利用SCGE技术对植物盐胁迫下DNA损伤的研究

以北斗七星蚕豆为试验材料,分别采用0,6,12,18,24,30g/L的6个质量浓度的NaCl溶液处理蚕豆根尖,利用SCGE技术对蚕豆根尖细胞在不同质量浓度盐胁迫下DNA的损伤进行检测,探讨逆境胁迫对植物细胞DNA的损伤效应,并以此建立快速准确的植物DNA损伤检测流程。结果表明,盐胁迫会对蚕豆根尖细胞DNA造成损伤,并且随着盐胁迫质量浓度的升高,细胞拖尾加剧,30 g/L盐胁迫下的细胞拖尾最明显;此外,当NaCl溶液质量浓度大于18 g/L时,随着NaCl溶液质量浓度的增加,蚕豆根尖细胞拖尾率逐渐增大,根尖细胞损伤概率增加。通过利用多种比较分析细胞尾部DNA发现,随着盐胁迫质量浓度的增加,细胞的彗星尾长增加显著,同时利用软件分析可增加对DNA损伤的直观检测,具有较好的应用效果。最后,通过对实验过程中涂层琼脂糖溶液和包埋凝胶溶液的制备、载玻片涂胶处理方法等均进行了合理的改良,为后续大批量开展植物逆境胁迫条件的评估提供便利。

基于SCGE的五氯酚对稀有鮈鲫DNA损伤的研究

采用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术,研究了在不同的染毒时间内不同浓度的五氯酚(PCP)对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)血细胞和肝脏细胞DNA的损伤.结果显示,各PCP染毒组细胞彗星尾部DNA含量(%DNAT)和彗星尾长(TL)显著增加,与空白对照组比较,差异极显著(P<0.05).随着浓度的增加,细胞彗星尾部%DNAT和TL逐渐增加,其相关系数>0.926,说明在实验浓度范围内,存在显著的浓度-效应关系.在同一浓度下,随着暴露时间的增加,处理组%DNAT和TL逐渐增加,存在显著的时间-效应关系.由于PCP可引起稀有鮈鲫血细胞和肝脏细胞DNA的严重损伤,因此稀有鮈鲫血细胞和肝脏细胞DNA的损伤可作为PCP遗传毒性的指示.

黑鲷精子的超低温冻存及DNA损伤的SCGE检测

以0.5mL的麦细管为冻存管和DMSO为抗冻剂进行超低温冷冻黑鲷精子,对冻精核DNA的损伤情况进行单细胞凝胶电泳(SCGE)检测,其结果表明,以Cortland溶液为稀释液,5%、10%、15%及20%DMSO为抗冻剂的超低温冻存的黑鲷精子活力、受精率与鲜精无显著差异。其中以10%DMSO为抗冻剂的冻存效果最佳,冻精的激活率、运动时间、寿命及受精率分别达(92.91±1.25)%、(39.90±2.70)min、(53.82±2.84)min及(89.35±1.99)%;而以25%及30%DMSO为抗冻剂时,冻精活力及受精率显著下降。SCGE检测结果显示,DMSO浓度为5%、10%、15%及20%时,黑鲷冻精与鲜精的彗星率及损伤系数差异不显著;DMSO浓度为25%及30%时,冻精与鲜精的彗星率及损伤系数差异显著;冻精的彗星率与抗冻剂DMSO浓度成正相关。黑鲷鲜精及冻精核的DNA损伤主要为轻度和中度损伤,重度损伤比例较低,完全损伤仅存在于25%及30%DMSO为抗冻剂的冻精中,且比例低。分析认为,较高浓度的DMSO是引起冻精核DNA损伤的主要原因。

用SCGE法检测燃煤污染型砷中毒患者血细胞DNA的损伤作用

目的 探讨砷中毒的致癌机理及寻找灵敏、实用的 DNA损伤监测指标。方法 应用单细胞凝胶电泳法 (SCGE)对贵州省兴仁县燃煤型砷中毒重病区 175名砷接触者的血细胞 DNA损伤进行了检测 ,并分析了相关因素的影响。结果 砷能引起人体血细胞 DNA单链断裂 ,其损伤发生早于临床表现 ,并与尿砷、发砷呈正相关关系 :与皮肤损害进展一致。吸烟和氟的影响可加重砷对 DNA的损伤作用。结论 SCGE具有灵敏、快速、简便等优点 ,可作为一种早期、实用的方法应用于砷接触人群的

间二硝基苯对小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤作用的SCGE研究

采用小鼠睾丸支持细胞/生殖细胞共培养法以及单细胞凝胶电泳技术,研究了间二硝基苯对小鼠睾丸生殖细胞DNA的损伤作用.结果表明:间二硝基苯能够导致生殖细胞DNA链断裂,而且其受损率与剂量具有明显的剂量效应关系,与对照组相比均具有显著性差异(P<0.01,P<0.05);间二硝基苯可以引起离体小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,具有生殖毒性.

