(Pyr1)Apelin-13对布比卡因诱导停搏乳鼠心肌细胞PI3K/Akt通路的干预

目的:探讨Apelin/APJ系统在逆转布比卡因心肌毒性中的作用及机制。方法:提取乳鼠心肌细胞进行原代培养,随机分为4组:空白培养基组(DMSO组)、布比卡因1 mmol/L(Bup组)、(Pyr1)Apelin-132μmol/L组(Apl组)和布比卡因1 mmol/L+(Pyr1)Apelin-132μmol/L组(BAp组)。记录各组细胞基础自主搏动次数后,按照相应分组给药处理6 h。处理完毕后时间记为T0,记录T0至T12不同时间的细胞搏动次数;电镜下观察T12时心肌细胞线粒体形态;比色法检测T12时细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)含量;ELISA检测T12时心肌细胞中Apelin-13浓度;Western blot检测T12时心肌细胞中APJ、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达。结果:T0时Bup组全部心肌细胞停止搏动。与DMSO组比较,Bup组细胞搏动次数显著减少(P<0.05),线粒体肿胀空泡化,培养液LDH含量明显上升(P<0.05),心肌细胞中Apelin-13、APJ、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均下调(P<0.05)。与Bup组比较,BAp组细胞搏动次数显著增加(P<0.05),线粒体结构明显改善,培养液LDH含量明显下降(P<0.05),心肌细胞中Apelin-13,APJ、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均上调(P<0.05)。结论:(Pyr1)Apelin-13可逆转布比卡因诱导的心肌细胞停搏,机制也许与激活PI3K/Akt蛋白磷酸化有关。

原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13 FOXO1表达水平及其临床意义

目的探究原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13、FOXO1表达水平及其临床意义。方法选取2019年1月至2022年12月在本院收治的183例原发性肾病综合征儿童作为研究组。另选取同时期在本院体检的185名体检健康的儿童作为对照组,苏木精-伊红(ELISA)法检测血清Apelin-13、FOX-O1水平;采用Pearson法分析Apelin-13、FOXO1水平与血脂指标的关系;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析Apelin-13、FOXO1对原发性肾病综合征的诊断价值;多因素Logistic回归分析影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结果与对照组比较,研究组患儿血清Apelin-13水平降低,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白(apo)B、FOXO1水平升高(P<0.05);与研究组治疗前比较,治疗后血清Apelin-13水平升高,TG、TC、LDL-C、apoB、FOXO1水平降低(P<0.05);Pearson相关性分析表明,原发性肾病综合征患儿血清Apelin-13与TG、TC、LDL-C、apoB均呈负相关,FOXO1与TG、TC、LDL-C、apoB均呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析表明,Apelin-13、FOXO1诊断原发性肾病综合征发生的曲线下面积(AUC)为0.795、0.734,二者联合诊断的AUC为0.920;多因素Logistic回归分析显示,Apelin-13与FOX-O1是影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结论原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13呈低表达、FOXO1呈高表达,二者与血脂水平有关,并且对原发性肾病综合征具有一定的诊断价值。

