TNBS诱导的草鱼肠炎模型

通过建立草鱼肠道炎症模型，为经济鱼类炎症性肠病发病机理研究及药物筛选提供实验平台。于水温28℃条件下，从草鱼肛门插管注入0．25mL浓度为2．5％的三硝基苯磺酸（TNBS）50％乙醇溶液，诱发草鱼肠炎，注入等体积0．7％生理盐水作为对照，观察草鱼机体损伤程度、肠道组织病理，分析不同肠段组织内髓过氧化物酶（MPO）活性及IL-1β、IL-8和TNF-a等炎性相关基因表达量。病理观察结果显示，实验期间实验鱼未出现死亡现象，经TNBS诱导后出现较严重的肠道炎症，肠灌TNBS后1d，草鱼肠粘膜严重充血溃烂，肠道组织中出现大量炎性细胞浸润；3d后出现腹水，损伤部位招募大量炎性细胞，溃疡开始愈合；7d后炎性细胞逐渐减少，出现杯状细胞，呈慢性炎症；14d时腹水减少，肠粘膜中杯状细胞丰富，21d仅有少量炎性细胞，肠道组织基本恢复正常。TNBS诱导后1d，MPO活性极显著升高，3d后明显下降，至第7天趋于正常，与组织病理变化趋势一致。TNBS致炎后第1天，IL-1β、IL-8和TNF-a等炎性相关基因表达量极显著升高，3d时开始下降，3～14d表达量略高于对照组，急性炎症转为轻微的慢性炎症，21d时基本恢复到正常水平。结果还显示，不同肠段间的炎症反应存在差异，第三、四肠段明显较第一、二肠段严重。本研究构建的草鱼TNBS肠炎模型稳定，可作为鱼类肠炎病理机制研究和新型药物筛选的良好工具。

罗格列酮通过抑制肠系膜脂肪组织炎症改善三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠结肠炎

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS诱导的结肠炎小鼠的治疗作用及可能机制。方法选取雄性BALB/c小鼠20只建立TNBS结肠炎模型,造模成功后随机分为罗格列酮处理组及模型组,每组10只。罗格列酮处理组给予罗格列酮灌胃(0. 2 m L,[20 mg/(kg·d)]),模型组给予生理盐水(0. 2 m L/d)灌胃。处理6周后,处死所有小鼠。采用炎症性肠病疾病活动度指数(DAI)及HE染色结合Spencer结肠炎组织学评分评估两组小鼠肠道炎症程度及组织学改变,ELISA检测肠黏膜白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10水平及肠系膜脂肪组织IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平;脂肪组织HE染色后200倍光镜下拍照依据比例尺计算脂肪细胞直径;免疫组织化学染色法检测小鼠肠系膜脂肪组织F4/80阳性巨噬细胞浸润数量、脂肪细胞成熟标志物外周蛋白(peripherin)、脂连蛋白(adiponectin)及瘦素(leptin)水平。Western blot法检测小鼠肠系膜脂肪组织核因子κB(NF-κB)和信号通路中的NF-κBp65、磷酸化的NF-κBp65(p-NF-κBp65)、磷酸化的NF-κB抑制蛋白(p-IκB)及磷酸化的IκB激酶(p-IKK)的蛋白水平。结果罗格列酮处理后第5及6周,小鼠DAI评分显著低于模型组。同时,处理组小鼠肠黏膜IL-1β及TNF-α水平显著低于模型组,而IL-10水平显著高于模型组。与模型组小鼠相比,罗格列酮处理组小鼠肠系膜脂肪细胞直径及脂肪细胞成熟标志物perilipin水平均显著高于模型组。同时,罗格列酮处理组小鼠肠系膜脂肪组织巨噬细胞浸润数量及炎症介质IL-6、MCP-1水平均显著低于模型组。罗格列酮治疗显著促进处理组小鼠肠系膜脂肪细胞adiponectin的表达,而抑制leptin的水平。罗格列酮处理组小鼠肠系膜脂肪组织NF-κBp65、p-NF-κBp65、p-IKK及p-IκB蛋白水平均显著低于模型组。结论罗格列酮可显著抑制TNBS模型小鼠肠道炎症,可能与抑制肠系膜脂肪组织NF-κBp65通路有关。

