长链非编码RNA-ROR介导上皮-间质转化对鼻咽癌细胞放疗抵抗作用的体外研究

目的 探讨lncRNA-ROR介导上皮-间质转化在鼻咽癌细胞放疗抵抗中的作用。方法 将鼻咽癌细胞CNE2分为空白组、阴性对照组、lncRNA-ROR沉默组,进行相应的处理。将CNE2细胞分为空白组、放疗组、放疗+阴性对照组、放疗+lncRNA-ROR过表达组(放疗处理为6 Gy射线照射24 h),进行相应的处理。用CCK-8法检测CNE2增殖能力,通过细胞划痕实验和Transwell 细胞迁移实验检测细胞迁移能力,用流式细胞术检测细胞凋亡的情况,用蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白和上皮-间质转化相关蛋白的表达。结果 与空白组、阴性对照组相比,抑制lncRNA-ROR表达48、72 h后鼻咽癌细胞CNE2的增殖能力均减弱(均P<0.05)。抑制lncRNA-ROR表达后鼻咽癌细胞CNE2的迁移率低于阴性对照组(P<0.05),而放疗+lncRNA-ROR过表达组CNE2细胞的迁移能力高于放疗组与放疗+阴性对照组(均P<0.05)。与放疗组、放疗+阴性对照组相比,放疗+lncRNA-ROR过表达组CNE2细胞的凋亡率均降低(均P<0.05)。抑制lncRNA-ROR后,活化的caspase 3、caspase 9蛋白表达均较空白组和阴性对照组升高(均P<0.05);而放疗+lncRNA-ROR过表达组活化的caspase 3、caspase 9蛋白表达均较放疗组和放疗+阴性对照组下降(均P<0.05)。抑制lncRNA-ROR可导致上皮标志蛋白(E-钙黏蛋白、β-联蛋白)表达升高,间质标志蛋白(N-钙黏蛋白、波形蛋白)表达下降(均P<0.05);而与放疗组和放疗+阴性对照组相比,放疗+lncRNA-ROR过表达组CNE2细胞的上皮标志蛋白表达下降、间质标志蛋白表达升高(均P<0.05)。结论 lncRNA-ROR可通过调控鼻咽癌细胞增殖、迁移、凋亡及上皮-间质转化影响其放疗抵抗,是逆转鼻咽癌细胞放疗抵抗的潜在靶点。

支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

慢性心力衰竭患者血清lncRNA ROR及miR⁃145水平与心房颤动发生的关联性分析

目的分析慢性心力衰竭(CHF)患者血清长链非编码核糖核酸(lncRNA)ROR、微小核糖核酸-145(miR-145)水平与心房颤动(AF)发生的关联性。方法招募2019年3月至2022年12月邯郸市第一医院收治的108例CHF患者,根据AF发生情况将其分为合并AF组(n=46)和未合并AF组(n=62),于同期纳入性别、年龄与CHF患者匹配的健康体检者50名作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA ROR、miR-145表达水平,采用Pearson相关性分析探讨血清lncRNA ROR、miR-145表达水平与心功能指标的相关性,采用多因素logistic回归分析CHF患者AF发生的影响因素,通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA ROR、miR-145对CHF患者AF发生的预测效能。结果与对照组比较,未合并AF组、合并AF组lncRNA ROR水平上调,且合并AF组高于未合并AF组,差异有统计学意义(P<0.05);未合并AF组、合并AF组miR-145水平下调,且合并AF组低于未合并AF组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清lncRNA ROR水平与左房内径(LAD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)呈正相关(P<0.05),与左室射血分数(LVEF)呈负相关(P<0.05);miR-145水平与LAD、LVEDD、LVESD呈负相关(P<0.05),与LVEF呈正相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级Ⅳ级、LVEF下降、lncRNA ROR水平上调是促进CHF患者AF发生的独立危险因素(P<0.05),而miR-145水平上调是抑制CHF患者AF发生的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清lncRNA ROR、miR-145表达水平能有效预测CHF患者AF发生,且两者联合的预测效能更优[AUC(95%CI)=0.814(0.730~0.897),P<0.001],其灵敏度和特异度分别为89.80%和72.00%。结论CHF患者血清lncRNA ROR、miR-145与AF的发生密切相关,二者联合检测对AF发生具有较高的预测价值。

