番茄PR-1和PR-5基因的表达特性分析

分别克隆番茄PR-1和PR-5基因片段,并以之制备探针,采用Northern blot方法研究了PR-1和PR-5基因在正常生长条件下番茄根、茎、叶、果实发育中的表达模式,研究了干旱、复水和内外源乙烯对这两种基因表达的影响.结果表明:这两个基因主要在衰老叶片、B期果实和根部表达,干旱抑制了这两个基因的表达,复水和乙烯诱导其表达.

拟南芥PR-1基因启动子的克隆与植物表达载体的构建

根据已报道的拟南芥(Arabidopsis thaliana L.)病程相关蛋白基因(PR-1)序列设计引物,通过PCR技术从拟南芥中扩增得到水杨酸诱导表达的PR-l基因启动子片段,序列分析表明,该启动子含910bp核苷酸,与已报道的序列比较,核苷酸的同源性为99.7%。将该启动子构建到植物表达载体pBI121上,获得病程相关蛋白基因(PR-1)启动子驱动的GUS报告基因的植物表达载体pBI-pr1p,将其转入根癌农杆菌GV3101,通过农杆菌介导转化拟南芥,获得转基因拟南芥植株,为深入研究寄主-病原物相互作用的分子机理奠定基础。

Pr/Zr原子比对Pr_(x)Zr_(1−x)O_(2−δ)催化氧化脱硝活性的影响

采用溶胶-凝胶法制备了不同Pr/Zr原子比的Pr_(x)Zr_(1−x)O_(2−δ)催化剂用于催化氧化脱硝。结果表明,催化氧化脱硝效率随Pr原子比的增加而先提高后降低;当Pr/Zr原子比为5∶5时,在250°C下,最佳脱硝活性可达94.62%。采用SEM、N_(2)吸附-脱附、XRD、XPS、H_(2)-TPR和FT-IR对催化剂进行了表征。结果表明,活性最好的催化剂(Pr_(0.5)Zr_(0.5)O_(2−δ))具有“层状”形貌,表面孔隙多,比表面积大,孔体积分别为77.74 m^(2)/g和0.66 cm^(3)/g。此外,随着Pr原子的增加,晶相从c-ZrO_(2)转变为Pr_(2)Zr_(2)O_(7)。XPS和H_(2)-TPR结果表明,表面化学吸附氧和表面Pr^(4+)氧化物增加,Pr原子比的上升有利于产生氧空位(Vӧ),有利于提高催化氧化脱硝效率。FT-IR表征结果表明,Pr_(0.5)Zr_(0.5)O_(2−δ)固溶体具有较高的NO选择性,有利于NO的催化氧化。抗SO_(2)和H_(2)O毒性实验表明,5∶5的Pr/Zr原子比的催化剂具有更好的抗毒性。此外,利用IC分析吸收产物,结果表明,吸收液中的主要产物是NO_(2)^(-)和NO_(3)^(-)。

HIV-1蛋白酶基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的为了研究HIV-1蛋白酶的生物学活性,制备HIV-1 PR蛋白及其特异性抗体。方法用PCR方法扩增编码PR的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并表达HIV-1 PR蛋白,用His抗体为一抗做Western blot鉴定目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达载体pET28 a(+)-PR成功构建,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到的PR蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确。用纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论得到纯化的HIV-1PR蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白PR,为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。

二苯乙烯苷对APP/PS1双转基因小鼠APP、PS1基因表达的影响

目的探讨何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)对APP/PS1双转基因小鼠脑组织中β淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PS1)基因的表达变化。方法 3月龄APP/PS1双转基因小鼠50只,随机分为APP/PS1对照组、石杉碱甲组和TSG高、中、低(0.3、0.1、0.033 g/kg)剂量组,另取同龄C5B7L/6J小鼠10只为正常对照组。分别给予相应药物60 d后,应用FQ-PCR法检测脑组织中APP、PS1 mRNA的表达。结果与APP/PS1对照组比较,TSG高、中、低各剂量组以及石杉碱甲组APP、PS1mRNA表达均明显下调(P<0.01或P<0.05);TSG各剂量组与石杉碱甲组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论二苯乙烯苷可对阿尔茨海默病起到一定防治保护作用,其机制可能与APP、PS1基因受到明显抑制有关。

