微小杆菌NOS基因密码子偏好性分析

对微小杆菌NOS基因密码子偏好性进行分析,为后续NOS基因的功能验证及遗传转化等研究提供理论依据。研究表明:微小杆菌NOS基因的密码子偏好性较弱,偏好使用G/C结尾的密码子;比较分析不同细菌NOS基因的密码子偏好性参数,发现不同细菌NOS基因密码子偏好性存在一定差异,整体看,放线菌NOS基因密码子偏好性比蓝藻,厚壁菌门强;与其他细菌NOS基因的CDS序列及RSCU值聚类分析表明,微小杆菌NOS基因与放线菌NOS基因表现出相近的密码子使用偏好性;中性绘图、PR2-plot和ENc-plot分析均表明,自然选择是影响NOS基因密码子偏好性形成的主要因素;与7种模式生物的基因组密码子使用频率比较发现,在异源转化受体选择中,大肠杆菌原核表达系统较酵母菌真核表达系统更适合微小杆菌NOS异源表达,常见5种作物均可作为微小杆菌NOS基因的遗传转化受体,其中水稻更理想。本研究初步揭示了微小杆菌NOS基因密码子使用规律,对后续开展基因功能验证有重要的指导作用,同时也可为生物一氧化氮合成酶进化提供一定科学依据。

急性脑梗死患者血浆Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF的变化及意义

目的探讨血浆生物标志物检查诊断急性脑梗死患者的特异性和敏感度,以辅助临床诊断和病情随访。方法分别测定150例急性脑梗死患者(观察组)和50例健康查体者(对照组)的血浆同型半胱氨酸(Hcy)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、可溶性血栓调节蛋白(s TM)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及血管性假血友病因子(v WF)水平。结果观察组血浆Hcy、e NOS、s TM、hs-CRP、v WF水平均显著高于对照组(P均<0.05)。根据ROC曲线得出当Hcy临界值为9.11μmol/L时诊断急性脑梗死的敏感性为95.2%、特异性为76%,e NOS临界值为437.30μmol/L时诊断的敏感性为79%、特异性为96%,s TM临界值为7.43μmol/L时诊断的敏感性为75.2%、特异性为96%,hs-CRP临界值为3.38 mg/L时诊断的敏感性为81.9%、特异性为90%,v WF临界值为194.85 ng/m L时诊断的敏感性为75.2%、特异性为80%。结论血浆Hcy、e NOS、s TM、hs-CRP、v WF水平可作为急性脑梗死诊断的辅助指标。

大气细颗粒物(PM_(2.5))对心血管内皮细胞NOS的影响

运用体外试验方法,探讨了大气细颗粒物的心血管毒性及其可能的作用机制.采集上海城区大气中的PM2.5,并以0.01、0.05、0.2、1mg·mL-1剂量染毒大鼠心血管内皮细胞24h后,观察PM2.5对心血管内皮细胞内总NOS,iNOS及cNOS活力等指标的影响.发现与对照组相比,0.2mg·mL-1染毒组的心血管内皮细胞总NOS和iNOS活力显著增加,而cNOS活力显著降低,并且随着PM2.5染毒剂量的增加,存在剂量反应关系.这一结果表明,PM2.5可通过诱导心血管内皮细胞的iNOS活性,对心血管系统产生氧化应激损伤,氧化应激作用可能是PM2.

