MPTP对小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D凋亡的影响

目的:探讨MPTP对小鼠多巴胺能神经元细胞MN9D凋亡的影响及其可能机制。方法:MN9D细胞分别以0、1μmol/L MPTP处理(对照组和MPTP组),或分别以pcDNA4、pcDNA4-BACE2转染(对照组和BACE2组),采用Western blot法检测BACE2、Cleaved Caspase-3和内源性DSG2蛋白的表达。MN9D细胞分为DSG2组、DSG2+BACE2组和DSG2+BACE2+BACE抑制剂组,分别转染pENTER-DSG2+pcDNA4、pENTER-DSG2+pcDNA4-BACE2以及转染pENTER-DSG2+pcDNA4-BACE2后用1μmol/L的BACE抑制剂处理,采用Western blot法检测DSG2全长以及DSG2各片段的表达。结果:与对照组相比,MPTP组中BACE2及Cleaved Caspase-3表达均上升(P<0.05);与对照组相比,BACE2组Cleaved Caspase-3表达增加,内源性DSG2表达减少(P<0.05)。与DSG2组相比,DSG2+BACE2组中全长DSG2表达下降,DSG2羧基末端片段以及胞外DSG2氨基末端片段均增多(P<0.05),而DSG2+BACE2+BACE抑制剂组中全长DSG2及各DSG2片段的表达与DSG2组相似(P>0.05)。结论:MPTP可通过上调BACE2促进MN9D细胞凋亡,其机制可能与BACE2对DSG2的剪切有关;BACE2和DSG2可能参与了帕金森病的发病。

基于miR-126-5p/Bcl-2/mPTP通路探究稳心汤对缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞损伤修复的作用机制

目的:观察稳心汤对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响,并基于miR-126-5p/Bcl-2/心肌细胞线粒体通透性转换孔(mPTP)调控通路明确其作用机制。方法:使用5%CO_(2)、1%O_(2)、94%N 2培养箱构建H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型,并通过细胞转染技术达到miR-126-5p的过表达与抑制。待干预结束后观察心肌细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放水平、心肌细胞活性氧(ROS)含量;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;流式细胞仪检测心肌细胞线粒体mPTP开放水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞色素C(Cyt-C)释放水平与Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-126-5p及Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的RNA表达水平。结果:与miR-126-5p低表达组比较,miR-126-5p过表达可显著降低LDH释放水平;减少心肌细胞ROS含量;改善心肌细胞凋亡率;提高心肌细胞CalceinAM水平,减少mPTP开放。miR-126-5p过表达可以减少H9c2心肌细胞Cyt-C释放水平,miR-126-5p低表达可部分减少H9c2心肌细胞Cyt-C释放水平。miR-126-5p过表达可上调Bcl-2蛋白与基因表达,下调Caspase-3与Caspase-9蛋白与基因表达。miR-126-5p低表达可部分上调miR-126-5p表达水平与Bcl-2蛋白与基因表达;部分下调Caspase-3与Caspase-9蛋白与基因表达。结论:稳心汤改善缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤可能与调控miR-126-5p/Bcl-2/mPTP信号通路有关,从而减轻氧化应激反应,降低线粒体膜通透性,抑制心肌细胞凋亡,延缓心肌损伤。

