一种天然植物抗菌液PAMs对人白血病K562细胞的促凋亡作用

初步研究一种天然植物抗菌液(YAMS)对白血病K562细胞的杀伤作用及抗肿瘤分子作用机制。MTT法确定PAMs对K562细胞的增殖抑制作用和具有的浓度和时间依赖性;AO-EB双染、Annexin-FITC/PI流式细胞仪染色观察显示PAMS对K562细胞的杀伤作用与细胞凋亡相关,这也被进一步的分子水平与酶活力检测所证实。FQ-PCR基因表达检测发现,PAMs处理后,K562细胞株中caspase-3、caspase-9、bax等促凋亡相关基因有所上升,而抑制凋亡基因bcl-2表达下降,Western blot法检测到PAMs上调caspase-3的表达量,同时下调抑制凋亡蛋白survivin的表达。这也与caspase酶活性测定结果相一致,PAMs处理后的K562,其caspase-3、9活性均有所上升。所有这些结果一方面揭示PAMs对白血病K562细胞株具有强的杀伤作用,同时在形态和分子水平揭示其抗肿瘤抑制作用途径与诱导细胞凋亡的密切相关性,为PAMs作为抗白血病抗肿瘤中药的研发提供参考。

PAMs移除猪红细胞表面GFP-Escherichia coli的体外观察

为了观察猪红细胞与猪肺泡巨噬细胞(PAMs)相互作用以清除免疫复合物的生物学过程,采用显微镜技术和流式细胞技术,借助平行板流动小室灌流系统构建猪红细胞免疫黏附致敏GFP-Escherichia coli与PAMs的细胞动态互作模型,并对GFP-Escherichia coli从猪红细胞表面向PAMs转移的过程进行了研究。结果表明,黏附有GFP-Escherichia coli的猪红细胞流动至PAMs处停留,绿色荧光点位于红细胞与PAMs交接处。随后,猪红细胞脱离连接,GFP-Escherichia coli完全转移至PAMs并被PAMs吞噬清除。试验成功拍摄到PAMs移除猪红细胞表面GFP-Escherichia coli的过程,可为猪红细胞免疫黏附介导免疫复合物清除的研究提供可视化的证据。

“天然植物抗菌液”(PAMs)潜在抗SARS-CoV-2活性成分及机制

为探寻云南普洱丹州制药股份有限公司出品的“天然植物抗菌液”(PAMs)潜在抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的可能活性成分及作用机制,应用TCMSP、BATMAN和YaTCM数据库查找PAMs中植物药材来源的化学成分和作用靶点;通过GeneCards数据库获取冠状病毒靶点;Cytoscape作图构建“药材-成分-靶点-疾病”网络和潜在的靶点PPI网络;GO和KEGG富集分析预测PAMs的作用机制,并将PAMs主要活性成分与新型冠状病毒的关键蛋白进行分子模拟与对接。最后,以M13噬菌体为病毒模型,测定PAMs对噬菌体病毒的抑制作用。共得到166种PAMs中的药材活性成分、1007个药物靶点,调控新型冠状病毒的潜在作用靶点73个。构建的药材-成分-靶点-疾病网络中,靶点度数大于10的有PTGS2、PTGS1、PPARG、DPP4、CALM1、CASP3、RELA、BAX等。GO富集分析共得到2109个条目,主要包括细胞因子、蛋白磷酸化、免疫调节等;KEGG共富集到144条信号通路,排名前5的依次为人巨细胞病毒感染、TNF、卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒感染、甲型流感以及乙型肝炎信号通路。分子对接结果显示,木犀草素、槲皮素、黄芩素与SARS-CoV-2的3CL水解酶(Mpro)、S刺突糖蛋白均呈现出强的结合能力;黄芩素、杨梅素、槲皮素与血管受体紧张素转化酶(ACE2)的结合能力强。PAMs对M13噬菌体的抑制测定显示,20%的PAMs对其抑制作用达到99%以上。PAMs可能通过多成分、多靶点、多通路作用于SARS-CoV-2,并且红花、紫草的主要活性成分槲皮素、黄芩素以及木犀草素与Mpro、ACE2以及S刺突糖蛋白均有较低的结合自由能,揭示其可能直接对COVID-19产生辅助治疗作用。

利用中心切割技术分析环境空气中57种臭氧前体物(PAMS)

针对我国臭氧浓度过高的问题,建立了玛罐采样/三级冷阱预浓缩-中心切割技术-气相色谱(FID)-质谱法分析环境空气中57种臭氧前体物的方法。样品经三级冷阱预浓缩仪富集、排除水分和二氧化碳等干扰后,采用中心切割技术,将C2~C3的5种组分切到FID定量分析,其余52种组分用质谱检测,内标法定量。本方法性能实验结果表明,57种目标化合物的方法检出限为0.01~0.06 g/m^(3),高、中、低3组浓度水平的相对标准偏差(RSD)为0.1%~3.8%(n=6),空白加标回收率为91.2%~117.1%,方法性能满足检测要求。

