LncRNA PURPL调节miR-342-3p/PIK3R1轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探究长链非编码RNA(PURPL)调节微小RNA-342-3p(miR-342-3p)/磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:细胞实验:将si-NC、si-PURPL、si-PURPL+inhibitor NC、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor分别转染至肝癌细胞Huh-7细胞并命名为si-NC组、si-PURPL组、si-PURPL+inhibitor NC组、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor组,未做任何处理的Huh-7细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PURPL、miR-342-3p、PIK3R1的关系;qRT-PCR检测人正常肝细胞系L02和人肝癌细胞系Huh-7中LncRNA PURPL、miR-342-3p表达;Western blot检测L02细胞、Huh-7细胞PIK3R1蛋白水平;MTT法检测Huh-7细胞增殖情况;流式细胞术检测Huh-7细胞凋亡率;Transwell检测Huh-7细胞侵袭数量;划痕试验测定Huh-7细胞迁移。体内实验:构建裸鼠异种移植模型,分组同细胞实验,检测肿瘤体积和肿瘤重量。结果:细胞实验结果显示:与si-NC组相比,si-PURPL组Huh-7细胞OD490值、划痕愈合率、侵袭细胞数量、LncRNA PURPL、PIK3R1水平显著下降(P<0.05),Huh-7细胞凋亡率、miR-342-3p相对表达量显著升高(P<0.05),而抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL抑制Huh-7细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的效果;LncRNA PURPL负向调控miR-342-3p/PIK3R1轴。体内结果显示:si-PURPL组裸鼠肿瘤体积和质量较si-NC组下降(P<0.05);抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL对体内肿瘤生长的抑制作用。结论:沉默LncRNA PURPL可抑制Huh-7细胞的恶性生物学行为,其机制可能与调控miR-342-3p/PIK3R1轴有关。

异鼠李素介导miR-454-3p/PIK3R1轴对口腔鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨异鼠李素(ISO)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生物学特性的影响,以及在该过程中对miR-454-3p/PIK3R1轴的调控机制。方法:MTT法检测ISO对TSCC1细胞的毒性,随后将TSCC1细胞分为OSCC组、ISO组、ISO+miR-NC组、ISO+miR-454-3p mimic组。MTT法检测各组细胞的存活率;克隆形成实验检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;RT-qPCR法检测各组细胞中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平;Western blotting法检测各组细胞中PIK3R1蛋白的表达;双荧光素酶实验验证miR-454-3p与PIK3R1的靶向关系;建立裸鼠移植瘤模型,将小鼠分为模型组、ISO组、ISO组+agomir-NC组,ISO组+miR-454-3p agomir组,每组5只,干预15 d后检测各组小鼠的肿瘤质量和体积;RT-qPCR法检测肿瘤组织中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平。结果:体外实验发现,与OSCC组比较,ISO组和ISO+miR-NC组细胞存活率、迁移和侵袭细胞数量、miR-454-3p表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、PIK3R1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);miR-454-3p mimic回补实验逆转了ISO对OSCC的抑癌作用及PIK3R1的表达水平(P<0.05),同时双荧光素酶报告基因实验验证了miR-454-3p与PIK3R1之间存在靶向关系;体内实验发现,与模型组比较,ISO组小鼠移植瘤的质量和体积均减小(P<0.05),miR-454-3p表达水平、PIK3R1 mRNA表达水平以及miR-454-3p agomir的回补实验结果均与体外实验保持一致。结论:ISO能够通过调节miR-454-3p/PIK3R1轴抑制OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

固定化脂肪酶催化合成(R)-3-氯-1-苯丙醇

3-氯-1-苯丙酮经NaBH_4还原、丁酰化,然后用商业化固定化脂肪酶CRL水解拆分得98%ee的(R)-3-氯-1-苯丙醇,总收率约为41%。

达罗他胺中间体2-氯-4(1 H-吡唑-3-基)苯甲腈的合成工艺

2-氯-4(1H-吡唑-3-基)苯甲腈是抗前列腺癌新药达罗他胺的重要中间体片段。本文以4-溴-2-氯苯甲腈和1-(2-四氢吡喃基)-1 H-吡唑-5-硼酸频哪酯为原料,经Suzuki偶联和水解脱保护两步反应,在50 g反应规模时,以大于95%的总收率和大于99%的纯度得到2-氯-4(1H-吡唑-3-基)苯甲腈。该反应原料安全易得,产物分离简单,反应收率和产物纯度高,特别是第一步Suzuki偶联反应母液可循环套用,节约了Pd催化剂和生产成本,适合工业化生产。

