清肠温中方含药血清调控NLRP6途径对Caco-2/HT29-MTX细胞共培养模型MUC2表达的影响

目的:研究清肠温中方含药血清调控NLRP6途径影响Caco-2/HT29-MTX细胞共培养模型MUC2分泌的作用机制。方法:使用SD大鼠制备清肠温中方含药血清;Caco-2/HT29-MTX细胞共培养构建单层肠上皮细胞模型;IL-1β刺激共培养细胞模拟体外肠道炎症模型;si-NLRP6质粒转染干扰NLRP6,研究清肠温中方作用机制。qPCR检测NLRP6、IL-18的mRNA表达水平;Western blot检测NLRP6、IL-18蛋白表达水平;免疫荧光染色观察MUC2表达。结果:正常培养的Caco-2/HT29-MTX细胞中,NLRP6敲除后,MUC2表达明显减少。清肠温中方含药血清增加IL-1β诱导的细胞炎症模型中NLRP6和IL-18 mRNA及蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且一定程度上抵消si-NLRP6的抑制作用。与模型组相比,清肠温中方含药血清干预后,促进MUC2蛋白表达恢复,si-NLRP6后一定程度上削弱了清肠温中方的作用。结论:清肠温中方含药血清通过调控NLRP6信号途径,进一步调节MUC2分泌,修复UC黏液屏障损伤。

自主研制四极杆-线形离子阱质谱仪测定血清中甲氨蝶呤

本研究基于自主研制的QLIT-6610MD液相色谱-四极杆-线形离子阱-质谱联用仪,建立了准确测量血清中甲氨蝶呤的同位素稀释质谱法。采用甲醇沉淀血清样品的蛋白后测定上清液。通过基质匹配标准曲线定量,在10~5000μg/L浓度范围内,甲氨蝶呤的线性系数R^(2)>0.9990,定量限为10μg/L,质控品精密度优于6.94%,血清样本添加回收率为86.39%~97.84%,变异系数(CV)≤8.04%。应用QLIT-6610MD与AB QTRAP 6500+液相色谱-质谱联用仪同时测定70例临床血清样本,并采用Pearson系数与BLand-ALtman法进行比较。结果表明,2台仪器所测结果一致,QLIT-6610MD可达到三重四极杆质谱仪定量测定血清中甲氨蝶呤的水平,能够满足临床诊断需求,为临床质谱分析提供了一种新的国产仪器选择。此外,本研究还初步探讨了多级碎裂技术(MSn)测定血清中甲氨蝶呤的可能性,为后续研究奠定基础。

大剂量MTX联合化疗治疗淋巴系统恶性肿瘤的临床和药动学研究

目的 :探讨大剂量甲氨蝶呤 (HD -MTX 3～ 4g/m2 )连续 2 4小时静脉输注 ,第 3 6小时CF解救联合其它化疗药物治疗淋巴系统恶性肿瘤的临床耐受性和药动学研究。方法 :分别对 11例淋巴系统恶性肿瘤进行共3 0个疗程大剂量MTX 3～ 4g/m2 连续 2 4小时静脉输注 ,第 3 6小时CF解救 ,同时行血药浓度监测。其中 2 2个疗程HD MTX在G CSF支持与其它化疗药物联合应用。结果 :一般出现 2～ 3级中性粒细胞减少 ,1～ 3级的粘膜毒性。其中 10个疗程伴有一过性转氨酶轻度升高 ,无严重毒副反应发生。 2 4小时血浆MTX浓度为 2× 10 - 4 ～ 5×10 - 5mol/L、48小时为 5× 10 - 6～ 5× 10 - 7mol/L、72小时 2× 10 - 7～ 5× 10 - 8mol/L。结论 :在血药浓度监测下 ,大剂量MTX 3～ 4g/m2 连续 2 4小时静脉输注 ,第 3

