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巴西苏木素通过抑制SarA以PIA依赖性方式减少MRSA生物膜形成的研究
1
作者 李明哲 杨智芳 +4 位作者 周小仙 刘和兰 黎瑞 周永雯 陈泽慧 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期527-534,共8页
目的 探究巴西苏木素(brazilin,BN)抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜形成的机制,为开展中医药防治MRSA感染提供新思路。方法 建立MRSA ATCC43300菌株生物膜模型,试验分为BN 8、16... 目的 探究巴西苏木素(brazilin,BN)抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜形成的机制,为开展中医药防治MRSA感染提供新思路。方法 建立MRSA ATCC43300菌株生物膜模型,试验分为BN 8、16和32μg/mL组及对照组;通过结晶紫法测定BN对MRSA生物膜的抑制作用;刚果红平板法、硫酸-苯酚法检测BN对细胞间多糖黏附素(polysaccharide intercellular adhesion,PIA)合成的影响;使用real-time PCR(qRT-PCR)方法验证胞间黏附素操纵子icaA和icaD转录水平;分析高通量转录组测序可能存在的生物膜抑制基因;通过qRT-PCR、Western blot方法对相关基因及蛋白加以验证;通过皮下埋植静脉导管建立MRSA生物膜感染小鼠模型进一步验证BN疗效。结果 与对照组相比,不同浓度的BN组均能显著减少MRSA生物膜及PIA生成,其中在最低剂量8μg/mL BN作用下,MRSA生物膜形成量下降40.17%(P<0.01)、PIA减少55.56%(P<0.01);通过qRT-PCR验证不同浓度的BN组均能显著抑制icaA和icaD基因的表达,其中在8μg/mL浓度下,icaA和icaD基因的表达量分别比对照组降低了59.03%(P<0.01)、48.33%(P<0.05);高通量测序显示sarA下调-1.458 log2;qRTPCR、Western blot结果显示,BN能显著抑制sarA转录及其蛋白表达;通过体内实验显示,BN能有效抑制小鼠体内MRSA生物膜的形成。结论 BN通过抑制SarA的表达,减少PIA的合成,进而干预生物膜的形成。 展开更多
关键词 巴西苏木素 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 生物膜 pia SARA
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高效液相色谱法测定间苯二甲酸中微量3-CBA的研究
2
作者 王敏 《石化技术》 CAS 2024年第5期63-65,共3页
间苯二甲酸(PIA)中间羧基苯甲醛(3-CBA)的含量,是直接判断产品品质等级的重要指标之一。主要探索了选用合适的色谱柱、检测器波长、流动相配比,确定了典型色谱操作条件,建立了高效液相色谱法测定PIA中3-CBA的方法。结果表明,3-CBA含量在... 间苯二甲酸(PIA)中间羧基苯甲醛(3-CBA)的含量,是直接判断产品品质等级的重要指标之一。主要探索了选用合适的色谱柱、检测器波长、流动相配比,确定了典型色谱操作条件,建立了高效液相色谱法测定PIA中3-CBA的方法。结果表明,3-CBA含量在0~100mg/kg时,外标法测定3-CBA含量的线性相关系数大于0.999,线性良好,标准溶液的重复性测定结果小于5%,加标回收率在96.0%~103.8%之间。分别采用液相色谱法和极谱法对标准样品进行测定,检测结果相似,没有明显差异,表明该方法的准确度和精密度良好。 展开更多
关键词 pia 3-CBA 液相色谱 极谱法 外标
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淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白PIA基因序列分析及原核表达系统的构建 被引量:1
3
作者 孙爱华 宋春涵 +3 位作者 吴森林 毛亚飞 周海鸥 严杰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2262-2264,共3页