吡唑醚菌酯关键中间体1-(4-氯苯基)-3-吡唑醇的合成工艺研究

1-(4-氯苯基)-3-吡唑醇是甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂吡唑醚菌酯的关键中间体。以对氯苯胺为原料,采用动态管连续法合成对氯苯肼盐酸盐,与丙烯酸乙酯环化反应得到中间体1-(4-氯苯基)-3-吡唑酮,然后用双氧水低温光催化连续氧化得到1-(4-氯苯基)-3-吡唑醇,对不同反应条件下的实验结果进行了分析,优化反应条件为:重氮化物料停留时间为40 min、反应温度5℃、搅拌速率150 r/min,环合反应温度为60℃,在UVA光源下进行氧化反应,产品总收率大于88.0%,纯度大于98.0%。该方法重氮化反应和氧化反应本质安全,原材料价廉易得,产品收率和纯度高,操作简单,适合于工业化生产。

(3R,4R)-N,4-二甲基-1-(苯基甲基)-3-哌啶胺盐酸盐的制备

以a-乙酰-γ-丁内酯为起始原料与碘甲烷反应合成化合物II;化合物II与氢溴酸反应水解溴代化合物III;化合物III再与溴素反应得到二溴代产物IV;化合物IV与苄胺关环得到化合物V;化合物V在转氨酶作用下,甲胺作为氨源,得到ee值99.5%以上的化合物I。考察催化剂、酶催化剂、物质的量比、反应温度对反应的影响,考察氢溴酸、溴素的回收利用情况。结果表明:化合物II的最佳工艺条件为碳酸钠为催化剂,碘甲烷为甲基化试剂,化合物III的最佳工艺条件氢溴酸既做反应试剂同时也作为溶剂;化合物IV最佳工艺条件酸性条件下溴素溴代得到二溴产物;化合物V的最佳工艺条件是与苄胺直接反应得到产物;化合物I的最佳工艺条件是常温下酶转化得到手性产品。

无溶剂体系介孔分子筛SBA-15固定化脂肪酶拆分(R,S)-3-氯-1-苯基丙醇

在无溶剂体系中,采用介孔分子筛SBA-15固定化P.fluorescens脂肪酶(PFL)拆分(R,S)-3-氯-1-苯基丙醇.结果表明,在以乙酸乙烯酯为酰基供体、水活度为0.19、温度为60℃、“记忆”pH为7.0的优化条件下反应28 h,酶促拆分转化率(c)达到49.87%,产物对映体过量值(ee_(p))达到98.73%,显示了良好的应用前景.

3-氯-1-苯丙酮还原制备重要药物中间体3-氯-1-苯丙醇方法综述

综述了国内外由3-氯-1-苯丙酮还原制备抗抑郁药物重要中间体3-氯-1-苯丙醇的方法,并对各类方法进行了综述比较,提出采用植物细胞法还原3-氯-1-苯丙酮的构思。

基于IGF-1R/PI3K/AKT的益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响及作用机制研究

目的:益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)有明显的治疗作用,但具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨益气固表丸对脂多糖(LPS)联合烟雾暴露构建慢性阻塞性肺病模型大鼠的治疗作用机制。方法:通过大鼠气管内灌注LPS和吸入香烟烟雾构建慢性阻塞性肺病模型,同时给予模型大鼠低、中、高剂量益气固表丸治疗14 d。观察呼吸参数及肺组织病理变化。采用酶联免疫吸附试验测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10水平。采用蛋白质印迹法检测大鼠肺组织样品中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)/PI3K/AKT信号通路组分的磷酸化状态。结果:与对照组和低剂量益气组比较,大剂量益气固表丸治疗可显著改善COPD大鼠呼吸参数,减轻肺损伤和炎症,降低BALF和血清炎症介质水平。此外,高剂量益气固表丸干预的COPD大鼠肺组织标本中磷酸化IGF-1R、p-PI3K、p-AKT、p-GSK3、p-mTOR蛋白水平显著降低。结论:益气固表丸对COPD有明显的治疗作用,可能与靶向IGF-1R/PI3K/AKT信号通路有关。