乳腺癌中BI-1基因与ER PR表达的关系及意义

目的:探讨乳腺癌BI-1基因与雌孕激素受体表达的关系及意义。方法:采用免疫组化S-P法检测48例乳腺癌及配对正常组织中BI-1的表达,并分析与ER、PR受体的关系。结果:乳腺癌及配对正常组织中BI-1表达阳性率分别为77.08%、18.75%,两组间相比有显著性差异(P<0.05)。ER阴性组BI-1表达阳性率高于ER阳性组,阳性率分别为94.74%和65.52%差异有显著性(P<0.05);PR阳性和阴性组之间的表达差异无显著性(P>0.05);淋巴结转移组BI-1表达率高于未转移组(P<0.05)。结论:BI-1与ER的联合检测是判断乳腺癌患者预后的重要指标。

刺头复叶耳蕨不同提取部位体外抗HIV-1蛋白酶活性的研究

目的对鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物刺头复叶耳蕨不同提取部位体外抗HIV-1蛋白酶活性进行研究。方法用荧光光度法测定蛋白酶的半数抑制浓度(IC50)。结果刺头复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物抑制HIV-1蛋白酶的半数有效浓度IC50分别为0.73,1.17,2.47μg/ml。结论刺头复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物与水提取物具有体外抑制HIV-1蛋白酶活性。

乳腺癌组织中bag-1、ER和PR的表达及意义

目的检测bag-1,ER和PR在乳腺癌组织中的表达与分布情况,探讨bag-1、ER和PR的表达水平在乳腺癌发病、早期诊断方面的价值。方法采用免疫组化SABC法观察了100例乳腺癌与35例乳腺良性肿瘤及10例正常乳腺组织的石蜡标本切片中bag-1,ER和PR的表达与分布情况。结果bag-1在乳腺癌组织中,乳腺良性肿瘤中,正常乳腺组织中阳性表达率分别为85.0%,11.5%,10.0%,差异明显(P<0.05)。ER在乳腺癌组织中,乳腺良性肿瘤中,正常乳腺组织中阳性表达率分别为61.0%,28.6%,30.0%,差异明显(P<0.05)。PR在乳腺癌组织中,乳腺良性肿瘤中,正常乳腺组织中阳性表达率分别为64.0%,31.5%,30.0%,差异明显(P<0.05)。结论在乳腺癌发病过程中,bag-1,ER和PR可能起着重要的作用,同时检测bag-1、ER和PR的表达与分布情况,在乳腺癌的早期诊断方面有一定价值。

玉米须总皂苷对肥胖大鼠脂肪组织中UCP1和PRDM16表达的影响

目的：探讨分析玉米须总皂苷对高脂饮食喂养的肥胖大鼠棕色脂肪组织中解偶联蛋白-1（UCP1）和PR结构域蛋白16（PRDM16）表达的影响。方法：雄性健康清洁级SD大鼠共40只,在适应性喂养1周后随机分为正常对照组、模型对照组以及玉米须总皂苷低剂量和高剂量干预组,每组10只,给予高脂饮食12周后构建肥胖大鼠模型,治疗时玉米须总皂苷低和高剂量组分别给予玉米须总皂苷100、200 mg·kg^-1·d^-1灌胃,正常对照组和模型对照组给予1 m L·kg^-1·d^-1生理盐水灌胃,治疗12周后称重、处死大鼠,收集血清和棕色脂肪组织,检测血清血脂指标,HE染色检测棕色脂肪组织病理学,Real-Time PCR和Western Blot检测棕色脂肪组织中UCP1和PRDM16的m RNA和蛋白表达水平。结果：与正常对照组相比,模型对照组大鼠体重明显升高（P〈0.05）,棕色脂肪组织重量和棕色脂肪组织重量/大鼠体质量明显降低（P〈0.05）,与模型组相比,玉米须总皂苷治疗后,大鼠体质量明显降低（P〈0.05）,棕色脂肪组织重量和棕色脂肪组织重量/大鼠体质量明显升高（P〈0.05）;与正常对照组相比,模型对照组血清葡萄糖、甘油三酯、总胆固醇和HDL-C明显升高（P〈0.05）,LDL-C明显降低（P〈0.05）;与模型对照组相比,玉米须总皂苷治疗后,血清葡萄糖、甘油三酯水平、总胆固醇和HDL-C降低（P〈0.05）,LDL-C明显升高（P〈0.05）;与正常对照组相比,模型对照组棕色脂肪细胞分布明显减少,脂肪空泡数量明显增加,而玉米须总皂苷治疗后,脂肪空泡数量明显降低;与正常对照组相比,模型对照组大鼠棕色脂肪组织中UCP1和PRDM16的m RNA和蛋白表达明显降低（P〈0.05）,玉米须总皂苷治疗后表达明显升高（P〈0.05）。结论：玉米须总皂苷治疗12周可以明显降低肥胖大鼠体质量和棕色脂肪组织中的相对含量,这可能与其可以降低棕色脂肪组织中UCP1和PRDM16的表达有关。

