拟干酪乳杆菌发酵生产L-乳酸过程中在线生理参数CER和RQ用于指导发酵过程优化

生理参数二氧化碳释放速率(CER)和呼吸商(RQ)对于深入理解生物过程的变化具有非常重要的意义。本研究以拟干酪乳杆菌发酵生产L-乳酸过程为研究对象,解析了发酵过程中CER和RQ变化与细胞生长和代谢之间关系,结果表明,CER与细胞生长速率密切相关,能够有效表征菌体的生长状态,而RQ值能很好地反映过程中代谢途径的变化。将CER和RQ作为在线指导参数,通过分阶段氮源添加策略,使得L-乳酸产率和转化率较原始发酵工艺分别提高了5.9%和3.0%,而且副产物乙酸和乙偶姻的浓度分别下降了31.3%和24.7%。因此,通过生理参数CER和RQ的变化对发酵过程进行优化,能够有效地提高L-乳酸的发酵产量和质量。

青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌荧光定量RQ-PCR检测方法的建立

参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100～1×1010拷贝。对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和伤寒沙门菌等非巴氏杆菌进行检测,结果均为阴性。结果表明,本研究建立的荧光定量RQ-PCR方法敏感性高,特异性强,为青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌病的早期诊断及分子流行病学调查提供了一种新的快速检测方法。

FISH与RQ-PCR监测慢性髓系白血病患者造血干细胞移植后微小残留病

背景与目的:监测慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的微小残留病(minimal residual disease,MRD)的常用方法有间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization,FISH)和实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription PCR,RQ-PCR)。本研究分析用FISH和RQ-PCR两种方法在CML造血干细胞移植后不同时间点监测MRD的意义。方法:采用间期FISH和RQ-PCR技术,对31例异基因造血干细胞移植前后的CML患者骨髓细胞进行BCR-ABL融合基因定期监测,随访时间3～48个月。结果:31例患者移植后,前30个月各时间点FISH检测的阳性细胞数及RQ-PCR检测的BCR-ABL/ABL比值均较移植前明显下降,下降>2个对数值(P<0.05);移植30个月后FISH检测结果为0时,RQ-PCR仍然能检测出BCR-ABL/ABL的表达水平,与移植前相比,30个月后各时间点BCR-ABL/ABL比值下降>3个对数值(P<0.05)。结论:FISH和RQ-PCR方法检测BCR-ABL融合基因有较好的一致性。RQ-PCR连续监测MRD的敏感性更高,MDR的定量分析有利于评估疗效和指导个体化治疗。

成人急性白血病GST-π与LRP基因的RQ-PCR检测及其临床意义

本研究通过对急性白血病(AL)患者外周血谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)和肺耐药相关蛋白(lungresistance-related protein,LRP)基因的检测,探讨两种基因与患者多药耐药性的关系。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RQ-PCR)检测44例AL患者及27例正常人外周血单个核细胞GST-π与LRP基因的表达。结果表明,GST-π基因水平在初治组和难治组与完全缓解组之间均有极显著性差异(P<0.01)。LPR基因水平在初治组与难治组,完全缓解组与难治组均有极显著性差异(P≤0.01)。GST-π与LRP基因之间无相关性。GST-π及LRP基因表达在不同外周血白细胞计数组、不同临床分型组(ALL、ANLL)之间的差异均不显著。结论:GST-π和LRP基因通过不同机制引起多药耐药,二者联合检测较单独测定某一基因对白血病评定预后更具临床意义。外周血白细胞计数、白血病分型可能与GST-π和LRP基因的表达无关。

基于二阶RQ-RLC模型的质子交换膜燃料电池水管理故障诊断

水淹和膜干故障严重影响质子交换膜燃料电池(proton exchange membrane fuel cell,PEMFC)的工作性能及使用寿命。为充分刻画高频及低频段电化学反应信息,该文建立宽频PEMFC电化学阻抗谱,提出基于二阶RQ-RLC等效电路模型的水管理故障诊断方法。首先,搭建燃料电池测试台架,进行水管理故障模拟实验,测试得到对应的电化学阻抗谱,辨识二阶RQ-RLC等效电路模型的参数,并获得八维水管理故障数据集。然后,运用线性判别分析方法对高维水管理故障数据集降维得到故障特征样本集,并选取4个模型关键参数作为故障诊断特征量。最后,提出自适应差分进化优化支持向量机算法对故障特征样本集进行分类,在50组、130组和210组样本下测试集分类准确率分别100%、97.44%和95.24%,结果表明所提方法能准确诊断出燃料电池所处的水管理故障类型。