目的:分析本地区淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白PIA基因核苷酸及氨基酸序列,构建PIA基因的原核表达系统。方法:采用高保真PCR扩增9株淋病奈瑟菌全长PIA基因序列,T-A克隆测序后与GenBank公布的序列进行同源性比较。构建PIA原核表达系统。采... 目的:分析本地区淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白PIA基因核苷酸及氨基酸序列,构建PIA基因的原核表达系统。方法:采用高保真PCR扩增9株淋病奈瑟菌全长PIA基因序列,T-A克隆测序后与GenBank公布的序列进行同源性比较。构建PIA原核表达系统。采用不同浓度IPTG诱导重组目的蛋白rPIA表达,10%SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rPIA表达情况。采用Ni-NTA亲和层析法提纯rPIA,SDS-PAGE检测提纯效果。结果:与报道的PIA基因序列(GenBankNo:L19962)比较,9株淋病奈瑟菌核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.6%-100%和99.1%-100%,均属于IA6血清型。rPIA表达量可占细菌总蛋白量的50.1%,提纯后仅显示单一的目的蛋白条带。结论:IA6为本地区淋病奈瑟菌优势血清型,该基因序列相当保守。所构建的PIA基因原核表达系统能高效表达rPIA,为今后研制淋病奈瑟菌血清学检测试剂盒及疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 奈瑟球菌 淋病 基因 pia 序列分析 原核表达
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PIAS-NY酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活活性分析
4
作者 郑英 张露萍 +3 位作者 王海燕 孙红亚 梁虹 王建军 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第32期3971-3974,共4页
目的构建PIAS-NY(protein inhibitor of activated STAT-NY,PIAS-NY)的诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与PIAS-NY相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR法扩增PIAS-NY编码序列的片段,先将其克隆入pGEMT-easy内,经序列测定确认无误... 目的构建PIAS-NY(protein inhibitor of activated STAT-NY,PIAS-NY)的诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与PIAS-NY相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR法扩增PIAS-NY编码序列的片段,先将其克隆入pGEMT-easy内,经序列测定确认无误后,再将片段亚克隆入pGBKT7载体内,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PIAS-NY转化到酵母细胞AH109及Y187中,进行诱饵载体的毒性及自激活活性分析。结果构建了PIAS-NY的诱饵载体,经过自激活活性的分析发现,该诱饵载体没有自激活活性,同时对两种酵母细胞的生长无毒性作用。结论成功构建了PIAS-NY的酵母双杂交诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供了实验基础。 展开更多
关键词 酵母双杂交 piaS—NY 载体构建
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淋球菌孔蛋白PIB和PIA融合蛋白真核表达载体构建及体内表达
5
作者 廖芳 贺超 +2 位作者 戴翔 宋启发 熊萍 《热带医学杂志》 CAS 2006年第8期865-867,891,共4页
目的克隆淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因并构建融合蛋白真核表达质粒pCI-PIB-PIA,了解pCI-PIB-PIA能否被小鼠骨骼肌细胞摄取并表达。方法采用PCR方法从质粒pET-PIB和pET-PIA中获得孔蛋白PIB和PIA全长DNA片段,构建表达融合蛋白PIB和PIA的真核... 目的克隆淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因并构建融合蛋白真核表达质粒pCI-PIB-PIA,了解pCI-PIB-PIA能否被小鼠骨骼肌细胞摄取并表达。方法采用PCR方法从质粒pET-PIB和pET-PIA中获得孔蛋白PIB和PIA全长DNA片段,构建表达融合蛋白PIB和PIA的真核表达载体pCI-PIB-PIA。pCI-PIB-PIA肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ABC法检测pCI-PIB-PIA免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达。