(R)-3-氨基-3,4-二氢-1-甲氧基喹啉-2(1H)-酮的合成

首先,以D-苯丙氨酸和二碳酸二叔丁酯为起始原料,经过Boc氨基保护合成N-叔丁氧羰基苯丙氨酸;然后N-叔丁氧羰基苯丙氨酸在甲氧氨盐酸盐的作用下生成缩合物2-(N-叔丁氧羰基)-N-甲氧基-3-苯丙酰胺;然后缩合物在催化剂二(三氟乙酸)碘苯的作用下成环生成3-(N-叔丁氧羰基)-3,4-二氢-1-甲氧基喹啉-2(1H)-酮;最后后者经过脱保护合成目标产物。该方法具有操作简单、成本低等优点,四步总收率15.1%,产物经过1H-NMR和MS确认。

miR-129-2靶向PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路减轻肺内皮细胞损伤

目的探讨miR-129-2在肺血管内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法SPF级小鼠40只随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、空载组、过表达组,给予气管滴注LPS诱导急性肺损伤(ALI),尾静脉注射高表达慢病毒来过表达miR-129-2,观察ALI小鼠呼吸频率、体质量等一般情况,检测miR-129-2及炎症因子IL-6、IL-10、TNF-α表达水平和肺损伤程度。人肺微血管内皮细胞(HPMECs)分为Control组、LPS组、NC组和mimic组,LPS处理诱导细胞损伤,转染miR-129-2 mimic来上调miR-129-2的水平,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力,检测各组细胞中miR-129-2、IL-6、IL-10、TNF-α及PIK3R1 mRNA的表达水平。双荧光素酶实验验证miR-129-2与PIK3R1的靶向关系,Western blot检测miR-129-2对PIK3R1及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。结果在小鼠中,miR-129-2过表达能使小鼠进食增加、呼吸频率减慢、体质量增加、肺组织损伤减轻,IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高(P<0.05)。在HPMECs中,mimic转染使miR-129-2表达水平上调,炎症因子表达水平降低,细胞迁移能力增强,PIK3R1表达降低(P<0.05);双荧光素酶报告显示miR-129-2与PIK3R1存在结合位点,miR-129-2下调使PIK3R1表达增加,PI3K/AKT信号通路被激活。结论miR-129-2过表达能够减轻小鼠炎症反应和肺损伤,并能介导PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路缓解肺内皮细胞损伤。

螺硼酸酯不对称催化制备(R)-3-氯-苯丙醇

以3-氯-苯丙酮为原料,螺硼酸酯为催化剂,采用不对称催化还原法合成手性中间体（R）-3-氯-苯丙醇。考察了溶剂对催化剂活性的影响以及催化剂用量、硼烷用量和温度对产品纯度和光学纯度的影响。以乙酸乙酯溶剂中制得的手性螺硼酸酯为催化剂,在n（3-氯-苯丙酮）∶n（螺硼酸酯）∶n（硼烷）=1∶0.1∶0.6,反应温度5～10℃条件下,产品纯度达99.5%,产品光学纯度96.3%e.e.。

锂盐/甘油/1-丁基-3-甲基咪唑氯盐改性玉米淀粉/聚丁二酸丁二醇酯共混材料的结构与性能

为制备具有良好性能的淀粉/聚丁二酸丁二醇酯(PBS)共混材料,采用锂盐、甘油和1-丁基-3-甲基咪唑氯盐([BMIM]Cl)复合的方法构建了新型改性剂,通过熔融共混法制备了淀粉/PBS共混材料,考察了由不同锂盐制备的改性剂的作用效果,研究了改性剂对淀粉/PBS共混材料结构和性能的影响。结果表明,锂盐中的阴离子对锂盐/甘油/[BMIM]Cl改性淀粉/PBS结构与性能影响显著,在LiF,LiCl,LiBr和LiI中,LiF,LiBr和LiI的作用效果较差,采用LiCl构建的LiCl/甘油/[BMIM]Cl复合改性剂对淀粉/PBS具有良好的改性作用。LiCl/甘油/[BMIM]Cl复合改性剂能通过破坏氢键、降低淀粉/PBS结晶度改善淀粉与PBS的相容性,提高共混材料的韧性,表现出比甘油/[BMIM]Cl更好的作用效果。采用LiCl/甘油/[BMIM]Cl(质量分数为7.0%LiCl、37.2%甘油和55.8%[BMIM]Cl)在质量分数为21.5%的条件下制备的改性淀粉/PBS共混材料(淀粉与PBS的质量比为2:3)具有良好的力学性能,拉伸强度为13.69MPa、断裂伸长率可达165.40%。