乳腺癌组织中AIB-1蛋白表达与临床病理指标的相关性

目的探讨乳腺癌组织中AIB-1的表达与临床病理指标的关系。方法采用免疫组织化学方法检测218例乳腺癌组织、45例正常乳腺组织、45例良性乳腺病变组织中AIB-1表达情况,并结合乳腺癌患者的临床病理资料进行统计分析。结果乳腺癌组织中AIB-1过表达率(54.59%)显著高于正常乳腺组织(22.22%)和乳腺良性病变组织(33.33%)(P=0.000)。AIB-1在乳腺癌组织学分级Ⅲ级组过表达率(63.39%)显著高于Ⅰ级组(18.18%)和Ⅱ级组(48.42%)(P=0.004)。AIB-1在腋淋巴结转移>3个组中的过表达率(73.47%)显著高于腋淋巴结转移≤3个组(49.11%)(P=0.003)。乳腺癌组织中,AIB-1过表达率在ER阳性组(59.26%)、阴性组(46.99%)间的差异无统计学意义(P=0.077),PR阳性组(59.48%)、阴性组(49.02%)间的差异无统计学意义(P=0.122),而HER-2阳性组的AIB-1过表达率(64.08%)显著高于阴性组(46.08%)(P=0.008)。结论乳腺癌中AIB-1过表达与肿瘤的恶性程度密切相关,提示可能预后不良。AIB-1是一个重要的预测他莫昔芬疗效的指标。

TCDD暴露对子宫内膜异位症模型小鼠在位内膜组织PR亚型和DNMT-1表达的影响

目的探讨TCDD暴露小鼠子宫内膜异位症模型在位内膜DNA甲基转移酶-1(DNMT-1)、PR-A、PR-B的表达,以及PR-A、PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度。方法 60只C57BL/6雌性小鼠以2∶1与30只C3H雄性小鼠随机合笼交配,根据母鼠妊娠第8天和雌性子鼠出生后21 d所暴露TCDD的剂量(μg/kg)分为5组,0/0组、0/3组、3/0组、3/3组及3/10组。每组均为12只雌性子鼠。以上组别除0/0组外,均于出生后49 d再次暴露TCDD(3μg/kg),出生后第70天给予TCDD(3μg/kg)并实施自体子宫内膜移植术构建小鼠子宫内膜异位症模型,并且于术后3、6、9周各暴露1次TCDD(3μg/kg),术后12周取阴道脱落细胞将处于动情前期雌性子鼠脱臼处死。取其在位内膜制成蜡块,免疫组化SP法检测在位内膜DNMT-1、PR-A、PR-B的表达,以及甲基化特异PCR(MSP)检测PR-A、PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度。结果 (1)DNMT-1在3/3组中的表达显著高于0/0组(P<0.01),在3/10组中的表达显著高于3/3组(P<0.01);PR-B在0/0组中的表达显著高于3/3组(P<0.01),在3/3组中的表达显著高于3/10组(P<0.01);4组PR-A的表达经比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度3/3组中的表达高于0/0组(P<0.05),在3/10组中的表达高于3/3组(P<0.05);4组PR-A基因启动子区Cp G岛甲基化程度经比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论自胚胎期至成年期持续暴露TCDD有可能通过上调在位子宫内膜DNMT-1的表达,从而使PR-B基因启动子区Cp G岛甲基化程度增强,致使PR-B表达减弱,促进了内异症的发生与发展。