异丙酚抑制炎性痛大鼠脊髓NOS神经元的c-fos表达

用福尔马林致痛模型、c fos基因免疫组织化学法和NADPH d组织化学技术 ,研究大鼠脊髓结构对福尔马林痛刺激的反应及异丙酚在其调节过程中的影响。结果表明 ,福尔马林痛刺激后 ,刺激侧脊髓背角出现大量Fos免疫样阳性神经元 ,其中部分为FLI/NOS双标记神经元 ;痛刺激之前或之后给予异丙酚 ,背角各层FLI神经元和FLI/NOS双标记神经元的数量均显著减少 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;单纯腹腔注射异丙酚或生理盐水 ,脊髓未见或偶见FLI神经元。上述结果提示

针刺对拟血管性痴呆大鼠脑内NO、NOS及血液流变学影响的实验研究

目的:建立拟血管性痴呆(VD)的动物模型,探讨针刺对VD大鼠模型的学习记忆行为、脑内NO含量、NOS活性及VD大鼠血液流变学的影响。方法:选用纯系健康雄性Wistar大鼠36只,随机分成假手术组、模型组、针刺组和西药对照组,采用2-血管阻断法(2-VO)制作VD大鼠模型。在大鼠“百会”“大椎”穴行针刺治疗。检测VD大鼠穿梭箱实验成绩,比色法检测脑组织NO含量、NOS活性,并检测VD大鼠的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积及纤维蛋白原浓度。结果:数据经统计学处理表明,针刺“百会”“大椎”穴可明显减少模型大鼠在穿梭箱实验中的电击次数和电击时间(P<0.01);降低脑组织内NO的含量及NOS活性(P<0.05);可使VD大鼠的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积及纤维蛋白原浓度降低(P<0.05,0.01)。结论:针刺能改善VD大鼠的学习记忆能力,降低脑组织内NO的含量及NOS活性,改善VD大鼠的血液流变学状态,从而改善大脑的血液供应,促进智能的恢复。

藏鸡高海拔适应与肺组织NOS活力的研究

为研究藏鸡高海拔适应机制，本试验测定了藏鸡和低地鸡种在高海拔环境饲养时的右心指数，分析了海拔和品种对鸡肺组织一氧化氮合酶（NOS）活力的影响。结果表明在高海拔环境中。藏鸡的右心指数平均为22．91％，在正常范围内；而对照的矮小隐性白（D）和寿光鸡（S）右心指数分别为28．8096和29．89％，表现不同程度的右心增大；藏鸡肺组织NOS活力明显高于低地鸡，特别是在高海拔环境中差异更加显著，比低地鸡高35％～118%。藏鸡NOS活力较高可能是藏鸡在高海拔环境右心指数保持正常的原因．是高海拔适应生理特征之一。

丹参素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织iNOS、NOS、NO的影响

目的:观察丹参素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织iNOS、NOS、NO的影响并探讨其脑保护作用机制。方法:将78只SD新生大鼠随机分成假手术组(n=6),缺氧缺血模型组(n=18),丹参素低剂量组(n=18),丹参素中剂量组(n=18),丹参素高剂量组(n=18)。通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型。假手术组不进行缺氧缺血处理。丹参素各治疗组按低、中、高剂量分别于造模后0、24h两个时点按15,30,60mg·kg-1腹腔注射用生理盐水稀释至0.5mL的丹参素注射液。缺氧缺血模型组及假手术组于相应时点腹腔注射生理盐水0.5mL。假手术组于缺氧缺血后6h,缺氧缺血模型组与各丹参素治疗组于缺氧缺血后6,24,48h断头取脑,测定脑组织匀浆iNOS、NOS、NO浓度。结果:与假手术组比较,缺氧缺血模型组新生大鼠大脑中iNOS在缺氧缺血后6h时变化不大;而在缺氧缺血24h后升高,应用丹参素治疗后回降,呈一定的量效关系,差异有统计学意义(P<0.05);NOS及NO在缺氧缺血后6,24,48h均升高,应用丹参素治疗后回降,且呈一定的量效关系,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:丹参素能抑制nNOS、iNOS的产生,从而减少过高的NO的产生,而发挥对新生鼠HIBD时脑的保护作用。