抗抑郁药重要手性中间体(R)-3-氯-苯丙醇的不对称合成研究

(R)-3-氯-苯丙醇是西汀类抗抑郁药的重要手性中间体。本文综述了由原料3-氯-苯丙酮通过各种不同手性催化剂催化还原制备手性3-氯-苯丙醇的各种合成线路,并比较各方法的优劣状况。

曲美他嗪与氯吡格雷联合治疗冠心病心绞痛对患者PTX-3、ESM-1、ET水平的影响

目的:观察曲美他嗪与氯吡格雷联合治疗冠心病心绞痛对患者五聚素3(PTX-3)、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)、内皮素(ET)水平的影响。方法:选取2018年4月-2020年2月咸宁市第一人民医院收治的118例冠心病心绞痛患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组59例。两组患者均给予补液、抗血小板、调脂、降压等常规治疗,对照组给予氯吡格雷治疗,观察组给予氯吡格雷联合曲美他嗪治疗。记录两组治疗前后PTX-3、ESM-1、ET、白细胞介素-18(IL-18)、核转录因子-κB(NF-κB)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、左室射血分数(LVEF),并评价两组疗效及安全性。结果:观察组和对照组的总有效率分别为93.22%(55/59)、79.66%(47/59),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组ESM-1、ET水平均较治疗前下降,观察组ESM-1、ET水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组IL-18、hs-CRP、NF-κB、PTX-3水平均较治疗前下降,观察组IL-18、hs-CRP、NF-κB、PTX-3水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组LVEF均较治疗前上升,观察组LVEF高于对照组(P<0.05)。观察组和对照组的不良反应发生率分别为5.08%、6.78%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:曲美他嗪与氯吡格雷联合治疗冠心病心绞痛可调节相关因子的表达,改善心绞痛,疗效优于单用氯吡格雷。

R,S及R/S型3-氯-1,2-丙二醇的急性毒性研究

目的探讨R，S和R／S型3-氯-1，2-丙二醇（3-MCPD）对ICR小鼠的急性毒性。方法选用健康性成熟ICR小鼠，对R，S及R／S型3-MCPD染毒剂量依次为176．78、198．43、222．73、250、280．61、314．98和353．55、396．84、445．44和499．99mg／kg，89．09，100，112．25，125．99，141．42，158．74和178．18mg/kg及130．25、150、172．75、198．95、229．13、263.88和303．91mg／kg。经口一次灌胃染毒观察14天，以改良寇式法计算LD50，计算脏体比并进行肝肾病理学检查。结果R，S及R／S型3-MCPD的LD50及95％可信区间（95％CI）分别为290．54mg／kg（280．74～300．68），117．57mg／kg（113．82，121．45），190．73mg／kg（177．76～204．59）。R型异构体在250mg／kg及以上剂量组动物肾体比显著增加（P〈0．05），脑体比在353．55mg／kg、445．44mg／kg及最高剂量组亦显著增大（P〈0．05）；S型3-MCPD染毒组动物各脏体比与对照组比均无显著差异；R／S型3-MCPD，在198．95mg／kg及以上荆量组动物肾体比明显增加，在229．13mg／kg及以上剂量动物脑体比亦明显增加，与对照组比有差异显著（P〈0．05）。在353．55mg/kg及以上剂量R型异构体引起肝细胞肿胀、肝窦扩张和明显充血，在229．13mg/kg及以上荆量（R／S）型3-MCPD也引起肝细胞肿胀和肝窦充血，S型则未引起。R、S及（R，S）型均未引起肾脏明显的病理改变。结论三种3-MCPD急性毒性大小依次为S型〉R／S型〉R型，R、S型异构体均显示出神经毒性。