RQ-PCR检测Ig/TCR基因重排监测急性淋巴细胞白血病患儿治疗过程微小残留白血病

目的研究RQ-PCR检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿Ig/TCR基因重排在微小残留白血病(MRD)监测中的作用。方法以2009年3月至2011年3月在广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科确诊和治疗的ALL患儿为研究对象,PCR检测初诊ALL患儿的Ig/TCR基因重排;基因扫描分析初诊患儿Ig/TCR基因重排的克隆特性;对ALL患儿的单克隆性Ig/TCR基因重排进行测序,RQ-PCR检测不同治疗阶段Ig/TCR基因重排的表达量。结果 86例ALL患儿进入分析,男52例,女34例;年龄1～13(4.3±3.0)岁,随访时间1～26(14.3±7.0)个月。①83例(96.5%)检出1种或以上Ig/TCR基因重排,共检出209个Ig/TCR基因重排;②91.8%(56/61例)检出1种或以上单克隆性Ig/TCR基因重排;61例172个Ig/TCR基因重排中,单克隆性、寡克隆性和多克隆性Ig/TCR基因重排的检出率分别为58.1%(100个)、30.8%(52个)和11.0%(19个),差异有统计学意义(P=0.000);③26例完成连续3次随访,其中22例持续完全缓解患儿的Ig/TCR基因重排平均相对表达量持续下降,在维持治疗前均为MRD阴性(≤1.0×10-4);4例复发患儿在诱导缓解治疗后至复发前各检测时点Ig/TCR基因重排表达量均>1.0×10-4,并在复发前已有回升,从开始回升至临床复发的平均时间为3.75(2～8)个月。结论 Ig/TCR基因重排相对表达量可反映MRD水平,可作为判断预后、监测复发和指导治疗的有效手段。

Investigation on RQ Embrittlement Mechanism of FeCuNbSiB Soft Magnetic Alloy

The XRD, TEM, PAT, Curie temperature and internal friction methods were used to study systematically the embrittlement mechanism of rapidly quenched ( RQ ) nanocrystalline soft magnetic alloy Fe73.5Cu1Nb3Si13.5B9.The test results confirmed that the RQ embrittlement mechanism of amorphous alloy FeCuNbSiB was not related to crystallization but that was related to structural relaxation. Furthermore, the structural relaxation temperature of amorphous alloy FeCuNbSiB was much lower than that of used commonly amorphous alloy Fe78B13Si9. It meant that the RQ embrittlement is easier to happen for nanocrystalline alloy FeCuNbSiB than amorphous alloy Fe-B-Si.

哺乳期高温经历导致布氏田鼠F1代的热中性区变窄

哺乳期是影响小型哺乳动物发育的关键时期,但关于哺乳叠加高温对后代代谢可塑性的影响,尚不清楚。为研究哺乳期母体(F0)高温经历对后代(F1代和F2代)能量代谢特征的影响,我们测定了哺乳期母体经历高温(30±1)oC的布氏田鼠(Lasiopodomys brandtii)F1代和F2代成体以及常温(23±1)oC经历的后代成体(作为对照)的体重和体温,采用开放式呼吸代谢仪测定不同环境温度暴露3 h后的代谢率,并计算热传导和呼吸商。哺乳期高温经历的F1代动物在成年期的体重显著低于常温对照组和高温经历的F2代动物。在5~33.5 oC环境温度范围内,布氏田鼠维持稳定的体温;35 oC高温胁迫时,常温组、高温经历F1代和F2代的体温均显著下降。常温组布氏田鼠的热中性区为27.5~33.5 oC,高温经历F1代的热中性区下临界温度点30 oC,热中性区比常温组变窄(30~33.5 oC),高温经历F2代的热中性区与常温组相比无变化。在热中性区温度以上,热传导随环境温度的升高而显著增加,高温经历的F1代和F2代布氏田鼠热传导增加的起始温度点升高。呼吸商随环境温度的升高明显增加,但不受哺乳期高温经历的影响。结果表明,哺乳期母体高温经历导致布氏田鼠F1代成年后的体重降低,热中性区变窄,提高了F1代动物在高温环境下的代谢可塑性,但这种影响并未持续到F2代。这些研究结果揭示了哺乳期母体高温(热浪)对小型哺乳动物后代体型和热中性区的长期影响,以及由此引起的对种群动态的潜在效应。

