部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化

采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓 板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对 板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓

白藜芦醇对脑缺血小鼠BDNF及NT-3表达的影响

目的探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)预处理对局灶性脑缺血小鼠的神经保护作用。方法将72只SPF级♂昆明小鼠随机分为假手术组、模型组、溶剂治疗组、白藜芦醇预治疗组,每组各18只。线栓法制作小鼠大脑中动脉永久性脑缺血模型(permanent middle cerebral artery occlusion,pM-CAO),免疫组织化学法检测脑组织BDNF及NT-3蛋白的表达,RT-PCR技术检测缺血脑组织中BDNF及NT-3的基因水平,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积的变化,以Zea Longa评分法进行神经功能学评分。结果与模型组及溶剂治疗组相比,白藜芦醇预治疗组梗死区周围BDNF及NT-3的表达水平均明显升高(P<0.01),脑梗死体积明显缩小(P<0.01),且神经功能学评分明显改善(P<0.01)。结论白藜芦醇可增加脑缺血后BDNF及NT-3的表达,减少脑梗死体积,改善神经功能缺损。

挤压伤后脊髓神经元NT-3和NT-4的表达变化

为了研究脊髓挤压伤后 ,脊髓神经元 NT-3和 NT-4的早期变化 ,本研究采用免疫组织化学 ABC法和阳性神经元计数 ,结果在大鼠脊髓证明了 NT-3免疫阳性反应产物主要在胞核着色 ,NT-4则胞浆及胞核均着色。腹角的 NT-3阳性神经元数在脊髓挤压伤后 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组明显增高 ( P<0 .0 1) ;背角的 NT-3阳性神经元仅 2 1d组较正常组有显著增加 ( P<0 .0 1)。腹角的 NT-4阳性神经元数在损伤后 2 4h组、7d组和 2 1d组均较正常组有显著增加 ( P<0 .0 5 ) ,且随时间的延长呈增加趋势 ( P<0 .0 5 ) ;背角的 NT-4阳性神经元数 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组显著增加 ( P<0 .0 1) ,随时间延长仍有增加趋势 ( P<0 .0 1)。结论 :在脊髓挤压伤后的早期腹、背角 NT-3和 NT-4阳性神经元数均有增多 ,提示内源性 NT-3和

镇肝熄风汤联合多巴丝肼片治疗帕金森病的疗效观察及对血清BDNF、IGF-1、NT-3的影响

目的观察镇肝熄风汤联合多巴丝肼片治疗帕金森病(PD)的疗效及其对血清脑源性神经营养因子(BDNF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、神经营养因子-3(NT-3)的影响。方法选择2015年5月至2016年11月接受治疗的94例PD患者为研究对象,随机分为对照组与治疗组各47例。对照组给予多巴丝肼片治疗,治疗组在对照组的基础上联合镇肝熄风汤治疗,两组治疗均持续3个月。观察治疗前后两组老年颤证功能积分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分、血清BDNF、IGF-1、NT-3及不良反应情况,比较两组临床疗效。结果治疗后两组老年颤证功能积分均比治疗前显著降低(P <0. 05),且治疗组显著低于对照组(P <0. 05);治疗后两组MoCA评分均比治疗前显著升高(P <0. 05),且治疗组显著高于对照组(P <0. 05)。治疗后两组血清BDNF、IGF-1、NT-3水平均比治疗前显著升高(P <0. 05),且治疗组显著高于对照组(P <0. 05)。两组治疗中不良反应情况比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。治疗后治疗组总有效率为97. 87%,显著高于对照组的82. 98%(P <0. 05)。结论镇肝熄风汤联合多巴丝肼片治疗PD疗效肯定,能显著改善患者血清BDNF、IGF-1、NT-3水平。

