高脂膳食诱导肥胖并影响脂肪组织MCHR1和OB-Rb的表达

目的:比较不同方式高脂饮食对大鼠脂肪组织黑色素聚集激素受体1(melanin concentrating hor-mone receptor 1,MCHR1)和瘦素受体(OB-Rb)表达的影响。方法:断乳大鼠分成3组:正常膳食组(NC组,13%热卡来自脂肪),与正常膳食组等热量的高脂膳食组(PHF组,47%热卡来自脂肪)及自由摄入高脂膳食组(HF组,47%热卡来自脂肪)。喂养8周后,称量大鼠体质量,检测血清中的黑色素聚集激素(melanin con-centrating hormone,MCH)和瘦素(leptin)浓度。运用实时定量PCR检测脂肪组织的MCHR1和OB-Rb mRNA水平。结果:HF组和PHF组体质量显著高于NC组(P<0.01),血清中MCH和leptin浓度较NC组有明显增高(MCH,P<0.01;leptin,P<0.05)。同对照组相比,HF组和PHF组脂肪组织中的MCHR1 mRNA水平显著升高(P<0.05),而OB-Rb mRNA却显著降低(HF组,P<0.01;PHF组,P<0.05)。HF组和PHF组的体质量、血清学指标及实时定量PCR结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论:等热量和高热量高脂膳食都能诱导大鼠肥胖和代谢异常;高脂膳食所诱导的机体肥胖及代谢紊乱与脂肪组织中MCHR1 mRNA上调和OB-RbmRNA下调有关。

大豆异黄酮对肥胖大鼠弓状核及垂体α-MSH、POMC、Ob-Rb 表达的影响

为了探究大豆异黄酮通过瘦素减重的作用机制,建立食源性肥胖大鼠模型,后进行低、中、高剂量(50,150,450 mg/kg)大豆异黄酮干预,并每周定期称量记录体重,采用苏丹Ⅲ染色、SABC免疫组织化学法和核酸原位杂交法,观察大豆异黄酮对肥胖大鼠体重、腹部脂肪细胞形态和下丘脑弓状核及垂体α-MSH、POMC mRNA、Ob-Rb mRNA表达的影响。结果显示,标准对照大鼠α-MSH在弓状核、垂体神经部和中间部均大量表达,POMC mRNA在弓状核和垂体仅少量表达,Ob-Rb mRNA仅在弓状核表达,同时肥胖大鼠3种因子表达均显著降低;大豆异黄酮干预后肥胖大鼠体重降低,腹部脂肪细胞面积缩小且形态分布明显改善,同时α-MSH、POMC mRNA、Ob-Rb mRNA表达增多。表明大豆异黄酮可能通过减少脂储、增加Ob-Rb表达从而促进具有抑食作用的POMC及其裂解物α-MSH产生,从而改善大鼠瘦素抵抗状态,发挥减重作用。

猪Ob-Rb基因的克隆与分析

[目的]采用RT-PCR法克隆与分析瘦素受体Ob-RbcDNA序列。[方法]从160日龄初情期的苏姜猪的下丘脑中提取组织总RNA,根据GenBank中猪Ob-RbmRNA全序列设计引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增,获得1条343 bp的片段,将PCR产物克隆于pGEM-Teasy载体后进行测序分析。[结果]用紫外分光光度计检测所提取的RNA质量,OD260/OD280=1.9,证明所提RNA的质量较好,无降解和蛋白质污染;用1%的琼脂糖检测所提RNA,有3条清晰的条带,分别是28S、18S、5S,28S与18S浓度比约为2∶1,说明所提的RNA的完整性较好。所获Ob-RbcDNA序列用Blast程序与在GenBank中发表的猪Ob-RbcDNA序列(AF092422)比较表明,其同源性为100%,说明所扩增的序列是正确的。[结论]该研究为进一步探索Ob-Rb基因组织表达和作用机理奠定了理论基础。

瘦蛋白对体外培养的新生牛脂肪细胞Ob-Rb mRNA表达的影响

取单层生长良好的脂肪细胞，采用单因素试验，分别添加浓度为5ng／mL外源牛重组瘦蛋白（每12h添加1次）不添加作为对照至4、12、24、36、48和72h后提取总RNA，每个处理3个重复（孔），应用竞争RT-PCR法检测外源瘦蛋白对初生犊牛脂肪细胞Leptin长型受体（Ob—Rb）表达水平的影响，结果与对照组相比在12～24h内随着培养时间的增加，脂肪细胞Ob—Rb表达水平量亦显著增加（P〈0．01），之后其表达量逐渐回降，在48～72h趋于平稳（P〉0．05）。结果表明，在一定时间内瘦蛋白可提高体外培养的新生牛脂肪细胞Ob-Rb mRNA的表达水平。

