MnSOD基因Val16Ala多态性与前列腺癌骨转移患者易感性的关系

目的探讨MnSOD基因Val16Ala多态性与前列腺癌骨转移患者易感性的关系。方法选择94例前列腺癌患者为研究对象。根据患者是否发生骨转移进行分组,将前列腺癌发生骨转移的患者作为骨转移组,将前列腺癌未发生骨转移的患者作为前列腺癌组。统计分析骨转移组与前列腺癌组患者临床资料(年龄、病程、TNM分期、体质量指数等)、两组MnSOD基因Val16Ala遗传平衡检验、MnSOD基因Val16Ala多态性分布以及携带不同基因型前列腺癌骨转移患者临床特征。结果骨转移组40例,前列腺癌54例。两组年龄、病程、TNM分期、体质量指数等临床资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。骨转移组和前列腺癌组MnSOD基因Val/Val、Val/Ala和Ala/Ala基因型实际频数和理论频数分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。骨转移组MnSOD基因Ala/Ala基因型、Ala等位基因频率高于前列腺癌组,Val/Val基因型频率、Val等位基因频率低于前列腺癌组(P<0.05)。MnSOD基因Val16Ala基因型与前列腺癌骨转移患者PSA、年龄以及Gleason评分无关(P>0.05);TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者Ala/Ala比例75.00%(18/24)显著高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。结论MnSOD基因Val16Ala多态性与前列腺癌骨转移患者易感性存在关系,可能存在促进前列腺癌发生骨转移的作用。

锰超氧化物歧化酶的催化原理与酶活性调节机制

锰超氧化物歧化酶(MnSOD)催化两分子超氧自由基歧化为分子氧和过氧化氢。超氧自由基被Mn~(3+)SOD氧化成分子氧的反应以扩散的方式进行。超氧自由基被Mn~(2+)SOD还原为过氧化氢的反应以快循环和慢循环两条途径平行进行。在慢循环途径中,Mn~(2+)SOD与超氧自由基形成产物抑制复合物,然后该复合物被质子化而缓慢释放出过氧化氢。在快循环途径中,超氧自由基直接被Mn~(2+)SOD转化为产物过氧化氢,快速循环有利于酶的复活与周转。本文提出温度是调节锰超氧化物歧化酶进入慢速或者快速循环催化途径的关键因素。随着在生理温度范围内的温度升高,慢速循环成为整个催化反应的主流,因而生理范围内的温度升高反而抑制该酶的活性。锰超氧化物歧化酶的双相酶促动力学特性可以用该酶保守活性中心的温度依赖性配位模型进行合理化解释。当温度降低时,1个水分子(或者OH~-)接近Mn、甚至与Mn形成配位键,从而干扰超氧自由基与Mn形成配位键而避免形成产物抑制。因此在低温下该酶促反应主要在快循环通路中进行。最后阐述了几种化学修饰模式对该酶的调节,说明锰超氧化物歧化酶受到多种形式的快速调节(变构调节与化学修饰)。这些快速调节直接改变酶的活化状态,进而调节细胞中超氧自由基和过氧化氢的平衡与流量,为揭示锰超氧化物歧化酶和超氧自由基的生理作用提供新理论。

浒苔中MnSOD和CAT基因克隆和表达分析

实验以大型绿藻浒苔为材料,克隆了其抗氧化系统关键酶锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)基因的部分片段,利用荧光定量PCR技术研究了Mn SOD和CAT对温度和水杨酸作用的响应规律。结果获得浒苔318 bp的Mn SOD基因,该Mn SOD推测的氨基酸序列与裂片石莼Mn SOD相似性最高为89%;获得了229 bp的CAT基因,该浒苔CAT编码氨基酸序列与裂片石莼和雨生红球藻CAT序列相似性分别为99%和93%。在利用M n SOD和CAT氨基酸序列构建的系统树中,浒苔均先与裂片石莼聚类,再与其他绿藻聚在一起。不同温度对浒苔Mn SOD和CAT基因表达影响表明,35℃高温培养对浒苔Mn SOD和CAT基因表达影响最显著,其表达量分别为25℃培养的2.18倍和2.05倍;5℃低温培养次之;而15℃与25℃培养对M n SOD和CAT基因表达影响差异不显著(P>0.05)。在高温35℃下,添加0.1 mmol/L水杨酸后Mn SOD和CAT基因表达量分别为各自对照的2.08倍和5.30倍,而0.01 mmol/L水杨酸添加后基因表达与对照差异不显著(P>0.05)。研究表明,Mn SOD和CAT基因表达的增强不仅是浒苔对高温胁迫的响应,而且也是水杨酸缓解高温对浒苔不利影响的方式之一。