灵芝孢子对大鼠脊神经腹根切断后脊髓运动神经元存活及其NT-3、NOS表达的影响

目的探讨灵芝孢子(萌动激活赤灵芝孢子)对大鼠脊髓受损伤运动神经元存活和表达神经营养素_3(NT_3)及一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法对单侧腹根切断后的大鼠胃饲不同剂量的灵芝孢子,计算受损伤运动神经元存活率;用免疫组织化学及原位杂交方法检测NT-3的表达;用酶组织化学方法检测NOS的活性。结果腹根切断后35 d,对照组运动神经元存活率为47.32%,灵芝孢子低、中、高剂量组的运动神经元存活率分别为67.11%、72.67%和81.67%;腹根切断后高剂量组存活的运动神经元NT_3和NOS的表达都高于对照组。结论灵芝孢子促进大鼠脊髓前角受损伤的运动神经元存活,其存活率与用药剂量有关;灵芝孢子促进大鼠脊髓存活的运动神经元表达NT-3和NOS。

NGF,BDNF,NT-3和GDNF在背根节不同神经元的配布的免疫组织化学证据

为了探讨神经生长因子、脑源性神经生长因子 ,神经营养素 -3,胶原细胞源性神经生长因子在成年猫背根节神经元不同大小细胞的分布。取 L6背根节制成 2 0μm厚冰冻切片 ,用上述四种因子抗血清进行免疫组化反应。计数每一种因子阳性大、中、小型 (小于 42μm者为小型神经元 ;42～ 5 7μm者为中型神经元 ;大于 5 7μm者为大型神经元 )神经元的百分数。结果证明 ,此四种因子在背根节大、中、小神经元的阳性百分数分别为 :1.2± 0 .7,2 .1± 0 .9,3.3± 1.1;1.7± 0 .4,11.2± 1.2 ,30 .0± 1.5 ;2 6 .7± 2 .2 ,6 .2± 1.2 ,13.2± 2 .9;2 7.4± 3.3,8.1± 1.7,2 0 .1± 2 .4。表明 :在成年猫 L6背根节仅存在少数神经生长因子阳性细胞 ,而脑源性神经生长因子则主要配布于中、小神经元 ,神经营养素 -3和胶质细胞源性生长因子的免疫阳性细胞主要是大神经元 ,但也包括一些中小神经元。提示此四种因子在成年猫背根节的生理功能可能与神经元的不同大小有关。

推拿影响坐骨神经损伤大鼠NT-3及其受体TrkC表达的研究

目的:观察推拿对坐骨神经损伤大鼠行为学、NT-3、TrkC的影响,探讨推拿促进坐骨神经损伤修复的机制。方法:采用大鼠坐骨神经夹持损伤模型,通过斜板实验、BBB评分观察正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组大鼠的行为学变化;通过免疫组化染色观察各组大鼠脊髓腹角NT-3、TrkC的表达情况,最后统计比较各组差异。结果:模型组和模型对照组大鼠行为学检测提示坐骨神经损伤大鼠的运动功能明显降低,在推拿干预后,斜板试验、BBB评分明显升高,神经功能恢复情况优于模型组和模型对照组;模型组、模型对照组及推拿组NT-3、TrkC表达与正常组相比均有统计学差异,推拿组NT-3表达与模型组相比也有显著差异,推拿组更高。结论:中医推拿可以通过促进NT-3及其高亲和力受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,促神经元存活的作用,最终改善坐骨神经损伤大鼠的运动功能,促进神经功能恢复。