针刺对大鼠胃肠肌间神经丛NO能神经元的影响

目的和方法 利用大鼠不规则进食的方法造成胃电节律失常的模型 ,模拟临床功能性消化不良的情况 ,通过针刺足三里和胃俞后观察胃肠肌间神经丛 NO能神经元数量和灰度的变化来研究针刺作用的机理。结果 针刺组与模型组相比神经元的密度下降 ,灰度值上升 ,而对上段小肠的影响不明显。结果 针刺足三里和胃俞穴可以使胃内 NOS的活性恢复到正常水平 ,有利于胃肠道功能的恢复。

大骨节病患者血清NO、NOS、sFas/APO-1检测分析

目的探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、可溶性Fas(sFas)诱导大骨节病发生发展的作用与特点,为大骨节病防治研究提供新的思路。方法选择陕西省永寿县、榆林市榆阳区大骨节病区与咸阳市渭城区非大骨节病区120例调查对象,分为成人、儿童大骨节病组;成人、儿童病区对照组;成人、儿童非病区对照组,每组20例,平均年龄、性别无差别。用酶还原法检测了血清NO,化学比色法检测了血清NOS、iNOS,ELISA法检测了血清sFas水平。结果①大骨节病成人组血清NO、iNOS显著高于病区和非病区成人对照组(P< 0.05);血清NOS、sFas/APO鄄1水平高于非病区成人对照组(P< 0.005)。②大骨节病儿童组血清NO高于非病区儿童对照组(P< 0.05);血清NOS、iNOS均高于病区和非病区儿童对照组(P< 0.005)。结论儿童大骨节病发生发展中NO诱导途径起一定的作用,而Fas途径作用不明显。当疾病发展到成人大骨节病时,二者均起一定作用。

补充NO前体L-Arg对耐力训练大鼠疲劳状况的影响

目的 :(1)观察耐力运动和补充外源性NO前体L -Arg(左旋精氨酸 )对机体各组织NO生成能力的影响 ;(2 )观察补充外源性NO前体L -Arg对机体运动疲劳状况的影响。方法 :将 30只SD大鼠随机分成安静组、运动对照组和运动用药组 ,运动组大鼠进行 4周跑台耐力训练和一次力竭运动 ,其中运动用药组每天给予 4 0mg每kg体重L -Arg灌胃 ,测定了力竭运动后即刻大鼠组织NO生成能力以及血清生化指标的变化。结果 :(1)所有运动组大鼠血清、肌肉、心肌、肝脏NOS活性均有升高趋势 ,尤其以血清、心肌和肝脏的升高具有显著性意义 ;(2 )运动用药组大鼠血清血尿素 (BUrea)、谷丙转氨酶 (ALT)、乳酸脱氢酶 (LDH)均较运动对照组有升高趋势。结论 :(1)补充外源性L -Arg对机体整体生成NO的能力 ,尤其是心脏等器官生成NO的能力可能有促进作用 ;(2 )补充外源性NO前体L

甲状腺素对大鼠阴茎海绵体内NOS及CO含量影响的研究

目的:建立甲状腺功能亢进及甲状腺功能减退Wistar大鼠动物模型,检测其阴茎海绵体内NOS及内源性一氧化碳(CO)的含量,探讨甲状腺素对大鼠勃起功能的影响及内源性CO在阴茎海绵体勃起过程中的作用,进一步讨论甲状腺素对人类勃起功能的影响。方法:将50只3月龄雄性Wistar大鼠随机均分为甲亢组、甲亢治疗组、甲减组、甲减治疗组及正常对照组。用紫外分光光度计分别测定阴茎海绵体内NOS及CO的含量。结果:无论甲状腺素增多及减少都会使大鼠阴茎海绵体NOS含量降低(P<0.01),并且甲减组阴茎海绵体内NOS活性低于甲亢组(P<0.01)。无论甲状腺素增多还是减少都会使大鼠阴茎海绵体内CO含量降低(P<0.01),并且甲亢组阴茎海绵体内CO活性低于甲减组(P<0.01)。在对甲减组及甲亢组进行治疗后其CO及NOS的含量得到提高,与正常对照组无显著差异(P>0.05)。结论:甲状腺功能紊乱情况下阴茎海绵体中NOS和CO的浓度均减低;甲状腺功能紊乱被及时纠正后阴茎海绵体中CO及NOS的含量可恢复到正常水平。在相同条件下甲状腺功能低下对性功能的损害强于甲状腺功能亢进对勃起功能的损害。