实时定量PCR在乙型肝炎(HBV)诊断中的应用

随着对乙型肝炎治疗的深入研究 ,对乙型肝炎病毒 (HBV DNA)数量的确诊显得尤其重要。本文采用RealTimeQuantitativePCR(简称RQ PCR)方法 ,对 2 84例经ELISA检定的乙型肝炎患者血清标本进行HBV DNA定量检测。结果有 96例HBsAg(+ ) HBeAg(+ ) HBcAb(+ )的血清标本RQ PCR阳性率为 10 0 % ,病毒平均量 5 0 2× 10 5拷贝 μl;87例HBsAg(+ ) HBeAb(+ ) HBcAb(+ )的血清标本RQ PCR阳性率为 4 4% (38例 ) ,病毒平均量 1 0 2× 10 3 拷贝 μl,5 3例HBsAg(+ ) HBcAb(+ )的血清标本RQ PCR阳性率为 5 8% (31例 ) ,病毒平均量 6 6 9× 10 4拷贝 μl;而 4 6例正常对照组经检测全为阴性。可见RQ PCR的检测结果反映了不同患者的病情 ,对乙型肝炎的诊断、治疗具有临床指导价值。

低氧训练对大鼠骨骼肌VEGF mRNA表达及毛细血管密度的影响

目的:探讨低氧训练对大鼠骨骼肌血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA水平表达及毛细血管密度的影响。方法:选用6周龄雄性SD大鼠120只,经3周适应性训练和力竭实验筛选出90只,随机分为9组:常氧安静对照组、持续低氧安静组、间歇低氧安静组、低住低练组、高住高练组、高住低练组、低住高练组、高住高练后复氧训练组、高住低练后复氧训练组。采用常压低氧舱以13.6%的氧浓度(相当于海拔3500m的氧浓度)作为低氧环境,根据血乳酸-速度曲线确定大鼠常氧训练的强度为35m/min,低氧训练的强度为30m/min。低氧训练持续时间为6周,每周训练5天。在第6周末的最后一次运动后休息48小时后处死大鼠并取材。采用实时荧光定量PCR技术、免疫组化染色法检测大鼠骨骼肌VEGF mRNA表达及毛细血管密度。结果:与常氧安静对照组相比,高住高练组骨骼肌VEGF mRNA表达明显提高(P<0.01),而高住低练组和低住高练组变化不明显;高住高练后复氧训练1周,大鼠骨骼肌VEGF mRNA表达有非常显著性下降(P<0.01),回到常氧安静组水平。与常氧安静对照组相比,高住高练组和低住高练组骨骼肌毛细血管密度增加,有非常显著性差异(P<0.01)。结论:(1)高住高练比高住低练和低住高练更能显著提高骨骼肌VEGFmRNA表达水平。(2)低氧-常氧的反复刺激更有利于血管生成。低氧下训练比常氧下训练更有利于提高骨骼肌毛细血管密度。低住高练和高住高练对血管生成的效果好于高住低练。

大学生依恋类型对心理健康的影响

目的：探讨大学生依恋类型和心理健康的关系。方法：以整群抽样的方式选取大学生676名；用关系问卷（RQ）、亲密关系经历量表（ECR）、症状自评量表（SCL-90）进行测查。结果：676名大学生中安全型依恋者占41．3％，轻视型占25．6％，倾注型占23．3％，害怕型占9．8％；除躯体化外，安全型和轻视型大学生的SCL-90量表总分和其他指标分均低于倾注型和／或害怕型，[如，总分（153．0±45．4）、（158．4±47．8）vs．（173．8±51．2）、（175．1±58．8），P〈0．001]，敌对得分安全型低于倾注型和害怕型[（1．7±0．6）vs．（1．8±0．6）、（1．9±0．9），P=0．027]；依恋回避与除敌对以外的其他心理健康指标呈正相关（r=0．14～0．17，P〈0．01）；依恋焦虑与SCL-90各指标呈不同程度的相关（r=0．24～0．47，P〈0．01）。结论：大学生的依恋类型对他们的心理健康水平产生影响，依恋焦虑与依恋回避越低心理健康水平越高。

刺五加制剂对中老年人恒定负荷运动中脂肪利用的影响

以 2 0名 45～ 5 5岁志愿者为试验对象 ,随机分为试验组与对照组进行双盲干预试验 ,研究刺五加制剂对人体运动能力的影响。结果表明 :试验组服用刺五加制剂 80 0mg 14天后 ,在 45 0kg·m/min(75W)持续恒定功率负荷运动时呼吸商由 0 95下降至 0 90 ,使运动时脂肪供能增加 17% ,而对照组无改变。结论 :刺五加制剂可能通过增加运动中的脂肪供能 ,节省肌糖元 ,从而发挥抗疲劳作用。