SIRT1-TLR4信号通路在MPTP帕金森病小鼠模型炎症反应中的作用

目的探索SIRT1-TLR4信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)帕金森病(PD)小鼠模型炎症反应中的作用。方法选用MPTP处理C57BL/6小鼠构建帕金森病小鼠模型,将小鼠随机分为对照组(Con组)、模型组(MPTP组)、激活剂组(RV+MPTP组)、抑制剂组(EX527+RV+MPTP组)。腹腔注射MPTP建立帕金森病小鼠模型,并给予白藜芦醇(RV)灌胃、SIRT1特异性抑制剂EX527腹腔注射处理,通过爬杆实验、旷场实验评估小鼠行为学改变,利用免疫荧光、Western blot等检测酪氨酸羟化酶(TH)、SIRT1、TLR4、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)等相关蛋白表达。结果和Con组相比,MPTP组小鼠爬杆总时间和爬杆转向时间明显增加,行走总路程、进入中心区域总距离、进入中心区域次数均明显减少(P<0.05);和MPTP组相比,RV+MPTP组小鼠爬杆总时间和爬杆转向时间明显缩短,行走总路程、进入中心区域总距离、进入中心区域次数均明显增加(P<0.05);和RV+MPTP组相比,EX527+RV+MPTP组小鼠爬杆总时间和爬杆转向时间明显增加,行走总路程、进入中心区域总距离、进入中心区域次数均明显减少(P<0.05)。免疫荧光检测发现,和Con组相比,MPTP组小鼠脑黑质区TH阳性神经元和SIRT1蛋白表达均明显减少,TLR4表达明显增加(P<0.05);和MPTP组相比,RV+MPTP组小鼠脑黑质区TH阳性神经元和SIRT1蛋白表达均明显增加,TLR4表达明显减少(P<0.05);和RV+MPTP组相比,EX527+RV+MPTP组小鼠脑黑质区TH阳性神经元和SIRT1蛋白表达均明显降低,TLR4表达明显增加(P<0.05)。蛋白质印迹检测发现,和Con组相比,MPTP组小鼠脑黑质中TH、SIRT1蛋白表达明显降低,TLR4、IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05);和MPTP组相比,RV+MPTP组小鼠脑黑质中TH、SIRT1蛋白表达明显升高,TLR4、IL-6、TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.05);和RV+MPTP组相比,EX527+RV+MPTP组小鼠小鼠脑黑质中TH、SIRT1蛋白表达明显降低,TLR4、IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论SIRT1-TLR4信号通路可能参与PD神经炎症反应过程,可能在PD的发生、发展中有重要作用,可能参与了PD的疾病过程。

氰戊菊酯通过诱导mPTP开放干扰小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的机制

目的探讨氰戊菊酯(Fen)干扰小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)睾酮合成的机制。方法TM3细胞随机分为对照组(Control group,0μmol/L Fen)、25μmol/L Fen暴露组、25μmol/L Fen+5 mmol/L NAC组、25μmol/L Fen+10μmol/L BAPTA-AM组;采用CCK-8法检测染不同浓度及不同作用时间的细胞增殖情况;ELISA法检测小鼠睾酮(T)和cAMP的含量;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;Fluo-4/AM探针检测细胞内Ca^(2+)浓度;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP)变化情况;生化比色法测定细胞ATP含量;Western blot检测3β-HSD、StAR、ANT4和CyPD表达水平。结果Fen暴露后,TM3细胞ROS水平和胞内Ca^(2+)浓度上升(P<0.01),线粒体膜通透性转运孔(mPTP)组成成分ANT4和CyPD表达水平上升(P<0.01),MMP水平下降(P<0.01),细胞ATP和cAMP合成能力降低(P<0.01),cAMP/PKA信号通路依赖性的StAR蛋白和3β-HSD表达水平下降(P<0.01),睾酮合成能力随之下降(P<0.01);与25μmol/L Fen暴露组比较,25μmol/L Fen+5 mmol/L NAC组和25μmol/L Fen+10μmol/L BAPTA-AM组TM3细胞睾酮合成水平显著上升(P<0.05)。结论Fen暴露后,TM3细胞ROS和胞浆Ca^(2+)浓度上升,二者通过协同效应引起mPTP开放,细胞ATP和cAMP合成障碍,cAMP/PKA信号通路依赖性的睾酮合成蛋白和酶表达下降,TM3细胞睾酮合成受阻。本研究的结果提示抑制ROS和Ca^(2+)的信号作用可能有助于抑制Fen诱导的TM3细胞mPTP开放并改善Fen暴露所致TM 3细胞睾酮合成障碍。

Fluoro-Jade B法显示神经毒物红藻氨酸和MPTP致小鼠基底神经核损伤引起神经元的变性死亡

目的探讨应用Fluoro-JadeB(FJB)染色法检测基底神经核神经元变性死亡的方法。方法制备纹状体定位注射红藻氨酸(KA)损伤大鼠模型、腹腔注射MPTP损伤小鼠模型、以及培养纹状体神经元KA损伤细胞模型,用FJB荧光染色显示和分析变性死亡的神经元。结果FJB染色可清晰地显示KA和MPTP致大、小鼠损伤引起的变性神经元胞体和部分突起。在脑组织切片上,KA模型纹状体内、MPTP模型黑质致密部内分布许多FJB染色阳性的变性神经元,而对照组动物未见变性神经元。在培养纹状体神经元体系内,FJB也能清楚地显示KA损伤后变性的神经元。单位面积内计数FJB阳性神经元占培养纹状体神经元总数的比率(均值±标准差),KA损伤组为(8·42±1·09)%,较对照组(3·42±0·45)%明显增多(P<0·01)。结论FJB方法快速、简便、经济、可靠。可以用于脑组织切片和培养细胞显示变性神经元,能成功检测出KA和MPTP损伤后基底神经核的变性神经元。

