8-氯腺苷诱导的组蛋白H3K79双甲基化促进NBS1和p21的基因转录激活

组蛋白H3第79位赖氨酸甲基化(H3K79me)修饰有单甲基、双甲基及三甲基3种形式,是常染色质的标志.然而,对于组蛋白H3K79三种甲基化各自在基因转录、DNA损伤修复中所起的作用尚不十分清楚.本研究以8-氯腺苷(8-Cl-Ado)为DNA双链断裂(DNAdouble-stranded breaks,DSB)诱导剂,采用Western印迹,在人肺癌细胞H1299检测出了DNA修复分子NBS1、细胞周期检验点相关分子p21,并发现H3K79me1、H3K79me2和H3K79me3三种甲基化修饰的组蛋白明显增加;染色质免疫共沉淀结合实时定量PCR实验显示,只有H3K79me2与DNA损伤检验点分子p21、DNA修复分子NBS1的启动子区域相结合,说明H3K79双甲基化修饰与这些基因的转录激活有关.结果提示,在8-氯腺苷引起DSB时,是H3K79me2、而不是H3K79me1和H3K79me3参与NBS1和p21基因转录激活时的染色质重塑.8-氯腺苷诱导H3K79双甲基化增强、促进H3K79me2所在染色质区域的NBS1和p21基因转录激活可能是8-Cl-Ado抑制肿瘤细胞生长作用机制之一.

8-氯腺苷调节RNA编辑酶ADAR1对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和迁移的影响

目的:研究8-氯腺苷(8-chloro-adenosine,8-Cl-Ado)对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和迁移的影响,以及与RNA编辑酶1(adenosine deaminases acting on RNA 1,ADAR1)表达的相关性。方法:蛋白印迹实验检测乳腺癌组织中ADAR1的蛋白表达量以及8-Cl-Ado(10μmol/L)处理乳腺癌SK-BR-3细胞不同时间ADAR1蛋白表达量的变化;MTT法和形态学观察检测不加药组和8-Cl-Ado(10μmol/L)加药组对SK-BR-3细胞增殖的影响;MTT法和伤口愈合实验检测SK-BR-3细胞过表达ADAR1质粒(空白对照组、空载组、ADAR1-P110组、ADAR1-P150组)对8-Cl-Ado作用SK-BR-3细胞增殖及迁移的影响。结果:乳腺癌癌组织中ADAR1-P110和ADAR1-P150蛋白表达量均明显高于癌旁组织(t=9.871,P=0.000;t=7.169,P=0.000);8-Cl-Ado作用SK-BR-3细胞48 h后ADAR1-P110和ADAR1-P150蛋白表达量均明显降低(t=-8.838,P=0.013;t=-19.866,P=0.003);8-Cl-Ado作用SK-BR-3细胞ADAR1-P110组和ADAR1-P150组48 h后增殖抑制率均明显低于空白组(P均为0.000);8-Cl-Ado作用SK-BR-3细胞ADAR1-P110组和ADAR1-P150组48 h后的迁移率均明显高于空白组(P均为0.000)。结论:8-Cl-Ado能明显抑制SK-BR-3细胞增殖和迁移,其作用机制可能与ADAR1的表达下调有关。

8-氯腺苷衍生物的合成及生物活性研究

N6-甲基 -8-氯腺苷的合成是以 N ,N -二甲基乙酰胺为溶剂由腺苷与碘甲烷反应 ,生成 N1-甲基 -8-氯腺苷 ,经过 Dimorth重排而得到 ,优化反应条件后 ,N1-甲基 -8-氯腺苷收率为 5 2 %。8-氯腺苷糖环羟基被酯化后失去原有的生物活性 。

8-氯腺苷脂质体的制备及性质考察

目的:研究水溶性药物8-氯腺苷(8-Cl-A)的脂质体包封方法和脂质体的性质。方法:建立脂质体中8-Cl-A含量测定方法;以包封率为指标优化处方及制备工艺,制备8-Cl-A脂质体;考察脂质体的形态、粒径、粒径分布和脂质体在5.0％葡萄糖溶液和大鼠血浆中的体外释放行为。结果:确定以改良的复乳法制备纳米级的8-Cl-A脂质体,按最优处方制备的8-Cl-A脂质体的包封率达到62.70％;粒径均值为79.9nm;8-Cl-A脂质体在5.0％葡萄糖溶液中24h释放为53％,在血浆中8h释放为91％。结论:以改良的复乳法可以制备包封率较高、粒径较小的8-Cl-A脂质体,体外释放表明该脂质体具有一定的缓释效果。

新抗癌药8-氯腺苷的毒理学研究

新抗癌药８－氯腺苷的毒理学研究彭敬刘影管玖萍王耐勤方家椿（北京医科大学临床肿瘤学院，北京市肿瘤防治研究所，北京１０００３４）中国图书分类号Ｒ９７９．１８－氯腺苷（８－Ｃｈｌｏｒｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ）是近年发现的一个具有抗癌活性的化合物，我院和北京医科...