急性一氧化碳中毒后迟发性脑病患者血清NO与NOS水平及其临床意义

目的探讨血清一氧化氮(nitric oxide,NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthsae,NOS)的水平及其动态变化与急性一氧化碳中毒后迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACMP)患者病情变化的关系。方法应用比色法(colorimetric method)动态测定31例DEACMP患者血清NO及NOS水平,并与30例急性一氧化碳中毒(acute carbon monoxide poisoning,ACMP)后未发生迟发脑病患者和30例正常对照进行比较。结果 DEACMP患者急性期血清NO及NOS水平[(62.67±14.39)μmol/L,(27.68±6.14)U/mL]明显高于正常对照组[(50.18±9.95)μmol/L,(20.88±6.32)U/mL](均P<0.05),与ACMP组急性期[(62.00±16.46)μmol/L,(28.13±5.23)U/mL]比较无统计学差异(均P>0.05);DEACMP患者恢复期血清NO及NOS水平[(54.66±11.73)μmol/L,(21.74±5.88)U/mL]明显低于急性期(均P<0.05),与ACMP组随访期[(52.79±11.22)μmol/L,(20.64±5.92)U/mL]比较无统计学差异(均P>0.05)。结论 NO-NOS系统参与了DEACMP的发病机制,NO-NOS水平变化与病情变化基本一致。

硫喷妥钠麻醉前后鼠脑NOS活性、NO的动态变化

目的 动态观察硫喷妥钠对大鼠不同脑区NOS活性、NO的影响 ,探讨硫喷妥钠的全麻作用机制。方法 ♂SD大鼠 40只 ,按麻醉不同时期随机分为 5组。分别在腹腔注射 (ip) 10ml·kg-1生理盐水 5min后 (对照组 ) ,ip硫喷妥钠 30mg·kg-12min后、翻正反射消失前 (诱导期组 ) ,翻正反射消失后 5min(麻醉期组 ) ,翻正反射刚恢复、尚未完全清醒时 (恢复期组 ) ,动物完全清醒后 (清醒期组 ) ,断头取脑。用还原酶法测定大脑皮层、脑干的NOS活性和NO。结果 与对照组比较 ,硫喷妥钠 30mg·kg-1使皮层、脑干的NOS活性在诱导期即降低 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;麻醉期进一步降低 ;恢复期开始恢复 ,但仍低于对照组 (P <0 0 5 ) ;清醒期基本恢复到对照水平。皮层、脑干的NO在诱导期即降低(P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;麻醉期进一步降低 ;恢复期开始恢复 ,但仍低于对照组 (P <0 0 5 ) ;清醒期基本恢复到对照水平。结论 硫喷妥钠 30mg·kg-1能明显影响大鼠脑NOS活性和NO ,表明NO可能在硫喷妥钠的全麻分子学机制中发挥重要作用。

补肾法对冠心病心绞痛NO、NOS、SOD的影响

目的:观察补肾法对冠心病心绞痛患者NO、NOS、SOD的影响。方法:应用补肾法治疗冠心病心绞痛60例,以单硝酸异山梨酯作为对照,服药前后记录NO、NOS、SOD、心绞痛症状、心电图ST-T改变、动态心电图缺血性ST-T改变的时间、血液流变学和血脂的情况。结果:补肾中药治疗后,NO、NOS、SOD明显升高。NO(μmol/L)由46.74±8.41改善为72.35±13.10,NOS(u/ml)由1.69±0.22改善为2.28±0.31,SOD(u/ml)由45.26±5.49改善为62.46±8.24,心绞痛总有效率为95%,心电图改善总有效率为70%,动态心电图缺血性ST-T改变的时间(min)由132.26±16.56改善为38.32±5.46,与对照组相比,有明显差异(P<0.05)。结论:补肾法治疗冠心病心绞痛疗效明显,能升高NO、NOS、SOD,且没有毒副作用。