大熊猫卵巢OB-Rb、NPY的蛋白表达与分布研究

为了探究瘦素长型受体(OB-Rb)与神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)在大熊猫生殖调控中的作用,运用HE法、免疫组化SABC法观察了5例大熊猫卵巢组织学结构及OB-Rb、NPY在卵巢的表达与分布。结果显示:大熊猫卵巢各级卵泡数量较少,尤以中晚期生长卵泡更甚,原始卵泡和闭锁卵泡相对多见。OB-Rb和NPY在卵巢上均有表达,其中OB-Rb主要分布在颗粒细胞、卵泡膜细胞及黄体的粒黄体细胞;NPY阳性纤维和产物不均匀分布于卵巢各个部位,呈串珠状或点状。NPY阳性神经纤维主要位于血管周围、卵泡、黄体以及颗粒细胞中。大熊猫卵巢卵泡数量少的特征可能与其生殖能力低下有关;OB-Rb和NPY参与了卵巢卵泡发育的调控。

胆汁酸核受体激动剂对瘦素及OB-Rb的影响

目的:观察胆汁酸核受体激动剂GW4064对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中瘦素及长型瘦素受体(OB-Rb)和对HepG2细胞OB-Rb的影响。方法:用GW4064干预3T3-L1前脂肪细胞的分化过程,采用荧光real-time PCR法检测分化过程中第0、2、4、6、8天瘦素及OB-Rb mRNA相对表达量及ELISA法检测瘦素分泌情况,同时,用GW4064干预饥饿后的HepG2细胞0、12、24、48 h后,荧光real-time PCR法检测OBRb mRNA相对表达量。结果 :GW4064干预后,3T3-L1前脂肪细胞中瘦素mRNA相对表达量较对照组明显上升,瘦素蛋白分泌情况与其mRNA表达相似,差异均有统计学意义(均P<0.05),而OB-Rb mRNA表达无明显改变(P>0.05);同时,HepG2细胞的OB-Rb mRNA在干预后表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 :GW4064可上调脂肪细胞瘦素和HepG2细胞OB-Rb的表达,目前瘦素在非酒精性脂肪性肝病中的作用及机制尚不明确,而OB-Rb的低表达则与非酒精性脂肪性肝病中的瘦素抵抗相关,因此,我们推测胆汁酸核受体激动剂可通过提高肝脏OB-Rb的表达改善瘦素抵抗,从而达到治疗非酒精性脂肪性肝病的目的。

猪初情期前后瘦素长型受体Ob-Rb mRNA在垂体内表达变化的研究

[目的]观察猪初情期前后瘦素长型受体Ob-RbmRNA在垂体内的表达变化,探讨其与猪初情期发育的关系。[方法]随机选取苏姜猪120日龄、初情期、180日龄各3头,屠宰,采集垂体组织,提取垂体组织总RNA,设计引物,利用实时荧光定量RT-PCR方法检测垂体内Ob-RbmRNA表达变化。[结果]在三个时期猪的垂体内都能检测到Ob-RbmRNA的表达,初情期表达量最低,与120日龄比较差异显著(P<0.05),与180日龄比较差异不显著(P>0.05)。[结论]低表达量的Ob-RbmRNA有利于初情期的发生。

奶牛Leptin长型受体(OB-Rb)竞争RT-PCR内标物的构建

为了构建奶牛瘦素长型受体(OB-Rb)的定量PCR内标物。应用RT-PCR方法,克隆、测序287bp的OB-Rb片段,应用限制性内切酶BglⅡ插入470bp外源片段,构建了一个重组的竞争模板,为建立竞争性RT-PCR法检测奶牛瘦素长型受体mRNA奠定了基础。

肥胖及糖尿病大鼠肝脏组织中Socs-3mRNA和OB-RbmRNA的表达相关性

目的了解肥胖及糖尿病大鼠模型肝脏组织中OB-RbmRNA和Socs-3mRNA的表达相关性。方法①雄性Wistar大鼠100只,适应性饲养1周后随机分为三组:对照组(15只),喂以基础饲料;肥胖组(35只),喂以高脂饲料;糖尿病组(50只),喂以高脂饲料,4周后一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型;肥胖组腹腔注射等量生理盐水作为对照。三组大鼠继续喂以相应饲料23周,饲喂周期共计28周;②采用ELISA法测定血清瘦素水平,半定量RT-PCR法检测大鼠肝脏组织Socs-3、OB-RbmRNA表达水平。结果肥胖与糖尿病大鼠肝脏中Socs-3mRNA表达水平较对照组均显著升高(P<0.05),OB-RbmRNA表达水平较对照组显著降低(P<0.05)。OB-RbmRNA与Socs-3mRNA表达呈负相关关系(r=-0.596,P<0.05)。多元逐步回归分析显示:OB-RbmRNA表达水平主要受Socs-3mRNA表达及体重的影响,Socs-3mRNA主要受血清瘦素、血糖及OB-RbmRNA表达的影响。结论血清瘦素水平升高可能导致肝脏Socs-3mRNA表达水平增加,从而抑制肝脏OB-RbmRNA表达。