APP17肽对卵巢去势大鼠学习、记忆功能和海马神经NT-3、NF表达的影响

目的 探讨APP1 7肽是否能提高去卵巢大鼠学习、记忆功能及作用机制。方法 雌性大鼠分三组 :①正常组 ,②去卵巢组 ,③用APP1 7肽保护去卵巢组。通过水迷宫测试 ,观察行为学的改变。而后灌注固定 ,取大脑组织冰冻切片 ,做NT 3、NF免疫组化染色。结果 (1 )行为学检查 :给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠游完全程的时间及错误反应次数均较未给予APP1 7肽的卵巢去势大鼠少 (P<0 0 5)。 (2 )用APP1 7肽保护的卵巢去势大鼠海马区神经元神经营养素 3(NT 3)、神经丝蛋白 (NF)的表达与正常大鼠相似 ,阳性细胞计数及平均灰度 (反映染色强度 )与卵巢去势大鼠比较差异显著 (P <0 0 5)。结论 卵巢去势大鼠存在学习、记忆障碍 ,APP1

推拿对坐骨神经损伤大鼠NT-3、TrkC的影响

目的研究推拿对坐骨神经损伤大鼠感觉功能及NT-3、TrkC表达的影响。方法采用夹持法建立坐骨神经损伤模型,将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组、推拿组,以按摩推拿手法模拟仪进行干预,通过热痛阈实验观察各组大鼠行为学变化;通过免疫组织化学染色观察各组大鼠背根节内NT-3、TrkC表达情况。结果模型组、模型对照组大鼠的PWL值与正常组相比明显延长,推拿组与模型组相比PWL值明显缩短,与正常组相比无显著差异。模型组、模型对照组及推拿组NT-3免疫组化表达与正常组比较均有明显提高,推拿组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论中医推拿可以改善神经损伤大鼠的行为学表现,通过促进NT-3及其受体TrkC的表达,发挥抑制细胞凋亡,对神经元胞体和突起的生长产生积极的影响,促进损伤神经的修复,改善坐骨神经损伤大鼠的感觉功能。

Lactuside B对缺血性脑损伤大鼠海马和纹状体NT-3 mRNA表达的影响

目的探讨Lactuside B对缺血性脑损伤大鼠海马和纹状体NT-3 mRNA表达的影响。方法 SD雄性大鼠,体重280～320g,随机分为假手术组、模型组、阳性药物对照组、Lactuside B低剂量组、中剂量组和高剂量组,共6组,8只/组。采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,各组动物均按5ml/kg的容量腹腔注射相应的实验药物,每天给药一次。动物持续脑缺血2h,在再灌注24h和72h对其神经系统体征进行客观评分后分别处死4只动物,采用RT-PCR技术检测大鼠海马和纹状体不同时间段NT-3 mRNA的表达。结果研究发现Lactuside B各剂量组均可降低神经缺损症状评分,提高海马和纹状体NT-3 mRNA的表达,且低、中剂量组作用较好,与模型组和阳性对照药比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),用药72h后两部位的NT-3mRNA表达更多,与24h比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论 Lactuside B可通过上调海马和纹状体NT-3 mRNA的表达起到抗缺血性脑损伤的作用,两部位升高的NT-3 mRNA对目标蛋白的合成具有积极的导向性质。

阳离子脂质体介导NT-3基因转染豚鼠耳蜗的实验研究

目的 探讨阳离子脂质体介导的NT - 3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能的影响。方法 克隆人NT- 3cDNA基因 ,构建携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的重组质粒pIRES2 -EGFP -NT3。采用脂质体介导的方法 ,将重组质粒转染豚鼠耳蜗 ,分别于术后 1天、2周、4周观察转染基因在耳蜗及脑干等部位的表达和分布情况。同时进行耳声发射及ABR测试 ,了解基因转染对豚鼠耳蜗听功能的影响。结果 成功克隆人NT - 3cDNA基因并构建重组质粒pIRES2 -EGFP -NT3。重组质粒转染豚鼠耳蜗后 ,荧光显微镜下观察发现耳蜗螺旋神经节、神经纤维、Corti器、血管纹等均可见绿色荧光 ,但 4周时荧光蛋白的表达强度较 1天时明显减弱。而CY3标记的NT - 3免疫荧光染色结果基本与EGFP的表达情况一致。此外 ,对侧耳蜗及第四脑室脉络膜处亦可见较强的绿色荧光。耳蜗基底膜铺片见内外毛细胞结构完整。转染前后豚鼠耳声发射及ABR阈值均无明显改变。结论 阳离子脂质体介导的NT - 3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能无明显影响 ;外源性NT -