血清Apelin-13和网膜素-1表达与肾移植术后患者肾功能的相关性研究

目的探讨血清Apelin-13、网膜素-1(Omentin-1)在早期预测肾移植术后并发急性肾功能损伤中的价值。方法纳入89例肾移植患者为肾移植组,根据肾移植术后1个月内患者是否发生急性肾功能损伤分为肾功能损伤组21例和非肾功能损伤组68例。同时随机选取健康体检者87例作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清Apelin-13、Omentin-1水平;采用粒子增强透射免疫比浊法测定胱抑素C水平;采用酶法测定血肌酐水平;采用紫外-谷氨酸脱氨酶法测定血尿素氮水平;采用比浊法测定β2-微球蛋白、24 h尿蛋白水平。校正eMDRD方程,计算估算肾小球滤过率(eGFR)。采用Pearson法进行术后肾功能损伤的肾移植患者血清Apelin-13、Omentin-1水平与肾功能指标的相关性分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Apelin-13、Omentin-1水平对肾移植患者术后肾功能损伤的预测价值;采用Logistic回归分析法分析肾移植患者术后肾功能损伤的影响因素。结果肾移植组的血肌酐、血尿素氮、胱抑素C、β2-微球蛋白、24 h尿蛋白水平高于对照组,Apelin-13、Omentin-1、eGFR水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。肾功能损伤组的血肌酐、血尿素氮、胱抑素C、β2-微球蛋白、24 h尿蛋白水平高于非肾功能损伤组,Apelin-13、Omentin-1、eGFR水平低于非肾功能损伤组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后肾功能损伤的肾移植患者血清Apelin-13、Omentin-1水平与肌酐、血尿素氮、胱抑素C、β2-微球蛋白、24 h尿蛋白呈负相关,与eGFR呈正相关(P<0.05)。Apelin-13、Omentin-1单独及联合预测肾移植患者术后肾功能损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.784、0.773、0.841。Apelin-13、Omentin-1是肾移植患者术后肾功能损伤的保护因素(P<0.05)。结论肾移植术后发生肾功能损伤患者血清中Apelin-13、Omentin-1均呈低表达,其或可成为早期预测指标。

重症急性胰腺炎患者血清Apelin-13与自噬标志物的相关性及其临床意义

目的 研究重症急性胰腺炎(SAP)患者血清Apelin-13与自噬标志物的相关性及其临床意义。方法 选择2017年8月至2022年8月期间郑州大学第二附属医院收治的168例急性胰腺炎患者,根据病情严重程度分为轻症急性胰腺炎(MAP)(n=92)组和重症SAP组(n=76),以同期体检者115例名作为对照组,检测血清Apelin-13和自噬标志物Beclin-1的含量,采用急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHE Ⅱ)、急性胰腺炎严重程度床边指数评分(BISAP)、序贯器官衰竭评分(SOFA)评价SAP的病情,根据SAP患者28 d治疗结局分为预后不良和预后良好,采用ROC曲线分析血清Apelin-13、Beclin-1对SAP的诊断价值、对预后的预测价值。结果 三组间血清Apelin-13含量为MAP组SAP组>对照组,差异有统计学意义(F=25.942、34.187,P<0.05);SAP组患者的血清Apelin-13含量与APACHE Ⅱ评分、BISAP评分、SOFA评分呈负相关(P<0.05),Beclin-1含量与APACHE Ⅱ评分、BISAP评分、SOFA评分呈正相关(P<0.05);SAP组中预后不良患者的血清Apelin-13含量低于预后良好患者,血清Beclin-1含量高于预后良好患者,差异有统计学意义(t=7047、4.994,P<0.05);血清Apelin-13、Beclin-1含量对SAP具有诊断价值、对SAP的预后具有预测价值。结论 SAP患者血清Apelin-13含量降低与自噬标志物Beclin-1含量增加相关,两者能诊断SAP、评价SAP预后。

(Pyr^1)apelin-13对Jarkat T淋巴细胞增殖和活化的影响

目的探讨(Pyr^1)apelin-13对Jurkat T淋巴细胞增殖和活化的影响。方法用(0、10、50)nmol/L(Pyr^1)apelin-13处理Jurkat T淋巴细胞24 h后,用CCK-8法检测细胞增殖能力的变化;用抗CD3抗体和抗CD28抗体包被并活化Jurkat T淋巴细胞,观察(Pyr^1)apelin-13对Jurkat T淋巴细胞活化的影响;实时定量PCR检测CD69、CD25、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)及程序性死亡蛋白1(PD-1)的mRNA水平。结果 (Pyr^1)apelin-13对Jurkat T淋巴细胞增殖无影响,但通过增加CD69和CD25的表达促进Jurkat T淋巴细胞活化,但对CTLA-4和PD-1表达影响不明显。结论 (Pyr^1)apelin-13促进Jurkat T淋巴细胞活化。