沉默RORα通过活化Wnt/β-catenin通路靶基因促进人胃癌细胞增殖

目的探讨人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体(ROR)α与Wnt/β-连环素(catenin)通路的相互作用。方法噻唑蓝(MTT)实验验证沉默RORα对胃癌细胞系MGC803的增殖作用;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹与免疫共沉淀检测敲低RORα对Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达;荧光素酶报告检测c-Myc基因启动子活性。结果敲低RORα可显著促进胃癌细胞增殖(P<0.05)。当RORα被敲低时可显著上调Wnt1 mRNA和蛋白表达(P<0.05);但对β-catenin无明显影响(P>0.05)。免疫共沉淀提示敲低RORα可显著降低RORα与β-catenin的结合效率(P<0.05)。RORα敲低后,核内β-catenin与转录因子(TCF)-4表达水平明显升高(P<0.05)。Wnt通路下游基因Axin、c-Myc、c-Jun和基质金属蛋白酶(MMP)-9的mRNA和蛋白水平显著上调(P<0.05)。荧光素酶报告提示,敲低RORα可显著增强c-Myc启动子活性(P<0.05)。结论敲低RORα可活化Wnt/β-catenin信号通路从而促进胃癌细胞增殖。

益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠胸腺中Aire及ROR-γt/Foxp3相关炎症因子表达的影响

目的研究益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠胸腺中自身免疫调节因子(Aire)及转录因子维甲酸相关核孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)相关炎症因子表达的影响。方法通过免疫诱导注射鼠源性AchR-α亚基97-116肽段复制EAMG模型,分为正常组、模型组、阳性对照组(强的松)及益气解毒复方高、中、低剂量组,每组10只。观察大鼠行为学及Lennon评分,检测血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)水平,Western blot检测EAMG大鼠胸腺组织中Aire和Foxp3的表达,RT-PCR检测各组大鼠胸腺组织中RORγt的表达情况。结果与治疗前相比,各药物组Lennon分级评分显著降低;与强的松组相比,益气解毒复方各剂量组Lennon评分无明显差异(P>0.05)。RT-PCR结果,模型组胸腺内RORγt mRNA相对表达量明显高于正常组(P<0.05),各药物组胸腺中RORγt mRNA相对表达量明显低于模型组(P<0.05)。Western blot结果,与正常组比较,模型组Aire和Foxp3蛋白的表达量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,各药物组大鼠胸腺中Aire和Foxp3蛋白的表达量均显著升高(P<0.01)。ELISA结果,模型组大鼠血清IL-6含量明显高于正常组(P<0.01),而TGF-β1含量明显低于正常组(P<0.01);给药后,各药物组IL-6含量明显降低,TGF-β1含量明显升高(P<0.01)。结论益气解毒复方能改善EAMG大鼠肌无力症状,其作用机制可能通过上调Aire蛋白表达,调节免疫炎症反应,影响Th17/Treg分化,从而调控ROR-γt/Foxp3免疫平衡发挥调节自身免疫反应的作用,可能是其治疗MG的作用机制之一。