补充NO前体L-Arg对耐力训练大鼠骨骼肌NOS基因表达的影响

目的 :(1)观察耐力运动和补充外源性NO前体左旋精氨酸 (L -Arg)对骨骼肌不同亚型NOS基因表达的影响 ;(2 )观察耐力运动和补充外源性NO前体L -Arg对骨骼肌NO生成能力的影响。方法 :将 30只SD大鼠随机分成安静组、运动对照组和运动用药组 ,进行 4周跑台耐力训练和一次力竭运动 ,其中运动用药组每天给予 4 0mg每千克体重L -Arg灌胃 ,测定力竭运动后即刻大鼠股外肌两种亚型NOS基因表达水平、NOS活性和NO浓度的变化。结果 :(1)运动大鼠股外肌cNOS与iNOS基因表达均显著升高 ,但运动用药组与运动对照组无显著差异 ;(2 )运动大鼠股外肌NOS活性与安静组相比均有升高 ,但无显著性意义。以上结果表明 :(1)耐力性运动能够使大鼠骨骼肌中的cNOS与iNOS基因表达上调 ,小剂量的外源性NO前体L -精氨酸对其表达的调节无明显影响 ;(2 )小剂量外源性L

染铅对大鼠脾脏NOS、NO、SOD、MDA的影响

目的 探讨染铅对大鼠脾脏一氧化氮合酶 (NOS)活力、一氧化氮 (NO)含量的影响及其与血铅相互关系。方法 Wistar大鼠经饮水 (加 0 ,18 4 ,184 0mg/L醋酸铅 ,分别供对照组、低剂量组、高剂量组自由饮用 )染毒 ,测定脾脏NOS活力、NO含量、SOD活力、MDA含量。结果 NOS活力高剂量染铅组 7d时显著低于对照组和低剂量组 (P <0 0 5 ) ,90d高于对照组和低剂量组 (P <0 0 5 ) ,低剂量组 90d高于对照组 (P <0 0 5 ) ;NO含量高剂量组和低剂量组 6 0d、 90d时均显著低于对照组 (P <0 0 5 ) ;SOD活力高剂量组 14d、 30d、 6 0d、 90d时均低于对照组 (P <0 0 5 ) ,低剂量组 30d、 90d时显著低于对照组(P <0 0 5 ) ;MDA含量高剂量组 14d、 6 0d、 90d时均显著高于对照组 ,6 0d时显著低于低剂量组 ,90d时显著高于低剂量组 (P <0 0 5 ) ,低剂量组在各时点与对照组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。血铅与脾脏NO含量呈倒S型剂量 -效应曲线 ;血铅与脾脏SOD活力呈倒抛物线型剂量 -效应曲线 ;血铅与脾脏MDA含量呈正抛物线型剂量 -效应曲线。结论 铅可引起大鼠脾脏NOS活力、NO含量、SOD活力、MDA含量改变 ,表明铅可引起体内氧应激反应导致脂质过氧化损伤。

大鼠创伤性脑损伤后细胞凋亡及NOS阳性细胞的变化

目的 :探讨大鼠创伤性脑损伤后不同时相皮质、海马、隔区细胞凋亡及NOS、ChAT阳性细胞的变化。方法 :采用大鼠自由落体脑损伤模型 ,伤后 1、2、3、4、5、7、10d取脑切片 ,经Nissl染色 ,用TUNEL法检测细胞凋亡 ,NADPH d组化染色观察NOS阳性细胞 ,ChAT免疫组化染色观察隔区ChAT阳性细胞。结果 :Nissl染色可见损伤侧海马CA2、CA3区锥体细胞层细胞消失或紊乱。损伤区周围皮质凋亡细胞伤后 3d达到高峰 ;损伤侧海马凋亡细胞伤后 5d达到高峰 ;损伤侧隔区凋亡细胞 7d达到高峰。正常侧上述脑区各时相点均未见到凋亡细胞。损伤区周围皮质、损伤侧海马和隔区iNOS阳性细胞数量明显增加。损伤侧隔区ChAT阳性神经元也明显减少。结论 :大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围皮质和损伤侧海马、隔区细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。