艾帕素13(apelin-13)通过阻断PINK1/parkin信号通路促进线粒体自噬改善大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的研究脂肪细胞因子艾帕素13(AP13)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中线粒体自噬水平的影响及机制。方法通过结扎大鼠冠状动脉分支建立MIRI模型,大鼠分为假手术组、AP13处理的假手术组、MIRI组、AP13处理的MIRI组。MIRI模型建立24 h后,采用ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,2,3,4-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测大鼠心肌梗死面积,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测MIRI心肌区的心肌细胞凋亡水平,透射电镜观察受损心肌区心肌细胞线粒体损伤情况及自噬体的形成。取各组大鼠心肌梗死区组织,Western blot法检测细胞中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)/LC3Ⅰ比值,泛素结合蛋白P62蛋白及线粒体自噬通路中磷酸酶与张力蛋白同源物诱导激酶1(PINK1)、泛素连接酶parkin和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白表达。采用携带GFP-LC3的腺病毒感染分离的各组大鼠心梗区心肌细胞,并采用免疫荧光细胞化学染色观察线粒体外膜转位酶20(TOM20)和LC3的共定位。结果与假手术组或AP13处理的假手术组相比,MIRI组或AP13处理的MIRI组大鼠血清CK、LDH、cTnI和心肌梗死面积和细胞凋亡率均显著增加,前两组无明显差异。而与MIRI组相比,AP13处理的MIRI大鼠的上述变化均明显降低。与假手术组或AP13处理的假手术组相比,MIRI组或AP13处理的MIRI组大鼠心肌细胞中线粒体结构的完整性明显破坏,且包裹线粒体的自噬体大量出现,而与MIRI组相比,AP13处理的MIRI组大鼠的心肌细胞线粒体损伤明显减轻,自噬体的数量显著增加。MIRI组或AP13处理的MIRI组梗死心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、PINK1、parkin及c-caspase-3蛋白表达均显著增加,P62表达水平明显降低,而与MIRI组相比,AP13处理的MIRI组中上述蛋白水平的变化趋势明显降低;MIRI造模后LC3与TOM20共定位于心肌细胞线粒体中,且在AP13处理的MIRI组中LC3的表达强度较MIRI组显著增加。结论AP13可能通过阻断PINK1/parkin信号通路,促进线粒体自噬水平减少MIRI造成的心肌梗死面积,降低细胞凋亡率。

ERK1/2参与自发性高血压大鼠离体血管环对apelin-13舒张反应性降低作用

研究自发性高血压大鼠(spontanously hypertensive rat,SHR)离体血管环对G蛋白偶联受体APJ的内源性配体apelin-13的血管收缩与舒张反应及其与一氧化氮(NO)和ERK1/2通路关系.采用离体血管环体外灌流方法用Power-Lab生物信息采集仪检测血管环的张力.实验分组如下:新福林(Phenylephrine,PE)组,乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)组,apelin-13组,apelin-13+PE组,apelin-13+Ach组,PD98059(ERK1/2抑制剂)+PE组,PD98059+Ach组,LNNA(L-nitro-arginine,硝基左旋精氨酸,一氧化氮合酶抑制剂)+PE组,LNNA+Ach组,apelin-13(预孵育)+PD98059+PE组,apelin-13(预孵育)+PD98059+Ach组,apelin-13(预孵育)+LNNA+PE组和apelin-13(预孵育)+LNNA+Ach组,以WKY大鼠血管环为对照组.培养大鼠血管平滑肌细胞,Western blot检测ERK1/2蛋白表达.结果显示:a.apelin-13对于有内皮的血管表现出浓度依赖性舒张作用,血管舒张百分比SHR<WKY大鼠,而对于去除内皮血管,apelin-13则表现出收缩血管的作用,且收缩张力SHR>WKY大鼠,apelin-13预孵育,能减少SHR和WKY大鼠血管对新福林的缩血管反应性,增加对乙酰胆碱的舒张反应性;b.NOS抑制剂LNNA阻断NO形成后,血管环对apelin-13的舒张反应明显抑制,且SHR组较WKY组对apelin的舒张反应减少更明显,提示apelin-13的舒血管效应至少部分依赖NO通路,而SHR高血压大鼠NO通路障碍减弱了apelin对血管的舒张作用;c.ERK1/2抑制剂PD98059预孵育后血管环对apelin-13表现出浓度依赖性的收缩,与去除内皮后apelin-13的收缩血管效应趋势一致,血管收缩张力SHR>WKY大鼠,PD98059逆转了apelin-13引起的血管舒张效应;d.Apelin-13促大鼠VSMCsERK1/2磷酸化增加并呈剂量依赖性和时间依赖性,ERK1/2抑制剂PD98059可以减少apelin-13诱导ERK1/2的磷酸化.结果表明,自发性高血压大鼠离体血管环对apelin-13舒张反应性降低,NO通路和ERK1/2通路介导了apelin-13的舒张血管作用.