结果PCR可扩增出预期大小的全长PIB和PIA基因片段。与GenBank报道的PIB和PIA序列比较,重组质粒pCI-PIB-PIA中目的插入片段的核苷酸序列同源性达到99%以上。免疫小鼠的肌细胞能摄取pCI-PIB-PIA并表达PIB-PIA融合蛋白。结论本研究成功地构建了淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因重组真核表达载体pCI-PIB-PIA;pCI-PIB-PIA接种小鼠后可见免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达,该结果可作为淋球菌多价DNA疫苗的研究基础。 展开更多
关键词 淋球菌 孔蛋白 PIB-pia真核表达载体 融合蛋白
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PIAS-NY稳定转染小鼠精母细胞株的构建与鉴定
6
作者 郑英 王海燕 +5 位作者 张露萍 孙红亚 梁虹 贾筱琴 胡艳秋 朱永泽 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期15-18,共4页
目的:构建PIAS-NY基因慢病毒质粒,并将包装所得慢病毒感染小鼠精母细胞,获得稳定过表达PIAS-NY的细胞株。方法:应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,对阳性克隆进行PCR筛选及测序鉴定。将重组质粒与两种辅... 目的:构建PIAS-NY基因慢病毒质粒,并将包装所得慢病毒感染小鼠精母细胞,获得稳定过表达PIAS-NY的细胞株。方法:应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,对阳性克隆进行PCR筛选及测序鉴定。将重组质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,获得含慢病毒颗粒的细胞上清,用慢病毒感染小鼠精母细胞,并用Western印迹方法检测细胞中PIAS-NY蛋白的表达。结果:成功构建了pGC-FU-PIAS-NY慢病毒表达质粒,获得了稳定过表达PIAS-NY的小鼠精母细胞株。结论:PIAS-NY过表达慢病毒质粒及稳定转染小鼠精母细胞株的构建,为进一步体外研究PIAS-NY基因在精子发生中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 piaS-NY基因 慢病毒载体 小鼠精母细胞系
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离子交换树脂法去除PIA废水中Co^(2+)、Mn^(2+)的研究 被引量:1
7
作者 李博伟 郦和生 徐月欣 《绿色科技》 2014年第5期184-186,共3页
研究了D001、D113、116三种离子交换树脂法去除精间苯二甲酸(PIA)废水中的Co2+、Mn2+时的交换性能和再生性能,结果表明:三种树脂均可有效去除废水中的Co2+、Mn2+,相同体积的湿树脂交换Co2+、Mn2+总量大小为D113>116>D001,再生后... 研究了D001、D113、116三种离子交换树脂法去除精间苯二甲酸(PIA)废水中的Co2+、Mn2+时的交换性能和再生性能,结果表明:三种树脂均可有效去除废水中的Co2+、Mn2+,相同体积的湿树脂交换Co2+、Mn2+总量大小为D113>116>D001,再生后交换性能可恢复。 展开更多
关键词 离子交换树脂 pia废水 CO^2+ MN^2+
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淋球菌主要外膜蛋白PIA原核重组质粒的构建及序列分析 被引量:4
8
作者 熊萍 廖芳 +3 位作者 叶嗣颖 宋启发 崔斌 杨利 《热带医学杂志》 CAS 2004年第5期524-527,共4页
目的构建携带淋球菌主要外膜蛋白PIA基因的pET重组质粒,分析其编码序列。方法根据PIA已知序列设计一对引物,用PCR技术从淋球菌捷克标准株中扩增PIA;将目的基因PCR产物和质粒pET28a(+)同时用BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶进行双酶切,纯化... 目的构建携带淋球菌主要外膜蛋白PIA基因的pET重组质粒,分析其编码序列。方法根据PIA已知序列设计一对引物,用PCR技术从淋球菌捷克标准株中扩增PIA;将目的基因PCR产物和质粒pET28a(+)同时用BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶进行双酶切,纯化回收后将其连接并将重组质粒转化大肠杆菌DH5α。将构建的重组质粒pET28a(+)-PIA通过PCR、质粒双酶切、DNA测序证实获得正确的重组克隆。结果成功构建PIA基因原核重组质粒pET28a(+)-PIA。序列分析表明,其携带的PIA基因序列与GenBank中公布的淋球菌(AF090818)的PIA序列具有很高的同源性,其同源性达到99.9%。结论成功构建携带淋球菌主要外膜蛋白PIA基因重组表达载体,有助于更深入地分析其基因功能,为后期淋球菌的临床检测和基因疫苗研制打下基础。 展开更多
