实施理论——常态化过程理论的解读

目的 常态化过程理论(Normalization Process Theory,NPT)是实施研究中常用的理论之一,但较难理解。本文将详细介绍NPT,为研究者理解NPT提供指引。方法 通过检索与NPT理论相关的文献并结合团队实际使用NPT的体验,描述NPT的起源、开发与演变、核心要素解读、运用并讨论其特点。结果 NPT以新技术在日常工作中的嵌入(即常态化)为实施结局,指出这个结局是实施者、实施对象和实施环境相互作用的过程。经过20余年的演变,NPT最终包含4个维度和16个构念。结论 NPT逐步完善,为实施科学提供了重要的理论基础;但NPT比较抽象,且存在逻辑和概念的不足,研究者需要在透彻了解其含义的基础上灵活使用。

带npt-Ⅱ基因转基因水稻快速检测技术的建立

以转溶菌酶基因水稻纯系材料中花9号(ZH9(R))及其受体品种中花9号(ZH9(CK))为材料,以ZH9(R)中携带的npt-Ⅱ基因作为辅助筛选标记,利用抗生素对其进行处理,建立了一套快速检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的技术体系。使用不同浓度的卡那霉素(Kanamycin,Kan)和G418溶液将ZH9(R)和ZH9(CK)成株离体叶片于室内室温下置于培养皿中浸泡处理,通过观察叶片变化,确定G418为检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的最佳抗生素,将G418(溶液)80mg/L浓度(处理4天)作为检测该类转基因水稻成株离体叶片的临界浓度。进一步用G418对ZH9(R)和ZH9(CK)种子、幼胚和幼苗进行了不同处理。确定:(1)G418(溶液)300mg/L浓度(处理7天)作为检测该类转基因水稻种子的临界浓度;(2)G418(1/2MS+0.5mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)200mg/L浓度(处理10天)作为检测该类转基因水稻幼胚的临界浓度;(3)G418(1/2MS+0.5mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)150mg/L浓度(处理12天)作为检测该类转基因水稻幼苗的临界浓度,并且通过PCR方法证实了上述结论。将这些结论应用于ZH9(R)转育后代叶片、种子、幼胚和幼苗群体的检测,检测效果都非常明显。这为带npt-Ⅱ基因转基因水稻建立了一套简便、直观且准确的检测方法。

抗虫棉群体Npt-Ⅱ标记基因纯度与其抗虫性强度的相关分析

研究了转基因抗虫棉标记基因纯度与生物学抗虫性的相关特性,结果显示:综合平均抗性指数与棉苗群体抗虫标记基因纯度两者呈极显著的正相关,即品种群体抗虫标记基因的纯度愈高,其生物学抗虫性愈强。通过提高转基因抗虫棉Npt Ⅱ标记基因纯度,可显著提高该品种的群体生物学抗虫性;进而通过苗床去杂保纯技术,达到跟踪保持抗虫棉群体抗虫性的目的。

转基因抗虫棉根际卡那霉素抗性细菌种群动态及nptⅡ基因漂移检测

【目的】研究转基因抗虫棉根际卡那霉素抗性细菌的种群动态,检测转基因棉卡那霉素抗性细菌nptII基因漂移。【方法】采用常规培养方法分析了转基因抗虫棉GK12、GK19、33B、SGK321,常规棉泗棉3号、33、石远321等7个棉花品种根际卡那霉素抗性细菌种群在棉花整个生育期的种群动态变化。以质粒pBI121为对照,设计nptII基因特异性引物,采用PCR方法对分离的根际卡那霉素抗性细菌菌株进行nptII基因漂移检测。【结果】7个棉花品种根际卡那霉素抗性细菌数量随时间延长而减少,同一棉花品种不同采样时间卡那霉素抗性细菌数量差异显著,而同一采样时间抗虫棉和对应的受体棉间差异不显著。Simpson、Shannon-Wiener多样性指数以及Pielou均匀度指数计算结果表明,受体棉根际卡那霉素抗性细菌群落的多样性高于转基因棉。PCR检测结果表明,21株卡那霉素抗性细菌菌株中18株发现有阳性片段,但其测序结果与卡那霉素抗性基因序列比对的同源性未能达到100%,不能判断nptII是否发生了转移。【结论】根际卡那霉素抗性细菌的数量在转基因棉与对应受体棉之间差异不显著,受体棉根际卡那霉素抗性细菌群落多样性指数高于转基因棉,更均匀稳定。未发现转基因棉卡那霉素抗性标记基因nptII向根际细菌的基因漂移。