Th17和调节性T细胞在人类免疫缺陷病毒疾病进展中的作用及其调控机制

目的本研究通过观察人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血Th17、Treg细胞及其相关转录因子、细胞因子的表达,进一步揭示Th17、Treg细胞的调控机制及其在HIV感染者疾病进展中的作用。方法选取2019年1月—2019年10月河南省上蔡县HIV感染者80例作为研究组,选取同地区健康人群20例作为对照组。采用流式细胞术检测外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T及外周血单个核细胞Th17、Treg,酶联免疫吸附试验检测血浆中细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-23水平,实时聚合酶链反应检测转录因子ROR-γt及Foxp3 mRNA表达,Pearson法分析Th17、Treg与CD4^(+)T的相关性。结果研究组CD4^(+)T、CD4^(+)T/CD3+T、CD4^(+)T/CD8^(+)T低于对照组(P<0.05),CD8^(+)T和CD8^(+)T/CD3+T高于对照组(P<0.05)。研究组Th17/CD4^(+)T、Th17/Treg低于对照组(P<0.05),Treg/CD4^(+)T高于对照组(P<0.05)。研究组ROR-γtmRNA高于对照组(P<0.05),Foxp3mRNA低于对照组(P<0.05)。研究组IL-17、IL-23水平低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果表示,Th17细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈正相关(r=0.293,P<0.05),Treg细胞百分比与CD4^(+)T细胞计数呈负相关(r=-0.198,P<0.05)。结论HIV感染能降低Th17细胞、升高Treg细胞,破坏机体免疫平衡,其机制与调控转录因子ROR-γt、Foxp3及细胞因子IL-17、IL-23表达有关,Th17细胞、Treg细胞与HIV感染者疾病进展密切相关。

枯芩与条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎大鼠Th17/Treg免疫失衡的调节机制研究

目的比较枯芩、条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子及转录因子维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响。方法50只健康SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、枯芩组、条芩组和美莎拉嗪组,每组10只。采用高脂高糖饲料喂养+高度白酒灌胃+5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合诱导法,建立湿热型UC大鼠模型;各组分别于造模第1天开始灌胃给药,枯芩组、条芩组给药剂量均为5.25 g·kg^(-1)·d^(-1),美沙拉嗪组给药剂量为0.266 g·kg^(-1)·d^(-1),正常组、模型组灌服等体积生理盐水。连续给药28 d。给药结束后,麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清,Elisa法检测大鼠血清白介素-6(IL-6)、IL-17A、IL-10、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平;分离脾脏和结肠组织,采用流式细胞术检测脾脏Th17、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3 mRNA表达水平;免疫蛋白印迹(western blot)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);给药28 d后,与模型组比较,各给药组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的降低(P<0.05或P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的升高(P<0.05或P<0.01);与枯芩组比较,条芩组、美沙拉嗪组在降低IL-6、IL-17A,增加IL-10、IL-35、TGF-β_(1)水平,调节ROR-γt mRNA和蛋白表达方面(P<0.05或P<0.01)均优于枯芩组。结论枯芩、条芩可能通过调控转录因子ROR-γt、Foxp3表达,恢复Th17/Treg免疫失衡,抑制炎症反应,从而保护肠道黏膜屏障受损,发挥治疗湿热型UC的作用。

非同轴并行彩色共聚焦测量系统表面倾斜角度误差分析及校正

针对非同轴式并行彩色共聚焦测量系统在被测物表面倾斜时存在的测量误差,提出了一种误差补偿方法。该方法使用两块标准量块搭建的台阶作为被测物进行实验,首先使样品横向运动,对采集的表面高度数据进行直线拟合获得倾斜表面的线性公式,再利用获得倾斜表面直线的斜率与倾斜角度之间的关系,得到表面倾斜角度,并通过三角函数关系计算出每个数据点的误差,最终通过补偿的方式消除因表面倾斜产生的数据误差。为了保证彩色相机能够捕获到反射回的光谱信号,不断调试被测物倾斜角度,设置被测物表面倾斜角度在[-4°,4°],在该范围内进行被测物表面在不同倾斜角度时的误差补偿实验,以倾斜角度为4°为例,补偿后的台阶高度测量平均值为101.92μm,相对误差为3.00%,系统的测量精度可达微米级。

泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA表达水平的研究

目的:研究泡球蚴感染小鼠肝组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17mRNA表达水平的变化特点,初步探讨Th17细胞与Th1/Th2在棘球蚴感染中的相互关系。方法:通过腹腔接种多房棘球绦虫的幼虫原头蚴混悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,持续观察10个月,分别在感染2天、8天、1月、3月、6月和10月处死小鼠,收集肝脏组织。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组小鼠肝脏组织T-bet、GATA-3、ROR-γt和IL-17 mRNA的表达水平。结果:T-bet mRNA的表达水平在感染早期开始增高,1月时达高峰后又开始缓缓下降至感染前水平;GATA-3 mRNA的表达水平在感染1月时明显升高,随后一直保持较高的表达水平;ROR-γt mRNA的表达水平在感染早期开始增高,感染1月时达到高峰,随后缓慢下降。IL-17 mRNA表达水平自感染早期开始持续性增高,到感染3月时达高峰,之后又逐渐降低至感染前水平。各组小鼠肝组织ROR-γt mRNA表达水平与T-bet mRNA表达水平呈正相关(r=0.67),IL-17 mRNA表达水平与ROR-γt mRNA表达水平有相关性(r=0.35),P值均<0.05。结论:泡球蚴感染宿主早期,主要以Th1型和Th17型细胞免疫为主,感染中后期出现Th1向Th2转化,机体呈现出以Th2细胞为主的优势应答。

胃癌中RORα蛋白的表达及临床病理意义

目的观察维甲酸相关孤核受体α(Retinoid acid receptor related Orphan Receptorα,RORα)蛋白在胃癌中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的关系,为寻找胃癌肿瘤标记物提供一定的实验依据。方法应用组织芯片技术及免疫组化SP法检测90例胃癌组织、48例癌旁胃黏膜组织与22例正常胃黏膜组织中RORα的表达,研究RORα与胃癌发生、发展的关系。结果 RORα蛋白在胃癌组织中表达下调,正常胃黏膜、癌旁胃黏膜和胃癌组织中RORα蛋白阳性率分别为83.36%(19/22),56.25%(27/48)和24.44%(22/90),3者相比差异有显著性(P<0.05)。高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌和印戒细胞癌中,RORα阳性率分别为45.00%(9/20)、27.59%(8/29)、14.29%(3/21)、11.11%(1/9)和9.05%(1/11)。高分化腺癌RORα阳性率高于低分化腺癌(P<0.05)。结论 RORα蛋白下调与胃癌的发生、发展相关,且可能与胃癌的分化程度有关。

基于两个点集间参数估计的DVL标定方法

[目的]为了提高无人艇(USV)捷联惯性导航(SINS)与多普勒计程仪(DVL)组合导航的精度,需要对DVL误差进行精确标定。[方法]首先,对DVL的安装误差角、杆臂、比例因子进行误差建模,着重分析舰船中杆臂误差项对组合导航定位产生的影响;然后,提出一种基于两个点集间参数估计的DVL误差标定方法,即将SINS/GNSS导航参数与DVL输出参数视为两个点集,将标定问题转换为两个点集间差值的估计问题,再利用卡尔曼滤波器对两个点集间的误差参数进行估计;最后,利用基于奇异值分解(SVD)的可观测性分析,对不同运动条件下滤波器的可观测性定量分析,给出标定过程中载体的运动策略。[结果]数学仿真和海试试验结果表明,标定后的SINS/DVL算法全局相对精度可达到0.122%航程;在角机动时,杆臂会导致SINS/DVL定位突变;补偿杆臂后的定位误差更加平滑,且整体上具有更小的定位误差。[结论]所提方法可为包括杆臂在内的各项DVL误差标定提供可行的途径。