新抗肿瘤化合物8-氯腺苷在大鼠体内的药代动力学研究

目的 :探讨一次静注 8 氯腺苷在大鼠体内药代动力学的规律及特点 ,为临床实验提供理论依据。方法 :给大鼠单次静注 4种剂量 8 氯腺苷后 ,应用HPLC测定在体液和组织中原形物 8 氯腺苷的含量。结果 :8 氯腺苷在大鼠体内迅速转化为代谢产物 ,其消除半衰期为 1h左右。除脂肪、脑、睾丸组织外 ,8 氯腺苷在体内分布广泛 ,药物血浆蛋白结合率在 10～ 4 0 μg/ml浓度范围内约为 3 7% ,主要以代谢物形式从尿及胆汁中排泄。 结论 :8 氯腺苷的药代动力学为一级动力学二室模型 ,AUC在 2 5～ 10 0mg/kg的剂量范围时按比例增加 ,当剂量增加至 15 0mg/kg时 ,则AUC不成比例地增加 ,药物在体内的消除可能转入了零级动力学 ,8 氯腺苷在大鼠体内迅速代谢 ,从血中消除并从尿中排泄。

8-氯腺苷长循环脂质体的制备及其在大鼠体内的药代动力学

Aim To prepare 8-chloro-adenosine (8-Cl-A)long circulation liposomes with high entrapped efficiency and prolonged action-time of 8-Cl-A in vivo. Methods To prepare 8-Cl-A long circulation liposomes of nanometer size by improved multiple emulsion. The entrapped efficiency, size and size distribution of 8-Cl-A long circulation liposomes were determined, and its pharmacokinetics in rats was evaluated. Results The entrapped efficiency of 8-Cl-A long circulation liposomes was 62.70% and mean diameter of the liposomes was 79.9 nm. The pharmacokinetics studies indicated that 8-Cl-A long circulation liposomes showed higher drug concentration and larger AUC values than that of 8-Cl-A after iv to rats. Conclusion 8-Cl-A long circulation liposomes could prolong the action-time of 8-Cl-A in vivo.

球后注射8-氯腺苷后眼内药代动力学研究

观察新型抗代谢药物８－氯腺苷球后注射后眼内的分布情况，以探讨该药物用于视网膜和脉络膜新生血管性病变治疗的可行性。方法 采用高效液相色谱分析法分别测定单次球后注射及反复多次球后注射８－氯腺苷后，眼内的药物分布情况。结果 单次球后注射８－氯腺苷后，眼后段的各组织中均检测到不同浓度的８－氯腺苷以及其代谢产物８－氯腺瞟呤。反复多次球后注射８－氯腺苷后未见蓄积效应。结论 球后注射８－Ｃｌ－Ａ后，该药在眼后段具有良好的分布。多次应用眼内无明显的蓄积作用。

8-氯腺苷对抑制人晶状体上皮细胞增生的体外研究

目的探讨8-氯腺苷(8-chloroadenonosine)是否对体外培养的晶状体上皮细胞增生有抑制作用。方法取第2、3代传代培养的晶状体上皮细胞做药物抑制试验。加入不同浓度的8-氯腺苷(2,4,8,16μmol/L)作用24、48、72和96小时后,用MTT比色测定法和流氏细胞仪检测法确定药物对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用。结果 8-氯腺苷在4-16μmol/L的浓度下能抑制晶状体上皮细胞的增生。并且其抑制程度呈时间、剂量依赖性。结论该结果可为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。