瘦素及转化生长因子-β1与四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型逆转恢复的相关性研究

目的研究瘦素(Leptin)及转化生长因子-β1(TGF-β1)与四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化逆转恢复的相关性。方法采用CCl4大鼠肝纤维化模型,分别于逆转恢复0、2、4、6、8周处死大鼠,取血清检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Leptin和TGF-β1含量;取肝组织进行Masson染色,羟脯氨酸(Hyp)含量检测,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Leptin、TGF-β1、瘦素功能型受体(OB-Rb)和转化生长因子-β1型受体(TGF-βRⅠ)mRNA表达,Western blot法检测核转录因子-κb(NF-κb)蛋白表达。结果 CCl4致大鼠肝纤维化在停止注射后发生逆转恢复;血清ALT、AST、HA、CⅣ、Leptin和TGF-β1含量以及肝组织Hyp含量在逆转恢复过程中逐渐降低;同时肝组织Leptin、TGF-β1、OB-Rb和TGF-βRⅠmRNA以及NF-κb蛋白表达亦出现不同程度下降;血清Leptin及TGF-β1水平与HA、CⅣ、Hyp变化呈正相关(P<0.01)。结论 CCl4致大鼠肝纤维化的逆转恢复与Leptin及TGF-β1下降关系密切;可能通过受体表达下调降低促纤维化因子作用,进而影响肝纤维化逆转恢复过程。

大豆异黄酮对大鼠肠道上皮内淋巴细胞、杯状细胞及瘦素长型受体的影响

大豆异黄酮具有广泛的生理作用,其对免疫系统的影响近年来成为一个焦点。为了研究大豆异黄酮对肠黏膜屏障结构的重要组成部分(上皮内淋巴细胞、杯状细胞)及免疫调节因子瘦素受体(长型)的影响,本实验采用高脂饲料喂饲大鼠,建立肥胖模型;然后将筛选出的肥胖大鼠分别灌胃剂量为对照(I:0mg/kg)、低(Ⅱ:50mg/kg)、中(Ⅲ:150mg/kg)、高剂量(Ⅳ:450mg/kg)的大豆异黄酮,并设置基础对照组(Ⅴ:溶媒为0.5%羧甲基纤维素钠),连续4周用HE、PAS染色观察小肠上皮内淋巴细胞、杯状细胞数量和分布变化;用免疫组织化学SABC法测定瘦素受体(长型)水平。结果表明:大鼠上皮内淋巴细胞以小型淋巴细胞为主,主要分布于上皮的基底膜附近;大鼠杯状细胞分布在肠黏膜上皮层;瘦素受体(长型)阳性细胞分布于黏膜层。应用大豆异黄酮高剂量组较对照组大鼠的肠黏膜上皮内淋巴细胞数量和杯状细胞的数量明显增加,且有向肠内层移动趋势,同时肠黏膜瘦素受体(长型)水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。表明大豆异黄酮在一定程度上可促进大鼠小肠黏膜屏障结构趋于完整并提高其免疫功能。

豹皮樟总黄酮调控瘦素、TGF-β1对肝纤维化大鼠的预防作用研究

目的研究豹皮樟总黄酮(TFLC)调控瘦素(leptin)和转化生长因子-β1(TGF-β1)对肝纤维化大鼠的预防作用。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,TFLC灌胃给药第12周末,检测ALT、AST及HA、LN、PⅢNP、CⅣ含量;检测Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、瘦素、TGF-β1的含量;检测Hyp及组织病理变化;检测瘦素受体(OB-Rb)、TGFβ1Ⅰ型受体(TGFβR1)、Smad3 mRNA及蛋白表达。结果 TFLC(200、400 g.L-1)能明显降低肝纤维化大鼠肝纤维化指标及血清Ⅰ型胶原、瘦素、TGF-β1水平;降低Ob-Rb、TGFβR1、Smad3的mRNA及蛋白表达。结论 TFLC能有效预防CCl4诱导的大鼠肝纤维化,可能与下调肝内瘦素及其受体,抑制TGF-β1/Smad通路有关。