关键词 淋球菌 主要外膜蛋白pia 重组质粒
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PIAS1通过调控Sonic hedgehog信号通路使胰腺癌细胞SW1990获得对吉西他滨的耐药性 被引量:4
9
作者 刘怀泽 俞婷婷 程雁 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期769-773,782,共6页
目的 :研究吉西他滨耐药性胰腺癌细胞中Sonic hedgehog(Shh)信号通路异常激活的机制。方法:通过间歇梯度倍增法筛选出对吉西他滨产生耐药性的胰腺癌细胞SW1990-GEM,荧光实时定量PCR和蛋白质印迹法检测耐药细胞中PIAS1的表达;利用RNA干... 目的 :研究吉西他滨耐药性胰腺癌细胞中Sonic hedgehog(Shh)信号通路异常激活的机制。方法:通过间歇梯度倍增法筛选出对吉西他滨产生耐药性的胰腺癌细胞SW1990-GEM,荧光实时定量PCR和蛋白质印迹法检测耐药细胞中PIAS1的表达;利用RNA干扰技术构建稳定低表达PIAS1的细胞株SW1990-GEM-sh PIAS1,从增殖速度、克隆形成能力及裸鼠皮下成瘤能力等方面考察PIAS1、Shh信号通路与胰腺癌耐药性的相关性。结果:耐药株SW1990-GEM中PIAS1基因表达量明显升高;PIAS1的高度表达正向激活了Shh信号通路的活性,使得细胞获得耐药能力;人为降低PIAS1的高表达后,耐药株的耐药能力同时被减弱。结论:PIAS1是使耐药株获得耐药性的关键因子,PIAS1通过正向调控Shh信号通路使其获得耐药能力。 展开更多
关键词 Sonic HEDGEHOG信号通路 胰腺癌 吉西他滨 耐药性 piaS1
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GS-PIA算法的收敛性证明 被引量:5
10
作者 王志好 李亚娟 邓重阳 《计算机辅助设计与图形学学报》 EI CSCD 北大核心 2018年第11期2035-2041,共7页
非均匀三次B样条曲线插值的GS-PIA算法具有简单、稳定及收敛速度较快等优点.文中详细阐述了GS-PIA算法的几何意义,严格证明了算法的收敛性.首先定义算法配置矩阵的比较矩阵,借助矩阵理论的正则分裂证明比较矩阵对应的迭代矩阵的收敛性;... 非均匀三次B样条曲线插值的GS-PIA算法具有简单、稳定及收敛速度较快等优点.文中详细阐述了GS-PIA算法的几何意义,严格证明了算法的收敛性.首先定义算法配置矩阵的比较矩阵,借助矩阵理论的正则分裂证明比较矩阵对应的迭代矩阵的收敛性;然后利用矩阵的相似性,证明了非均匀三次B样条曲线插值的GS-PIA算法的收敛性.为GS-PIA算法的进一步研究及其在计算机图形学等相关领域的应用打下了理论基础. 展开更多
关键词 GS-pia算法 收敛性证明 迭代速度 曲线插值 非均匀三次B样条曲线
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鄂西南地区稻瘟病菌AVR-Pia动态变化研究 被引量:1
11
作者 韩旭晨 董岩 +6 位作者 韩豪杰 谭艳平 刘学群 刘新琼 徐鑫 李开 王春台 《中国农学通报》 2022年第21期112-121,共10页
为了解鄂西南地区稻瘟病菌AVR-Pia的分布和动态变化,于2017—2020年在鄂西南9个地点同时种植特定100个水稻品种,采集感病稻杆并分离稻瘟病菌;利用水稻单基因系IRBLa-A进行致病性鉴定,设计无毒基因AVR-Pia特异性引物进行PCR扩增和序列分... 为了解鄂西南地区稻瘟病菌AVR-Pia的分布和动态变化,于2017—2020年在鄂西南9个地点同时种植特定100个水稻品种,采集感病稻杆并分离稻瘟病菌;利用水稻单基因系IRBLa-A进行致病性鉴定,设计无毒基因AVR-Pia特异性引物进行PCR扩增和序列分析。结果表明2017—2020年分离保存的661株稻瘟病菌菌株中,有49株含有无毒基因AVR-Pia(占7.4%),不同年份及不同地点AVR-Pia出现频率差异明显,2017—2020年分别为7.5%、16.0%、3.1%、5.0%,AVR-Pia出现频率最高的是野三关(15.8%),其次是柏杨和来凤(都是14.6%),咸丰、建始和太平未出现。含Pia的单基因系IRBLa-A对其中91个菌株(13.8%)具有抗性。49个菌株能扩增出463 bp的特异性条带,序列分析发现其CDS区域未发现突变,起始密码子上游109 bp位点发生碱基突变G/T,该位点变异是否与表达相关有待进一步研究。说明鄂西南地区无毒基因AVR-Pia存在较少,抗性基因Pia不适合在鄂西南地区作为主效抗病基因来选择育种。 展开更多