猪PRRS抗性筛选单核细胞来源巨噬细胞模型的建立

采用密度梯度离心法分离猪外周血单核细胞(PBMCs),通过添加GM-CSF刺激使PBMCs转化为外周血单核细胞来源巨噬细胞(MDMs);比较了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染MDMs和肺泡巨噬细胞(PAMs)不同时间的病毒载量及病毒TCID50,研究了PRRSV体外感染猪MDMs后复制和滴度的变化规律。结果表明:PBMCs转化的MDMs具有很好的墨汁吞噬能力,MAC387标记阳性;GM-CSF刺激PBMCs转化为MDMs的最适质量浓度为20 ng.mL-1,刺激时间为72 h时MDMs转化率最高;PRRSV体外感染12 h时MDMs中病毒载量达到最高值,随后迅速下降;细胞上清液的病毒滴度在12～24 h进入平台期,然后转入衰亡期,与PRRSV在PAMs中增殖趋势相似。本试验建立的PRRS抗性筛选MDM模型,具有受检猪只损伤小、简便易行的特点,可代替PAM细胞模型用于评价猪对PRRS的抗性。

天然植物抗菌液凝胶膏剂流变学特性及烫伤修复作用研究

目的探讨影响天然植物抗菌液(PAMs)凝胶膏剂性能的处方因素并进行初步药效评价。通过研究不同温度、时间以及主要组分对凝胶膏剂表观成型性、流变学特性及对大鼠烫伤修复程度的影响,为PAMs凝胶膏剂基质处方的筛选提供一种新的评价方法。方法采用正交试验、流变学特性及建立大鼠烫伤模型,综合评估PAMs凝胶膏剂的性能。结果3种不同处理温度与时间下,50℃恒温固化24 h后室温(25℃)静置2 d形成的PAMs凝胶膏剂强度最大,其线性黏弹区(LVR)、储能模量(G′)、损耗模量(G″)、复数模量(G~*)值均最大;感官感受与流变学分析显示,正交试验各处理样品中Viscomate NP-700、酒石酸的浓度越高,凝胶膏剂强度越大;EDTA浓度越高,凝胶膏剂黏性越大;促透剂含3.0%丙二醇时,对大鼠烫伤修复效果较好,结果与LVR、G′、G″、G~*、相位角(δ)值变化一致。权重和综合分析表观成型性、黏弹性以及动物模型结果,初步确定该PAMs凝胶膏剂的优化基质配方为Viscomate NP-7004.0%、酒石酸0.2%、氮酮3.0%、丙二醇3.0%,不含EDTA。结论该体外、体内共同评价的方法为PAMs凝胶膏剂基质处方的筛选和优化提供了一种思路,同时对建立凝胶膏剂可行的测量指标和评价体系具有重要的参考价值。

猪原代CD163^(+)肺泡巨噬细胞的分离

猪CD163^(+)肺泡巨噬细胞(CD163^(+)PAM)是一种重要的免疫细胞,对呼吸道感染和炎症的研究具有重要意义。该文旨在提供一种可行的方法,通过磁珠从猪肺组织中分离和培养原代CD163^(+)肺泡巨噬细胞,以满足相关研究的需求。该方法不仅有助于研究呼吸系统疾病,还可应用于疫苗研发和药物筛选。

一种天然植物抗菌液对HEPG-2细胞的杀伤及作用机制研究

目的:采用多种方法探究天然植物抗菌液(PAMs)对人肝癌细胞HEPG-2的杀伤及初步分子作用机理。方法:运用形态学观察、MTT法测定PAMs对HEPG-2的抑制作用,AO/EB细胞双染、Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测PAMs作用于HEPG-2细胞后细胞的凋亡情况,再通过qRT-PCR与western blot检测HEPG-2中相关基因在m RNA水平和蛋白水平的表达量变化。最后利用划痕实验和transwell小室检测PAMs对HEPG-2细胞迁移能力的抑制。结果:PAMs可以抑制和杀伤HEPG-2细胞,作用效果呈浓度和时间依赖性,且与细胞的凋亡途径密切相关。PAMs可下调HEPG-2细胞中foxm1、survivin、bcl-2的m RNA表达水平,同时在蛋白水平下调foxm1的表达量,上调p53的表达量。除此之外,PAMs还能够有效地抑制HEPG-2细胞的体外迁移。结论:PAMs杀伤HEPG-2细胞的途径之一是通过下调foxm1、上调p53基因的表达量,从而抑制或减少其下游靶基因survivin和bcl-2的转录表达,促进细胞凋亡。本研究为基于PAMs抗癌创新民族医药的研发提供了重要的前期工作基础。

Modeling and compensation of hysteresis for pneumatic artificial muscles based on Gaussian mixture models

This paper presents a new data-driven model of length-pressure hysteresis of pneumatic artificial muscles(PAMs) based on Gaussian mixture models(GMMs). By ignoring the high-order dynamics, the hysteresis of PAMs is modeled as a first-order nonlinear dynamical system based on GMMs, and inversion of the model is subsequently derived. Several verification experiments are conducted. Firstly, parameters of the model are identified under low-frequency triangle-wave pressure excitations.Then, pressure signals with different amplitudes, shapes and frequencies are applied to the PAM to test the prediction performance of the model. The proposed model shows advantages in identification efficiency and prediction precision compared with a generalized Prandtl–Ishlinskii(GPI) model and a modified generalized Prandtl–Ishlinskii(MGPI) model. Finally, the effectiveness of the inverse model is demonstrated by implementing the feedforward hysteresis compensation in trajectory tracking experiments.