新抗肿瘤化合物8-氯腺苷代谢物在大鼠体内的药代动力学研究

目的 :全面了解一次静注 8 氯腺苷后其代谢产物在大鼠体内药代动力学的规律及特点 ,为临床实验提供理论依据。方法 :给大鼠单次静注 4种剂量 8 氯腺苷后 ,应用HPLC方法测定在体液和组织中 8 氯腺苷代谢产物8 氯肌苷和 8 氯嘌呤的含量。结果 :8 氯腺苷在大鼠体内迅速转化为代谢产物 8 氯肌苷和 8 氯嘌呤。代谢产物之一 8 氯嘌呤半衰期 (t1/2 )有随用药剂量的增加而延长的趋势 ,为 10 .15～ 32 .84min。药时曲线下面积 (areaunderthecurve ,AUC)在 8 氯腺苷剂量增加至 15 0mg·kg-1时不成比例地增高 ,呈非线性动力学消除的特点。另一代谢产物 8 氯肌苷的t1/2 约为 10 0min ,在剂量增加至 10 0mg·kg-1时 ,其AUC不成比例地增加 ,呈非线性动力学消除的特点。除脂肪、脑、睾丸组织外 ,8 氯肌苷和 8 氯嘌呤在体内分布广泛 ,其中肝、肾等代谢和排泄器官的含量较高。药物主要以代谢物形式从尿及胆汁中排泄 ,排泄量占总给药量的 39.81%。结论 :静注 8 氯腺苷后 8 氯嘌呤在大鼠血中迅速生成 ,消除也比较迅速 ,8 氯肌苷在大鼠血中出现较晚 ,消除也比较缓慢 ,两种代谢物在用药剂量 2 5～ 10 0mg·kg-1范围内呈线性动力学消除 ,当剂量增加至 10 0～ 15 0mg·kg-1有非线性动力学消除的趋势。

E2F1介导8-氯-腺苷引起的人肺癌细胞H1299的凋亡

8-氯-腺苷(8-Cl-adenosine,8-Cl-Ado)可诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299发生凋亡,但其分子机制还没有阐明.首先用四唑盐(MTT)比色法检测了8-Cl-Ado对H1299细胞的生长抑制作用.进一步采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测了8-Cl-Ado处理H1299细胞后,procaspase-3的激活情况以及E2F1的蛋白水平.通过用pcDNA-HA-E2F1表达载体和pSUPER-E2F1 RNA干扰载体分别转染H1299细胞,研究在E2F1过表达和RNA干扰(RNAinterference,RNAi)两种情况下对凋亡的影响.实验结果表明,8-Cl-Ado可抑制H1299细胞的生长,激活凋亡关键执行蛋白procaspase-3,升高E2F1蛋白水平.当E2F1过表达后,同时伴有procaspase-3的激活,而E2F1表达受到抑制后,与对照相比,8-Cl-Ado引起的procaspase-3的激活被明显抑制,说明E2F1介导8-Cl-Ado引起的人肺癌细胞H1299的凋亡.

G6976转变8-氯-腺苷引起的G_2/M期阻滞为S期阻滞并促进K562细胞凋亡

8-氯-腺苷可抑制多种人类肿瘤细胞生长.8-氯-腺苷可引起细胞有丝分裂异常、G2/M期阻滞和晚期凋亡.为探索增强8-氯-腺苷的抗肿瘤作用,本研究以人慢性髓性白血病细胞株K562为靶细胞,联合使用Chk1抑制剂G6976与8-氯-腺苷,观察G6976处理后肿瘤细胞对8-氯-腺苷的增敏效果,探索其作用机制.流式细胞分析发现,G6976可消除8-氯-腺苷引起的K562细胞G2/M期阻滞,使转换为S期阻滞.蛋白质印迹及免疫共沉淀实验显示,G6976可灭活Chk1,激活Chk2,使Chk1-Cdc25C-CDK1级联反应转换为Chk2-Cdc25A-CDK2级联反应,从而引起细胞周期阻滞发生改变.蛋白质印迹实验证明,G6976可明显增强8-氯-腺苷作用引起的凋亡相关分子procasepase-3和PARP的激活;流式细胞分析显示,G6976促进8-氯腺苷引起的细胞凋亡.研究结果提示,G6976增强了靶细胞对8-氯-腺苷的敏感性,通过转换8-氯-腺苷引起的G2/M期阻滞为S期阻滞,促进细胞凋亡.