关键词 稻瘟病菌 AVR-pia 动态变化 鄂西南地区 变异机理
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UTOPIA Level 3接口的FPGA实现 被引量:1
12
作者 吴鑫琦 徐展琦 《电子科技》 2008年第8期35-38,共4页
通用测试操作ATM物理层接口(UTOPLA)是ATM论坛定义的ATM设备内部重要接口,它用于连接物理层和ATM层设备,ATM论坛已经颁布了4个等级的UTOPLA规范。文中重点分析了UTOPLA Level 3接口的连接拓扑、信元格式、接口信号以及接收方向的工作流... 通用测试操作ATM物理层接口(UTOPLA)是ATM论坛定义的ATM设备内部重要接口,它用于连接物理层和ATM层设备,ATM论坛已经颁布了4个等级的UTOPLA规范。文中重点分析了UTOPLA Level 3接口的连接拓扑、信元格式、接口信号以及接收方向的工作流程和时序。最后,在ISE下对该接口进行仿真验证。 展开更多
关键词 异步传输模式 通用测试操作ATM物理层接口 现场可编程门阵列
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Regulation of cytokine signaling pathways by PIAS proteins 被引量:21
13
作者 Ke Shuai 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2006年第2期196-202,共7页
Cytokines 激活多重信号 transduction 小径调整基因表示。STAT 和 NF-kB 是 cytokines 激活的抄写因素的二个重要家庭。STAT 和 NF-kB 活动的反常规定与人的疾病被联系了。激活的 STAT (PIAS ) 蛋白质家庭的蛋白质禁止者被建议了与超过... Cytokines 激活多重信号 transduction 小径调整基因表示。STAT 和 NF-kB 是 cytokines 激活的抄写因素的二个重要家庭。STAT 和 NF-kB 活动的反常规定与人的疾病被联系了。激活的 STAT (PIAS ) 蛋白质家庭的蛋白质禁止者被建议了与超过 60 蛋白质交往,许多哪个抄写因素涉及免疫系统。PIAS 蛋白质通过几机制调整抄写,包括堵住抄写因素的 DNA 有约束力的活动,招募 transcriptional 合作抑压者和支持的蛋白质 sumoylation。这篇文章是在表明小径的 STAT 和 NF-kB 的规定考察 PIAS 蛋白质的角色。 展开更多
关键词 细胞因子 信号途径 piaS蛋白 激活作用
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基于Office PIA自动生成Word文档 被引量:5
14
作者 崔建功 《电脑知识与技术》 2013年第4X期2899-2903,共5页
随着办公量的日益增大,对办公软件的二次开发以适应需求的趋势变得必要。该文介绍了VB.NET环境下通过Office PIA对Word工程配筋计算报告书进行编程设计的方法,包括文档文字、图片和表格等的自动生成与排版设计。采用该方法可大幅度提高... 随着办公量的日益增大,对办公软件的二次开发以适应需求的趋势变得必要。该文介绍了VB.NET环境下通过Office PIA对Word工程配筋计算报告书进行编程设计的方法,包括文档文字、图片和表格等的自动生成与排版设计。采用该方法可大幅度提高办公效率。 展开更多
关键词 Office pia VB.NET WORD 自动化
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PIAS-1基因真核表达质粒的构建与鉴定
15
作者 秦会影 王海琳 +1 位作者 刘钰 张培 《实用临床医药杂志》 CAS 2014年第16期7-10,共4页
目的构建PIAS-1 siRNA干扰载体Plko.1、PIAS-1。方法设计以PIAS-1基因为靶标的siRNA序列,并克隆人载体Plko.1,用基因测序进行重组克隆验证。结果 PCR检测证实siRNA插入Plko.1质粒,测序分析证实插入序列正确。结论成功构建PIAS-1基因的si... 目的构建PIAS-1 siRNA干扰载体Plko.1、PIAS-1。方法设计以PIAS-1基因为靶标的siRNA序列,并克隆人载体Plko.1,用基因测序进行重组克隆验证。结果 PCR检测证实siRNA插入Plko.1质粒,测序分析证实插入序列正确。结论成功构建PIAS-1基因的siRNA载体,为研究PIAS-1基因对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响提供了稳定转染的骨架载体。 展开更多