NT-3基因转染对耳蜗传入神经损伤保护作用电镜观察

目的探讨阳离子脂质体介导的神经营养素-3(NT-3)基因转染对庆大霉素性耳蜗传入神经损伤超微结构的影响。方法采用阳离子脂质体介导法,将携带外源性NT-3基因的重组真核表达载体增强型绿色荧光蛋白(pIRES2-EGFP)-NT-3注入豚鼠左侧耳蜗,术后3 d开始给予庆大霉素肌注(120 mg/kg),连续注射14 d,分别于停药后1 d、2周进行听性脑干诱发反应(ABR)测听,随即处死动物,并进行耳蜗取材,在透射电镜下观察耳蜗传入神经超微结构改变。结果庆大霉素停药1 d时,与正常对照组相比,空载体及磷酸盐缓冲液(PBS)组ABR阈值显著提高(P<0.01),NT-3治疗组ABR阈值增高虽不如前二者显著,但仍有差异(P<0.05),但以上3组间无显著性差异;当庆大霉素停药2周时,NT3治疗组ABR阈值虽仍有提高,但与停药1 d时相比,无显著性差异(P>0.05),而空载体及PBS组ABR阈值升高显著(P<0.05)。透射电镜下见庆大霉素停药1d时,空载体及PBS组传入性神经末稍已出现肿胀,突触间隙明显增大,I型及II型神经纤维轴索内微管排列出现紊乱,少量崩解,髓鞘板层结构尚可,I、II型神经元胞体内偶可见少量髓鞘样结构;在停药2周时,传入神经退行性改变明显加重,出现突触结构消失、空泡化,神经纤维崩解,神经元出现大量空泡化。而NT3基因转染组在损伤的早期,传入性神经从末梢到神经元仅出现轻微的改变,在庆大霉素停药2周时,神经退行性改变略加重,但仍显著轻于空载体及PBS组对照组。结论阳离子脂质体介导的NT-3基因转染对豚鼠庆大霉素性耳蜗传入神经性损伤具有一定程度的保护作用。

BDNF,NT-3在猫背根神经元的自分泌和旁分泌作用初探——原位杂交和免疫组织化学研究

探讨脑源性神经营养因子 (BDNF)、神经营养因子 3 (NT- 3)在成年猫背根节 (DRG)神经元是否存在自分泌或旁分泌作用方式。用特异的 trk B、 trk C抗体及 BDNF、 NT- 3的 c RNA探针 ,以免疫组化及原位杂交双标法观察了成年猫 L6DRG神经元 BDNF m RNA与 trk B、 NT- 3 m RNA与 trk C的关系 ,以了解 BDNF、 NT- 3在成年猫 L6 DRG神经元有无自分泌或旁分泌作用。结果表明 ,在成年猫 L6 DRG BDNFm RNA阳性细胞主要是部分中、小神经元 (4 2～ 5 7μm,<42μm) ,而 trk B阳性细胞则主要是部分大神经元 (>5 7μm)。未见双标的 BDNF m RNA和 trk B阳性神经元 ,但见一些双标的卫星细胞。与BDNF者比较 ,大多数大神经元既表达 NT- 3 m RNA,又表达 trk C。这表明在成年猫 L6 DRG神经元 ,NT- 3可能存在自分泌方式。但本文的结果未证明 BDNF在成年猫 L6 DRG神经元存在自分泌。