急性髓系白血病PDCD5的表达及其临床意义

目的:本研究通过检测PDCD5(programmed cell death 5)在成人急性髓系白血病(AML)患者中的表达,探讨PDCD5在AML发病中的作用及其与AML患者临床特征和预后的相关性。方法:分别采用实时定量PCR(RQ-PCR)和流式细胞术(FCM)检测36例初治AML患者的PDCD5 mRNA水平和胞内蛋白含量,并分析PDCD5 mRNA水平和蛋白含量与临床特征及生存时间的相关性。结果:AML患者的细胞内PDCD5蛋白含量显著高于正常人(P<0.05),mRNA水平较正常人无显著性差异(P>0.05)。PDCD5 mRNA和蛋白的表达水平与AML患者的性别、年龄、白细胞数、FAB亚型、髓外浸润情况、WT1基因、NPM1基因突变以及诱导化疗反应均无关(P>0.05),FLT3内部串联重复(FLT3/ITD)突变阳性者较突变阴性者PDCD5蛋白含量显著增高(P<0.05)。结论:AML患者PDCD5蛋白含量显著升高,但并未能发挥对AML细胞的促凋亡作用。FLT3/ITD突变阳性者PDCD5高表达。

NF-κB mRNA在急性髓系白血病中的表达

本研究目的旨在应用实时定量PCR技术(qPCR)检测急性髓系白血病(AML)患者NF-κB mRNA的表达,以揭示NF-κB在AML发病中的作用。收集60例初诊AML患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取总RNA,合成cDNA,以GAPDH为内参照进行荧光定量检测NF-κB mRNA的表达;在实验中选择12例正常人作为对照。结果表明,NF-κB mRNA在AML患者中的表达高于正常人,差异显著(p<0.05)。M4,M5亚型的NF-κB mRNA表达高于M1,M2,M3亚型组。结论:NF-κB在AML中表达升高,其表达上调在AML的发病中可能起了重要作用。

酒精性肝衰竭患者能量代谢与临床特点

目的探讨酒精性慢加亚急性肝衰竭患者(酒精肝衰竭组)的能量代谢与临床特点。方法选择28例酒精肝衰竭患者为研究组,48例乙肝慢加亚急性肝衰竭患者(乙肝肝衰竭组)为对照组,根据疾病程度分早期和中期,根据预后分恢复和死亡。应用间接能量代谢测定仪及24h尿素氮测定患者静息能量消耗(resting energy expenditure,REE)、呼吸商(respiratory quotient,RQ)、碳水化合物(carbohydrate,CHO)、蛋白质(protein,PRO)和脂肪(FAT)的氧化率。结果酒精肝衰竭组RQ值显著低于乙肝肝衰竭组[(0.80±0.06)vs.(0.84±0.05),P=0.007]。同为疾病中期或死亡组,酒精肝衰竭组RQ值显著低于乙肝组[(0.78±0.05)vs.(0.83±0.05),(0.75±0.04)vs.(0.82±0.05),P均=0.001]。酒精肝衰竭组内,中期患者RQ显著低于早期[(0.78±0.05)vs.(0.83±0.05),P=0.007],死亡组RQ及CHO氧化率显著低于恢复组[(0.75±0.04)vs.(0.83±0.04),P=0.000;(25.82±13.04)%vs.(38.41±14.69)%,P=0.029],而FAT氧化率显著增高[(54.55±11.44)%vs.(40.29±14.53)%,P=0.011]。结论酒精肝衰竭患者REE与乙肝肝衰竭患者相似,均以FAT氧化供能为主、伴CHO利用障碍为代谢特点,并且随病情动态变化的趋势是一致的;酒精肝衰竭患者RQ值降低更加显著,RQ值与疾病严重程度和预后密切相关。合理的营养支持可降低营养不良的发生,改善预后。