MPTP诱导小鼠帕金森病亚急性模型和慢性模型的比较

目的探讨对比1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠亚急性模型和慢性模型的行为学及组织病理学变化。方法亚急性模型C57/BL小鼠腹腔注射MPTP 25 mg/kg,每天1次,连续注射7 d;慢性模型C57/BL小鼠腹腔注射MPTP 25 mg/kg,每周注射2次,连续注射5 w。通过爬杆实验和悬挂实验检测小鼠的行为学变化;应用高效液相色谱法检测纹状体内多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)的含量;应用免疫组化染色法检测中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果与对照组相比,慢性组小鼠行为学改变明显,而亚急性组小鼠无明显改变。在爬杆实验中,慢性组小鼠爬杆所用的时间长于亚急性组;悬挂实验中,慢性组小鼠悬挂时间低于亚急性组。两组小鼠纹状体DA含量明显降低(P<0.05),但慢性组与亚急性组相比DA含量降低程度更明显(P<0.05);而5-HT含量未见明显改变(P>0.05);中脑黑质致密部TH阳性细胞减少方面,亚急性组下降至对照组28%,慢性组下降至对照组的17%;慢性组HE染色切片中的神经细胞凋亡最多,而亚急性组神经细胞相对凋亡较少。结论 MPTP的PD小鼠慢性模型与亚急性模型相比,具有更明显的与人类PD相似的临床症状,是以后进一步研究PD病理生理学机制的潜在稳定模型。

硫酸化茯苓多糖对MPTP诱导帕金森小鼠的神经保护作用研究

目的本实验通过检测硫酸化茯苓多糖(SP)对MPTP诱导的帕金森小鼠中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性、抗超氧阴离子活力、MDA及过氧化氢含量,探讨SP对帕金森小鼠中脑和脑皮层神经元细胞的保护作用。方法将ICR小鼠随机分为对照组、MPTP组和SP治疗组(SP 50、100、150mg·kg^(^(-1))),腹腔注射给药,取中脑和脑皮层匀浆,利用酶标仪检测小鼠中脑和脑皮层中SOD、GSH-Px、CAT活性、抗超氧阴离子活力、MDA及过氧化氢含量。结果 SP治疗组小鼠中脑和脑皮层3种抗氧化酶活性有不同程度的增强、抗超氧阴离子活力升高、MDA及过氧化氢含量不同程度下降。结论 SP对MPTP诱导的帕金森小鼠中脑和脑皮层神经元细胞有一定的保护作用。

首乌制剂对MPTP引起的小鼠帕金森病的防治

实验选用成年ICR纯系小鼠 ,通过对小鼠主动运动以及脑内多巴胺 (DA)含量的测定 ,观察首乌的醇提取物对MPTP引起的小鼠帕金森病的预防与治疗作用。实验发现 ,注射MPTP后 ,小鼠主动性活动明显减少 ,脑内DA含量明显降低 ,表现出帕金森病的特征。对这些小鼠再注射首乌制剂能促进小鼠的运动 ,脑内DA的含量得以恢复。若同时注射MPTP和首乌制剂 ,则小鼠主动性活动时间以及纹状体多巴胺的含量都明显高于单独注射MPTP组。实验提示 ,MPTP可引起ICR小鼠脑内多巴胺神经元损伤并产生帕金森病症状 ,而首乌制剂对MPTP的毒性作用有明显的预防作用和一定的治疗作用 ,这可能与首乌制剂抑制B型单胺氧化酶的活性有关。

和厚朴酚通过抑制脑MPTP开放和调节PARP-1活性保护全脑缺血的作用研究

目的研究和厚朴酚微乳剂对全脑缺血的影响,探讨其可能的作用机制。方法用断头法制备小鼠急性全脑缺血模型;用分光光度法观察脑线粒体通透性转换孔(MPTP)开放程度;用荧光法测定聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)活性;用MTT法侧细胞活力。结果和厚朴酚(7～70μg.kg-1)单次静注可剂量依赖地增加小鼠断头后喘息次数、降低小鼠脑匀浆液中乳酸的含量,升高脑匀浆液中ATP的含量。和厚朴酚(2.5μmol.L-1～10μmol.L-1)可浓度依赖地降低脑组织MPTP的开放,它可浓度依赖地抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)活性,其IC50=76.82μmol.L-1,和厚朴酚可明显提高缺氧损伤的PC12细胞存活率。结论和厚朴酚对全脑缺血有保护作用,该作用与其可能减轻缺血状态、抑制能量耗竭和乳酸堆积有关,可能与抑制神经细胞MPTP开放、抑制PARP-1的活性、从而保护神经细胞有关。这些结果为其治疗全脑缺血提供了实验依据。