穴位埋线对肥胖大鼠SOCS-3基因表达的影响

目的:观察穴位埋线对肥胖大鼠SOCS-3基因表达的影响,阐明瘦素抵抗可能发生的分子机制。方法:将普通饲料喂养大鼠作为正常组,挑选经高脂饲料喂养12周体质量超过正常大鼠20%者,随机分模型组和埋线组。埋线治疗后,使用ELISA和RT-PCR等方法观察穴位埋线对各组肥胖大鼠下丘脑胰岛素、瘦素含量、瘦素受体基因(OB-Rbm RNA)表达,观察下丘脑细胞信号转导抑制因子-3(SOCS-3)基因表达;观察外周血清SOCS-3的含量表达。结果:埋线后大鼠血清瘦素和胰岛素含量较模型组肥胖大鼠明显降低(P<0.05),而下丘脑瘦素和胰岛素含量和脑、血瘦素和胰岛素之比较模型组肥胖大鼠均明显升高(P<0.05);埋线后大鼠下丘脑OB-Rbm RNA表达水平与模型组肥胖大鼠比较显著增加(P<0.05),而SOCS-3m RNA表达水平及血清SOCS-3含量明显减少(P<0.05)。结论:穴位埋线改善胰岛素、瘦素血脑转运屏障及胰岛素、瘦素受体后信号传导障碍,进而纠正胰岛素抵抗和瘦素抵抗,达到减肥的目的。

降脂颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠下丘脑瘦素及瘦素受体的影响

目的:观察下丘脑瘦素和瘦素受体在非酒精性脂肪肝大鼠发病中的变化规律,探讨中药降脂颗粒治疗非酒精性脂肪肝可能的作用机制。方法:高脂饲料(88%普通饲料+10%猪油+2%胆固醇)制备SD大鼠脂肪肝模型,将模型大鼠随机分为模型对照组、辛伐他汀组和降脂颗粒组,并设空白对照组。治疗4周后,观察大鼠的一般情况,记录肝指数,作血清TC、TG和肝组织病理学检测,RT-PCR法检测下丘脑组织瘦素和瘦素受体(OB-Rb)mRNA表达,Western blot检测下丘脑磷酸化瘦素受体(p-OB-Rb)蛋白表达。结果:模型组大鼠肝指数、血清TC、TG指标明显升高,并出现弥漫性的肝脏脂肪变。药物干预后这些数值都明显下降(P<0.05),肝脂肪变明显减轻,且降脂颗粒组优于辛伐他汀组;大鼠下丘脑瘦素受体mRNA水平和蛋白表达在模型组明显降低,两用药组大鼠下丘脑OB-RbmRNA水平及p-OB-Rb蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:降脂颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠有较好的治疗作用,其作用机制可能是通过调节下丘脑瘦素受体表达来实现的。

奶牛乳腺中瘦素及其受体的表达与定位

为探讨瘦素在奶牛乳腺发育、泌乳及退化各时期的表达变化规律及在乳腺组织中的具体位置,采用免疫印迹(western blot-ting)技术及激光共聚焦技术检测奶牛乳腺组织中瘦素及瘦素受体(OB-Rb)的表达变化及其定位。结果表明,瘦素在青春期表达量较高,在泌乳期表达量最低。瘦素受体在青春期和妊娠期表达量较高,泌乳期表达量相对较低,退化期逐渐恢复到妊娠期水平。