8-氯腺苷对HL-60细胞中蛋白酶体活性的抑制作用

背景与目的:蛋白酶体是真核细胞中具有多相催化活性的蛋白酶复合体,国外报道,蛋白酶体可作为新靶点来筛选抗肿瘤药物。8-氯腺苷(8-chloroadenosine,8-CA)由本室合成,研究已证实8-CA对肉瘤细胞株S180、肝癌细胞株H22及人胃癌异种移植瘤生长有抑制作用。但8-CA抑制肿瘤生长与蛋白酶体的关系还不清楚。本研究拟探讨8-CA对人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60中20S蛋白酶体的三种酶活性(包括糜蛋白酶样活性、胰蛋白酶样活性、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性)的影响。方法:不同浓度的8-CA作用于HL-60细胞24、48、72h后,提取细胞总蛋白,分别检测总蛋白提取液中20S蛋白酶体的三种酶活性,并采用免疫沉淀法测定纯化蛋白酶体的糜蛋白酶样活性,酶活性均以特异底物被蛋白酶体水解后产生的荧光吸光度表示。结果:0.1μmol/L8-CA作用于HL-60细胞48h,对总蛋白提取液中20S蛋白酶体的三种酶活性均有显著抑制作用,并且随着8-CA浓度的增加,其抑制作用逐渐增强。5μmol/L8-CA作用48h,对糜蛋白酶样活性、胰蛋白酶样活性、多肽-谷氨酰-多肽水解酶活性抑制率分别为44.96%、54.52%和48.36%;作用72h,对三种酶活性的抑制率分别为67.53%、70.48%和64.08%。1μmol/L和5μmol/L8-CA作用48h,对HL-60中蛋白酶体的糜蛋白酶样活性抑制率分别为68.

8-氯腺苷通过磷酸化修饰提高转录因子CREB的活性

背景与目的:8-氯腺苷是国内新近研发的抗肿瘤药物,其分子作用机制尚未完全阐明。本实验研究该药对HL-60细胞转录因子cAMP应答元件结合蛋白(cAMP-response-element-bindingprotein,CREB)活性的影响及其相关机制。方法:应用MTT法检测8-氯腺苷对人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60的半数抑制浓度(IC50),用蛋白印迹实验(Westernblotanalysis)检测药物作用不同时间CREB蛋白水平和CREB磷酸化水平,用凝胶阻滞实验(Gelshiftassay)检测药物作用不同时间CREB与DNA的结合水平。结果:(1)8-氯腺苷对HL-60细胞的IC50约为0.42μmol/L。(2)8-氯腺苷快速诱导CREB磷酸化,30min达到最高水平,6h恢复至基础水平,CREB蛋白水平在药物作用期间保持恒定。(3)8-氯腺苷不改变CREB与DNA结合能力。结论:8-氯腺苷诱导CREB转录因子活性的提高依赖于CREB磷酸化水平的提高,而与CREB蛋白水平及CREB与DNA的结合水平无关。

HPLC测定犬血中抗肿瘤化合物8-氯腺苷的药代动力学

目的：测定８－氯腺苷（８－Ｃｌ－Ａ）及其代谢物８－Ｃｌ－Ａｄ和８－Ｃｌ－Ⅰ在犬血中的药动学。方法：用ＲＰ－ＨＰＬＣ测定犬血中和组织中８－Ｃｌ－Ａ及其代谢物。结果：犬单剂量和多剂量静脉点滴８－Ｃｌ－Ａ后，计算得到８－Ｃｌ－Ａ的代谢物８－Ｃｌ－Ａｄ的药动学参数。结论：８－Ｃｌ－Ａ在犬体内迅速代谢和消除血中未出现蓄积性现象，８－Ｃｌ－Ａ在犬体内主要以８－Ｃｌ－Ａｄ代谢物分布于主要脏器组织中。

8-氯腺苷抑制人胃癌细胞增殖相关信号蛋白的作用

目的探讨8-氯腺苷是否会影响肿瘤细胞的表皮生长因子受体(EGFR)及其相关信号蛋白的表达.方法人胃癌BGC-823细胞与不同浓度8-氯腺苷共孵育.SRB染色法观察细胞增殖;Western蛋白印迹法观察细胞增殖相关信号蛋白的表达.结果8-氯腺苷1.0, 2.5,5.0,7.5和10 μmol*L-1作用24 h,浓度依赖性抑制BGC-823细胞增殖,抑制率分别为19.7%,31.8%, 40.1%, 49.8%和56.7%.7.5 μmol*L-18-氯腺苷作用BGC-823细胞24, 48和72 h,抑制率分别为49.8%, 49.1%和45.6%.Western蛋白印迹结果表明,8-氯腺苷2.5～7.5 μmol*L-1作用24 h,BGC-823细胞EGFR蛋白表达减少;Raf-1蛋白表达变化不显著;p-MEK和p-ERK磷酸化蛋白表达增加.结论8-氯腺苷可抑制BGC-823细胞增殖;改变EGFR-Raf/MEK/ERK等一系列信号蛋白的表达可能是其抑制细胞增殖的重要途径之一.