Bcl-2/Bad/mPTP通路介导14-3-3γ对抗脂多糖所致心肌损伤

目的探讨Bcl-2/Bad/mPTP通路在14-3-3γ对抗脂多糖所致心肌损伤中的作用。方法构建pFLAG-14-3-3γ重组质粒,转染至原代乳鼠心肌细胞中,然后行LPS损伤处理。处理结束后,取培养液检测LDH活性,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测mPTP开放,Western blot检测14-3-3γ、Bad、phospho-Bad以及线粒体Bcl-2蛋白表达。结果 LPS损伤使心肌细胞LDH活性升高、细胞存活率下降、凋亡细胞增加、mPTP开放加剧,转染pFLAG-14-3-3γ重组质粒后再行LPS损伤,则LDH活性下降、细胞存活率升高、mPTP开放与细胞凋亡减少,同时phospho-Bad蛋白表达增加,线粒体Bcl-2蛋白表达增加。结论 pFLAG-14-3-3γ能够对抗脂多糖所致的心肌细胞损伤,其机制可能与磷酸化Bad,释放Bcl-2至线粒体,抑制mPTP的开放有关。

银杏平颤方及其拆方对MPTP模型小鼠脑内DA及其代谢产物含量的影响

目的 :观察银杏平颤方及其拆方对帕金森病 (PD)模型小鼠行为学和前脑纹状体多巴胺及其代谢产物含量的影响。方法 :采用爬杆法测量小鼠行为学改变 ,应用高压液相电化学法测定前脑多巴胺(DA)、高香草酸 (HVA)及二羟基苯乙酸 (DOPAC)。结果 :PD小鼠出现爬杆能力下降、时间延长、自发活动次数减少 ,中药全方组和拆方各组小鼠行为学异常均可不同程度改善 (P均 <0 0 5 ) ;中药各组的DA含量较正常组低 (P均 <0 0 0 1) ,DA HVA、DA DOPAC比值均明显降低 (P <0 0 1或P <0 0 0 1) ;拆方组中化瘀通络 (H)组HVA、DOPAC的含量明显增加 ,但DA的含量与模型组相比差异不显著 (P >0 0 5 )。结论 :银杏平颤方拆方组中化瘀通络 (H)组可部分改善PD模型小鼠的行为异常改变 ,并能调节前脑纹状体DA与其代谢产物含量及DA HVA、DA DOPAC比值。

MPTP损伤的小鼠PD模型的制作与评价

帕金森病(Parkinson!sdisease,PD)动物模型研究的目的是揭示多巴胺能神经元特异性损伤的机制,进而探索针对这种损伤的神经保护方法或治疗方法.由神经毒素MPTP损伤的小鼠PD模型,广泛应用于散发性PD的研究中.根据注射总剂量、两次注射间隔时间、注射方式的不同,制成了适合于不同研究目的的各种小鼠PD模型.关于MPTP导致的PD模型动物神经损伤的评价方式也是多层面、多指标并存的.对MPTP动物模型的起源和MPTP导致多巴胺能神经元损伤途径进行了较为系统的概述,并对MPTP小鼠PD模型的制作方法与评价指标进行较为详细的归纳.