Apelin-13对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨Apelin-13对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤(CIRI)的保护作用及其可能的机制。方法改良线栓法建立S-D大鼠局灶性CIRI模型,分假手术组、模型组、小剂量Apelin-13干预A组、中剂量B组、大剂量C组共5组,Apelin-13进行侧脑室注射,分别进行神经功能评分,脑水肿、脑梗死体积测定,观察细胞凋亡;检测脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)。结果 (1)B、C组较模型组神经功能评分降低(P<0.05),含水量、脑梗死体积降低(P<0.05);模型组梗死组织可见水肿、坏死,较多深染、固缩核细胞;B组、C组TUNEL阳性细胞数低于模型组(P<0.05);(2)B、C组缺血周边脑组织MDA含量降低,SOD的活性增加(P<0.05);(3)各组ERK1/2蛋白表达无差异性(P>0.05);模型组和干预组pERK1/2蛋白表达高于假手术组(P<0.05);干预组高于模型组(P<0.05)。结论 Apelin-13可能通过抑制氧化应激反应对大鼠局灶性CIRI起保护作用;ERK1/2信号通路可能参与了Apelin-13保护作用机制。

Apelin-13对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的观察Apelin-13对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响并初步探讨其机制。方法 SD大鼠40只随机分为4组:正常对照组,糖尿病模型组,Apelin-13低、高剂量组。对照组给予普通饮食,实验组给予高脂高糖饮食4周后一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)30 mg/kg,建立糖尿病模型。Apelin-13低、高剂量组分别按50、100μg/(kg.d)连续灌胃8周,8周后计算各组大鼠心脏指数(H/B)和左室质量指数(left ventricular mass index,LVMI),Masson染色观察心肌胶原形态、图像分析测量心肌间质胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF),放射免疫法测定局部心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度,western blotting法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)及基质金属蛋白酶(MMP-1)蛋白的表达情况。结果糖尿病组H/B、LVMI、心肌间质CVF均显著高于正常对照组(P<0.05),AngⅡ的浓度、TGF-β1及TIMP-1蛋白的表达明显上调(P<0.05),MMP-1蛋白的表达则明显减少(P<0.05)。Apelin-13治疗后,上述趋势均明显好转,并呈剂量依赖性,高剂量组改变更明显。结论 Apelin-13可能通过对TGF-β1及基质金属蛋白酶的影响来改善糖尿病心肌间质纤维化。

