P均<0.05);与B组比较,A组Annexin V阳性百分数降低(P均<0.05).与C组比较,A、B组S期细胞比例降低,G1期细胞比例升高(P均<0.05).与C组比较,A、B组Cdk2蛋白表达降低,A组p27蛋白表达升高(P均<0.05);与B组比较,A组Cdk2蛋白表达升高,p21蛋白、p27蛋白表达降低(P均<0.05).结论 O6-环己基甲基鸟嘌呤可抑制MMQ细胞增殖,诱导细胞凋亡,并将细胞阻滞在G1期,4μmol较0.4μmol效果更为明显,机制可能与其可抑制CDK2蛋白表达有关.

Pou6f2基因对泌乳素腺瘤MMQ细胞增殖和分泌能力的影响

目的观察Pou class 6同源框2(Pou6f2)基因对泌乳素腺瘤MMQ细胞增殖和分泌能力的影响。方法敲低Pou6f2实验:将细胞分为对照组和实验1、2组,按Lipofectamine~? 3000转染试剂盒说明书分别转染control-siRNA、Pou6f2-siRNA-1、Pou6f2-siRNA-2,72 h后收集细胞。过表达Pou6f2实验:将细胞分为对照组和实验组,按Lipofectamine~? 3000转染试剂盒说明书分别转染空载质粒、野生型Pou6f2质粒,72 h后收集细胞。采用Western blotting法检测细胞中Pou6f2表达量,MTS法测定细胞增殖活性(A_(490)值),ELISA法测定细胞泌乳素(PRL)分泌水平。结果敲低Pou6f2实验中,与对照组比较,实验1、2组MMQ细胞Pou6f2表达量降低、增殖的A_(490)值增加、分泌PRL水平升高(P均<0. 01),实验1、2组各指标差异均无统计学意义。过表达Pou6f2实验中,与对照组比较,实验组MMQ细胞Pou6f2表达量增加、增殖的A_(490)值降低、分泌PRL水平下降(P均<0. 01)。结论 Pou6f2可以抑制泌乳素腺瘤MMQ细胞的增殖及PRL分泌能力,有望成为泌乳素腺瘤治疗的新靶点。

TGF-β/Smad3信号通路在氟维司群抑制泌乳素腺瘤MMQ细胞增殖和分泌中的作用

目的观察氟维司群对泌乳素腺瘤MMQ细胞增殖和分泌的影响,探讨TGF-β/Smad3信号通路在其中的作用。方法 MTS试验检测不同浓度氟维司群处理泌乳素腺瘤MMQ细胞24、48、72 h后细胞增殖活力。ELISA检测不同浓度的氟维司群处理泌乳素腺瘤MMQ细胞24 h后细胞上清中TGF-β1和泌乳素的分泌水平。免疫荧光检测泌乳素腺瘤MMQ细胞经氟维司群处理24 h后细胞中磷酸化Smad3的表达水平。结果氟维司群能够有效抑制泌乳素腺瘤MMQ细胞的增殖,并呈现良好的时间依赖性与浓度依赖性。氟维司群处理泌乳素腺瘤MMQ细胞可显著提高活性TGF-β1水平、降低泌乳素水平,呈现良好的剂量依赖作用。免疫荧光技术观察氟维司群处理泌乳素腺瘤MMQ细胞24 h后,细胞核和细胞浆中(主要为细胞核中)p-Smad3明显增多。结论氟维司群可能通过TGF-β/Smad3信号通路抑制泌乳素腺瘤MMQ细胞增殖和泌乳素分泌。

喜泊分介导的光动力对大鼠泌乳素瘤MMQ细胞作用的研究

目的观察喜泊分介导的光动力对大鼠泌乳素瘤MMQ细胞的作用。方法不同浓度(0、5、10、20μg/mL)的喜泊分与细胞孵育3 h后,先用405 nm波长紫外光照射观察细胞对喜泊分的吸收情况,然后用630 nm波长红光照射不同时间(0、100、500、1 000 s),采用MTT比色法测定细胞的增殖情况并计算抑制率;应用最大抑制率的参数光动力作用后,在倒置显微镜下观察细胞形态的变化,台盼蓝染色观察细胞的存活情况,Hoechst33342染色观察细胞凋亡或坏死的情况,Annexin/PI双染色流式细胞术分析细胞的死亡形式。结果喜泊分与MMQ细胞孵育3 h后,用紫外光照射细胞,细胞激发出红光,说明MMQ细胞对喜泊分吸收良好;随着喜泊分浓度的增加与光照时间的延长,喜泊分-光动力对MMQ细胞的抑制率逐渐升高,当喜泊分浓度为20μg/mL、光照时间为1 000 s时,抑制率达到最高,为84%;应用最大抑制率的参数光动力作用后,细胞开始游离、细胞膜破裂,并出现很多细胞碎片;台盼蓝染色显示光动力导致MMQ细胞大量死亡;Hoechst33342染色显示喜泊分-光动力组MMQ细胞蓝色荧光强度明显增加,光动力导致细胞核固缩,细胞质凝集;Annexin/PI双染色流式细胞术结果分析显示,在喜泊分浓度为20μg/mL、光照时间为1 000 s时,死亡细胞主要是坏死细胞,达到92.3%。结论喜泊分介导的光动力对大鼠泌乳素瘤MMQ细胞具有光动力杀伤效应,可以引起显著的死亡。