针刺对痴呆小鼠线粒体mPTP相关蛋白的调整

[目的]观察"三焦针法"对线粒体通透性转换孔(mPTP)孔开放相关蛋白亲环蛋白D(CypD)、线粒体Aβ(Aβ)的调控作用,探讨"三焦针法"治疗阿尔茨海默病(AD)的机制。[方法]选取快速老化小鼠SAMP8为模型,采用Western blot等方法,观察小鼠皮质、海马线粒体Aβ、CypD含量的变化,以及"三焦针法"对其的影响。[结果]SAMR1正常组小鼠皮质与海马线粒体中Aβ42、CypD表达较低,SAMP8对照组小鼠皮质海马线粒体中Aβ42、CypD表达上调,针刺组小鼠皮质与海马线粒体中Aβ42、CypD表达,相对于SAMP8对照组下调或有下调趋势。[结论]"三焦针法"具有调整SAMP8鼠神经元线粒体皮质、海马Aβ42、CypD含量的作用。

MPTP诱导的褐鼠黑质基因差异表达的研究

本研究目的在于获取１－甲基－４－苯基－１，２，３，６－四氢吡啶（ＭＰＴＰ）诱导的褐鼠黑质差异表达的表达序列标签（ＥＳＴ）。通过ＭＰＴＰ腹腔注射建立褐鼠帕金森病模型，利用差别显示反转录ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ ＰＣＲ）技术分析ＭＰＴＰ 处理褐鼠与正常褐鼠黑质基因差异表达的状况，并筛选差异表达基因片段。结果经ＤＤＲＴ－ＰＣＲ 筛选并通过反Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交去除假阳性，最终获得２ 个差异表达基因片段。对其中一个片段进行克隆、测序和同源性比较发现，该片段为一个新的ＥＳＴ 序列，并且与胰岛素原样α肽具有同源性。本研究的结果提示，差异表达序列的分析有可能为研究ＭＰＴＰ诱导的褐鼠黑质变性的分子机理提供线索。

二苯乙烯苷对MPTP诱导的帕金森病小鼠模型黑质多巴胺转运体的影响

目的:研究2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-gluco-side,TSG)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠黑质多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)表达的影响。方法:将1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)注入小鼠腹腔制作PD模型,然后采用爬杆实验和悬挂实验检测小鼠的行为学变化,免疫荧光组织化学法观察黑质DAT阳性神经元数目。结果:行为学检测结果表明:模型组小鼠较正常对照组爬杆时间延长,悬挂能力下降(P<0.01),而TSG干预后可有效缩短小鼠的爬杆时间,并提高其悬挂能力(P<0.05,P<0.01)。免疫荧光结果显示:模型组小鼠黑质DAT阳性神经元的数目明显少于正常对照组(P<0.01),而TSG干预后,小鼠DAT阳性神经元数目的减少降低(P<0.05,P<0.01)。结论:TSG可改善PD小鼠的行为学、提高黑质DAT阳性神经元的存活数目,表明TSG对黑质多巴胺能神经元有一定的保护作用。

人参皂苷Re对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的研究人参皂苷Re对 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (1 methy 4 phenyl 1,2 ,3,6 te trahydropyridine ,MPTP)诱致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法通过给C5 7BL小鼠皮下注射MPTP制备帕金森病 (parkinson’sdisease ,PD)模型 ,灌胃给予人参皂苷Re预处理后 ,运用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)、免疫组织化学染色以及图像分析等技术分别对纹状体前脑啡肽原 (preproenkephalin ,PPE)mRNA、前强啡肽原 (preprodynorphin ,PPD)mRNA的表达水平和黑质酪氨酸羟化酶 (TH)、γ 氨基丁酸 (GABA)免疫反应阳性神经元数目等多项指标进行考察。结果Re能使黑质致密部 (SNc)的TH阳性神经元和黑质网状部 (SNr)的GABA阳性神经元数目显著增多 ;Re高剂量预防组 (2 6mg·kg-1)PPD扩增产物较模型组显著增加 (P <0 0 5 ) ;Re预防组的PPE扩增产物与模型组比没有显著差异。结论人参皂苷Re对MPTP诱致帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元具有明显的保护作用 ,其作用可能与改变GABA能神经元以及PPDmRNA表达水平 ,从而调节PD中直接回路和间接回路的兴奋