Apelin-13对葡萄糖剥夺乳鼠心肌细胞自噬的影响及机制

目的观察血管紧张素1型受体相关蛋白配体(apelin-13)对损伤心肌细胞自噬的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外培养3 d龄内的SD乳鼠心肌细胞,通过葡萄糖剥夺(glucose deprivation,GD)方法建立心肌细胞损伤模型,将细胞随机分为5组:正常对照组(Control组)、葡萄糖剥夺组(GD组)、Apelin-13预处理组(GD+Apelin-13组)、Tricribine+Apelin-13预处理组(GD+Apelin-13+Tricribine组)和阻断剂组(Tricribine组)。采用透射电镜观察细胞内自噬体的变化,免疫沉淀脂质激酶分析法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的活性,Western-blotting法检测细胞内自噬相关蛋白-微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达,以及信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的表达。结果葡萄糖剥夺可诱导乳鼠心肌细胞自噬体数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加(P<0.01);Apelin-13预处理能减轻葡萄糖剥夺引起的心肌细胞损伤,使自噬体数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下降,提高PI3K的活性,上调Akt、mTOR蛋白的磷酸化水平(P<0.01);Akt特异性阻断剂Tricribine可以使Apelin-13的上述保护作用减弱(P<0.01)。结论 Apelin-13在一定程度上可以抑制GD诱导的心肌细胞自噬,机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

apelin-13下调caveolae可促进血管平滑肌细胞增殖

背景:结合课题组以往研究成果,提出caveolae可能参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖的假设。目的:实验观察细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与G蛋白偶联受体APJ的内源性配体apelin-13促进大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用。方法:采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用MTT方法观察血管平滑肌细胞增殖,Western Blotting方法观察信号蛋白表达,免疫共沉淀技术检测信号分子复合物的形成。结果与结论:①caveolae结构破坏剂β-环糊精(5mmol/L,25h)可明显增强apelin-13诱导的血管平滑肌细胞增殖。②apelin-13(0,1,2,4,8μmol/L)刺激血管平滑肌细胞,caveolin-1的表达下调,在1μmol/L时下调明显。③β-环糊精(5mmol/L)破坏caveolae后,可使apelin-13下调caveolin-1表达的作用增强。④对照组(体积分数为0.1%胎牛血清孵育)及处理组(apelin-13刺激)caveolin-1与PI3K及ERK1/2均有复合物形成,在apelin-13刺激的情况caveolin-1-PI3K复合物减少、caveolin-1-ERK1/2复合物减少,即apelin-13可能促进caveolin-1与PI3K及ERK1/2解离。结果提示细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖作用。

Apelin-13对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织中自噬的影响

目的探讨Apelin-13对大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)时自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的影响。方法取健康清洁SD大鼠54只,随机分为对照组、造模组、给药组,每组18只。每组大鼠分别对应处理后第3、6、12 h检测血清淀粉酶,并取部分胰腺组织做常规病理切片、HE染色观察其病理变化,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达情况。结果造模组各时间点血清淀粉酶、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达水平较对照组显著提高,给药组各时间点血清淀粉酶、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达较造模组显著降低(P均<0.05),ANP时自噬相关蛋白表达会随着病理损伤程度加重而增加,且Apelin-13可以显著抑制自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达。结论Apelin-13在ANP中通过下调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达发挥对胰腺组织的保护作用。

Apelin-13对压力超负荷大鼠心肌纤维化及TGF-β_1/Smads信号通路的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白内源性配体-13(Apelin-13)对压力超负荷大鼠心肌纤维化的影响,探讨其可能的影响机制。方法 40只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(AOB组)、Apelin-13组、阻断剂组(SB431542组)。假手术组游离但不结扎腹主动脉,其余3组于左肾动脉上方0.5 cm处行腹主动脉缩窄术建立压力超负荷模型,3 d后各组给予相应药物干预。4周后取材,计算大鼠心脏指数(H/B)和左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI);Masson染色光镜下观察心肌组织形态学改变,测算心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);ELISA法测定血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)浓度;Western-blotting检测TGF-β1及Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维的蛋白表达量;RT-PCR检测心肌组织Smad3 mRNA、Smad7 mRNA的表达水平。结果与Sham组相比,AOB组大鼠H/B、LVMI、CVF、血清TGF-β1均明显升高(P<0.05),心肌组织TGF-β1、Ⅰ型胶原纤维、Ⅲ型胶原纤维及Smad3mRNA表达水平亦显著升高(P<0.05);与AOB组相比,Apelin-13和SB431542干预组上述指标均明显下调(P<0.05)。Smad7 mRNA在各组间的表达呈相反趋势。结论 Apelin-13可通过部分抑制TGF-β1/Smads通路以减轻压力超负荷大鼠心肌纤维化。

