TRPV4在眼病理生理功能中的研究进展

瞬时受体电位香草醛受体4(TRPV4)是一种非选择性阳离子通道,负责感知细胞肿胀、温度、机械牵张、剪切应力和渗透压的变化,通过调节跨膜钙信号进而影响基因表达、细胞形态和细胞骨架等构建。TRPV4在全身广泛表达。在眼内,TRPV4在角膜、晶状体、睫状体、小梁网和视网膜等组织均有功能性表达。本文就TRPV4在眼内各个组织中的表达及生理病理功能方面进行阐述。随着TRPV4在眼部病理生理功能中的深入研究,TRPV4在角膜损伤修复、青光眼及视网膜血管生成方面可能成为潜在的新兴药物靶点,但仍需进一步的深入研究。

基于TRPV4介导BDNF/TrkB/CREB信号通路探究畅舟通便方对功能性便秘合并抑郁样行为大鼠的干预机制

目的探究畅舟通便方对功能性便秘(functional constipation,FC)合并抑郁大鼠的干预机制。方法采用盐酸小檗碱法联合慢性不可预知温和刺激建立功能性便秘合并抑郁样行为大鼠模型,随机分为空白组、模型组、乳果糖组及畅舟通便方高、中、低剂量组,干预5周。分别于干预前、干预后计算粪便含水量;干预结束后计算小肠推进率;分别于干预前、干预后采用强迫游泳实验、糖水偏好实验评估大鼠的抑郁样行为水平;HE染色观察结肠黏膜形态;尼氏染色观察海马CA1、DG区锥体细胞形态和数量;Western Blot法检测各组大鼠结肠组织的TRP离子通道香草香素4型(TRPV4)及海马脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体(TrkB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)蛋白相对表达量。结果与空白组比较,模型组大鼠的粪便含水率明显减少(P<0.001),小肠推进率明显降低(P<0.01),糖水偏好指数明显下降(P<0.001),海马CA1区、DG区的锥体细胞数量明显减少(P<0.001),结肠TRPV4以及海马BDNF、TrkB、MAPK、CREB蛋白含量均明显下降(均P<0.001)。与模型组比较,畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组大鼠的粪便含水率均明显增高(P<0.001,P<0.01);畅舟通便方高、低剂量组及乳果糖组的小肠推进率明显增高(P<0.01,P<0.05);畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组的糖水偏好指数明显升高(P<0.01,P<0.05);结肠病理无异常;畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组的海马CA1、DG区锥体细胞数目明显增多(P<0.01,P<0.001);畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组的结肠TRPV4含量明显增加(P<0.001),海马BDNF、TrkB、MAPK、CREB蛋白含量均明显增加(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论畅舟通便方干预后可明显提高功能性便秘合并抑郁模型大鼠结肠的TRPV4含量,增加粪便含水量,促进肠蠕动,可改善便秘;同时TRPV4可激活BDNF/TrkB/MAPK通路,引发下游CREB的增高,从而改善神经可塑性,减轻部分抑郁样行为。

TRPV4在乳腺癌发生发展中作用的研究进展

瞬时受体电位香草素亚型4(TRPV4)是一种非选择性、渗透性阳离子通道,可被各种物理和化学刺激激活从而参与肿瘤的发生发展。TRPV4在乳腺癌的多个生物学过程中起着关键作用,有望成为乳腺癌诊断和治疗的潜在靶点。现将TRPV4在乳腺癌细胞侵袭转移、血管新生及癌细胞死亡等过程中的作用进行综述,以期为乳腺癌的治疗寻找潜在靶点。

β-细辛醚通过抑制TRPV4的表达缓解谷氨酸诱导的Ca^(2+)超载

谷氨酸处理会导致Ca^(2+)超载,瞬时受体电位香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)在其中的作用及可能机制尚不清楚。β-细辛醚能快速透过血脑屏障,对兴奋性毒性具有较强的神经保护作用。文章以高分化的PC12细胞为研究对象,探究β-细辛醚(15、30、60μmol/L)预处理4 h,40 mmol/L谷氨酸处理实时记录对PC12细胞Ca^(2+)浓度的影响,采用钙成像技术检测Ca^(2+)浓度的变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、Western Blot及免疫荧光技术检测TRPV4的mRNA和蛋白的表达;采用Lipofectiamine 2000脂质体实验转染TRPV4-siRNA和pEX-3-TRPV4,观察沉默和过表达TRPV4对谷氨酸引起Ca^(2+)超载的影响。结果表明:与正常对照组相比,谷氨酸处理5 min可诱导Ca^(2+)超载,显著提高TRPV4的mRNA和蛋白的表达;与模型组相比,β-细辛醚能够剂量依赖性地降低谷氨酸诱导的Ca^(2+)超载和TRPV4的表达;沉默TRPV4抑制细胞Ca^(2+)超载;过表达TRPV4则部分逆转β-细辛醚抑制谷氨酸诱导的Ca^(2+)超载。该研究证明,谷氨酸处理PC12细胞5 min通过上调TRPV4的表达诱导Ca^(2+)超载,β-细辛醚作为TRPV4的拮抗剂,是一种潜在的抑制兴奋性毒性的药物。