实时荧光定量PCR法检测人骨肉瘤耐MTX细胞系中RFC、DHFR、GST-π的mRNA表达

[目的]研究RFC(还原叶酸载体)、GST-π(谷胱甘肽S转移酶π)、DHFR(二氢叶酸还原酶)mRNA在人骨肉瘤U2-OS细胞系及人骨肉瘤耐药细胞系U2-OS/R1-R3中的表达差异,并探讨其在人骨肉瘤MTX化疗耐药中的意义。[方法]采用冲击并逐步增加诱导药物浓度诱导的方法,诱导人骨肉瘤细胞系U2-OS,并建立耐MTX细胞系(U2-OS/R1-R3),利用荧光定量PCR技术在mRNA水平检测RFC、GST-π、DHFR在U2-OS及(U2-OS/R1-R3)中的表达。[结果]本试验成功建立三株人骨肉瘤耐药细胞系U2-OS/R1-R3中,荧光定量PCR结果显示MTX耐药与DHFRmRNA表达增加有关,与RFCmRNA的表达降低有关,与GST-πmRNA的表达增加有关。[结论]本试验在基因水平探讨人骨肉瘤细胞MTX化疗耐药机制,DHFR、GST-π基因表达的增加及RFC基因表达的降低参与了人骨肉瘤细胞的MTX耐药,为临床探索骨肉瘤患者的MTX耐药机制提供了重要的依据,为临床筛选MTX化疗不敏感患者提供重要的依据。

腹腔镜联合甲氨喋呤(MTX)与单纯MTX保守治疗异位妊娠的疗效比较

目的比较腹腔镜联合MTX与单纯MTX保守治疗异位妊娠的临床疗效。方法选取2005年1月～2006年1月在四川省妇女儿童医院住院治疗的89例异位妊娠患者,分为腹腔镜联合MTX保守手术治疗组(A组)和单纯MTX保守治疗组(B组),分别观察两组患者治疗前血清β-HCG值、附件包块大小、住院天数、住院费用、出院时血中β-HCG浓度、输卵管通水情况、再次宫内妊娠以及再次同侧异位妊娠情况。结果A组比B组住院天数短(P<0.01),血中β-HCG下降快(P<0.01),再次宫内妊娠率高(P<0.05)。结论相对于单纯MTX药物保守治疗,腹腔镜联合MTX保守手术治疗异位妊娠疗效快,住院时间短,远期并发症少,再次宫内妊娠率高,具有良好的临床应用价值。

阿维A与MTX治疗泛发性脓疱型银屑病的疗效比较

目的 比较阿维A与MTX治疗泛发性脓疱型银屑病的疗效。方法 回顾调查我科自 1995年～ 2 0 0 1年的泛发性脓疱型银屑病的住院病历 ,其中糖皮质激素合用MTX治疗的病例 2 0例 ,糖皮质激素合用阿维A治疗的病例10例。用t检验比较发热、红斑和脓疱的平均消退时间 ,χ2 检验随访 1个月的复发率。结果 发热、脓疱的平均消退时间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,红斑平均消退时间差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,阿维A组优于MTX组 ;两组复发率比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 在泛发性脓疱型银屑病的系统治疗中 ,糖皮质激素合用阿维A的疗效优于糖皮质激素合用MTX的疗效。

介导多药耐药的ABC转运蛋白超家族与MTX耐药性的关系研究

细胞耐药性的产生是导致肿瘤化疗失败的重要因素,尤其是多药耐药是目前研究的一个重点。ABC转运蛋白超家族成员介导药物的外排,与多药耐药密切相关。为了解该家族成员与MTX耐药的相关性,进一步探讨MTX的耐药机制,应用SuperArray基因芯片对MTX耐药前后编码ABC转运蛋白超家族成员的mdr1、mrp1、mrp2、mrp3、mrp5、mrp6和abcg27个基因进行检测,并对MRP1和MRP5蛋白表达进行了验证。结果显示,与MTX耐药性相关的ABC转运蛋白超家族成员主要为多药耐药相关蛋白,其中mrp1和mrp5呈现高表达,并且,在MTX抗性细胞中,MRP5在mRNA及蛋白水平的表达均明显增强,提示其在MTX耐药机制中起重要作用,可能为潜在的药物作用靶点。

应用差异PCR技术研究MTX耐药细胞的遗传学改变

基因扩增是介导细胞产生耐药性的一种普遍性机制。为探讨MTX耐药的小鼠细胞中与耐药机制形成有关的分子遗传学背景 ,应用差异PCR技术 ,检测了MTX耐药细胞中DHFR基因的扩增和过表达 ,并对c myc及p5 3基因状态与dhfr扩增之间的相关性进行了探讨。结果表明 :dhfr的扩增和过表达直接介导细胞耐药。未检测到c myc的扩增和p5 3拷贝数的变化 ;也未检测到c mycmRNA水平的改变 ,但p5 3基因的mRNA水平明显升高 ,显示p5 3可正常表达。这些结果表明dhfr的扩增与这两个候选基因的状态无关 。