溃疡性结肠炎大鼠模型不同建立方式比较

目的对比分析溃疡性结肠炎大鼠三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇模型和右旋糖酐硫酸钠(DSS)模型的差异性。方法18只雄性Wistar大鼠随机分为TNBS/乙醇组(TNBS/乙醇建模)、DSS组(DSS建模)、健康对照组(不做处理)各6只。建模后7 d剖杀取材,行疾病活动指数(DAI)评分,对大鼠结肠组织进行损伤评价及结肠组织病理学苏木素-伊红(HE)染色切片,过碘酸雪夫(PAS)染色的观察。结果TNBS/乙醇组和DSS组DAI评分明显高于健康对照组(P<0.01)。而TNBS/乙醇组和DSS组DAI评分差异无统计学意义(P>0.05)、TNBS/乙醇组死亡2只,较DSS组和健康对照组死亡率显著增加(P<0.01)、结肠损伤评价显示TNBS/乙醇组和DSS组均对结肠黏膜造成损伤,TNBS/乙醇组损伤较重、结肠组织病理学观察HE染色显示健康对照组黏膜结构完整,无炎症,杯状细胞丰富,TNBS/乙醇组和DSS组黏膜损伤,炎症浸润,TNBS/乙醇组炎症浸润较深,范围较广、结肠组织病理学观察PAS染色显示健康对照组可见大量染色阳性的含黏液杯状细胞,TNBS/乙醇组和DSS组黏液素较健康对照组明显减少(P<0.05);TNBS/乙醇组和DSS组未见明显差异(P>0.05)。结论TNBS/乙醇和DSS均可建立溃疡性结肠炎模型,且模型在组织病理学和症状特征等方面具有差异性。

己酮可可碱对2,4,6-三硝基苯磺酸肠炎模型的影响

目的 :观察己酮可可碱 (PTX)对 2 ,4 ,6 三硝基苯磺酸 (TNBS)肠炎模型影响。方法 :通过直肠给予雄性BALB/c小鼠TNBS诱导结肠炎 ,应用PTX对其进行治疗 ,6d后收集结肠标本评价结肠炎症程度 ;采用半定量RT PCR检测肠黏膜IL 18mRNA表达 ,采用免疫组织化学染色显示IL 18阳性细胞。结果 :直肠内给予BALB/c小鼠TNBS后可造成小鼠结肠炎性改变 ;PTX治疗可使小鼠疾病活动指数、结肠重量和炎症指数均显著下降 (P <0 .0 5 ) ,结肠IL 18mRNA和肠黏膜固有层表达IL 18细胞数显著下降 (P <0 .0 5 )。结论 :PTX治疗可使TNBS肠炎模型小鼠肠黏膜局部IL 18表达显著下降 ,肠炎得以减轻。

三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导的结肠炎动物模型

目的建立三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导的结肠炎动物模型,探讨炎症性肠病的发病机制。方法SD大鼠168只,雌雄各半,分为:①正常对照组42只,②三硝基苯磺酸/乙醇模型组42只,③免疫复合物组42只,④三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导的结肠炎动物模型组42只(以上每组雌雄各半)。分别于造模后1、2、3、4、6、9、12周末将大鼠处死(每组每周处死6只)。观察各组结肠大体形态和组织学改变,并检测肠黏膜髓过氧化物酶(MPO)活性,大便潜血实验。结果三硝基苯磺酸/乙醇与免疫复合物联合诱导的结肠炎动物模型组大鼠大体形态损伤评分均数为5·8571±0·8431;组织学损伤评分均数为4·8571±0·3542;MPO均数为3·8588±0·8625;OBT积分均数为4·1429±0·6010皆明显高于其余各组,具有统计学意义。结论上述联合诱导的结肠炎动物模型是一种较理想的IBD动物模型,可作为研究IBD发病机制及评估药物疗效的有益工具。

培菲康对实验性溃疡性结肠炎大鼠TNF-α、IL-10水平的影响

目的阐明培菲康对三硝基苯磺酸钠(TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎(UC)TNF-α、IL-10水平的影响,寻求UC治疗的有效新途径。方法成年雌性SD大鼠50只,随机分成5组(n=10):正常对照组(G1)、模型对照组(G2)、培菲康治疗组(G3)、奥沙拉嗪治疗组(G4)、培菲康和奥沙拉嗪联合治疗组(G5),经不同处理和治疗后,通过免疫组化染色观测各组大鼠结肠组织中TNF-α(两步法)、IL-10(S-P法)表达情况,通过实时荧光定量PCR分析结肠组织中TNF-α、IL-10mRNA的表达水平。结果G1组各指标显著低于G2组(P<0.001),肠组织结构正常;与G2组相比,G3、G4、G5组TNF-α、IL-10细胞阳性率和TNF-α、IL-10mRNA的表达水平显著降低(P<0.001);与G3或G4组相比,G5组TNF-α、IL-10细胞阳性率和TNF-α、IL-10mRNA的表达水平也显著降低(P<0.001);G3或G4组之间,TNF-α、IL-10细胞阳性率及TNF-αmRNA水平无差别(P>0.05),而G4组IL-10mRNA水平明显低于G3组(P<0.001)。结论TNF-α、IL-10在溃疡性结肠炎(UC)的发生、发展过程中起重要作用,培菲康能明显降低该过程中肠组织TNF-α、IL-10的表达水平,可能通过调控这两个细胞因子的表达而发挥疗效。