加味柴胡疏肝散及其拆方对心肌缺血合并抑郁症大鼠Apelin-13、ERK1/2的影响

目的探讨加味柴胡疏肝散及其拆方对心肌缺血合并抑郁症大鼠血管紧张素受体样受体(APJ)的内源性配体13(Apelin-13)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)1/2的影响。方法SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、加味柴胡疏肝散组(11.7 g·kg^(-1))、拆方祛瘀化痰组(4.05 g·kg^(-1))、拆方疏肝行气组(3.15 g·kg^(-1))、拆方健脾养血组(4.5 g·kg^(-1))、氟西汀组(0.0018 g·kg^(-1))、曲美他嗪组(0.0054 g·kg^(-1))、辛伐他汀组(0.0018 g·kg^(-1))。除正常组外,其余各组大鼠均采用高脂饮食联合注射异丙肾上腺素(ISO)及慢性不可预见性温和应激(CUMS)方法建立高血脂状态的心肌缺血合并抑郁症大鼠模型,造模共8周。造模同时各药物组大鼠给予相应剂量的药物灌胃,正常组和模型组大鼠等体积的生理盐水灌胃,1次/d。采用旷场实验、糖水消耗实验评估大鼠焦虑抑郁状态;心脏B超检测左心室舒张末内径(LVDd)、左心室收缩末内径(LVDs)、左心室缩短分数(LVFS)、左心室射血分数(LVEF),HE染色观察心肌组织病理变化;采用酶标仪检测大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清和心脏组织Apelin-13含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠心脏、海马组织ERK1/2的mRNA和蛋白表达。结果与正常组比较:模型组大鼠旷场实验水平运动距离和站立次数、糖水消耗率显著下降(P<0.01);心脏B超显示LVDd、LVDs显著增大,LVEF、LVFS显著下降(P<0.01),HE染色显示模型组大鼠心肌组织明显损伤;血清和心脏组织Apelin-13含量显著升高(P<0.01);海马ERK1、ERK2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),心脏ERK1、ERK2mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组大鼠比较,加味柴胡疏肝散组及各拆方组上述指标的异常变化得到不同程度的改善(P<0.05或P<0.01),但全方组效果最佳。结论加味柴胡疏肝散及其拆方具有降血脂、抗抑郁、改善心肌损伤的作用,方中祛瘀化痰药、疏肝行气药、健脾养血药存在协同作用,全方可发挥最佳疗效,其机制可能与下调血清和心脏组织Apelin-13含量,调节心脏和海马组织ERK1/2的基因和蛋白表达有关。

Apelin-13对2型糖尿病大鼠心肌纤维化防治的作用机制

目的通过建立2型糖尿病大鼠模型诱导心肌纤维化的发生,探究血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白的内源性配体亚型之一Apelin-13对糖尿病大鼠心肌纤维化防治作用的可能机制。方法高脂高糖喂养联合尾静脉注射小剂量链脲佐菌素构建2型糖尿病大鼠模型。48只Wistar大鼠随机分为四组:正常对照组、模型组、Apelin-13组、阻断剂组(SB431542组)。各组大鼠给予相应干预措施12周,取材后行Masson染色,光镜下观察心肌细胞形态学改变及间质胶原纤维沉积情况,测算胶原容积分数(CVF),ELISA检测心肌组织内Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维含量,免疫组织化学染色分析心肌内信号蛋白转化生长因子β1(TGF-β1)和转化生长因子β1Ⅰ型受体(TβRⅠ)的表达水平,Western blot检测下游信号蛋白smad2、p-smad2、smad3、p-smad3的表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织CVF值、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量明显升高,伴随信号通路蛋白TGF-β1、TβRⅠ、smad2、p-smad2、smad3、p-smad3表达增强(P<0.01);而与模型组相比,Apelin-13或SB431542干预的糖尿病大鼠心肌组织CVF值、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量则明显下降(P<0.01),Apelin-13组各通路蛋白的表达均显著下调(P<0.01),而SB431542组TGF-β1、TβRⅠ的表达与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05),其余信号蛋白的表达亦明显减弱(P<0.01)。结论外源性Apelin-13可抑制糖尿病大鼠心肌纤维化的发生,此作用是通过减弱TGF-β1/TβR/smads信号转导通路的过度激活得以实现的。