NGF、BDNF和NT-3在背根节卫星细胞的表达

目的 观察神经因子 (NGF)、脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经营养因子 - 3(NT- 3)及其 m RNA在成年猫背根节 (L6 )卫星细胞的表达情况。方法 成年雄猫 5只 ,随机取一侧的 L6 背根节 (DRG)制作 2 0μm厚冰冻切片 ,行免疫组化及原位杂交染色。观察 NGF、BDNF和 NT- 3及其 m RNA在 DRG卫星细胞的分布以及亚细胞定位。结果 在正常 DRG,可见 NGF、BDNF和 NT- 3及其 m RNA阳性卫星细胞。各因子 m RNA的阳性反应物定位于胞质。 BDNF- IR定位于胞质 ,而 NGF- IR和 NT- 3- IR则定位于胞核。结论 背根节部分卫星细胞内有 NGF、BDNF和 NT- 3及其 m RNA的分布 ,BDNF和 NGF、NT-

BDNF和NT-3对胚胎大鼠脊髓神经元生长发育的影响

为研究脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经营养因子 3(NT 3)对体外培养的胚胎大鼠脊髓神经元存活和生长发育的影响 ,在倒置相差显微镜下观察原代培养的神经细胞存活和生长发育情况 ,计数并进行显微测量。实验数据均以均数±标准差表示 ,进行方差分析和SNK检验。结果 :BDNF和NT 3均能促进培养的胚胎大鼠脊髓神经元的存活 ,BDNF的作用更显著。两者还促进脊髓神经元的生长发育 ,BDNF主要促进胞体的发育 ,NT 3主要促进突起的生长。提示 :BDNF和NT 3对培养的胚胎大鼠脊髓神经元的存活和生长发育有促进作用 。

部分背根切断后备用DRG卫星细胞NGF、BDNF和NT-3的表达变化

为探讨部分去背根猫备用背根节 ( L6 )卫星细胞 NGF、BDNF和 NT-3的表达变化 ,将成年雄猫 2 0只分为正常对照组和术后 3 d、术后 7d及术后 10 d三个实验组。实验组行单侧部分背根切断术 (切除一侧 L1 ～ L5,L7～S2 DRG,保留 L6 背根为备用根 )。取正常组一侧和术后 3 d、7d及 10 d实验组手术侧的 L6 DRG制作 2 0μm厚冰冻切片 ,行免疫组化反应 ;观察 NGF、BDNF和 NT-3在 DRG卫星细胞的分布 ,计数各组 L6 DRG的 NGF、BDNF和 NT-3的阳性卫星细胞数量。结果发现 ,部分去背根术后7d和 10 d组 L6 DRG的 NGF、BDNF和 NT-3的阳性卫星细胞数量较术后 3 d组和正常组者明显增高 ( P<0 .0 1)。表明 ,单侧部分背根切断导致备用 DRG卫星细胞的 NGF、BDNF和 NT-3的表达上调 ,这一变化可能与脊髓可塑性有关。

体外树突状细胞通过NT-3上调P-ERK1/2的表达促进神经干/祖细胞分化

目的观察树突状细胞(dendritic cells,DCs)对神经干/祖细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)分化的影响,探讨神经营养素-3(Neurotrophin-3,NT-3)在DCs调控NSPCs分化中可能的作用机制。方法实验共设5组,分别为NSPCs组、NSPCs/DCs组、NSPCs+NT-3组、NSPCs/DCs+抗NT-3组和DCs组。共培养24、48、72 h后,ELISA法检测各组上清液中NT-3含量;7 d后荧光免疫细胞化学法检测各组NSPCs分化情况。Western blot检测各组NSPCs磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)表达。结果 NSPCs/DCs组上清液中NT-3含量较NSPCs组、NSPCs/DCs+抗NT-3组和DCs显著升高(P<0.05)。NSPCs/DCs组和NSPCs+NT-3组β-tubulin-Ⅲ阳性细胞数较NSPCs组和NSPCs/DCs+抗NT-3组显著增高(P<0.05),而NSPCs组和NSPCs/DCs+抗NT-3组GFAP阳性细胞较NSPCs/DCs组和NSPCs+NT-3组显著增高(P<0.05)。NSPCs/DCs组和NSPCs+NT-3组NSPCs中的p-ERK1/2的表达较其余两组增高(P<0.05)。结论 NSPCs与DCs共培养能显著促进NSPCs分化为神经元,可能与共培养后NT-3表达量增高,通过其特异性受体TrkC激活下游信号通路MEK-ERK有关。