Wnt5a和ROR1在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的探讨Wnt5a和受体酪氨酸激酶样孤核受体1(ROR1)在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测35例骨肉瘤和15例骨软骨瘤中Wnt5a及ROR1的表达情况,并分析两者表达与临床病理特征及预后的关系。结果 Wnt5a和ROR1在骨肉瘤组织中的阳性表达率分别为62.9%(22/35)和57.1%(20/35),明显高于骨软骨瘤组织的13.3%(2/15)和6.7%(1/15),差异均有统计学意义(P<0.05)。在骨肉瘤组织中,Wnt5a和ROR1的表达与Enneking分期和远处转移密切相关(P<0.05)。Wnt5a与ROR1的表达呈正相关(r=0.888,P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析显示,Wnt5a和ROR1阳性表达者的中位生存时间分别为23个月和27个月,明显短于阴性表达者的41个月和42个月(P<0.05)。结论 Wnt5a和ROR1在骨肉瘤中呈高表达,其阳性表达可能与骨肉瘤的发生、发展密切相关,联合检测Wnt5a、ROR1对于判断骨肉瘤的进展及预后具有重要意义。

二期梅毒患者血清IL-17,IL-23和ROR-γt的检测

目的检测二期梅毒患者血清IL-17,IL-23和维甲酸受体相关孤儿受体γt(ROR-γt)的水平,探讨Th17细胞在梅毒免疫致病机制中的可能作用。方法采用酶联免疫吸附法检测30例二期梅毒患者和20例正常人血清IL-17,IL-23和ROR-γt水平。结果 30例二期梅毒患者血清IL-17,IL-23和ROR-γt水平分别为(24.8±20.9)pg/mL,(32.1±8.3)pg/mL和(120.2±40.6)pg/mL,均较健康对照[(12.7±14.2)pg/mL,(21.0±8.7)pg/mL,(72.0±41.8)pg/mL]明显升高(P<0.05)。梅毒患者血清IL-17,IL-23和ROR-γt水平与RPR滴度间无线性相关(P>0.05)。结论梅毒患者血清IL-17,IL-23和ROR-γt水平的升高可能与梅毒的免疫致病机制有关。

基于真实世界数据的CGRP靶向药物不良事件的对比分析

目的 对比分析降钙素基因相关肽(CGRP)靶向药物上市后的不良事件,为患者药物选择和临床安全用药提供参考。方法 收集美国食品药品监督管理局(FDA)不良事件报告系统(FAERS)中自药品上市时间至2023年9月30日的原始数据,采用报告比值比法(ROR)和贝叶斯可信区间递进神经网络法(BCPNN),对比分析小分子CGRP受体拮抗剂(吉泮类)和CGRP单抗类药物的不良事件信号。结果 吉泮类不良事件信号共计176个(报告例数10 569),单抗类不良事件信号共计401个(报告例数87 605)。所有CGRP靶向药物均存在药物无效和治疗效果下降的不良事件。吉泮类共有的不良事件信号包括恶心、嗜睡和眩晕,单抗类共有的不良事件信号为注射(或输液)部位的各种反应。存在FDA说明书中未记载的多个不良事件信号,有些信号是某类药物所特有的,如阿托吉泮的便秘,瑞美吉泮的上腹痛和咽部肿胀等,乌布吉泮的胸痛、颈痛和心悸等,加卡奈珠单抗的眩晕和体重增加,瑞玛奈珠单抗的肿舌和耳鸣,艾普奈珠单抗的咽喉刺激、鼻充血和超敏反应等。结论 CGRP靶向药物的不良事件既有共性也有各自的特性,对于说明书未记载的不良事件,临床应予以关注并指导患者安全用药。

