基于MTT比色和响应面法优化侧孢短芽孢杆菌最大活菌数培养条件

目的:探索获得侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)最大活菌数的最佳培养基成分及培养条件。方法:在建立MTT比色法与平板计数法的相关回归方程基础上,对获得最大活菌数的侧孢短芽孢杆菌最适培养基成分(碳源、氮源、无机盐)和培养条件(初始pH、温度、接种量、磷酸二氢钾)进行优化。结果:MTT比色法与平板计数法对活菌数测定结果表现出显著的线性关联(R^(2)>0.999);麦芽糖、氯化钙、初始pH、磷酸二氢钾为显著影响因子,最佳发酵条件为麦芽糖8.75 g/L,氯化钙0.17 g/L,初始pH 7.07、磷酸二氢钾3.73 g/L,此条件下活菌数为8.12×10^(8)CFU/mL,与理论活菌数(8.25×10^(8)CFU/mL)无显著差异。结论:基于MTT比色和响应面法优化侧孢短芽孢杆菌最大活菌数培养条件,优化后的活菌数较优化前提高了3.02倍。

MTT法用于中药成分细胞毒性和增殖检测的干扰因素及控制措施

3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法具有操作简单和成本低廉等优点,被广泛应用于中药成分的细胞毒性和对细胞增殖影响等研究。然而,细胞的数量和密度、MTT浓度和作用时间等实验条件会干扰检测结果的准确性。另外,由于中药成分种类繁多而且化学结构复杂,可能导致吸收光谱漂移、形成近似检测波长的吸收峰及干扰细胞代谢的活性等,影响MTT检测结果的准确性。对近年的相关文献进行整理,归纳和分析了影响MTT实验的实验条件、优化措施和质量控制,归类了检测需要注意的某些中药成分,总结了替代MTT法的其他实验及MTT与其他实验的联合应用,对应用中存在的问题进行了探讨和展望,期望为MTT法在中药成分相关实验中的合理应用提供参考。

6-巯基-5-三唑并[4,3-b]-s-四嗪(MTT)的密度泛函理论研究

采用密度泛函理论(Density functional theory,DFT),在B3LYP/6-31g(d)(C,H,N,S),Ag原子采用LanL2d赝势基组水平上对甲醛(HCHO)与4-氨基-5肼基-3-巯基-1,2,4-三唑(4-amino-5-hydrazino-3-mercapto-1,2,4-triazole,AHMT)衍生化反应生的成产物6-巯基-5-三唑并[4,3-b]-s-四嗪(6-mercapto-5-triazolo[4,3-b]-s-tetrazine,MTT)及其银配合物进行结构优化,优化结果表明MTT的结构是一个近平面结构.通过对频率计算,获得MTT分子及其银配合物的拉曼光谱,对400-1800 cm^(-1)波段内的拉曼光谱特征峰进行了指认.同时讨论了MTT分子的表面静电势,分析可能发生化学反应的位点.并采用含时密度泛函理论(Time Dependent density functional theory,TDDFT)对MTT分子与Ag3配合物的激发态进行了计算分析,并使用电荷转移光谱对Ag配合物与MTT之间电荷转移关系进行了研究.该研究对MTT分子的光谱测定和电子性质提供了理论基础.

MTT-分光光度法快速测定地衣芽孢杆菌发酵液活菌数的研究

试验以地衣芽孢杆菌发酵液为研究对象,旨在建立1种快速、稳定、灵敏度高的活菌计数方法,并探讨MTT-分光光度法用于活菌计数的可行性。试验筛选显色反应终止液最适浓度、最适反应波长、最适反应时间、最适菌液浓度等,考察不同培养基、培养液保存后和其他干扰物对测定结果的影响,并对比MTT-分光光度法与稀释平板法测定发酵菌液中地衣芽孢杆菌活菌数结果的关系。结果显示,在最大吸收波长550 nm处测定OD值,反应时间为1 h,反应终止液为1.0 mol/L盐酸,MTT添加量为0.2 mL,新鲜的地衣芽孢杆菌发酵液OD值>0.04。菌液浓度为10^(8)~10^(9)CFU/mL时,OD550 nm值与稀释平板法得到的活菌数具有很好的线性对应关系,当菌液浓度<10^(8)CFU/mL时对应关系不再成立。研究表明,活菌量>10^(8)CFU/mL时,MTT-分光光度法不受地衣芽孢杆菌生长阶段的影响,可准确计量地衣芽孢杆菌发酵液活菌量相对应的吸光度,从而快速、准确地检测活菌数。

MTT训练对改善手外伤患者患侧上肢肌肉萎缩的疗效观察

目的探讨MTT训练对改善手外伤患者患侧上肢肌肉萎缩的疗效。方法选取2019年8月12日-2021年3月10日东莞市桥头医院收治的60例手外伤患者作为此次研究的研究对象。采用随机数字分组法,分为治疗组和对照组,30例/组。对照组患者采用常规康复治疗,治疗组患者在常规治疗的基础上进行MTT训练治疗。观察并记录两组患者的患侧上肢肌肉萎缩的改善情况,以一个月为周期。结果在经过治疗后,治疗组的患者患侧上肢肌肉萎缩的改善情况明显好于对照组,且患侧上肢的主动屈伸、旋转活动度,各运动方向的肌力等手功能情况评价均较好于对照组的患者(P<0.05)。此外,结果显示,治疗组的生活质量明显高于对照组,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论MTT训练对改善手外伤患者患侧上肢的肌肉萎缩状况有着良好的效果,相关的医疗人员应该要积极将MTT训练应用到手外伤患者肌肉萎缩改善过程中。