慢性应激对大鼠海马NGF、NT-3表达的影响及应激停止后的变化

目的探讨慢性应激对大鼠海马神经元NGF、NT-3蛋白表达的影响及其应激停止后的变化。方法采用慢性强迫游泳和孤养制作动物模型。运用Open-field法观察大鼠行为学的变化，运用免疫组织化学方法观察大鼠海马DG区、CA3区NGF、NT-3的表达。结果与对照组相比，实验组1大鼠海马CA3、DG区NGF、NT-3的平均灰度值显著增加[灰度值分别为（187．25±0．87），（169．67±0．94），（183．49±0．21），（157．33±0．39），P〈0．05和P〈0．01]，实验组2平均灰度值与对照组2相比同样增加[灰度值分别为（186．31±0．68），（170．30±1．22），（187．79±1．01），（162．79±0．98），P〈0．05]。结论慢性应激使大鼠海马NGF、NT-3表达降低，应激30d后，其表达仍低于对照组。

NT-3 mRNA分子杂交在胚胎脊髓修复成鼠受损脊髓过程中的变化

为了从神经营养因子角度探讨移植修复机理，将大鼠１４ｄ胚胎脊髓（ＥＳＣ）植入急性损伤成鼠脊髓后１、３、５、７、１０、１５和３０ｄ，用原位杂交和斑点杂交技术对ＥＳＣ和宿主脊髓（ＨＳＣ）内ＮＴ－３ｍＲＮＡ的变化进行定性和定量观察。定性观察显示，在正常脊髓内，ＮＴ－３ｍＲＮＡ以前角运动神经元和少量胶质细胞分布为主；脊髓损伤以后，杂交产物扩大到中小型神经元，同时更多的胶质细胞参与了反应；ＥＳＣ植入后，除移植物本身继续表达外，宿主脊髓阳性反应神经元和胶质细胞数量进一步增加。定量结果表明，损伤组原位杂交和斑点杂交的反应强度明显高于正常组；而移植组的分子杂交反应又在很多时相点上显著高于损伤组。除此而外，分子杂交反应在损伤组和移植组内持续的时间也不相同，前者的最强反应期为术后７ｄ，后者为术后１０～１５ｄ．我们认为，移植的ＥＳＣ除为自身和ＨＳＣ提供神经营养外，也诱发了ＨＳＣ在发生过程中曾经拥有的合成机制，以增强ＮＦ表达的方式为自身再生提供营养，同时也为移植物的发育分化提供合适的营养环境。

NGF,BDNF和NT-3在培养鸡胚背根节神经元的表达

目的 探讨NGF ,BDNF ,NT - 3在体外培养鸡胚背根节神经元中的表达变化。方法 采用NGF ,BDNF ,NT - 3的兔抗血清分别对培养前后的鸡胚背根节神经元以免疫组化ABC法染色。观察NGF、BDNF和NT - 3在培养前、后鸡胚背根节神经元的表达情况 ,计数并比较培养前、后三种因子免疫阳性神经元百分数。结果 未培养的神经元 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :10 %± 3%,2 7%± 5 %,2 9%± 7%。培养 48小时后 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :77%± 6 %,6 4%± 7%,2 4%± 7%。结论 培养后NGF ,BDNF的表达较未培养者增加 (P <0 0 1) ,而NT - 3者则有减少 (P <0 0 5 )。提示在体外培养的鸡胚背根节神经元NT - 3的表达有不同于NGF和BDNF的调节方式。