罗氏沼虾胞质锰超氧化物歧化酶的功能

为了解超氧化物歧化酶(SOD)分子生物学特性和免疫功能,实验克隆了罗氏沼虾胞质锰SOD基因(MrcMnSOD),制备多克隆抗体,并分析在嗜水气单胞菌感染下该基因的表达模式。结果显示,嗜水气单胞菌感染可显著诱导MrcMnSOD在转录水平和蛋白质水平进行高表达。为探究MrcMnSOD参与免疫应答的机制,进一步的抑菌实验表明,该蛋白质可显著抑制3种革兰氏阴性细菌(大肠杆菌、副溶血性弧菌、嗜水气单胞菌)和2种革兰氏阳性细菌(无乳链球菌、金黄色葡萄球菌)的生长,且抑制作用与蛋白质浓度的关系不显著。研究表明,MrcMnSOD可能作为一种免疫相关分子参与免疫应答反应。本研究初步探讨了MrcMnSOD的免疫生物学功能,旨在为深入研究罗氏沼虾SOD的功能奠定相关基础。

紫杆柽柳MnSOD基因在非生物胁迫中的作用

构建了酵母表达载体pYES2-MnSOD,并将其转入酿酒酵母INVSc1,以转空载体pYES2的酵母INVSc1为对照,检测其抗NaCl、Na_2CO_3、NaHCO_3和紫外线胁迫能力。结果表明,转MnSOD基因酵母在以上逆境因素胁迫下的存活率有明显提高,说明MnSOD基因具有较强的抗NaCl、Na_2CO_3、NaHCO_3和紫外线胁迫能力。

MnSOD模拟化合物诱导人白血病多药耐药K562/ADM细胞凋亡

目的:研究锰超氧化物岐化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxi dedismutase,MnSODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:以人白血病高表达耐药基因(mdr1)的K562/ADM多药耐药细胞为靶细胞,应用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性;光学显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化;Annexin V/PI双标记法检测K562/ADM细胞凋亡。结果:(1-50)mg/LMn-SODm可抑制K562/ADM细胞增殖(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性。MnSODm诱导48h后,K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学改变;Annexin V/PI双染显示凋亡细胞显著增高。结论:MnSODm体外明显抑制人白血病K562/ADM耐药细胞的增殖,并诱导K562/ADM细胞凋亡。

MnSOD的基因多态性与抗结核药物性肝损害关系的研究

目的研究药物代谢酶锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的基因多态性与抗结核药物肝损害的关系,阐明抗结核药物诱导肝损害的分子机制。方法通过聚合酶链反应-直接测序(PCR-DS)方法分析101例有抗结核药物性肝损害的结核病患者(病例组)及107例无抗结核药物性肝损害的结核病患者(对照组)的MnSOD的基因多态性,并分析它们与抗结核药物性肝损害之间的关系。结果与MnSOD编码基因47位碱基T/T基因型(OR:0.68,P>0.05)、T/C基因型(OR:1.03,P>0.05)比较,47位碱基C/C基因型患者更易发生抗结核药物性肝损害,OR值为5.77(P<0.05)。结论 MnSOD编码基因的47位碱基CC基因型有可能是发生抗结核药物性肝损害的易感基因。