结肠康对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用

目的:探讨结肠康对2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitro picrylsulfonic acid,TNBS)诱导的溃疡性结肠炎的治疗作用。方法:2%TNBS的50%乙醇溶液一次性灌肠建立小鼠溃疡性结肠炎模型,结肠康51.2、25.6、12.8g/kg三个不同剂量灌胃治疗两周,通过观察小鼠体重变化、死亡率、是否有稀便、血便及血便的潜伏期和持续时间以及结肠病理学改变,检测结肠康对TNBS诱导小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。结果:与空白组小鼠相比,模型组小鼠体重增加明显减少、死亡率高、稀便/血便的潜伏期短和持续时间长以及结肠炎性改变;三个剂量结肠康不同程度地使小鼠的体重减轻、死亡率增加、稀便/血便潜伏期缩短和持续时间延长以及结肠的炎性病理改变得到改善。结论:结肠康对小鼠实验性溃疡性结肠炎具有治疗作用。

溃疡性结肠炎模型的构建及其炎症反应机制研究

目的：构建2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS）以及恶唑酮（oxazolone,OXZ）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）模型。方法：120只昆明小鼠（）随机分为4组（n=30）。Ⅰ组、Ⅱ组参照Morris及Walter的方法制备小鼠TNBS模型：Ⅰ组（TNBS溶剂对照组）,50%乙醇0.1 m L灌肠;Ⅱ组（TNBS模型组）,0.6%TNBS溶液0.1 m L灌肠;两组灌肠给药一次后在d 1、d 2、d 3、d 5、d 7每组处死6只。Ⅲ组、Ⅳ组参照Heller方法制备小鼠OXZ模型：Ⅲ组（OXZ溶剂对照组）,皮肤涂抹100%乙醇0.1 m L,每天一次,连续2 d,d 7以50%乙醇0.1 m L灌肠;Ⅳ组（OXZ模型组）,皮肤涂抹1%OXZ溶液（100%乙醇溶解）0.1 m L每天一次,连续2 d（致敏）,d 7以0.5%OXZ（50%乙醇溶解）0.1 m L灌肠;两组灌肠给药一次后在d 1~d 5每天处死6只小鼠。观察Ⅰ~Ⅳ组小鼠疾病活动指数（disease activity index,DAI）、结肠组织大体损伤指数（colon macroscopic damage index,CMDI）和病理组织学评分（histopathological score,HPS）,并检测小鼠结肠组织中髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的水平。结果：两种模型组小鼠DAI,CMDI和HPS均较对照组有明显改变;TNBS和OXZ诱导的结肠炎均可导致MPO明显上升,TNBS结肠炎TNF-α明显上升,OXZ结肠炎IL-4明显下降。结论：TNBS及OXZ均能诱导小鼠溃疡性结肠炎模型。两种模型各有特点,其中TNBS诱导的小鼠溃疡性结肠炎以辅助性T1（helper1,Th1）型炎症反应为主,OXZ诱导的小鼠溃疡性结肠炎以辅助性T2（helper2,Th2）型炎症反应为主。

国债期货交割价格确定机制的改进研究——以中国5年期国债期货为例

采用理论分析和实证检验相结合的研究方法,对比论证基于转换因子系统(CFS)和真实名义债券系统(TNBS)的国债期货交割价格确定机制的优劣。理论分析认为,相对于中国现行的转换因子系统而言,真实名义债券系统具有限制条件少、国债期货收益率明确、套期保值程序简单易行以及形成期货价格的现货基础稳定等优势;实证结果表明,在中国实际收益率环境下,基于真实名义债券系统的交割价格确定机制可降低非最便宜可交割债券的相对交割损失、提高国债期货价格发现效率,并有助于防范逼仓风险。

基于补体C5a在炎症性肠病中的作用研究

目的探索2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导炎症性肠病(IBD)发病机制中补体C5a的作用。方法选择SPF级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只,鼠龄6~8周,体质量180~220 g。随机分为3组,即空白对照组、TNBS IBD组、TNBS+抗C5a单克隆抗体干预组(简称治疗组)。IBD大鼠建模方法采用TNBS联合乙醇诱导灌肠法。治疗组在建模后立即每只腹腔注射抗C5a单克隆抗体1.5 mg干预。利用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测不同时间段大鼠血清中炎性介质C5a和白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平;另给予C5a拮抗剂后,再次检测大鼠血清中IL-6、TNF-α的表达水平。结果C5a、IL-6、TNF-α伴随着炎症的进展而增高,伴随炎症的转归出现下降趋势,即血清中C5a、IL-6、TNF-α的变化趋势与炎症反应程度呈正向相关性;给予C5a拮抗剂后,TNBS IBD组与治疗组相比,IL-6、TNF-α的表达水平有明显下调趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论初步判断抗C5a单克隆抗体可能通过抑制IL-6、TNF-α的表达,有效地降低了IBD炎症反应,提示C5a在IBD发病机制中发挥着重要作用。

采用三硝基苯磺酸法测定乳基婴幼儿配方奶粉中的有效赖氨酸

采用三硝基苯磺酸法建立了乳基婴幼儿配方奶粉中有效赖氨酸的测定方法,研究了乙醚用量、水解时间以及三硝基苯磺酸的孵化时间对水解液吸光度的影响。方法线性范围为0.02～0.12 mg/mL,相关系数r2=0.999 3,检出限为3.72μg/mL,定量限为10.23μg/mL,样品重复性相对标准偏差RSD为1.55%～5.57%,回收率为86%～115%。