液相色谱串联质谱法测定精炼植物油中的4种3-氯-1,2-丙二醇双酯

为准确、快速测定油脂中3-氯丙醇双酯,建立了一种基于液相色谱串联质谱技术测定精炼植物油中4种3-氯-1,2-丙二醇双酯[3-氯-1,2-丙二醇棕榈酸二酯(3-MCPD-PP)、3-氯-1,2-丙二醇二油酸酯(3-MCPD-OO)、3-氯-1,2-丙二醇硬脂酸二酯(3-MCPD-SS)、3-氯-1,2-丙二醇-1-棕榈酸-2-亚油酸二酯(3-MCPD-PL)]的方法。待测油样加入氘代同位素内标后经NH2固相萃取柱、固相分散萃取净化包(PSA 500 mg, C18 500 mg)联合净化后,过0.22μm有机膜,取2μL样品溶液注入液质联用仪中进行测定。经Accucore VDX色谱柱分离,ESI源离子化,SRM模式,并采用同位素内标法对3-氯-1,2-丙二醇双酯进行定性定量分析。结果表明:4种3-氯-1,2-丙二醇双酯在1~1 000μg/L范围内均呈现良好的线性关系,检出限均为0.010 mg/kg,在精炼植物油中的回收率和相对标准偏差(RSD)分别为3-MCPD-PP 62.3%~94.0%和5.43%~11.67%,3-MCPD-OO 60.1%~91.7%和3.28%~13.54%,3-MCPD-SS 61.6%~92.1%和4.73%~10.46%,3-MCPD-PL 62.3%~92.2%和2.69%~11.37%。该方法简便、高效,可用于精炼植物油中3-氯-1,2-丙二醇双酯的检测。

食品中3-氯-1,2-丙二醇脂肪酸酯的检测方法及防控措施研究进展

3-氯-1,2-丙二醇脂肪酸酯(3-monochloropropane-1, 2-diol fatty acid esters, 3-MCPD酯)是一种在食品加工过程中产生的化学污染物,其在精炼植物油、脂肪、酱油甚至婴儿配方奶粉中含量均相对较高。3-MCPD酯已被证明可在体内诱导产生肾脏毒性、生殖毒性、神经毒性、免疫毒性和致突变性作用,对人类健康存在潜在风险,引起了国内外的广泛关注和高度重视。国际和我国已设立了对3-MCPD酯的检测标准,但是检测方法烦琐、耗时,安全隐患较大,对实验室仪器要求高,因此,建立简单、快速、适用性强的3-MCPD酯检测方法对食品中3-MCPD酯的污染水平监测、暴露评估和风险防范等具有重大的意义。本文综合介绍了国内外最新的3-MCPD酯监测方法,并对相关的检测方法及其适用范围进行了简单概括,根据3-MCPD酯的影响因素综合描述了对各种食物中3-MCPD酯控制措施,并展望了3-MCPD酯未来发展方向。

我国市酱油氯丙醇污染调查研究:3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)与某些因素的关系

调查了我国市售酱油氯丙醇的污染情况,样品来自2003年全国污染物监测网和2004年卫生部健康相关产品卫生抽检。采用基质固相分散萃取法(MSPD)进行样品的净化,以稳定性同位素稀释技术结合气相-质谱法(GC-MS)的内标法定量测定3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)含量。对3-MCPD污染水平与某些因素的关系作了探讨,结果表明,国家免检、HACCP认证、包装形式等因素与3-MCPD水平有显著性相关关系(P<0.05),而QS认证、IS09000认证、推荐与监制、铁强化、生产工艺、质量等级和抽样场所等因素与3-MCPD水平的高低没有显著性关系(P>0.05),说明QS认证、IS09000认证、推荐与监制等措施对氯丙醇降低的作用不明显。此外,来自餐饮业酱油的氯丙醇污染相对较高,值得进一步关注。

采用通透性处理的安大略假丝酵母全细胞高效合成(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇(英文)

考察了利用安大略假丝酵母(Candida ontarioensis)静息细胞不对称催化2-氯-1-(3-氯苯基)乙酮合成(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇的转化反应条件.结果表明,当底物浓度为10g/L时,在最适转化条件下反应72h,产物的ee值和产率分别达到99.9%和99.0%.采用4g/L十六烷基三甲基溴化铵对Candida ontarioensis细胞于4℃通透性处理20min后,全细胞的酶活提高2倍以上.当底物浓度提高为30g/L,转化24h后,产物的ee和产率分别达到99.9%和97.5%.该研究为高效制备(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇提供了可行途径,并为生物催化合成芳基手性醇类手性中间体提供了理论指导。