MnSOD基因表达调控的研究进展

MnSOD是生物体内重要的氧自由基清除剂,具有抗氧化和抗肿瘤作用。MnSOD基因的表达调控是一个复杂的过程,多种转录因子、细胞信号分子和细胞信号通路参与其中。MnSOD基因的表达调控包括转录调控、转录后调控和翻译调控3个方面。转录调控是MnSOD基因表达调控的第一个层次,在MnSOD基因表达的过程中起重要作用。它主要是通过调节与MnSOD基因转录相关的转录因子活性来实现的,例如特异蛋白-1(SP-1)、激活蛋白-2(AP-2)、激活蛋白-1(AP-1)、核因子-卡巴B(NF-κB)等。药物和金属离子就是通过改变这些转录因子的活性来调控MnSOD基因表达的,另外某些基因的突变和缺失也能改变这些转录因子的活性。转录后调控主要体现在改变mRNA的稳定性或mRNA的翻译上。翻译调控则是对MnSOD多肽的编辑、修饰并与相应的金属离子结合及定位的调控。近年来发现了一种线粒体MnSOD的锰转运因子,它对MnSOD活性的调控起重要作用。文章综述了这一研究领域的一些进展,着重讨论了MnSOD基因的转录调控和翻译调控,并展望了MnSOD基因表达调控的研究方向。

柽柳MnSOD基因的克隆及功能验证

根据已克隆得到的柽柳MnSOD基因片段,采用RACE技术从柽柳中获得MnSOD的cDNA全长序列。该基因全长为1087bp。其中,5'非编码区40bp,3'非编码区333bp,开放读码框(ORF)长699bp,编码232个氨基酸。分子量为26KD,等电点为7.10。该MnSOD氨基酸序列与拟南芥MnSOD序列同源性最高为83%,从12个物种的序列比对可以看出MnSOD氨基酸序列保守性较高。该序列的Genbank注册号为AY573576(基因)和AAS77885(蛋白)。将MnSOD基因与酵母表达载体pYES2连接,并进一步转化到酵母基因组中。对重组酵母INVSc1(pYES2-SOD)和对照INVSc1(pYES2)进行干旱、高温胁迫实验。结果表明:重组酵母的抗干旱、高温能力明显高于对照,证实了来源于柽柳的MnSOD基因具有抗干旱和耐高温能力。

烟草MnSOD基因在保定苜蓿中的转化

通过农杆菌介导的转基因方法 ,将烟草MnSOD基因的cDNA序列导入保定苜蓿中 ,成功地诱导了转基因植株的再生。转基因植株生长和发育良好 ,NPTⅡ基因和MnSOD基因的PCR检测和Southern杂交表明MnSOD基因已经导入到保定苜蓿的再生植株中 。

腺病毒介导MnSOD转染对肺癌细胞生长及体内抗肿瘤作用的影响

目的研究腺病毒介导锰超氧化物歧化酶(Ad-MnSOD)对肺腺癌细胞生长影响及在体内抗肿瘤作用。方法应用细胞基因转染、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),观察Ad-Mn-SOD转染A549细胞后对肺癌A549细胞生长的影响,并将A549细胞接种到裸鼠皮下后,注射Ad-MnSOD及Ad-LacZ到瘤体内,观察对肿瘤生长的影响。结果50MOI Ad-Laze转染率达90%以上,Ad-MnSOD转染A549细胞后MnSOD mRNA表达增加,MTT法检测显示转染Ad-MnSOD A549细胞组生长率(78.7%)低于转染Ad-LacZ的对照组(92.2%);A549细胞接种裸鼠后,用Ad-MnSOD及Ad-LacZ分别注射于瘤体内,Ad-MnSOD组瘤体生长速度低于Ad-LacZ对照组。结论Ad-MnSOD转染A549细胞后MnSOD可明显抑制A549细胞生长及肿瘤在裸鼠体内的生长,MnSOD对肺癌细胞A549有明显抗肿瘤作用。

MnSOD模拟化合物通过线粒体途径诱导K562/ADM细胞凋亡

目的:观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(Mn-SODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制.方法:采用AnnexinV/PI双标记和细胞形态学法检测K562/ADM细胞凋亡;流式细胞术(FCM)检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm),细胞色素C(Cytc)含量和释放Caspase-3活性变化.结果:10,50mg/LMnSODm处理K562/ADM细胞后,AnnexinV/PI染色显示凋亡细胞明显增多,凋亡率分别为85.1%,96.8%;光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;FCM检测发现Bcl-2蛋白表达下调32%～73%,Bax蛋白表达增高4～10倍;线粒体Δψm释放降低35%～52%;Cytc含量增高28%～75%;Caspase-3活性增强5.1～6.4倍.结论:MnSODmke可抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达,并通过线粒体途径诱发K562/ADM耐药细胞凋亡.