MPTP对小鼠行为学及脑纹状体多巴胺含量的影响

目的 观察不同剂量对 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3 ,6 四氢吡啶 (MPTP)小鼠行为学及脑纹状体多巴胺 (DA)去甲肾上腺素 (NE)、5 羟色胺 (5 HT)及其代谢产物含量的影响 ,探讨MPTP致帕金森病 (PD)样小鼠模型的最佳条件。方法 C5 7BL小鼠分别给予MPTP不同单日剂量 (2 0～ 40mg/kg) ,不同给药次数 (1～ 7)天处理 ,测定各组小鼠爬杆时间检测动物运动协调性 ,测定自发活动记数评价动物神经兴奋性 ,测定通道式水迷宫游出时间评价各组小鼠空间学习记忆能力。应用高效液相色谱法检测动物纹状体内DA、NE、5 HT及其代谢产物含量。结果 MPTP30mg/kg腹腔注射 1天、3天、7天及 40mg/kg腹腔注射 1天、3天后小鼠都出现不同程度爬杆时间延长 ,自发活动次数减少 ,但小鼠水迷宫游出时间在给药前后未见明显改变。MPTP处理组与对照组相比DA及其代谢产物 3,4 二羟基苯乙酸 (DOPAC)含量都有明显降低 ,而NE、5 HT、及其代谢产物5 羟吲哚乙酸 (5 HIAA)含量均未见明显改变。结论 MPTP处理可造成小鼠的帕金森病样症状 ,但不伴有明显智力障碍。在此种动物模型中 ,应根据科研目的选择MPTP的应用剂量和给药途径。

单侧颈内动脉注入 MPTP 建立偏侧帕金森病灵长类模型的研究

分别向未夹闭颈外动脉（Ａ组）和夹闭颈外动脉（Ｂ组）的恒河猴（Ｍａｃａｑｕｅ）的一侧颈总动脉注入甲基苯基四氢吡啶（ＭＰＴＰ），制造帕金森病（ＰＤ）灵长类动物模型。发现未夹闭组动物均需重复注射ＭＰＴＰ２～４次方可出现ＰＤ症状；而夹闭组动物均经１次手术获得成功。术后１个月脑核磁共振检查显示注射侧黑质区域密度减低、面积缩小。抗酪氨酸羟化酶免疫组化脑切片显示手术侧中脑多巴胺能神经元明显少于对侧。研究结果表明：夹闭颈外动脉向颈总动脉注入ＭＰＴＰ，是一种简便有效的建立灵长类偏侧帕金森病模型的方法。

类叶升麻苷对MPTP所致帕金森病小鼠模型的神经保护作用

目的研究类叶升麻苷在MPTP诱导的C57小鼠的帕金森病(PD)模型中的神经保护作用及机制。方法通过自主活动实验和滚筒实验研究动物的行为表现,通过高效液相电化学检测方法观察脑纹状体多巴胺的变化,通过脑黑质酪氨酸羟化酶(tyroxinehydroxylase,TH)免疫组化染色观察多巴胺能神经元的损伤程度。并对黑质纹状体进行α-突触核蛋白(α-synuclein)的免疫印迹分析以探讨药物作用机制。结果①经MPTP诱导的C57小鼠,其自主活动次数、滚筒运动潜伏期均低于对照组(P<0·01);纹状体多巴胺含量明显降低(P<0·01);多巴胺能神经元数量明显减少;黑质纹状体α-synuclein蛋白水平下降。②经类叶升麻苷(10、30mg·kg-1)预处理后能明显改善MPTP诱导的C57小鼠的行为学表现,增加脑内多巴胺递质的含量,增加多巴胺能神经元的数量,增加黑质纹状体α-synuclein蛋白水平。结论类叶升麻苷具有神经保护作用,能对抗MPTP诱导的C57小鼠PD模型中的神经损伤。其机制可能与上调α-synuclein蛋白水平有关。

二苯乙烯苷通过抑制ROS减轻MPTP对帕金森病小鼠的神经毒性作用

目的:探讨2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside,TSG)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-pheyl-1,2,3,6-tetrahydrophridine,MPTP)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的机制。方法:实验分成三组,即健康C57BL小鼠随机分为对照组(腹腔注射生理盐水);模型组,连续7 d给C57BL小鼠腹腔注射MPTP(30 mg/kg)制备亚急性PD模型;治疗组,在给予MPTP后1 h腹腔注射TSG(60 mg/kg)。爬杆实验检测小鼠的行为学变化;活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测ROS水平;免疫荧光组织化学染色法测定黑质酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)的表达变化。结果:行为学:与对照组比较,模型组爬杆时间与转头时间明显延长(P<0.01),而治疗组较模型组时间缩短(P<0.05)。模型组ROS水平较对照组大幅度升高(P<0.01),治疗组较模型组明显下降(P<0.05)。免疫荧光染色:与对照组相比,模型组TH及DAT阳性神经元的数目明显减少(P<0.01),而治疗组TH及DAT阳性神经元数目减少的幅度明显有所下降(P<0.05)。结论:TSG对MPTP诱导的神经毒性具有保护作用,其机制可能与TSG抑制ROS有关。