Studies on the Anti-lipid Peroxidative Actions of the Methanolic Extract of the Root of Aegle marmelos and Its Constituents In Vivo and In Vitro

The inhibitory effect of the methanolic extract of the root of Aegle marmelos (MERA) and its constituents on the lipid peroxidation in vivo and in vitro were studied. The results suggested that MERA increased the activities of superoxide dismutase (SOD) and GSH-peroxidase in the liver cytosol of mice, but showed no significant effect on the activity of catalase, and one of its major constituents, 4-methoxy-1-methyl-2-quinolone (MMQ) increased the activity of SOD in liver tissue of mice intoxicated with FeCl2-ascorbic acid (AA)-ADP in vivo. Various constituents isolated from the root of title plant inhibited the lipid peroxidation in rat liver homogenate, which was in vitro induced by FeCl2-ascorbic acid, CCl4-NADPH, or ADP- NADPH. Of the test compounds, MMQ and its derivatives integriquinolone were similar to (-tocopherol in inhibiting MDA production in rat liver microsomes induced by Fe2+-ascorbate, CCl4-NADPH, or ADP-NADPH.

进疆野战部队新兵适应不良影响因素分析

目的调查了解进疆野战部队新兵适应不良的影响因素,为新兵心理健康教育提供理论依据。方法对2012年度288名进疆野战部队新兵新训第一周用军人适应不良自评量表进行测评。结果①新兵适应不良各因子分显著高于全军士兵常模(t=8.517,P<0.01);城市新兵情绪障碍得分显著低于农村新兵(t=-3.409,P<0.01);独生子女适应不良总分显著高于非独生子女新兵(t=-6.053,P<0.01);在适应不良总分上有工作经历新兵显著高于无工作经历新兵(t=-5.516,P<0.01);②≥21岁新兵各个因子得分显著低于其他年龄段;大专以上新兵在不同文化程度中得分最低。结论进疆野战部队新兵心理适应能力低于全军士兵水平,城市、非独生子女、有工作经历、文化程度高、年龄较大新兵有较好的环境适应能力。

一种多动机强化学习框架

以Q学习为代表的传统强化学习方法都是维持一个状态与动作的映射表.这种状态-动作的二层映射结构缺乏灵活性,同时不能有效地使用先验知识引导学习过程.为了解决这一问题,提出了一种基于多动机强化学习(MMRL)的框架.MMRL框架在状态与动作间引入动机层,将原有的状态-动作二层结构扩展为状态-动机-动作三层结构,可根据经验设置多个动机.通过动机的设定实现了先验知识的利用,进而加快了强化学习的进程,提高了强化学习的灵活性.实验表明,通过合理的动机设定,多动机强化学习的学习速度较传统强化学习有明显提升.

基于RNA干扰技术的多巴胺D2受体低表达的高催乳素MMQ细胞模型构建

目的利用RNA干扰技术建立多巴胺D2受体(D2R)低表达的高催乳素大鼠垂体瘤MMQ细胞模型。方法设计3对可沉默D2R基因表达的小干扰RNA(siRNA)序列,转染MMQ细胞,建立包括siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组、阴性对照(siNT)组和空白对照(CTRL)组的5组细胞模型,采用Western blot法检测各组MMQ细胞D2R蛋白表达。选择干扰高表达细胞株,加入溴隐亭1μmol/L进行干扰,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法、Western blot法及实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分别观察干扰后MMQ细胞催乳素的分泌、催乳素蛋白相对表达量及催乳素mRNA水平。结果5组D2R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(F=19.936,P<0.01);其中siRNA1组、siRNA3组D2R蛋白相对表达量[(0.23±0.12)、(0.57±0.24)]与siNT组(0.81±0.24)、CTRL组(0.94±0.21)比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);siRNA1组、siRNA3组对MMQ细胞的D2R蛋白表达抑制率分别为74%和35%。干扰后,siRNA组、CTRL组、siNT组MMQ细胞催乳素分泌、催乳素蛋白相对表达量、催乳素mRNA水平比较,差异均有统计学意义(F=10.898、7.485、7.898,均P<0.05);siRNA组催乳素分泌高于siNT组、CTRL组[(2.91±0.12)ng/ml比(2.14±0.15)、(2.09±0.44)ng/ml];siRNA组催乳素蛋白相对表达量高于siNT组、CTRL组[(0.99±0.67)比(0.85±0.13)、(0.82±0.12)];siRNA组催乳素mRNA水平高于siNT组、CTRL组[(1.00±0.07)比(0.69±0.09)、(0.73±0.14)],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论基于RNA干扰技术构建的D2R低表达的高催乳素MMQ细胞模型为目标药物治疗高催乳素血症的靶点研究提供了可靠的细胞模型。