Toll样受体7激动剂T7-利尿酸偶合物联合ROR1具有更强的抗乳腺癌作用

目的探讨Toll样受体7激动剂T7-利尿酸偶合物(T7-EA)联合受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)抗乳腺癌的作用。方法采用Syfpeithi表位预测软件预测ROR1的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位;ELISA检测4μmol/L T7-EA、4μmol/L ROR1和4μmol/L T7-EA联合4μmol/L ROR1诱导小鼠脾淋巴细胞产生的γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)和骨髓来源的树突状细胞(DC)产生的肿瘤坏死因子α(TNF-α);BALB/c小鼠皮下接种乳腺癌4T1细胞建立移植瘤模型,腹腔分别注射3 mg/kg T7-EA、15 mg/kg ROR1、3 mg/kg T7-EA联合15 mg/kg ROR1,每周1次,免疫治疗4次后处死小鼠检测肿瘤质量;ELISA检测血清中针对4T1细胞肿瘤蛋白的Ig G水平;乳酸脱氢酶(LDH)法测定特异性CTL活性。结果在预测的多条ROR1 CTL表位肽中选取序列PYCDETSSV作为疫苗多肽;体外实验显示T7-EA活化淋巴细胞呈现剂量依赖性,与ROR1相关多肽混合后不改变其活性;T7-EA与ROR1合用诱导小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ和IL-12,刺激DC产生TNF-α;体内实验显示T7-EA联合ROR1抑制肿瘤生长效果显著强于单用T7-EA组和ROR1组,T7-EA联合ROR1诱导的针对4T1细胞肿瘤蛋白的血清Ig G水平显著高于T7-EA和ROR1单独给药组,T7-EA联合ROR1诱发的T细胞杀伤作用显著强于T7-EA和ROR1单独处理组。结论 T7-EA和ROR1联合应用具有更强的抗乳腺癌效果。

不同分期慢性淋巴细胞白血病患者外周血T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA的表达变化

目的:研究特异性转录因子T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA在不同分期慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中的表达情况并探讨其在CLL发病机制中可能的作用及临床意义。方法:选择46例初诊未治疗CLL患者为病例组(其中Binet A期15例,Binet B期16例,Binet C期15例),20名健康人作为对照组,通过荧光实时定量PCR方法分别检测各组外周血单个核细胞(PBMNC)中T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA的表达。结果:1 CLL患者外周血中T-bet mRNA表达低于正常对照组(P<0.05),GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA的表达均高于正常对照组(P值均<0.05),T-bet/GATA-3与RORγt/Foxp3比值均低于正常对照组(P值均<0.05);2分期越晚,GATA-3 mRNA和Foxp3 mRNA的表达量越高,其中B期和C期的GATA-3 mRNA表达高于A期(P<0.05),C期的Foxp3 mRNA表达高于A期和B期(P<0.05);分期越晚,T-bet/G ATA-3和RORγt/Foxp3比值越低。其中A期的T-bet/GATA-3比值高于C期(P<0.05),A期与B期的RORγt/Foxp3比值均高于C期(P<0.05)。结论:本研究从转录因子层面发现在CLL患者中,随着病程的进展,Th1/Th2和Th17/Treg平衡分别向Th2和Treg偏移,Treg细胞可能在CLL的发生发展中起着重要的免疫抑制作用。

负压真空袋固定全上肢在乳腺癌保乳术后调强放疗中体位精度及重复性研究

目的 探讨负压真空袋固定全上肢在乳腺癌保乳术后调强放射治疗(IMRT)中的体位精度及重复性价值。方法 回顾性分析2020年10月至2022年5月乳腺癌保乳术后调强放疗患者34例,随机均分为试验组和对照组。试验组采用80 cm×120 cm真空袋全上肢塑型固定;对照组采用70 cm×100 cm真空袋上肢部分塑型固定,双手交叉置于额前。治疗前后分别获取左右(X)、头脚(Y)、腹背(Z)三维方向分次间、分次内的摆位误差(ΔP1、ΔP2);由ΔP1计算临床靶体积(CTV)至计划靶体积(PTV)三维方向的外放范围。计算当次治疗前后三维方向体表线偏移值ΔP3。两组ΔP1、ΔP2、ΔP3在同一方向上的摆位误差采用配对样本t检验;ΔP1与ΔP3在组内的相关性采用Pearson相关性分析。结果 试验组和对照组在X、Y、Z三维方向上的ΔP1进行比较,差异无统计学意义(P>0.05);试验组和对照组在X、Y、Z三维方向上的PTV外扩值分别为4.97 mm、6.31 mm、5.38 mm和8.24 mm、9.96 mm、7.52 mm,差异有统计学意义(P=0.02)。试验组和对照组在Z方向的ΔP2分别为(0.29±1.02)mm、(-0.09±1.49)mm,ΔP3分别为(-0.63±0.95)mm、(-1.05±1.35)mm,两组差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,两组ΔP1与ΔP3在Z方向均存在相关性(r=0.450,P<0.05;r=0.630,P<0.05)。结论 真空袋固定全上肢可提高乳腺癌保乳术后全乳IMRT中的体位精度及重复性,可能有一定的临床参考及推广价值。