局域寿命控制NPT-IGBT瞬态模型

提出了局域寿命控制下NPT IGBT的瞬态模型,并与数值分析结果进行了对比,验证了模型的正确性.该模型采用了准静态近似,将关断过程分为快速下降阶段和缓慢下降阶段分别加以求解而得到.基于该模型,详细讨论了局域低寿命区参数对关断时间的影响.该模型将有助于理解局域寿命控制NPT IGBT的关断过程物理图像,同时也可以用于指导该类器件的设计和优化.文中所采用的分析方法具有一定的普适性,其他类似结构和器件亦可采用此方法进行分析.

新试剂N-壬基-N′-(氨基对苯磺酸钠)硫脲(NPT)与钯(Ⅱ)显色反应的研究和应用

研究新合成的水溶性光度试剂Ｎ－壬基－Ｎ′－（氨基对苯磺酸钠）硫脲（ＮＰＴ）与钯（Ⅱ）的显色反应，结果表明，在ｐＨ５．８～６．６的ＨＡｃ－ＮａＡｃ缓冲体系中，Ｐｄ２＋与ＮＰＴ形成１４的黄色水溶性配合后物，ＣＴＭＡＢ对反应有明显的增敏作用，配合物的最大吸收波长位于２９７．６ｎｍ，表观摩尔吸光系数ε２９７．６＝１．２７×１０５Ｌｍｏｌ－１ｃｍ－１，钯含量在２～１１．２μｇ／２５ｍＬ范围内服从比尔定律，５０种离子不干扰测定，其灵敏度和选择性是目前测钯（Ⅱ）的最好的试剂之一。该法用于阳极泥和催化剂中钯的测定，均获满意结果。

非霍奇金淋巴瘤患者血清LDH、β_2-MG、CD44、Npt水平的动态检测和临床相关研究

目的 观察非霍奇金淋巴瘤 (NHL)患者血清乳酸脱氢酶 (LDH)、β2 -微球蛋白 (β2 -MG)、CD4 4及新喋呤 (Npt)水平的动态变化及其与病情、疗效和预后的关系。方法 LDH测定采用BeckmanCX5型生化分析仪自动检测 ;β2 -MG采用RIA法测定 ;CD4 4及Npt采用ELISA法进行测定。对 4 6例NHL患者治疗前后血清指标进行动态检测。结果 LDH ,β2 -MG ,CD4 4 ,Npt在化疗前不同组织分型的NHL患者中表达不同。LDH ,β2 -MG在低度恶性患者中表达较低 ,中度恶性患者中较高 ,但统计学处理P >0 0 5 ;高度恶性患者表达与中度恶性患者相比P <0 0 1。CD4 4 ,Npt表达低度恶性患者与中度恶性患者 ,中度恶性患者与高度恶性患者比较P <0 0 1。CD4 4 ,Npt,β2 -MG在化疗前Ⅲ +Ⅳ期患者的表达比Ⅰ +Ⅱ期患者高 ,P <0 0 1;LDH在Ⅲ +Ⅳ期患者的表达与Ⅰ +Ⅱ期患者比较 ,P >0 0 5。经两疗程IEVP(异环磷酰胺、表阿霉素、长春地辛、泼尼松 )方案化疗后的NHL患者 ,LDH ,β2 -MG ,CD4 4 ,Npt各数值均有明显改变 ,与化疗前相比P <0 0 1。在三种治疗结果中 ,CR组患者四项指标化疗后与化疗前比较P <0 0 1,PR组患者LDH表达化疗后与化疗前比较P >0 0 5 ,其他三项指标化疗后与化疗前比较P <0 0 1,NC组患者LDH ,β2 -MG水平化疗后与化疗前?