腹腔镜下输卵管开窗取胚术联合局部注射MTX预防持续性异位妊娠的临床探讨

目的探讨输卵管妊娠行腹腔镜保守手术中使用甲氨喋呤(MTX)预防持续性异位妊娠的临床价值。方法对68例确诊为输卵管壶腹部妊娠的患者行腹腔镜开窗取胚术,将患者随机分为2组实验组(n=34)术中局部应用MTX20mg,对照组(n=34)局部注射等容量的生理盐水。于术前和术后d1、d4、d7、d10、d14查β-HCG及观察临床表现。结果2组术前一般情况和血β-HCG水平差异无显著性,但术后d1差异有显著性(P<0.05),术后d4、d7(P<0.01)和d10、d14(P<0.00)差异有极显著性。实验组无术后持续性异位妊娠(PEP),对照组出现6例术后PEP,二者差异有显著性(P<0.05)。结论在异位妊娠腹腔镜开窗取胚术中局部应用MTX可预防术后PEP的发生。

预防性应用MTX在腹腔镜保守治疗异位妊娠中的作用探讨

目的 探讨预防性应用MTX (甲氨碟呤 )在腹腔镜保守治疗异位妊娠中的作用。方法 回顾性分析我院 1 0年来施行腹腔镜保守治疗未破裂输卵管妊娠患者 4 5 8例 ,其中有 2 1 2例在术后的 2 4h内应用MTX5 0mg m2 肌肉注射一次 ,其他 2 4 6例患者中有 2 7例出现相应的症状后才应用。所有的患者均随访血 β hCG的变化 (术后第 1、 3、 7、 1 2天 )及相关并发症的出现。术后没避孕要求生育者 ,随访其再次妊娠情况。结果 ①术后 2 4h内应用MTX者 ,血 β hCG的值下降迅速 ,发生持续性异位妊娠者 4例 ,其中 3例手术。②没有在 2 4h内应用者 ,血 β hCG下降缓慢 ,其中有 2 7例发生了持续性异位妊娠 ,不同时间应用MTX后仍有 7例手术。③两组再次妊娠者中 ,宫内妊娠和异位妊娠的发生率相近。结论 术后 2 4h内预防性应用MTX者与没有在 2 4h内应用者相比 ,血 β hCG值下降迅速 ,术后发生持续性异位妊娠者数量少 。

氨甲喋呤(MTX)药物治疗异位妊娠30例临床分析

目的:探讨氨甲喋呤(MTX)药物治疗异位妊娠的疗效。方法:对30例异位妊娠进行临床分析。结果:30例中 治愈24例,治愈率为80.00％;失败6例,占20.00％。治疗成功与失败者治疗前血β-HCG水平差异有高度显著性(P<0.01)。 结论:氨甲喋呤(MTX)药物治疗异位妊娠的疗效是确切的,严格掌握适应症是治疗成功的关键。

CsA,MTX,MMF联合ATG预防非亲缘供者外周血造血干细胞移植后GVHD的疗效观察

本研究旨在探讨非亲缘供者外周血造血干细胞移植(URD-PBSCT)后的移植物抗宿主病(GVHD)预防方法、疗效及其对患者生存、复发的影响。对我院HLA高分辨相合或1个位点不合URD-PBSCT患者33例的临床资料进行总结,主要比较了不同GVHD防治方法下的GVHD发生率、疾病的复发率及患者的生存率。GVHD防治方法:环孢素A(CsA)+短疗程甲氨喋呤(MTX)+霉酚酸酯(MMF)+抗胸腺细胞球蛋白(URD-ATG组),其中13例加用CD25单克隆抗体(URD-ATG+CD25组)。结果显示,移植后所有患者100%植入,造血重建顺利。URD-ATG+CD25组、URD-ATG组急性GVHD的发生率分别为23.07%、45%%,慢性GVHD的发生率分别为0和47.4%,后者均显著高于前者(p<0.05);疾病的复发率分别为53.84%、15%,前者显著高于后者(p<0.05)。根据移植前患者疾病状态(稳定、进展)分层分析显示,进展期疾病的复发率显著高于稳定期(p<0.01),而URD-ATG+CD25组进展期疾病的复发率高达100%。URD-ATG+CD25组和URD-ATG组患者的1年总生存率(OS)分别为53.8%、75%;5年OS分别为38.5%、65%,URD-ATG组高于URD-ATG+CD25组(p<0.05);同时移植前疾病进展期患者的生存率显著下降。结论:在HLA相合或1个位点不合的URD-PBSCT中采用CsA+MTX+MMF+ATG的GVHD防治措施是安全可行的,对于进展期患者可考虑进一步减少ATG用量以减少复发,提高存活。