TRPV4通道抑制剂对大鼠创伤性脑损伤后血脑屏障破坏的保护机制研究

目的:探讨TRPV4通道抑制剂对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)破坏的具体保护机制。方法:制备大鼠TBI模型;应用TRPV4通道抑制剂HC067047或PKC-δ抑制剂Rottlerin检测TBI后BBB通透性、大鼠神经功能评分和脑损伤区域微血管内皮紧密连接蛋白ZO-1和ZO-2表达的变化。结果:与假手术组比较,大鼠TBI后,BBB通透性明显增加,脑神经功能评分降低,同时紧密连接蛋白ZO-1和ZO-2的表达明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与TBI模型组比较,给予HC067047或Rottlerin后,其BBB通透性、神经功能评分、紧密连接蛋白ZO-1和ZO-2的改变均被部分逆转,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:TBI介导的BBB损伤可能通过TRPV4通道调控PKC-δ信号通路进而影响紧密连接蛋白ZO-1和ZO-2的表达实现;抑制TRPV4通道功能或PKC-δ信号分子均能够部分减轻TBI诱导的BBB损伤,本研究可能为临床TBI的治疗提供新思路。

甘草酸通过激活TRPV4诱导线粒体自噬抑制脑胶质瘤细胞的生长

目的:探讨甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)在脑胶质瘤中的作用及机制研究。方法:采用细胞克隆形成实验和CCK-8方法检测GA、TRPV4抑制剂HC-067047对胶质瘤细胞活力的影响;采用Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin和LC3蛋白的表达水平;采用电镜检测线粒体自噬情况;构建人脑胶质瘤小鼠原位模型,使用小动物活体生物发光成像系统监测肿瘤生长情况并分析各组小鼠的生存期,并监测小鼠体重。结果:CCK-8实验结果表明GA显著抑制胶质瘤细胞增殖活力,TRPV4抑制剂HC-067047对细胞增殖活力有促进作用,并且TRPV4抑制剂HC-067047可以逆转GA的抑制作用;Western blot实验结果表明GA可诱导胶质瘤细胞线粒体自噬,促进自噬相关蛋白PINK1、Parkin和LC3蛋白的表达;电镜检测发现GA可以促进胶质瘤细胞中的线粒体自噬,TRPV4抑制剂HC-067047可以逆转GA的促自噬作用;小动物活体生物发光成像结果显示,GA可明显抑制脑胶质瘤的生长,显著延长脑胶质瘤小鼠的生存期。结论:GA可通过激活TRPV4诱导线粒体自噬,进而抑制脑胶质瘤细胞的生长。

TRPV4在眼科疾病中的研究进展

瞬态电位受体香草醛4(TRPV4)是一组存在于细胞膜上的非选择性阳离子通道。它们是调节细胞功能和信号通路的感觉信号的重要介质。TRPV4在眼部各种组织中广泛表达,可参与多种生理功能,包括渗透压调节、Ca^(2+)稳态、凋亡和自噬,在正常生理功能以及不同病理中起重要作用。最近研究发现TRPV4与角膜上皮损伤、青光眼、年龄相关性白内障、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜脱离等疾病紧密联系,调控着相关眼科疾病的发生和发展过程。本文就TRPV4通路在眼科疾病中的研究进展做简要综述,为临床眼病治疗提供思路。

TRPV4在青光眼性视神经病变中的研究进展

青光眼性视神经病变(GON)是青光眼治疗难点所在。近年来,关于GON的发病机制提出了多种学说,但其中任何一种均无法解释所有类型青光眼造成的视神经病变原理,使得该病在临床治疗中顾此失彼,且不利于早期干预。最新研究发现,存在于视网膜中的瞬时受体电位通道香草酸亚家族4(TRPV4)在GON多种发病机制中均占有重要地位。本文将对TRPV4及其在GON发生发展过程中所发挥的作用作一综述,以期为GON的多种机制学说寻找一共同“连接点”,这将有助于对该病的进一步认识和临床治疗。

TRPV4在海人藻酸介导的小鼠癫痫模型中的作用

目的探讨瞬时感受器电位辣椒素受体4型(TRPV4)在小鼠癫痫持续状态(SE)中的作用及其可能的机制。方法本实验利用腹腔注射海人藻酸(KA)建立小鼠SE模型,随机分为Control组、KA组、HC-0670475 mg·kg^(-1)组、HC-06704710 mg·kg^(-1)组、HC-06704720 mg·kg^(-1)组及Vehicle组;依据Racine行为分级法记录小鼠癫痫发作程度,同时记录小鼠达到SE的潜伏期、各组小鼠SE发生率及小鼠存活率;利用Western-blot和Real-Time PCR检测海马组织中TRPV4表达水平;应用ELISA试剂盒检测海马组织中MDA、SOD和GSH含量。结果观察到SE后6 h小鼠海马区TRPV4的表达水平升高(P<0.05),在24 h达到高峰;预先应用TRPV4拮抗剂HC-067047延长了诱发小鼠SE的潜伏期(P<0.05),减少SE的发病率(P<0.05),增加小鼠的存活率(P<0.05);此外,证实了SE可以引起海马区MDA含量增加,SOD、GSH活性降低(<0.05),而HC-067047预处理可以降低MDA含量,增加SOD、GSH活性(P<0.05)。结果TRPV4可能通过增加海马区氧化应激损伤参与小鼠癫痫持续状态。