MnSOD 9Ala/Val基因多态性与冠心病的关系

目的探讨锰超氧化物歧化酶9 Ala/Val(MnSOD9 Ala/Val)基因多态性与冠心病、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)活性以及丙二醛(MDA)浓度的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测262例冠心病患者和100例对照组的MnSOD9 Ala/Val基因多态性的基因型,采用比色法测定血浆T-SOD、MnSOD活性以及MDA浓度。结果与对照组比较,冠心病患者的血浆T-SOD和MnSOD活性[(23.61±16.51)U/ml与(44.01±22.68)U/ml,P<0.001和(21.56±13.11)U/ml与(28.79±8.65)U/ml,P<0.001]明显降低,MDA浓度显著增高[(2.47±0.73),(2.15±0.55)nmol/ml,P<0.01];冠心病患者的MnSOD 9 AA基因型和A等位基因频率较对照组明显增多(64.2%与43.0%,P=0.001和80.0%与67.0%,P=0.014);MnSODAA基因型的MnSOD活牲较VV基因型明显降低[(22.87±13.47)与(32.04±9.19)U/ml,P<0.01)];MnSOD与MDA负相关(r=-0.15,P<0.01)。结论冠心病患者的血浆T-SOD和MnSOD活性明显降低,MDA浓度显著增高;MnSOD 9 Ala/Val基因多态性AA基因型的血浆MnSOD活性降低。

拟南芥MnSOD的原核表达、纯化及抗体制备

PCR扩增拟南芥MnSODcDNA的保守区段,构建pET-SOD重组质粒,转化大肠杆菌JM109穴DE3雪,IPTG诱导融合蛋白高效表达;经检测表达产物占菌体总蛋白的69%,且以不溶的包涵体形式存在;表达产物变性后经Ni-NTASuperflow亲和柱分离纯化,得到相对分子质量约为29000的PAGE纯蛋白。融合蛋白经还原复性处理后,比活达到200U/mg;免疫家兔制备MnSOD融合蛋白抗体,抗体效价为1∶10000。以上结果为进一步大规模制备MnSOD及其功能研究奠定基础。

MnSOD在非小细胞肺癌组织的表达及意义

目的 研究锰超氧化物歧化酶 (MnSOD)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤生物学特征的关系。方法 采用免疫组化法 (ABC法 )对 5 0例NSCLC和 15例远离肿瘤的正常肺组织中MnSOD蛋白的表达状况进行检测 ,分析其在NSCLC和正常肺组织中表达以及与肿瘤大小、病理分级、组织学类型、淋巴结转移及临床分期的关系。结果 MnSOD在正常肺组织表达阳性率 (10 0 % ) ,在NSCLC组织中表达阳性率为 70 % ,较正常肺组织明显降低 (P <0 .0 5 ) ;MnSOD阳性表达率与肿瘤T分期有关 ,T3～ 4组MnSOD表达阳性率 4 7.83% ,明显低于T1～ 2 组阳性表达率 88.89% (P <0 .0 5 ) ,而与病理分级、细胞类型、临床分期临床分期及有无淋巴结转移无关。结论 NSCLC肿瘤组织中MnSOD表达阳性率明显低于正常肺组织MnSOD表达阳性率 ,在NSCLC病人MnSOD表达阳性率T3～ 4组明显低于T1～ 2 组 ,提示MnSOD在肺癌发生发展中可能起抑制样作用 ,并可用于判断NSCLC生长侵袭能力。