反复熔铸Ni-Cr烤瓷合金体外细胞毒性实验(MTT法)

目的:初步评价反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同熔铸次数Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液培养小鼠结缔组织成纤维细胞(L-929)的结果,从而对反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性进行初筛。结果:各浓度实验组细胞生长形态良好、细胞毒性级为0～1级;经过2～5次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液、不同培养时间的A492均值与经过1次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金相应A492均值无显著性差异(P>0.05)。结论:初步认为Ni-Cr烤瓷合金经过1～5次熔铸后具有较好的生物相容性。

MTT-四氯化碳萃取吸光光度法测定活菌数

噻唑蓝(MTT)-四氯化碳萃取比色法是一种快速测定活细胞的方法,通过对反应条件的探索,建立了一种快速的测定细菌活性的方法。结果表明,MTT-四氯化碳萃取法可以有效地测定活菌数,并且与传统的平板稀释法和比浊法的测定结果一致,可以作为代替平板稀释法活菌计数的一种新方法。

MTT法在抗病毒药物筛选中的应用

目的 :采用MTT法评价清热消炎复方制剂体外抗柯萨奇病毒 (CVB3 )、呼吸道合胞病毒 (RSV)效果。方法 :待正常细胞长成单层 ,用病毒感染 ,培养一定时间后 ,根据不同病毒感染细胞出现细胞病变 (CPE)时间的不同 ,加入一定量的MTT液 ,然后测定OD570 值 ,计算病毒抑制率。结果 :MTT法较光镜CPE法更为客观 ,能以OD值变化反映药物对病毒的抑制程度 ,从而获得实验结果 ,且便于统计学处理。结论

噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒检测中的应用

目的:探讨噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒滴度检测中的应用。方法:用噻唑蓝(MTT)代替常规的中性红作为染色剂进行空斑形成实验MDCK和Hep-2细胞在12孔板上形成单层后,分别感染流感病毒和呼吸道合胞病毒,加入单层琼脂糖代替传统双层琼脂糖培养3-4天,用噻唑蓝(MTT)代替常规的中性红作为染色剂计数空斑。结果:⑴MTT法空斑形成实验检测流感病毒和RSV病毒滴度操作简单,时间短;⑵与常规中性红法空斑形成实验比较检测病毒滴度没有差异;⑶MTT法可以避免假空斑形成。结论:MTT法空斑形成实验可替代中性红法空斑形成实验,且更快速、准确。

鸭淋巴细胞转化试验(MTT法)最佳条件的研究

通过对培养温度、小牛血清及刀豆蛋白A(ConA)的浓度以及培养时间 4个参数的研究 ,确定了鸭淋巴细胞转化试验 (MTT法 )的最优培养条件。结果表明 ,采用 3 9.0℃、含 1 0 %小牛血清和 5μg/mLConA的RPMI1 64 0培养 66h可获得最大的OD570nm光吸值。

MTT还原法检测NK细胞活性的方法学研究

对ＭＴＴ还原法用于检测ＮＫ细胞毒活性进行了方法学探讨，实验表明，在ＭＴＴ还原法中，用二甲亚砜代替异丙醇溶解存活的靶细胞，并选效靶细胞比例为１０：１，效应细胞浓度为１×１０＾６，孵育时间４ｈ，即能获得满意的结果。

MTT、MTS、WST-1在细胞增殖检测中最佳实验条件的研究

目的:探讨MTT、MTS、WST-1三种四唑盐在细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法:取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞,用10%胎牛血清DMEM培养液制成不同浓度的细胞悬液加入96孔培养板中培养24h,分别加入三种试剂后在450nm、492nm和630nm波长处测定OD值,根据不同波长所测OD值的大小确定三种试剂的最佳实验波长。根据细胞浓度与OD值关系曲线确定三种试剂各自的最适细胞浓度。取最适浓度的B16细胞分别加入三种试剂在0.5h、1h、2h和4h四个不同时间点测定吸收值,根据OD值确定最佳的检测时间。结果:MTT、MTS法的最佳波长为492nm,WST-1法为450nm。MTT的最适细胞接种浓度为1.6×103—2.56×104/mL,MTS的最适细胞接种浓度为5×10—6.4×103/mL,WST-1的最适细胞接种浓度为2.5×10—1.6×103/mL。三种方法的最佳测定时间均为4h。结论:MTT、MTS、WST-1分别适用于不同条件下检测细胞的存活与增殖,可为抗病毒及抗癌药物的筛选提供实验依据。