扶正汤对MRL/1Pr红斑狼疮小鼠模型免疫器官及生活质量的影响

目的探讨扶正汤治疗系统性红斑狼疮的有效性和机制。方法应用经典红斑狼疮小鼠模型MRL/1Pr小鼠,分为生理盐水对照组、中药组、中西医结合组、西药组,治疗6周。对小鼠精神状态、食量、体重、胸腺和脾脏指数进行观察和检测。结果中药组小鼠精神状态好、食量、体重、胸腺和脾脏指数均较对照组增加,西药组体重较其它三组减轻,胸腺和脾脏指数下降。结论扶正汤能改善红斑狼疮小鼠生存质量,并可能通过不同与激素的机制发挥免疫调节作用。

奥曲肽对胃癌细胞转录活化蛋白-1的抑制作用

背景与目的:生长抑素是一种多功能神经肽,其本身及其类似物能抑制多种内分泌肿瘤及某些胃肠肿瘤的生长,但是否能抑制胃癌的生长并不清楚。因此,本研究拟探讨生长抑素类似物奥曲肽对胃癌细胞生长的影响及其机制。方法:不同浓度的奥曲肽作用于人胃癌SGC-7901细胞24h后,用免疫印迹法检测奥曲肽对SGC-7901细胞中c-Fos、ERK蛋白表达的影响。建立人胃癌细胞裸鼠原位移植瘤模型,奥曲肽治疗8周,观察奥曲肽对胃癌生长的影响;免疫组化法检测裸鼠人胃癌组织c-Fos和ERK表达的变化。在此基础上,采用EMSA技术检测奥曲肽对胃癌细胞AP-1活化的影响。结果:1×10-5mol/L奥曲肽可明显降低胃癌细胞的3H-TdR的掺入;奥曲肽能抑制人胃癌细胞裸鼠原位移植瘤的生长,抑瘤率为62.3%。SGC-7901胃癌细胞经不同浓度奥曲肽作用后,其c-Fos和ERK的表达水平均有不同程度下降;组织标本检测亦有类似变化。EMSA分析显示,胃癌细胞有基础水平的AP-1活化,20%血清能刺激AP-1的结合力,奥曲肽能抑制这种刺激作用。结论:奥曲肽通过抑制胃癌c-Fos、ERK蛋白的表达而抑制AP-1的结合活性,从而抑制胃癌的生长。

HIV-1 PR催化水解第3步机理的研究

在B3LYP/6-31G(d)水平下研究了HIV-1 PR催化水解反应关键性的一步,即第3步反应.模型体系包括了活化位点的3个残基,Asp25(25′)-Thr26(26′)-Gly27(27′)主要参加反应的基团,构建了由69个原子组成的较大模型体系.进一步研究表明Thr26(26′)和Gly27(27′)在水解反应中只起到保持活化位点平面构型的作用,并未直接参与水解反应.另外,详细分析了第3步反应的分子内及分子间氢键.

力箭一号分离系统设计与验证

针对力箭一号(PR-1)一二级分离时刻结构壳段不憋压失效,二级姿态可控,火箭滑行阶段零过载条件下,整流罩无过载分离以及三四级分离不因火工品而产生多余物的需求,进行分离系统设计。区别于传统设计,一二级分离采用被动排焰热分离,三四级分离采用非火工分离冲量装置,整流罩基于能量法设计零过载下旋转分离。通过大型地面和飞行试验,验证了PR-1采用的3种新型分离设计的可靠性。