NPTⅡ基因和GUS基因在小麦遗传转化中的应用

对小麦遗传转化上常用的选择标记基因NPTⅡ的选择剂及GUS基因在幼胚愈伤组织中的转移进行了研究。结果表明用G418作为选择剂,浓度为20-30 mg／L较为合适。幼胚愈伤组织与农杆菌共培养3 d后,即可检测到GUS基因的瞬时表达。农杆菌LBA4404由500 mg／L羧卞青霉素抑制;EHA105、AGLI由500 mg／L头孢霉素抑制。而不能用卡那霉素。

Monte Carlo NPT系综法模拟考察几种水模型

应用NPT系综法模拟考察了五种水的势能模型 .模拟中采用周期边界条件、Metropolis抽样方法 ,并用Ewald方法对水分子间电荷作用进行长程校正 .模拟计算了内能 ,密度 ,压力及恒压热容等性质 .同时 ,还对这五种模型模拟得到的径向分布函数作了分析 .

掘辅运配巷缩小工作面绕过陷落柱NPT技术优化

为研究工作面安全高效绕过陷落柱技术,依据平朔井工一矿实际生产情况,采用掘辅运配巷缩小工作面绕过陷落柱,分析了绕过陷落柱期间的主要工序及其衔接关系,利用NPT技术对绕过陷落柱工序安排进行优化,确定了总工期与关键路线;并计算确定了各工序合理的开始与结束时间,从而实现高产高效安全生产。

转基因抗虫棉Bt基因与nptⅡ基因的遗传与表达

采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。Bt基因与npt Ⅱ基因均整合进了棉花基因组中,相互之间紧密连锁遗传,均稳定表达,因此报告基因npt Ⅱ可用于研究Bt基因的遗传情况。

局域寿命控制NPT-IGBTs稳态模型

提出了局域寿命控制下的NPT-IGBT稳态模型.通过与二维器件数值仿真比较,表明模型结果和仿真结果能较好地吻合.基于该模型,详细地分析了局域寿命区的参数对器件正向特性的影响.通过对基区空穴浓度的分析,澄清了长期以来对于最优局域低寿命区位置的不同看法,将各种结论统一起来.

NPT系综下应用ABEEM-7P水分子模型的动力学模拟

应用ABEEM‐7P水分子模型，对含有216个水分子的液态水体系，采用周期性边界条件，在NVT 和NPT 系综下进行分子动力学模拟，研究了不同的NVT、NPT 系综运行时间和压力弛豫时间，对分子动力学模拟的影响．通过分析，发现NVT系综运行时间为500 ps时，模拟的动力学性质同实验值偏差较小且计算速度较快，而当τT ＝0．01 ps时，τP较大或较小时动力学性质偏差较大．因此，216个水分子动力学模拟时τP 选为0．05～5 ps ．应用以上研究结果，分析了NPT 系综下260～310 K温度范围内，相同的τT 不同的τP 下，NPT系综的动力学性质以及某些性质与温度的依赖关系．分析显示，216个水分子动力学模拟得到的性质是合理的，为以后更深入精细研究水分子体系提供参考．

创伤后感染致多器官功能障碍综合征患者血清β-hBD-2、OPN、pro-ADM和NPt水平的变化

目的:探讨多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)患者的炎症感染病理过程中炎性介质水平的变化。方法:血清人类β防御素-2(humanβ-defensin-2,β-hBD-2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和新蝶呤(neopterin,NPt)采用酶联免疫分析法(ELISA)测定,肾上腺髓质素前体(pro-adrenomedullin,pro-ADM)检测采用化学免疫发光法。结果:四项血清标志物测定结果分别显示,对照组和确诊时组β-hBD-2、OPN、pro-ADM、NPt四种血清炎症介质标志水平均显著高于正常人组(P<0.05,P<0.01),出院前组β-hBD-2、OPN水平显著高于正常人组,另两项指标均与正常人组比较无显著性差异(P均>0.05);同时确诊时组与对照组比较β-hBD-2、OPN、pro-ADM三项指标水平也显著升高(P<0.05,P<0.01),NPt水平患者组呈略高,但无统计学意义(P>0.05);出院前组β-hBD-2、OPN、pro-ADM、NPt四种血清炎症介质标志水平均显著低于确诊时组(P<0.05,P<0.01)。结论:MODS患者的炎症感染病理过程中炎性介质水平显著升高,其测定对于临床抗感染治疗提供重要价值。