关键词 宫颈癌 piaS-1 质粒pLKO 1 SIRNA
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Efficacy of Spinal Pia Mater Incision and Laminoplasty Combined with Internal Fixation for Old Spinal Cord Injury 被引量:4
16
作者 Gen-long Jiao Zhi-zhong Li +2 位作者 Ming Tan Yong-qin Pan Zhi-gang Zhou 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2012年第3期134-140,共7页
Objective To evaluate the clinical efficacy of incising spinal pia mater to relieve pressure and unilateral open-door laminoplasty with internal screw fixation for treatment of the dated spinal cord injury. Methods Fr... Objective To evaluate the clinical efficacy of incising spinal pia mater to relieve pressure and unilateral open-door laminoplasty with internal screw fixation for treatment of the dated spinal cord injury. Methods From March, 2009 to July, 2010, 16 cases with chronic cervical cord injury underwent spinal dura mater incision and unilateral open-door laminoplasty with internal screw fixation. Nerve functions of preand postoperation were evaluated by Frankel classification and the Japanese Orthopaedic Association (JOA) scale. The improvement rate of JOA score at the indicated time was recorded. Results Postoperative Frankel classification rating of 16 patients improved obviously. JOA scores at the 1st month, 3rd month, 6th month, and 12th month after surgery were 7.9±2.3, 8.5±1.6, 8.9±2.1, and 12.4±2.5, respectively, and significantly increased compared with that prior to surgery (5.5±0.6). At the end of follow-up period, JOA score was significantly higher than that of pre-treatment (P<0.05). The recovery was relatively rapid during the first 3 months following the surgery, then entered a platform period. Conclusion It is effective for patients with dated spinal cord injury to undergo spinal decompression and laminoplasty. 展开更多
关键词 脊髓损伤 临床疗效 内固定术 板成形 切口 神经功能
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人睾丸特异表达基因PIAS-NY原核表达和多克隆抗体的制备
17
作者 王海燕 曾凡强 +2 位作者 王玉兰 郑英 戚大石 《中国现代医学杂志》 CAS 2018年第33期13-18,共6页