Apelin-13通过激活ERK1/2通路复苏布比卡因诱导的心脏停搏

目的:探讨Apelin-13对布比卡因诱导大鼠心脏骤停中的复苏作用及作用机制。方法:选择35只雄性SD大鼠,随机分为3组:假手术组(Sham组,n=5)、布比卡因+0.9%氯化钠溶液组(A组,n=15)、布比卡因+Apelin-13组(B组,n=15)。大鼠麻醉后开放股动静脉,静脉推注布比卡因30 mg·kg^-1制备心脏停搏模型,之后A组静脉注射等量0.9%氯化钠溶液,B组立即给予150μg Apelin-13。心脏停搏记为0 min并开始实施心肺复苏,按压至自主循环恢复(ROSC)或至40 min放弃。存活者观察至ROSC后120 min后处死,留取心肌组织。记录大鼠复苏率、生存率、开始给布比卡因到心脏停搏时间(T0)、心肺复苏开始至出现第1个自主心跳的时间(Ts)和心肺复苏开始至ROSC的时间(Tr);监测各组大鼠收缩压(SBP)、心率(HR)、收缩压与心率乘积(RPP)、复跳后各时点RPP与基础值的比值(RPPh);Western blot检测心肌组织中APJ、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达;ELISA检测心肌组织Apelin-13浓度。结果:与Sham组比较,A组心肌组织Apelin-13、APJ和p-ERK1/2蛋白表达下调(P<0.05)。与A组比较,B组复苏成功率和生存率升高、Tr缩短(P<0.05);与A组比较,ROSC后20 min内B组HR明显升高,ROSC后10~20 min内RPP和RPPh升高(P<0.05);与A组比较,B组心肌组织Apelin-13、APJ和p-ERK1/2蛋白表达上调(P<0.05)。结论:Apelin-13可解救布比卡因诱导的大鼠心脏停搏,其机制也许与激活ERK1/2通路蛋白磷酸化有关。

Apelin-13减轻糖尿病小鼠主动脉损伤

目的探讨apelin-13对糖尿病小鼠主动脉结构的影响及其机制。方法对照组:8周龄C57/BL6j小鼠6只;糖尿病组:8周龄kk Ay小鼠6只;apelin-13处理组:kk Ay小鼠6只,皮下埋微量植渗透泵释放apelin-13[30μg/(kg·d)]。4周后取材,进行HE、Masson染色,光学显微镜下观察血管的形态学改变及胶原纤维的沉积情况,弹性蛋白染色观察血管弹力纤维板的形态学改变,免疫组织化学染色分析血管内信号蛋白转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平。结果与正常对照组相比,糖尿病组小鼠血管壁中膜明显增厚,主动脉内胶原纤维含量明显升高(P<0.05),弹力纤维排列紊乱、断裂,同时血管壁TGF-β1表达增强(P<0.05),而apelin-13处理组小鼠血管壁中膜较糖尿病组明显变薄,血管间质内胶原纤维的含量较糖尿病组小鼠显著下降(P<0.05),弹力纤维排列较整齐,血管壁TGF-β1表达也显著下调(P<0.05)。结论外源性Apelin-13可能通过抑制TGF-β1以及平滑肌细胞增殖减轻糖尿病引起的主动脉纤维化以及血管中膜弹力纤维损伤。