重金属Cu、Pb 对泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus)卵细胞凋亡及 DNA 损伤的 SCGE 试验

采用室内暴露试验方法,以单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测,研究了Cu、Pb不同浓度梯度与不同暴露时间联合染毒对泥鳅卵细胞DNA的损伤。结果表明,各Cu、Pb浓度组DNA平均迁移长度增加,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05)。此外,随着Cu、Pb染毒剂量的增加,各试验组DNA的平均迁移长度逐渐增加,在试验浓度梯度范围内(Cu0.01mg/L+Pb0.05mg/L、Cu0.10mg/L+Pb0.50mg/L、Cu0.25mg/L+Pb0.75mg/L),存在较为显著的剂量-效应关系(P<0.05),但未见明显的时间-效应关系(P>0.05)。Cu、Pb可引起泥鳅卵细胞凋亡和DNA损伤,卵细胞的不同损伤水平可望作为较为理想的水环境基因毒性指标。

SCGE,SCE和染色体畸变分析法用于DNA损伤与修复检测的对比研究

目的与方法 :单细胞凝胶电泳技术 (SCGE)、姐妹染色单体交换法 (SCE)和染色体畸变分析法均能被用来检测DNA的损伤或修复。通过对比研究了这 3种方法在DNA损伤和修复检测中的灵敏度和准确性。结果 :SCGE检测H2 O2 所致的DNA损伤比SCE更为灵敏 ,在H2 O2 10 0 μmol/L和 2 0 0 μmol/L剂量组 ,SCGE检测到的DNA损伤率分别达到 45 .6 %和 5 9.5 % ,而姐妹染色单体交换法检测到相应 2个剂量组的DNA损伤率仅为 3 .4%和 5 .3 %。用染色体畸变分析法 ,H2 O2 处理的 4个实验组的染色体畸变率与对照组无明显差异。结论 :SCGE ,SCE和染色体畸变分析法是在 3个不同水平检测DNA的损伤和修复 ,SCGE具有操作简便、快速。

应用SCGE技术研究细胞DNA损伤的原理与方法

对单细胞微凝胶电泳（ＳＣＧＥ）技术的操作过程，技术原理以及实验操作过程中应注意的事项，进行了详细介绍和讨论；并应用ＳＣＧＥ技术研究了γ射线照射对人血淋巴细胞ＤＮＡ的损伤效应．结果表明，γ射线照射能引起细胞ＤＮＡ迁移长度增加，且呈显著地剂量效应关系．

低剂量T-2毒素对大鼠体外培养软骨细胞DNA损伤的SCGE观察

目的观察低剂量T-2毒素对大鼠体外培养软骨细胞DNA损伤情况,进一步探索大骨节病等真菌毒素中毒疾病的发病机制,预防亚临床损害和促进人类健康。方法单层原代培养的软骨细胞加入不同浓度T-2毒素(0、1、10、100μg/L)培养24 h,用单细胞凝胶电泳(SCGE)观察软骨细胞DNA损伤情况。结果随着T-2毒素剂量的升高,大鼠体外培养软骨细胞的拖尾率增加,且10μg/L组及100μg/L组与对照组相比差异均有显著意义。同时可见,随着T-2毒素剂量的升高,软骨细胞的尾DNA含量、尾长、尾动量均增加,与对照组相比,三项指标差异均具有显著意义。结论低剂量T-2毒素对体外培养的大鼠关节软骨细胞DNA可产生明确损伤,剂量越大,损伤越严重。

用SCGE法观察砷、氟、黄绿青霉素和T-2毒素引起的SGC-7901细胞基因组DNA损伤

目的 观察砷、氟、黄绿青霉素和 T-2毒素对 SGC-790 1细胞基因组 DNA的损伤作用及特点。方法 染毒剂量 10μmol/ L ,染毒后 4h应用单细胞凝胶电泳技术结合“彗星图像分析系统”检测 DNA损伤。结果 Na As O2 组尾长明显大于对照组 ;Na F组拖尾率显著高于对照组 ;CIT组总拖尾率、尾长和尾动量均高于对照组 ;而 T-2毒素组各指标均高于对照组。结论 Na As O2 、Na F、CIT和 T-2毒素均可引起 DNA损伤 ,但各有特点 ,说明它们引起