SRB法与MTT法细胞计数应用比较

目的比较SRB(SulforhodamineB)法与MTT法细胞计数的灵敏性与稳定性。方法取4种不同类型细胞系指数生长期细胞,调整细胞密度为1×106,并按比例稀释为0.078-10×105细胞梯度。分别用SRB法与MTT法测量各细胞梯度吸光度(A),分析其与相应细胞数目的相关性。SRB法与MTT法各随机取100个A值,测量其在2、16、24h和7d后的A值,比较这两种方法的稳定性。结果SRB法与MTT法测定的A值与不同细胞系细胞数目均有极好的相关性;SRB法的测定结果几乎不随时间而变,而MTT法的测定结果受时间影响较大。结论SRB法相对于MTT法是进行大规模细胞计数与细胞生长曲线测定前途更加光明的实验方法。

纤蛇纹石石棉及代用纤维粉尘的光谱研究与噻唑蓝(MTT)比色法分析

以纤蛇纹石石棉、陶瓷纤维、玻璃纤维、岩棉、硅灰石为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测染毒72h后V79细胞的存活率,并通过吉姆萨染色观察细胞形态学上的变化。不同浓度ρ/(μg.ml-1)的矿物粉尘(100,200,400,600,800,1000)作用72h后,V79存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现大量细胞衰亡,呈现出剂量效应关系,且细胞毒性大小为玻璃纤维>纤蛇纹石石棉>陶瓷纤维>硅灰石>岩棉;形态学观察发现染毒细胞出现空泡、肿胀、裸核、黑褐色颗粒以及胞浆胞核模糊、形态变化等现象,且不同的粉尘对V79细胞的影响不同。总体而言,岩棉是五种粉尘中毒性最低的石棉代用纤维。

MTT法检测RAW264.7细胞活力及可能因素分析

目的通过MTT法检测RAW264.7细胞活力并绘制生长曲线,探讨MTT作用环节中的可能影响因素,优化实验方案。方法以对数生长期的RAW264.7细胞为实验对象,分别用正常培养和脱离血清培养法,记录在不同时间点的OD值。并在加入DMSO后,分别在6、12、24和48h及3、15和30d进行OD值测量。结果加入DMSO后不同时间点的MTT法检测结果,随着时间的延长,结果差异越来越大,超过3d后影响较大,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。3d内,与对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论①验证、测量并绘制RAW264.7的生长曲线;②加盖后影响透光度,增大了OD值,影响了实验结果;③随着DMSO时间的延长以第3天为限,否则影响实验结果。

SRB法和MTT法抗肿瘤药物筛选结果相关性研究

为了探索抗肿瘤药物体外筛选中磺酰罗丹明B(SRB)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法实验结果的相互验证作用,作者以PC-3、BGC-823、Bcap-37细胞系为研究对象,利用SRB法和MTT比色法对供试化合物行体外抑制活性考察,并用SPSS12.0对两种筛选方法得到的实验结果进行差异性分析。结果表明,SRB法和MTT比色法实验结果相关性好,可以相互验证实验结果的准确性和可靠性。

肿瘤病人白细胞、癌细胞MTT法体外抗癌药敏测定相关性探讨

用MTT法测定了78例癌症病人的癌细胞和外周血白细胞，对15种抗癌药物的药敏性。结果发现：妇瘤对十种抗癌药物，白细胞、癌细胞药敏阳性及抑制率都有差别，但无统计学意义，有很好的相关性。肺癌病人的情况大致与妇瘤病人一样。除了CTX对白细胞药敏率比癌细胞显著增高外，其它九种药物亦无统计学差异。结肠、直肠癌组的白细胞和癌细胞药敏性对部份药物有极大的差别，它们是5－FU、MMC、CTX、DDP，癌细胞药敏抑制率明显高于白细胞（P＜0．025、P＜0．001）。

MTT分析法、空斑减数法及CPE观察法评估药物体外抗病毒效果的比较与分析

目的:比较MTT分析法、空斑减数试验及细胞病变效应(CPE)观察3种方法在评估药物体外抗病毒效果分析中的优劣,为选择适宜的药物体外抗病毒效果的检测方法提供实验依据。方法:分别采用 CPE法、MTT分析法和空斑减数试验法评价大黄素于体外抗疱疹病毒 1 型、疱疹病毒 2 型和柯萨奇病毒增殖的效果,比较 3 种检测方法的结果,并分析该方法的实用性与利弊。结果:在抗疱疹病毒增殖的检测中,MTT法与空斑减数法所测结果具有显著性差异,空斑减数法比MTT法更准确,但对抗柯萨奇病毒增殖的检测,MTT法与空斑减数法无明显差异。结论:MTT法与 CPE法结合,可广泛用于对抗病毒药物的筛选,但对于疱疹病毒类非杀细胞病毒,使用空斑减数法较好。

CCK-8法与MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的比较研究

目的探讨CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。方法以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,采用CCK-8和MTT法检测抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对PC3细胞增殖的影响。结果 CCK-8法的最佳检测波长为450 nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4 h,适宜细胞数量范围为8×102～1×105个。结论 CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。

MTT比色法检测IL－2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细胞数目及细胞毒效应。