以nptⅡ为选择标记基因的转基因小麦高效筛选方法

采用两种方法筛选以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦植株,结果表明,由未成熟种子获得的植株在无菌条件下进行卡那霉素筛选时（A方法）,50 mg/L的卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;由成熟种子自然发芽获得的植株在滤纸上进行卡那霉素滴注筛选时（常规方法,B方法）,80～100 mg/L的卡那霉素能较好地抑制非转化小麦幼苗的正常生长。相对于B方法的常规筛选方法,A方法具有材料对卡那霉素敏感性高、筛选周期短而且筛选结果可靠性高等优点,是一种高效的以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦的筛选方法。

NPT型锥体螺纹塞规多参数测量的探讨

在各种现代装备系统的设计和制造工作中,对锥体螺纹塞规的加工提出了更高的要求,如何提高锥体螺纹塞规的测量准确度成为亟需解决的课题。目前锥体螺纹塞规主要是测量其基面中径,且方法不同结果有差异。文中以NPT型螺纹塞规为例,总结出其多参数的测量方法。

应用G418催芽胁迫体系鉴定携带npt-Ⅱ基因的转育水稻纯系的研究

研究了G418胁迫条件下转育后代的发芽特性和长根类比率,筛选获得了高抗G418的抗性株系,并进行其npt-Ⅱ基因及目的基因的检测与遗传分析。结果表明,转育株系如BM-3、BM-10、BM-13具有高发芽率(>90%)、高生根率(>95%)、低死亡率(<10%)和高长根比率(约为90%),经PCR结果发现这些株系内各单株都含有npt-Ⅱ基因及溶菌酶基因,确为转基因纯合体。进一步证实了G418胁迫催芽技术是可行和实用的,对于npt-Ⅱ基因转育纯系的筛选有重要意义。

银屑病患者治疗前后血清中Npt和VEGF水平的测定

目的探讨Npt和VEGF在银屑病发病中的意义。方法检测37例寻常性银屑病患者在不同病期及治疗前后血清Npt和VEGF水平。结果银屑病患者在治疗前血清Npt,VEGF水平较健康对照组显著升高,治疗后,两者均明显下降。银屑病患者治疗前、后血清Npt,VEGF水平分别与PASI评分有显著正相关,而且治疗前后Npt和VEGF呈正相关。结论血清Npt和VEGF在银屑病的发病机制中起重要作用,并与疾病的活动和严重程度密切相关。

壳聚糖DNA电化学生物传感器的伏安法研究以及对NPT Ⅱ基因的检测

将十八碳酸作为修饰剂制得性质改良的碳糊电极,利用壳聚糖与羧基的静电作用在电极表面修饰一层天然阳离子聚合物壳聚糖膜,进而进行DNA探针的固定和靶DNA的杂交.以亚甲基蓝(MB)为杂交指示剂用循环伏安法(CV)优化了DNA的固定和杂交条件.用该电化学生物传感器以微分脉冲伏安法检测了转基因油菜外源NPTⅡ基因,性能良好.

NPTⅡ基因在满江红鱼腥藻染色体DNAglnA位点的定点整合及对泌氨和细胞形态结构的影响

本研究构建了含glnA基因片段和TPTⅡ基因的单交换整合型重组质粒pGN1-4,并通过电激法,三亲接合转移和二亲接合转移法号入到满江红鱼腥藻细胞中。用蓝细菌原位杂交法筛选出转化细胞菌落。再经Southern杂交方法进一步证实了转化结果。化学测氨法表明,培养后7～14d泌氨达到高峰,转化细胞泌氨比对照高40％。光镜观察表明,转化细胞藻丝变短,易断成单个细胞,异形胞频率降低;扫描电镜观察指出,转化细胞外壁有鳞片状鞘层,而对照较光滑。