SCGE技术检测镉对背角无齿蚌血细胞DNA的损伤

以背角无齿蚌(Anodonta woodiana woodiana)为研究对象,利用单细胞凝胶电泳技术检测不同浓度及不同染毒时间氯化镉对背角无齿蚌血细胞DNA的损伤作用。结果显示,染毒后的背角无齿蚌血细胞均出现了拖尾现象,各染毒组与对照组相比,拖尾增长明显。剂量效应组中,蚌暴露在不同浓度(0、1、10、50 mg.L-1)的氯化镉中72 h,各组蚌血细胞DNA平均迁移长度及彗尾DNA含量均明显增加,与阴性对照组比较差异显著(p<0.01),存在显著的剂量-效应关系;在时间效应组中,蚌暴露在10 mg.L-1的氯化镉中分别24、48、72、96 h,随着氯化镉染毒时间的延长,各染毒组细胞DNA平均迁移长度及彗尾DNA含量与0时间组比较差异显著(p<0.01),但时间-效应关系不明显。

SCGE技术检测镉对大弹涂鱼外周血细胞DNA损伤

本研究以大弹涂鱼为实验材料,采用SCGE技术并对该技术中通过对缓冲液、铺胶方法、裂解液及不同解旋时间的优化来检测镉对大弹鱼外周血细胞DNA的损伤作用。结果表明,染毒后镉使大弹涂鱼外周血细胞均出现了拖尾现象,经过筛选,采用Ringer's缓冲液、"三明治"式铺胶法、裂解液C、40min解旋时间进行实验效果最好。通过优化SCGE条件所得结果来看,本研究提高了SCGE对大弹涂鱼血细胞DNA损伤的检测效率,为SCGE技术间接作为水环境监测的有效工具提供更多的方法学参考。

SCGE技术在环境污染物检测中的应用

介绍单细胞凝胶电泳技术(SCGE)的原理及其在环境污染物检测中的应用。该技术可用于环境中多种污染物如大气污染物、重金属、醛类及辐射污染的检测,且灵敏度高,具有广阔的应用前景。

不同冻存条件和时间对SCGE试验结果的影响

目的 研究人外周血淋巴细胞在不同冻存条件下保存不同时间后DNA的损伤程度 ,从而评价SCGE最适宜的细胞保存方法和时间。方法 将未处理的和H2 O2 处理的人外周血淋巴细胞分别储存于 4℃、-2 0℃和 -70℃ ,于保存 0h、 2 4h、 48h、 72h、 96h、 192h后取出 ,进行单细胞凝胶电泳 (SCGE)试验。结果 未处理的和经H2 O2 处理的人外周血淋巴细胞在不同冰冻条件 ( 4℃、 -2 0℃、 -70℃ )下 ,保存一定的时间 ( 2 4h、 48h、 72h、 96h、 192h)后 ,经电泳表明淋巴细胞DNA的迁移长度和DNA拖尾率结果比较差异有显著意义。结论 4℃情况下保存细胞以 2 4h内为佳 ,保存更长时间需 -70℃。

藏药绿萝花彗星试验(SCGE)研究

研究藏药绿萝花的抗(致)突变作用,科学合理地利用藏药资源.根据遗传毒性研究试验组合原则和判定标准,以环磷酰胺、丝裂霉素C为阳性药物对照,采用单细胞凝胶电泳试验(彗星试验),研究不同剂量绿萝花对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL) DNA的影响.结果显示,环磷酰胺、丝裂霉素C具有很强的致CHL细胞SCGE上升、HDNA下降、TDNA上升、TL和TM增加(超过40μm)的作用;生药浓度为0. 224 g/mL、0. 448 g/mL、0. 896 g/mL的绿萝花在分别染毒1次、2次和3次后对CHL细胞DNA无影响,对环磷酰胺和丝裂霉素C引起的DNA损伤无保护作用.研究表明藏药绿萝花无致基因突变作用,研究结果为绿萝花临床安全用药提供了科学依据.