应用实时荧光定量RT-PCR检测急性髓系白血病患者aml1／eto融合基因的临床意义分析

本研究目的旨在构建实时荧光定量RT-PCR(RQ-RT-PCR)方法检测用的am l1/eto融合基因的RNA标准品,并以此作为工具监测急性髓系白血病M2患者微小残留病(MRD)的状态。应用定性的RT-PCR筛选患者标本中的am l1/eto融合基因,经体外扩增转录,得到1010拷贝数RNA标准品,并对37例患者骨髓/外周血标本进行了检测。结果表明:构建的RNA标准品具有线形良好的标准曲线,扩增效率较高,特异性较好;患者初诊组和复发组的目的基因am l1/eto的相对值的平均值高于完全缓解组(CR)(p<0.05);随访的患者中初诊时目的基因am l1/eto的相对值很高,完全缓解时降低,复发时明显升高。初诊和CR两个时间点目的基因am l1/eto的相对值相差2个数量级以上时,病人的复发危险性相对较小,如果am l1/eto基因的相对值持续升高,则提示患者的预后较差。结论:RQ-RT-PCR方法检测am l1/eto融合基因的敏感性和特异性比较高,可信度和稳定性较好;对am l1/eto融合基因阳性患者MRD定量动态监测有助于初步评价治疗效果,估计患者的复发危险度,因此有望成为确定强化治疗的时机、延长病人完全缓解期的重要手段。

王家岭矿难获救矿工的急性应激反应

目的:评估"3.28"王家岭矿难发生后获救矿工的急性应激反应(ASR)及相关因素。方法:以王家岭矿难中资料完整的81例获救矿工为研究对象,在矿工获救后2周内用斯坦福急性应激反应量表(SASRQ)评估ASR,同时对获救矿工进行社会支持评定量表(SSRS)、应付方式问卷(CSQ)及一般状况的评估。结果:81例被调查者中,SASRQ总分介于40～56分者占11.1%,57～150分者占16.0%;有分离症状者34.6%,有创伤再体验症状者38.3%,有回避症状者31.9%,有焦虑或醒觉性增高症状者46.9%。相关分析显示,SASRQ的回避分与烟龄呈负相关(r=-0.31,P<0.01),激惹分与既往创伤史呈正相关(r=0.28,P<0.05);SASRQ总分、SASRQ分量表分(除回避分量表分)与不成熟的应对方式呈正相关(r=0.23～0.31,P<0.05)。SASRQ总分和各分量表分均与最糟糕的天数、烦恼程度及CSQ的幻想分呈正相关(r=0.35～0.40,P<0.01)。Logistic回归分析结果显示,烦恼程度(B=1.58,P<0.05)、最糟糕的天数(B=0.66,P<0.01)和应对方式幻想分(B=0.35,P<0.05)与SASRQ总分呈正相关。结论:王家岭矿难获救矿工在获救后的2周内存在明显的急性应激症状,烦恼程度越重、最糟糕的天数越长、应对方式幻想值越高则矿工发生急性应激相关障碍的可能性越大。

太极拳运动对大学生能量代谢及形态机能指标的影响

采用心肺功能仪、心率遥测仪和身体成分分析仪,测试了大学生太极拳练习者(男21人,女73人)在练拳过程中及前后的能量代谢、肺通气量、摄氧量、二氧化碳排出量、身体成分和关节运动幅度,结果显示:以上各项指标在太极拳练习过程中均呈累积性上升,提示太极拳练习能有效地增强大学生的心肺功能和关节柔韧性,提高其身体形态和功能水平.

茄子种质资源苗期耐涝性鉴定

本实验旨在找到鉴定茄子耐涝性强弱的方法,并筛选出耐涝性较强的种质资源,为今后进行茄子耐涝机理的研究以及耐涝新品种的选育奠定基础。在涝害胁迫后利用综合恢复指数评价了263份种植资源的耐涝性。恢复指数结果表明,供试品种圆茄子、许昌紫茄、观赏茄、紫长茄、墨茄王、荷包茄、雎县紫茄等94个材料耐涝性较强;而野茄子-3、墨玉长茄、引茄1号、早白茄、汉宝3号、茄26、安阳紫冠等34个材料耐涝性较差。茄子种质资源苗期耐涝性强弱的鉴定对茄子生产具有重要的参考意义。

肺鳞癌组织中Annexin-1的表达及意义

目的检测肺鳞癌组织中膜联蛋白Ⅰ(Annexin-1,Anx-A1)的表达水平,探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)和Western blot方法检测22例肺鳞癌组织及其相应癌旁正常组织中Anx-A1 mRNA及蛋白的表达水平,并分析其与临床病理指标的关系。结果肺鳞癌组织中Anx-A1 mRNA和蛋白的表达水平均高于癌旁正常组织,在低分化肺鳞癌组织中的表达水平高于高、中分化肺鳞癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。Anx-A1在早期(Ⅰ期+Ⅱ期)肺鳞癌组织和非早期(Ⅲ期)癌组织中表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Anx-A1在肺鳞癌中表达上调,可能与肺癌的发生、发展相关。