目的构建PIAS-NY-p ET30a原核表达载体,并诱导其成功表达,经纯化后获得高浓度的可溶性融合蛋白His-PIAS-NY,免疫小鼠获得鼠源性PIAS-NY多克隆抗体。方法以人精原c DNA文库为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增PIAS-NY开放阅读框,克隆到p ET... 目的构建PIAS-NY-p ET30a原核表达载体,并诱导其成功表达,经纯化后获得高浓度的可溶性融合蛋白His-PIAS-NY,免疫小鼠获得鼠源性PIAS-NY多克隆抗体。方法以人精原c DNA文库为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增PIAS-NY开放阅读框,克隆到p ET30a表达载体中,酶切、PCR鉴定构建重组质粒。测序完全正确后将质粒PIAS-NY-p ET30a转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行大量扩增,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。超声、离心、His-Ni柱亲和层析纯化包涵体蛋白,依次经过不同浓度尿素进行蛋白质复性,获得高浓度的可溶性His-PIAS-NY融合蛋白。分6次BalB/C小鼠腹腔注射乳化纯化蛋白。2个月后小鼠眼球取血,收集血清。结果成功构建原核表达质粒PIAS-NY-pET30a;利用终浓度1 mmol/L IPTG 37℃诱导4 h,大肠杆菌BL21大量表达融合蛋白His-PIAS-NY,并以包涵体形式存在于菌体中;尿素变性后His-Ni柱纯化融合蛋白,复性后获得高浓度的可溶性蛋白His-PIAS-NY;6次免疫后收获存活小鼠抗血清;酶联免疫吸附测定(ELISA)抗血清滴度达到1∶100 000;免疫印迹和免疫共沉淀证实PIAS-NY抗血清能特异性识别293T细胞和GC2细胞中PIAS-NY蛋白。结论成功获得PIAS-NY多克隆抗体,而且具有高反应性和高特异性,PIAS-NY在GC2细胞和293T细胞中表达,并且能够与RUVBL2蛋白发生相互作用。 展开更多
关键词 精子发生 piaS-NY 原核表达载体 蛋白纯化 多克隆抗体制备
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EFFECTS OF ELECTRO ACUPUNCTURE AND TWIRLING REINFORCING-REDUCING MANIPULATIONS ON VOLUME OF MICROCIRCULATORY BLOOD FLOW IN CEREBRAL PIA MATER
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作者 史仁华 姬广臣 +2 位作者 赵鲁鸣 王世军 董军 《Journal of Traditional Chinese Medicine》 SCIE CAS CSCD 1998年第3期220-224,共5页
Effects of electroacupuncture (EA) and routine acupuncture with twirling reinforcing and reducing manipulation of the needle (RA) both at Zusanli point (St 36) on volume of microcirculatory blood flow in the cerebral ... Effects of electroacupuncture (EA) and routine acupuncture with twirling reinforcing and reducing manipulation of the needle (RA) both at Zusanli point (St 36) on volume of microcirculatory blood flow in the cerebral pia mater were observed by fenestration of the cranial bone and laser Doppler microcirculatory blood flow analyser. Results showed that both RA and EA could increase the volume of microcirculatory blood flow in the cerebral pia mater; and that the increase in the EA group was superior to that in RA group. This suggests that a moderate and effective stimulation is a key to the production of a regulative effect on the organism. 展开更多