MnSOD基因多态性与常熟地区抗结核药致肝损害的关系

目的:研究锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,MnSOD)基因上的rs4880和rs5746136位点与抗结核药致肝损害(antituberculosis drug-induced liver injury,ATLI)的相关性。方法:基于常熟地区抗结核治疗人群,采用1∶2匹配病例对照研究设计。应用TaqMan SNP Genotyping系统对rs4880和rs5746136进行基因分型,并使用条件Logistics回归分析SNP位点与ATLI发生的关系。结果:共纳入ATLI病例50例以及年龄、性别和初复治与之匹配的对照组100例。在调整体质量和预防性保肝等因素后,rs4880和rs5746136位点的基因型分布及等位基因频率与ATLI的发生均无统计学关联(P>0.05)。同时对两个位点采用显性、隐性、加法模型以及单倍型进行分析,也未见两者间存在统计学联系(P>0.05)。结论:在常熟地区抗结核治疗人群中,未能发现rs4880和rs5746136基因多态性与ATLI的发生存在关联。

MnSOD过表达对t-BHP诱导间充质干细胞凋亡的保护作用

通过重组慢病毒系统感染人间充质干细胞(mesenchymal stromal cells,MSCs),建立了能够稳定、高效表达锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的细胞株MnSOD-MSCs.从胎儿肝脏组织克隆MnSOD基因,构建重组慢病毒MnSOD的表达载体,感染MSCs.根据荧光表达进行流式分选,获得能够继续稳定传代的高表达MnSOD基因的MSCs,RT-PCR和Western blot结果证实细胞株中的MnSOD基因稳定高表达.用不同浓度的第三丁基过氧化氢(t-BHP)处理细胞,通过CCK-8法检测细胞的存活率,SA-β-gal染色观察细胞的衰老情况,流式细胞技术分析细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR分析p53和p53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)的表达.结果发现,MnSOD过表达可提高细胞的存活率,抑制细胞的凋亡,SA-β-gal染色阳性率降低,且p53和PUMA表达下调.这提示MnSOD过表达对t-BHP诱导的细胞凋亡具有保护作用.

一步3′RACE快速构建鸡MnSOD全长cDNA克隆

将触减PCR与3′cDNA末端快速扩增(rapidamplificationofcDNAends,RACE)技术进行结合,仅用一条特异性引物和一条通用引物,成功地实现了从3′末端cDNA库对鸡含锰超氧化物歧化酶(manganese-containingsu peroxidedismutase,MnSOD)全长cDNA的一步3′RACE快速构建。与常规使用的末端PCR或亚克隆方法相比,该法具有快速、省时、经济和特异性好的优点。

柽柳MnSOD基因(英文)

在环境胁迫下,植物体内活性氧(ROS)的大量积累会对其本身产生毒害作用。SOD酶在清除这些活性氧化酶机制中发挥关键作用。大量研究表明,MnSOD可有效增强转基因植物抵抗氧化胁迫的能力。我们从抗逆性较强的木本植物紫杆柽柳中克隆到一个新的MnSOD基因,并将该全长基因在GenBank上注册,其登录号分别为AY573576(基因序列)和AAS77885(氨基酸序列)。这将为研究木本植物的抗逆机理和该酶在抗逆基因工程中的应用奠定基础。

萘胁迫下秋茄MnSOD基因和C4H基因的实时定量表达分析

研究首次探讨了萘胁迫下红树植物秋茄不同组织C4H基因和MnSOD基因的表达特征。研究结果表明,两个基因在叶茎根中的表达量有明显的差异,C4H基因在叶茎中的表达量明显大于根,MnSOD基因的表达量为叶最大,茎次之,根最小。在5个不同浓度的萘胁迫下,C4H基因和MnSOD基因的表达普遍被诱导,转录水平都随着处理浓度的升高而增强,而且在叶组织中的表达量和萘处理浓度表现出明显的相关关系,相关系数分别达到0.846和0.902(p<0.05),而在根和茎中并不具有显著的相关关系。在萘胁迫下秋茄叶子是最敏感的部位,而C4H基因和MnSOD基因在叶子中的表达量则为指示萘胁迫强度的良好生物学指标。