利用SCGE分析nZVI对DNA的损伤及其方法优化

本实验利用单细胞凝胶电泳技术(Single cell gel electrophoresis,SCGE)分析细胞中DNA的损伤情况,实验使用受试生物为土壤毒理学常用的模式生物赤子爱胜蚯蚓.从SCGE技术的实验方法开始,摸索SCGE的实验步骤,分别从体腔细胞的提取、铺胶、裂解、染色四个方面优化实验.探究了阴阳性的对照组,观察到阳性对照组出现条带状的DNA片段,而阴性对照组只观察到团状DNA,说明本实验的实验方法摸索成功.与此同时,将经过零价纳米铁染毒的赤子爱胜蚯蚓体腔细胞作为平行样品,进一步分析零价纳米铁(n ZVI)的生态毒理学效应,实验结果发现,在该实验条件设置下,纳米铁的急性毒性效应并不强烈,无法观察到DNA损伤.这一结论为纳米铁在环境领域的应用提供可行性的参考.

TUNEL法和SCGE法评价奶牛性控冻精DNA损伤

末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)和单细胞凝胶电泳法(SCGE)常被用于检验细胞DNA的完整性。本研究采用这两种方法分别对性控、常规冻精进行检测,比较不同方法对精子DNA损伤的检测结果。结果表明:TUNEL法检测性控冻精DNA的损伤率为63.32±0.56%,显著高于(P<0.01)常规冻精的31.67±1.03%;SCGE法检测性控冻精和常规冻精的DNA损伤率分别为64.00±0.68%和32.23±0.72%,差异极显著(P<0.01)。而两种方法对性控冻精和常规冻精DNA损伤的检测结果间没有显著差异(P>0.05),说明该两种方法均可用于冻精DNA损伤检测。

钬离子溶液诱导蚕豆根细胞凋亡的初步研究

运用硝酸钬溶液对蚕豆根尖染毒,提取根尖细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳;取根尖压片观察细胞核异常情况;同时取根尖细胞进行单细胞凝胶电泳。结果表明,钬离子诱导了根尖细胞核异常;在8mg·L-1剂量下,彗星细胞尾长和拖尾细胞数量在24h内随着根尖处理时间的延长而增加,处理24h时,琼脂糖凝胶电泳中出现明显的连续拖尾带型;处理48h后彗星拖尾缩短,琼脂糖凝胶电泳中拖尾带型缩短,推测可能发生了DNA修复作用或者交联作用。64mg·L-1剂量处理24h,彗尾缩短且出现核碎裂,琼脂糖凝胶电泳中未出现拖尾带型。实验中未观察到细胞凋亡的典型DNA"梯状带型"和特征性彗星拖尾现象。

应用单细胞凝胶电泳测定人血痕淋巴细胞降解的实验研究

目的探讨血痕形成时间与其DNA降解的淋巴细胞出现率的关系。方法应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术结合荧光显微镜和专业的计算机图像分析技术,测定离体72h内不同时间段的血痕中彗星样淋巴细胞出现率。结果获得人离体血液经不同放置时间间隔后,经LUC IA图像分析系统采集得到荧光图像,并获得体现DNA降解趋势的二项式回归方程y=-0.0178X2+2.4623X+8.1098,r2=0.9522,具有高度的统计学意义。结论72h内的人血DNA降解的淋巴细胞出现率与血痕形成时间之间具有高度的线性相关。

重金属Cd^(2+)、Pb^(2+)和Zn^(2+)对泥鳅DNA损伤的研究

采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE),研究重金属Cd2+、Pb2+、Zn2+在不同暴露时间(1—35d)、单一重金属离子不同暴露浓度(0.05mg/L、0.5mg/L、5.0mg/L)或混合重金属离子(Cd2++Pb2+、Cd2++Zn2+、Pb2++Zn2+、Cd2++Pb2++Zn2+)相同浓度(0.5mg/L)条件下对泥鳅肝胰脏细胞核DNA的损伤作用。以带彗尾核DNA百分率和彗尾长度(TL)与核直径(D)比值为指标,探讨DNA损伤级别与处理浓度间的相关性。结果显示,随着处理时间的延长,带彗尾核DNA百分率和TL/D值均呈上升趋势,5.0mg/L Zn2+组28d时带彗尾核DNA百分率最高(84.85%),35d的TL/D值亦为所有组中最高(2.50);对DNA损伤作用,初期以1级损伤为主,7d后以3级损伤为主,且损伤率超过80%;Cd2+、Pb2+和Zn2+之间的联合毒性表现复杂,但总体表现为Cd2+存在时能增强Pb2+或Zn2+对DNA的损伤作用。总之,重金属Cd2+、Pb2+和Zn2+对泥鳅肝胰脏细胞核DNA损伤具有明显的浓度和时间效应,利用SCGE技术可对水环境污染导致的生物基因毒性作用进行监测。