关键词 实验针灸学 针刺补泻手法 甲皱微循环 皮肤温度 捻转补泻手法 针刺手法 科学技术 中国医药学 杨兆民 石学敏
全文增补中
七十味珍珠丸干预脑梗死模型大鼠软脑膜微循环及胶质瘢痕的变化 被引量:2
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作者 马辉 孙正启 李岩松 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第28期4462-4467,共6页
背景:改善脑梗死微脑膜循环、抑制瘢痕形成可有效治疗脑梗死疾病,因此寻找安全有效的药物来改善脑微循环及瘢痕形成至关重要。目的:探讨七十味珍珠丸对脑梗死大鼠软脑膜微循环、Janus激酶2(Janus Kinase2,JAK2)/转录激活因子3(signal tr... 背景:改善脑梗死微脑膜循环、抑制瘢痕形成可有效治疗脑梗死疾病,因此寻找安全有效的药物来改善脑微循环及瘢痕形成至关重要。目的:探讨七十味珍珠丸对脑梗死大鼠软脑膜微循环、Janus激酶2(Janus Kinase2,JAK2)/转录激活因子3(signal transducer and activator transcription3,STAT3)蛋白表达及胶质瘢痕的影响。方法:于95只雄性SD大鼠中随机抽取15只作为健康组,剩余大鼠建立脑梗死模型,将模型大鼠随机分为模型组、中药低、中、高剂量组以及尼莫地平组,在建模过程中意外死亡5只,剩余75只建模成功,每组15只。中药低、中、高剂量组分别于造模前25 min给予16.67,33.34,66.68 g/kg七十味珍珠丸混悬液灌胃1次,尼莫地平组于造模前25 min给予30 mg/kg尼莫地平片灌胃1次。建模后运用MCIP微循环图像处理系统检测脑血流速度,苏木精-伊红染色观察脑组织病理学形态,RT-PCR检测JAK2、STAT3、神经蛋白聚糖、胶质纤维酸性蛋白基因水平,TUNEL技术检测脑组织细胞凋亡情况,免疫印迹检测JAK2、STAT3、p-STAT3、神经蛋白聚糖、胶质纤维酸性蛋白的蛋白表达。结果与结论:(1)与健康组相比,模型组不同时间点脑血流速度降低,JAK2、STAT3、p-STAT3、神经蛋白聚糖、胶质纤维酸性蛋白、神经元细胞凋亡率升高(P<0.05);(2)与模型组相比,中药低剂量组不同时间点脑血流速度升高,JAK2、STAT3、磷酸化转录激活因子3、神经蛋白聚糖、胶质纤维酸性蛋白、神经元细胞凋亡率降低(P<0.05);(3)与中药中剂量组相比,中药高剂量组与尼莫地平组不同时间点脑血流速度升高,JAK2、STAT3、p-STAT3、神经蛋白聚糖、胶质纤维酸性蛋白、神经元细胞凋亡率降低(P<0.05);(4)与中药高剂量组相比,尼莫地平组不同时间点脑血流速度降低,JAK2、STAT3、p-STAT3、神经蛋白聚糖、胶质纤维酸性蛋白、神经元细胞凋亡率升高(P<0.05);(5)健康组大鼠脑皮质组织结构正常;模型组脑皮质组织神经元减少,少数存活的神经元固缩,并有大量炎性细胞浸润;与模型组相比,中药低、中、高剂量组及尼莫地平组均有所改善,且以中药高剂量组效果显著;(6)提示七十味珍珠丸可能通过抑制胶质瘢痕标志蛋白神经蛋白聚糖、神经胶质纤维酸性蛋白水平影响胶质瘢痕的形成,还可改善脑梗死大鼠软脑膜微循环,并通过抑制JAK2/STAT3通路的激活,减少脑组织细胞的凋亡,从而发挥脑保护的作用。 展开更多
关键词 七十味珍珠丸 脑梗死大鼠 软脑膜微循环 JAK2/STAT3 胶质瘢痕
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Toric曲面的渐进迭代逼近
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作者 段卓 彭兴璇 《应用数学进展》 2023年第12期5166-5174,共9页
渐进迭代逼近(PIA)是一种直观有效的数据拟合方法。当给定数据点的参数域为不规则的凸多边形时,需要对参数域剖分来用多片曲面拟合,然后考虑相邻曲面片的拼接。Toric曲面是Bézier曲面的推广,它的参数域可以调整为任意凸多边形。使... 渐进迭代逼近(PIA)是一种直观有效的数据拟合方法。当给定数据点的参数域为不规则的凸多边形时,需要对参数域剖分来用多片曲面拟合,然后考虑相邻曲面片的拼接。Toric曲面是Bézier曲面的推广,它的参数域可以调整为任意凸多边形。使用Toric曲面做渐进迭代逼近即可以保留渐进迭代逼近的优点,也可以整体对数据点进行拟合,无需考虑曲面的重构与拼接。本篇文章定义了一种对凸多边形上的参数点进行字典排序的方法。并实现了一种用Toric曲面做渐进迭代逼近的算法。我们还用具体的数值例子证明方法有效。 展开更多
关键词 Toric曲面 渐进迭代逼近(pia) 数据拟合 BÉZIER曲面
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