宫腔镜下输卵管插管注射MTX治疗输卵管妊娠疗效观察

目的探讨宫腔镜插管注药治疗输卵管妊娠的有效性。方法采用宫腔镜直视下输卵管插管一次性注射甲氨蝶呤(MTX)50mg,治疗输卵管妊娠。结果实验组较对照组血β-HCG转阴时间短,住院时间缩短,治愈率高,差异具显著性(P<0.05);输卵管通畅率差异无显著性。结论宫腔镜直视下输卵管插管注药治疗输卵管妊娠副反应少、成功率高、治疗时间短,方法简便可行,值得推广。

大剂量MTX治疗儿童ALL副作用防治研究

目的 研究大剂量甲氨蝶呤 (methotrexate,MTX)对急性淋巴细胞性白血病患儿的中枢神经系统白血病的预防 ,观察其毒副作用。方法 13例ALL患儿接受 5 7例次HD MTX (每次 3.0 g/m2 )治疗。经综合预防措施后 ,观察临床症状、体征和实验室指标 ,总结HD MTX的副作用发生种类、发生率及临床疗效。结果 13例ALL中 11例未发生CSNL ,2例治疗中出现CNSL ,经治疗后CR ,现仍处于CCR中。 13例平均CCR 31.8个月。结论 儿童对HDMTX耐受性好 ,HD MTX可以有效预防ALL的CNSL复发 ,提高长期无病生存率。

MTX药代动力学以及组织与全血浓度相关性研究

目的 研究MTX药代动力学以及组织与全血药物浓度相关性。方法 用30mg/m^2 MTX的给药剂量,在肿瘤病人体内研究其药代动力学过程,并对肿瘤局部血及外周血中的药物浓度进行了相关性比较,同时对该剂量下的药品不良反应作了观察。结果 用同30mg/m^2剂量MTX静脉滴注后,肿瘤病人体内药代动力学为一级动力学三房室模型。肿瘤局部与外周血药浓度有显著相关性。应用本剂量药品不良反应发生率较低。结论 治疗药物浓度监测可为临床治疗提供客观有效的数据,有指导意义,使用30mg/m^2剂量为一安全有效的治疗剂量。

MTX与米非司酮预防持续性异位妊娠的分析

目的 探讨用氨甲蝶呤 (MTX)及米非司酮用于预防腹腔镜下保守性手术后持续性异位妊娠 (PEP)的治疗效果。 方法 对 2 0 1例异位妊娠患者行腹腔镜下保守性手术 ,10 9例在残腔内注入MTX 2 0mg ,另 92例术后口服米非司酮 3 0 0mg。 结果 保守性手术中用MTX后PEP发生率为 0 .92 % ,而米非司酮组为 2 .17% ,差异不显著 (P >0 .0 5 )。术后第 1d两组血 β -HCG均有大幅度下降 ,下降率分别为 73 .3± 0 .16%和 5 0 .8± 0 .2 1% ,而两组间比较也有明显差异 ,术后 3、6、12d血 β -HCG下降两组间差异不显著。 结论 用MTX及米非司酮能成功预防腹腔镜下保守性手术后PEP的发生 ,副作用小 ,是腹腔镜保守手术治疗异位妊娠有效的辅助手段。

大剂量MTX不同给药方式治疗淋巴瘤的血药浓度与毒副反应研究

目的比较大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)不同给药方式(6 h和24 h持续静脉滴注)MTX血药浓度和毒副反应的区别,并探讨MTX滴注结束后24 h、48 h发生延迟排泄与临床毒副反应的相关性。方法筛选得到该院HD-MTX单药化疗NHL患者44例,共124例次。分别记录6 h给药组和24 h给药组MTX滴注结束后0、12、18、24、48 h的血药浓度和毒副反应,用SPSS进行数据统计分析。结果 6 h给药组0、12 h平均血药浓度分别为(304.88±137.67)、(4.93±4.39)μmol·L^(-1),明显高于24 h给药组(80.14±51.93)、(3.88±2.27)μmol·L^(-1)(P均<0.05)。6 h给药组发生白细胞、中性粒细胞下降,谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高例次数均少于24 h组(P<0.05)。滴注结束后48h延迟排泄与非延迟排泄比较,6 h给药组发生血红蛋白下降例次数增加(P<0.05);24 h给药组发生白细胞、中性粒细胞下降,谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高例次数增加(P<0.05)。结论 6 h给药方式预防和治疗淋巴瘤中枢转移更有优势;延迟排泄会加重毒副反应,可从相关代谢酶单核苷酸基因多态性方面进一步探讨。