RORα miRNA真核表达载体构建及对人胃癌细胞增殖的影响

目的构建RORα(Retinoid acid receptor related orphan receptorα,维甲酸相关孤核受体α)miRNA真核表达载体,分析其对人胃癌MGC803细胞RORα蛋白表达及细胞增殖的影响。方法构建针对设计RORαmiRNA表达的3对miRNA干扰序列,克隆入pcDNATM6.2-GW/EmGFP miRNA真核表达载体,在测序鉴定无误后将含RORαmiRNA转染人胃癌MGC803细胞,用Western blo检测MGC803细胞转染前后RORα蛋白的表达水平变化。MTT法检测对转染MGC803细胞增殖的影响。结果 Western blot结果证实,MGC803细胞转染RORαmiRNA后24h RORα蛋白表达水平明显低于转染阴性组(P<0.05)。MTT结果显示,转染RORαmiRNA后细胞增殖率(光吸收值)高于转染阴性组(P<0.05)。结论 miRNA靶向抑制RORα表达后,可促进人胃癌MGC803细胞增殖,提示RORα是一个潜在的胃癌基因及药物治疗的靶点。

ROR-γt干扰腺病毒载体抑制Th17细胞功能

目的:设计和构建ROR-γt特异性干扰腺病毒载体,观察其对大鼠脾脏来源的辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)功能的影响。方法:设计ROR-γt编码区干扰序列,DNA聚合酶作用下形成双链序列,与线性化pSES-HUS质粒连接。转入BJ5183,转染病毒包装体系293细胞系,收集细胞,得到病毒液。反复感染4次得到高滴度pSES-HUS-ROR-γt病毒液。将其感染大鼠脾脏来源的Th17细胞,检测其对Th17细胞功能的影响。结果:成功构建和包装pSES-HUS-ROR-γt干扰腺病毒液,Th17细胞感染pSES-HUS-ROR-γt干扰病毒后,其分泌细胞因子白介素(interleukin,IL)-17、IL-6和TNF-γ水平下降。结论:pSESHUS-ROR-γt干扰腺病毒能够有效抑制Th17细胞功能,可能对肾移植慢性排斥反应具有抑制或者延缓作用。

RNA干扰ROR-γt表达对大鼠肾移植模型中Th17细胞功能和慢性排斥反应的作用

目的探讨RNA干扰Th17关键转录因子ROR-γt表达后,对大鼠肾移植慢性排斥模型中Th17细胞功能以及慢性排斥反应的影响。方法构建ROR-γt特异性干扰腺病毒,将其通过尾静脉注入大鼠慢性排斥反应模型,监测大鼠血肌酐变化,酶联免疫吸附试验检测Th17相关细胞因子IL-17、IL-6和TNF-γ改变。4周后检测大鼠肾组织病理改变。结果成功构建ROR-γt特异性干扰腺病毒pSES-HUS-ROR-γt。大鼠慢性排斥反应模型尾静脉注入pSES-HUS-ROR-γt,大鼠血清肌酐水平下降,IL-17、IL-6和TNF-γ水平下降,肾小球纤维化病变减轻。结论 pSES-HUS-ROR-γt特异性干扰腺病毒可以抑制Th17细胞功能,减轻肾移植慢性排斥反应。