化痰祛瘀中药联合溴隐亭含药血清抑制泌乳素垂体瘤细胞增殖的体外研究

目的探索化痰祛瘀中药联合溴隐亭含药血清对体外培养泌乳素垂体瘤细胞增殖的影响及其作用机制。方法以大鼠垂体瘤细胞系MMQ作为研究对象。将细胞分为空白对照组、空白血清组、溴隐亭组(溴隐亭0.104 mg)、联合治疗低剂量(化痰祛瘀中药6.25 ml+溴隐亭0.104 mg)、中剂量(化痰祛瘀中药12.5 ml+溴隐亭0.104 mg)及高剂量组(化痰祛瘀中药25 ml+溴隐亭0.104 mg),给予相应干预措施,通过MTT法检测不同干预措施对MMQ细胞增殖的影响。采用流式细胞仪检测细胞周期,免疫印迹法检测多巴胺受体DRD2及抑癌基因PETN蛋白表达。结果干预24 h后,溴隐亭组细胞存活率为77.83%,联合治疗低、中及高剂量组细胞存活率分别为74.64%、66.67%和58.69%;其中溴隐亭组、联合治疗中及高剂量组细胞存活率显著低于空白血清组(P<0.05或P<0.01)。干预48 h后,溴隐亭组细胞存活率为59.44%,联合治疗低、中及高剂量组细胞存活率分别为57.62%、54.41%和45.87%,且溴隐亭组及联合治疗各剂量组细胞存活率均显著低于空白血清组(P<0.05或P<0.01);同时,联合治疗高剂量组细胞存活率显著低于溴隐亭组(P<0.05)。干预72 h后,溴隐亭组细胞存活率为49.56%,联合治疗低、中及高剂量组细胞存活率分别为46.65%、30.01%和23.78%,且溴隐亭组及联合治疗各剂量组细胞存活率均显著低于空白血清组(P<0.05或P<0.01);联合治疗中及高剂量组细胞存活率低于溴隐亭组(P<0.05或P<0.01)。溴隐亭组及联合治疗各剂量组细胞存活率随着时间的延长而降低(P<0.05)。联合治疗高剂量组细胞周期增殖S期比例显著降低,从25.61%下调为5.83%(P<0.01)。此外,化痰祛瘀中药联合溴隐亭治疗可上调细胞多巴胺受体及抑癌基因PTEN蛋白表达。结论化痰祛瘀中药通过上调多巴胺受体蛋白表达,可能是其协同增效溴隐亭治疗泌乳素垂体瘤,发挥临床治疗作用的主要途径。

麦芽总生物碱上调多巴胺D2受体抑制垂体瘤细胞泌乳素表达和分泌

目的研究多巴胺D2受体(D2R)在麦芽总生物碱调控泌乳素(PRL)分泌过程中的作用。方法大鼠垂体瘤MMQ、GH3细胞分为对照组、溴隐亭(5μg/mL)组、麦芽总生物碱(4.4、8.8、35.2、70.4μg/mL)组、氟哌啶醇(10、20、40μg/mL)组、麦芽总生物碱与氟哌啶醇联合给药组。采用CCK-8法检测细胞活力;Western blotting检测PRL、D2R蛋白表达;ELISA法检测细胞上清PRL水平;qRT-PCR法检测PRL、D2R mRNA表达。结果与对照组相比,麦芽总生物碱(35.2、70.4μg/mL)可显著下调MMQ细胞PRL蛋白及mRNA表达、上清PRL水平(P<0.05),显著上调MMQ细胞D2R蛋白及mRNA水平(P<0.05);氟哌啶醇可显著减弱麦芽总生物碱对MMQ细胞PRL蛋白及mRNA表达、上清PRL水平的下调(P<0.05),并显著减弱麦芽总生物碱对MMQ细胞D2R蛋白及mRNA表达的上调(P<0.05);麦芽总生物碱对GH3细胞PRL表达、上清PRL水平无显著影响。结论麦芽总生物碱通过上调D2R表达,从而抑制MMQ细胞PRL的表达和分泌。

疏肝养血降乳汤含药血清对垂体瘤增殖和凋亡作用的解析

为了探索疏肝养血降乳汤含药血清对垂体瘤（垂体泌乳素腺瘤）细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制,采用大鼠垂体瘤细胞系MMQ作为研究对象,通过MTT法检测不同浓度疏肝养血降乳汤含药血清对MMQ细胞活力的影响;流式细胞仪检测不同浓度疏肝养血降乳汤含药血清对MMQ细胞周期和凋亡的影响;蛋白质免疫印迹检测不同浓度疏肝养血降乳汤含药血清对MMQ细胞Caspase-1、Caspase-3蛋白剪切活化的影响。表明,疏肝养血降乳汤含药血清对MMQ细胞增值有很强的抑制作用,通过激活Caspase-1、Caspase-3而促进MMQ细胞的凋亡,含药血清将MMQ细胞阻滞在G2/M期。这些说明疏肝养血降乳汤含药血清能够抑制MMQ细胞增值并促进其凋亡。