超声引导下经腹局部注射MTX联合米非司酮治疗孕囊型切口妊娠的临床疗效评估

目的探讨超声引导下经腹孕囊内注射甲氨蝶呤(MTX)联合米非司酮(RU486)治疗孕囊型切口妊娠中的临床疗效及特点。方法利用穿刺针在超声引导下,对38例子宫切口区孕囊进行抽液,注入MTX治疗,术后口服米非司酮3天。比较手术成功病例术后第3、7、14、28天血β-hCG水平变化,术后第7、14及28天切口区病灶体积及周围血流变化情况。结果超声引导下孕囊内介入治疗孕囊型切口妊娠的治愈率为78.95%(30/38例),其中3例在术后出现阴道大出血,急诊行子宫动脉栓塞治疗;5例术后血β-hCG水平下降缓慢,后行超声引导下宫腔镜剥离术;26例术后第3天血β-hCG已经下降,27例第7天出现明显下降(≥50%),21例第14天血β-hCG水平转阴,第28天全部转为阴性。术后与术前病灶体积之间的差异无统计学意义(P>0.05);术后第28天病灶体积较术后第7天和第14天明显缩小(P<0.05)。术后病灶周边彩色多普勒血流信号较治疗前明显减少(P<0.01)。30例治愈病例中,18例宫内排出物中病理检测到滋养细胞,12例内未发现明确滋养细胞。结论超声引导下孕囊内注入MTX联合米非司酮治疗孕囊型切口妊娠是一种简单,安全、有效的临床治疗方法。

大剂量MTX治疗儿童急性淋巴性白血病的观察与护理

目的 :研究大剂量甲氨蝶呤 (HDMTX)治疗儿童急性淋巴性白血病的疗效。方法 :对 2 9例次急性白血病患儿行HDMTX化疗 ,观察其毒副作用及实施有效的护理。结果 :阻止了肿瘤细胞的生长 ,缓解了病情 ,延长了患儿的生存期。结论 :加强对应用HDMTX患儿的治疗与护理 ,是减少MTX毒副作用反应的主要措施。

MTHFR、TS联合作用与ALL患儿HD-MTX化疗毒副作用的关系

目的：探讨 MTHFR、TS基因多态性联合作用对ALL患儿HD-MTX化疗后不良反应的影响，以及与MTX血药浓度变化之间的关系；分析MTHFR、TS基因多态性联合作用在个体化治疗及疾病防治中的作用。方法 ALL患儿73例，提取其基因组DNA，PCR扩增后测序鉴定MTHFR C677T、MTHFR A1298C、TS 5’-UTR的基因型。观察所有ALL患儿HD-MTX化疗后的毒副作用，并监测MTX血药浓度。以Logistic 回归分析基因多态性与化疗毒副作用的危险度；采用Fisher精确概率法比较 HD-MTX 化疗后 MTHFR C677T、MTHFR A1298C、TS 的不同基因型之间42～48 h MTX血药浓度的差异，以P＜0.05为差异有显著性。结果（1）MTHFR677 CT／TT合并1298 AC／CC基因型者，其血红蛋白降低发生的风险下降了2.9倍，而黏膜损害发生的风险则增加了4.3倍，但差异均无显著性。（2）MTHFR1298 AC／CC合并TS 3R／3R基因型者，其发生黏膜损害的风险增加了5.4倍，差异有显著性（χ2＝4.911，P＝0.027）。（3）MTHFR677 CT／TT合并TS 3 R／3R基因型与HD-MTX化疗毒副作用的发生无关。（4）MTHFR677 CT／TT＋MTHFR1298 AC／CC＋TS 3 R／3 R基因型者，其黏膜损害发生的风险增加了7.5倍，且差异有显著性（χ2＝5.295，P ＝0.021）。结论 TS和MTHFRC677T基因多态性可与ALL患儿HD-MTX化疗后黏膜损害的发生有关。