Ca_(1-x)Zn_xTiO_3∶Pr^(3+),R^+(R^+=Li^+,Na^+,K^+,Rb^+,Cs^+,Ag^+)的合成和发光性质

采用X射线衍射、荧光光谱和热释发光研究了Ca1 -xZnxTiO3∶Pr3+ ,R+ 的物相组成和发光性质。Pr3+ 取代Ca2 + 形成PrCa·正电性缺陷发光中心。激发光谱是峰值位于 3 3 0nm附近的宽带谱 ,发射光谱是峰值在 613nm半宽度为 2 0nm的带谱 ,对应Pr3+ 的1 D2 -3H4 跃迁发射。发光强度和余辉随基质组分Zn/Ca摩尔比和合成温度而变化。Zn2 + 的最佳含量在 10 %～ 2 0 %。X射线衍射研究表明掺入适量的Zn2 + 物相组成为CaTiO3,Ca2 Zn4 Ti1 5O36 和Zn2 TiO4 。热释发光曲线表明掺入Zn2 + 离子后体系中形成了新的缺陷ZnTi″ ,且ZnTi″的缺陷陷阱深度大于RCa′。

溶胶-凝胶法制备Li_(2+)_xPr_xSi_(1-x)O_3及其离子导电性研究

采用溶胶－ 凝胶法制备了Ｌｉ２＋ ｘ ＰｒｘＳｉ１－ ｘ Ｏ３（ｘ＝ ０～０１５），用ＤＴＡ、ＸＲＤ、ＴＥＭ 及交流阻抗仪等技术对样品的结构、形貌、粒径及离子导电性等进行了观察和测试。结果表明：其固溶体形成范围是０＜ ｘ≤００９，在固溶体范围内，样品电导率随掺杂量增加而增高；平均粒径为０１５μｍ ；与传统的固相合成方法相比，该法可使样品的生成温度降低，离子导电性提高。

菟丝子总黄酮对大鼠流产模型血清P、PR、Th1/Th2细胞因子表达的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮对大鼠流产模型蜕膜PR及Th1/Th2细胞因子表达的影响,同时观察血清P和PR的变化。方法:对溴隐亭致SD孕鼠流产模型,设菟丝子总黄酮高、低剂量治疗组、达芙通为阳性对照组,于孕12d处死各组大鼠,酶联免疫检测血清P和PRL的水平,免疫组化法检测蜕膜PR的表达,RT-PCR法检测蜕膜Th1/Th2 mRNA的表达。结果:模型组蜕膜IL-4、IL-10 mRNA及PR蛋白表达明显低于正常妊娠组,TNF-α、IFN-γmRNA表达明显高于正常妊娠组,差异有显著性(P<0.05),菟丝子总黄酮可上调流产大鼠蜕膜IL-4、IL-10、PR的表达,下调TNF-α、IFN-γ表达,同时可提高血清P的水平,其作用与孕激素达芙通相似。结论:菟丝子总黄酮可能通过调节母胎界面内分泌-免疫网络平衡而起到维持早孕的作用。

DFT和ABEEM方法研究HIV-1 PR活化位点的化学性质

应用密度泛函理论计算并研究了HIV-1 PR活化位点的硬度、软度、化学势和电负性,分析了酶-水络合物、酶-抑制剂络合物及酶-抑制剂-水络合物的性质.在密度泛函方法研究的基础上,应用原子-键电负性均衡方法(ABEEM)计算研究了活化位点的电荷分布和Fukui函数值,分析了活化位点的化学性质,本研究也支持HIV-1PR的水解反应应有水分子的参与.

Galectin-1蛋白及孕激素受体与胃癌腹膜转移的关系

目的:探讨胃癌组织中半乳糖结合蛋白(Galectin-1)及孕激素受体(PR)表达与胃癌腹膜转移的关系。方法:应用即用型孕激素测定试剂盒及鼠抗人Galectin-1单克隆抗体和免疫组织化学SP染色法检测40例同期伴腹膜转移胃癌患者的癌旁正常胃黏膜、胃癌原发灶、胃癌腹膜转移灶及淋巴结转移灶中Galectin-1蛋白及PR的表达。结果:正常胃黏膜中Galectin-1及PR的表达与胃癌原发灶、腹膜转移灶及淋巴结转移灶之间差异均具统计学意义(P<0.05)。胃癌原发灶、腹膜转移灶及淋巴结转移灶三者间的Galectin-1及PR表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胃癌病灶中的Galectin-1及PR表达可能成为判断胃癌患者术前是否有腹膜转移及预后的生物学指标,并可为胃癌的内分泌治疗提供依据。