caveolae介导的apelin-13促内皮细胞增殖机制探讨

目的探讨caveolae及其标志蛋白caveolin-1在apelin-13促内皮细胞增殖中的作用,并对apelin-13促内皮细胞增殖信号转导通路进行拓展性研究。方法 MTT比色法观察caveolae在apelin-13促内皮细胞增殖中的作用;Western Blot检测不同因素处理下,内皮细胞中信号蛋白的表达;免疫共沉淀技术检测不同因素处理后,内皮细胞中信号分子复合物的形成情况。结果β-环糊精作为caveolae结构破坏剂(5mmol/L,24h)对apelin-13诱导的内皮细胞增殖具有明显的增强作用;apelin-13处理内皮细胞后,caveolin-1的表达减少,且它的减少在2μmol/L时表现尤为明显;内皮细胞在使用β-环糊精(5mmol/L)预孵育后,apelin-13下调caveolin-1表达的作用增强;对照组及apelin-13(2μmol/L)处理组caveolin-1与PI3K、ERK1/2均有复合物形成,apelin-13处理组较对照组caveolin-1-PI3K及caveolin-1-ERK1/2两种复合物的形成均有所减少。结论 caveolae及其标志性蛋白caveolin-1参与apelin-13促内皮细胞增殖过程;apelin-13促内皮细胞增殖作用可能与促进caveolin-1与PI3K、ERK1/2解离有关。

Apelin-13通过ERK_(1/2)信号通路促进MCF-7细胞的增殖及侵袭

采用MTT、Brdu流式细胞术,Transwell侵袭实验,ElISA、Western blot检测实验研究了apelin-13对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭的影响.结果表明:apelin-13能够激活ERK1/2信号传导通路,上调Cyclin D1和MMP-1的表达,进而促进MCF-7细胞的增殖及侵袭,可为临床乳腺癌的诊断、防治及愈后评估提供新的思路和方法.

Apelin-13对H9c2心肌细胞增殖及ERK1/2信号通路活化的影响

目的分析Apelin-13对H9c2心肌细胞增殖及ERK1/2信号通路活化的影响。方法体外培养后的H9c2心肌细胞分为对照组、Apelin-13组、U0126(ERK1/2抑制剂)组和Apelin-13+U0126四组。对照组:只使用10%的FBS和DMSO处理;Apelin-13组:在对照组基础上分别加入浓度为0.0001,0.001,0.01和0.1μmol/L的Apelin-13(n=5);U0126干预组:在对照组基础上加入浓度为10μmol/L的U0126;Apelin-13+U0126组:在对照组基础上分别加入0.1μmol/L的Apelin-13和10μmol/L的U0126。各组依次恒温培养24 h后,采用MTT法测定H9c2心肌细胞在490 nm处各组的光密度值(OD值,n=5)并计算其细胞增值率,采用Western blot法测定各实验组ERK1/2信号通路磷酸化水平。结果与对照组比较,U0126干预组所测各细胞指标差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,Apelin-13组的干预显著升高各组H9c2心肌细胞的OD值,促进了H9c2心肌细胞的增殖,升高了心肌细胞的p-ERK1/2表达量;并且0.001～0.1μmol/L Apelin-13四组间,细胞增值率及p-ERK1/2表达量有显著的统计学差异,随Apelin-13剂量的增加,各组的OD值、细胞增殖率及p-ERK1/2表达量亦显著升高(P<0.05)。与Apelin-13组比较,Apelin-13+U0126组H9c2心肌细胞的OD值、细胞增值率及p-ERK1/2表达量显著降低(P<0.05)。结论 Apelin-13促进了H9c2心肌细胞的增殖,并存在显著的剂量依赖性,Apelin-13通过ERK1/2信号通路调控了H9c2心肌细胞的细胞增殖。