电针对慢性神经源性痛大鼠痛行为反应和脊髓背角NOS的影响

目的:观察慢性神经源性痛时的痛行为反应和脊髓背角NOS活性变化以及电针对它们的影响作用。方法:SD大鼠72只分为对照组(n=24,假手术)、模型组(n=24,手术)、电针组(n=24,手术+电针)。慢性神经源性痛模型参照Mosconi氏的大鼠坐骨神经慢性压迫法制作。电针取“环跳”和“阳陵泉”穴区。痛阈测定采用热辐射测痛法,分别于术后第2、4、7、14、28 d进行实验观察,NOS活性观察用NADPH-d酶组织化学法。结果:慢性神经源性痛时,大鼠抬腿潜伏期(痛阈值)降低,经多次电针后,随着电针次数的增加抬腿潜伏期也逐渐升高(P<0.05)。脊髓背角的NOS活性,慢性痛大鼠明显降低,电针后又明显回升(P<0.05)。结论:慢性神经源性痛时,热痛敏的行为学表现与NOS活性的下调变化相一致,而电针对慢性神经源性痛的抑制及对脊髓背角NOS活性的表达升高有一定的作用。

脑缺血后脑组织NO含量和NOS活性变化及三七总皂甙的影响

为了探讨一氧化氮 (NO)在缺血神经元坏死中的作用机制及三七总皂甙 (PNS)是否通过影响NO的变化而起脑保护作用。 方法 用栓线法建立大鼠局灶性脑缺血模型 ,测定脑缺血后不同时间脑组织NO含量和一氧化氮合成酶 (NOS)活性变化及PNS对其的影响。 结果 缺血后 3 0分钟脑组织NO含量和NOS活性均显著升高 (P <0 0 1 ) ,而PNS能防止脑缺血后两者的升高。NO含量与NOS活性呈显著正相关。 结论 NO在缺血神经元损伤中起重要作用 。

针灸内关预处理对心肌缺血再灌注损伤兔血清NO、NOS及腺苷含量的影响

目的观察针灸内关预处理对心肌缺血再灌注损伤兔血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及腺苷含量的影响。方法将32只新西兰大耳白兔随机分为假手术组、缺血再灌注组、电针组和艾灸组。采用结扎左冠状动脉前降支40 min再灌注60 min的方法,建立心肌缺血再灌注损伤模型。假手术组于末次捆绑结束48 h后开胸,穿线静置40 min,拔线,继续静置60 min后取材;缺血再灌注组于末次捆绑结束后48 min行缺血再灌注后取材,电针组和艾灸组分别在针刺、艾灸内关穴之后48 h再行缺血再灌注。高效液相色谱法测定血清腺苷含量,采用硝酸还原酶化学比色法检测血清NO、NOS的含量。结果缺血再灌注组血清NO、NOS及腺苷的含量较假手术组相比明显下降(P<0.05);电针组与艾灸组血清NO、NOS及腺苷的含量较缺血再灌注模型组相比均明显升高(P<0.01),而电针组与艾灸组两组间无明显差异(P>0.05)。结论电针、艾灸内关穴预处理可以提高兔血清中NO、NOS及腺苷的含量,即可以增强延迟性保护机制的细胞信号转导通路中触发物质NO、NOS、腺苷的活性和含量,表明了针灸预处理内关穴可以在48 h这一延迟时相产生针对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。