大豆异黄酮对肥胖大鼠肠道瘦素介导Janus激酶/信号转导及转录激活因子信号转导通路的影响

本试验旨在研究大豆异黄酮(SIF)对肥胖大鼠肠道瘦素介导Janus激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)信号转导通路的调控作用,探讨SIF对肥胖大鼠的干预机制。选取80只5周龄SD雄性大鼠,适应环境1周后,随机分为基础饲粮组(12只)和高脂饲粮组(68只),分别饲喂基础饲粮和高脂饲粮,饲喂8周后高脂饲粮组大鼠成功建立食源型肥胖大鼠模型。将40只肥胖大鼠随机分为SIF干预低、中、高剂量组和肥胖对照组,每组10只。低、中、高剂量组大鼠分别灌胃50、150、450 mg/kg BW的SIF提取物,基础饲粮组和肥胖对照组灌胃不含SIF提取物的溶媒剂。SIF连续干预肥胖大鼠5周,监测大鼠体重,并采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物(SABC)染色法研究大鼠肠道中长型瘦素受体(OB-Rb)、Janus激酶2(JAK2)、磷酸化的信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、细胞因子信号3抑制因子(SOCS3)和神经肽Y(NPY)的分布和表达。结果显示:试验各时期基础饲粮组大鼠体重均极显著低于肥胖对照组(P<0.01)。SIF干预5周后,与肥胖对照组相比,各SIF干预组大鼠体重均下降,并表现出剂量依赖性,其中中、高剂量组极显著低于肥胖对照组(P<0.01)。各组大鼠OB-Rb、JAK2、p-STAT3、SOCS3和NPY在十二指肠、空肠、回肠、结肠和直肠均有表达;同基础饲粮组相比,肥胖对照组大鼠上述5种因子在各肠段的表达量均显著降低(P<0.05);SIF干预组中OBRb、JAK2、p-STAT3和NPY的表达量在各肠段均较肥胖对照组增多,总体呈现剂量依赖性。由此得出,SIF可通过增加肠道中OB-Rb的表达,激活JAK,加速STAT的磷酸化,改善能量代谢,减弱肥胖大鼠瘦素抵抗状态,来起到减重作用。

瘦素及其受体系统在小鼠胚泡着床过程中子宫内膜的表达

目的:探讨瘦素(leptin)及其受体(Ob-Rb)在小鼠胚泡着床过程中子宫内膜的表达规律,以明确其在胚泡着床过程中的可能作用。方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测小鼠胚泡着床过程中子宫内膜leptin及其受体(Ob-Rb)的表达。结果:leptin在胚泡着床过程中在小鼠子宫内膜也都有表达,各时期的表达水平差异不明显(P>0.05);Ob-Rb在胚泡着床过程中在小鼠子宫内膜也都有表达,各时期的表达水平差异(P<0.01),且在孕期第4天表达水平最高,在5到7天仍然维持在一定水平。结论:瘦素及其受体(Ob-Rb)可能在胚泡着床过程中发挥作用,同时也可能参与着床后胚胎的生长发育。

瘦素对大鼠肝纤维化的信号转导调控及槲寄生碱的干预作用

目的探讨瘦素调控大鼠肝纤维化的信号转导机制及槲寄生碱的干预作用。方法以CCl4诱导的肝纤维化大鼠模型为研究对象,45只大鼠随机分为三组,分别为对照组、模型组、药物干预组。对照组不做任何处理,自由饮食、饮水;模型组和槲寄生碱治疗组分别腹腔注射40%CCl4-植物油溶液2 m L/kg,每周2次,共8周。实验第9周,治疗组经灌胃给予大鼠槲寄生碱8g/(kg·d),模型组灌胃给予等剂量的生理盐水,共8周。实验第17周颈椎脱臼法处死所有动物,取出肝脏左前叶。采用HE染色、MASSON染色方法观察槲寄生碱对肝纤维化大鼠肝组织形态学的影响;免疫组织化学的方法观察槲寄生碱对大鼠肝星状细胞瘦素及瘦素受体的影响。Western Blot法检测大鼠肝脏组织JAK2、STAT3蛋白水平以及JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平。结果肝脏大体、HE染色以及Masson胶原染色结果提示:大鼠肝纤维化模型复制成功,槲寄生碱具有阻断逆转肝纤维化的作用。免疫组织化学染色显示,与模型组比较,槲寄生碱明显抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达。Western Blot显示,正常对照组JAK2、STAT3蛋白表达量最少;模型组JAK2、STAT3蛋白高表达;而药物处理组的JAK2、STAT3蛋白表达明显下调。结论槲寄生碱可有效逆转大鼠肝脏纤维化,其作用机制可能是通过下调大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达,进而影响JAK2/STAT3信号通路来完成的。

瘦素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨leptin对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖影响 ,并研究leptinb型受体在VSMC中的表达。方法 本文主要采用培养的自发性高血压大鼠 (SHR)血管平滑肌细胞 (VSMC) ,研究Leptin受体b(OB Rb)的mRNA的表达 ,以及对平滑肌细胞增殖的影响。结果 OB Rb的mRNA仅在SHR大鼠的平滑肌细胞表达 ,而没有在正常对照大鼠 (WKY)的平滑肌细胞中表达。Leptin仅仅可以刺激SHR大鼠VSMC的DNA合成率的增加 ,而对WKY大鼠的VSMC则无作用。同样 ,Leptin对VSMC细胞增殖的作用 ,也仅仅在SHR大鼠可以发现 ,而WKY大鼠则没有。结论 上述研究的结果显示 ;高血压时 ,Leptin是一种对血管平滑肌细胞的增殖因子 ,也许在高血压的发生、发展过程中起重要的作用。