TRPV4影响软骨细胞退变的初步研究

目的:探讨并验证瞬时受体电位香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)影响软骨细胞的退变。方法:取新生SD大鼠软骨细胞,甲苯胺蓝染色和阿利新蓝染色鉴定;通过白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)构建体外软骨细胞炎症模型,采用TRPV4抑制剂处理炎症条件下软骨细胞,经荧光定量PCR(real-time PCR,PCR)法检测软骨细胞中TRPV4、基质金属肽酶-13(matrix metallopeptidase 13,MMP-13)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(A aisintegrin and metalloproteinase with thrombospondin 5,ADAMTS-5)、一氧化氮合酶2(nitric oxide synthase 2,NOS2)、Ⅱ型胶原α1(collagen,typeⅡ,alpha 1,Col2α1)和软骨蛋白聚糖(aggrecan,Acan)mRNA;通过TRPV4不同浓度过表达质粒处理原代软骨细胞,筛选最佳过表达剂量,并经RT-PCR法检测最佳TRPV4过表达剂量下软骨细胞中TRPV4、MMP-13、ADAMTS-5、NOS2、Col2α1、Acan mRNA表达情况。结果:甲苯胺蓝染色和阿利新蓝染色鉴定提取细胞为原代软骨细胞。RT-PCR显示,经TRPV4抑制剂处理后炎症条件下软骨细胞中TRPV4、MMP-13、ADAMTS-5、NOS2 mRNA的表达明显下降(P<0.05),Col2α1 mRNA、Acan mRNA的表达升高(P<0.05);经0.8 ng·μl-1 TRPV4过表达质粒处理的软骨细胞中Col2α1、Acan mRNA表达情况明显下降(P<0.05),NOS2 mRNA的表达升高(P<0.05),MMP-13、ADAMTS-5mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制TRPV4的表达能下调软骨细胞退变相关基因表达。

TRPV4基因变异引起先天性骨病遗传学分析

目的对4例不同严重程度的先天性骨病患儿进行基因诊断以明确其遗传学病因。总结临床特点并进行基因型-表型分析。方法收集4例患儿的临床资料,采集患儿及父母外周血并提取DNA,患儿行全外显子组测序,根据ACMG遗传变异分类标准与指南判断变异位点致病性,对患儿及父母进行Sanger测序验证。结果4例患儿均携带TRPV4基因杂合变异,其中2个错义变异遗传自患病父母,1个缺失插入变异和1个错义变异为新生变异,分别为c.2077 G>A(p.Val 693 Met),c.1199 G>A(p.Arg 400 Gln),c.1657 delinsACTA(p.Tyr 553 delinsThrAsn),和c.259 G>A(p.Glu 87 Lys),以上位点国内外未见报道。1-3号患儿有不同程度的身材矮小,4例患儿均有先天性脊柱侧弯及其他骨骼系统异常。分别诊断为轻型变形性骨发育不良、3型常染色体显性短躯干、变形性骨发育不良合并类扭伤型侏儒及经典型变形性骨发育不良。携带相同变异的患儿父亲/母亲有轻度的骨骼畸形。结论TRPV4基因不同位点变异引起的先天性骨病表型互有重叠但严重程度差异较大,可根据分子诊断结果进行鉴别诊断及临床干预。

TRPV4抑制剂HC067047对小鼠膝骨关节炎软骨组织的影响

目的探讨瞬时受体电位香草素受体4型通道蛋白(TRPV4)抑制剂HC067047对小鼠膝骨关节炎软骨组织的影响。方法将30只小鼠均分为假手术组、模型组、HC067047组。假手术组仅切开右侧膝关节髌韧带内侧皮肤,不予处理膝关节囊内结构;模型组、HC067047组手术切除小鼠板股韧带及内侧半月板前角以构建膝骨关节炎,分别用生理盐水、HC067047每天10 mg/kg灌胃。qRT-PCR检测各组小鼠软骨组织中TRPV4 mRNA表达水平。番红固绿染色评估关节软骨受损程度,HE染色分析膝关节软骨下骨的骨量变化。Western blotting检测各组软骨组织中细胞焦亡标志蛋白TRPV4、Caspase-1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、GSDMD-N蛋白水平;ELISA、Western blotting分别检测血清、软骨组织中炎症因子水平。结果与假手术组比较,模型组TRPV4、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β、IL-18水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,HC067047组NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β、IL-18水平显著降低(P<0.05)。HC067047能明显改善关节软骨形态及降低骨关节炎受损程度,并能维持软骨下骨的骨量。结论TRPV4抑制剂HC067047能抑制软骨组织细胞焦亡,改善膝骨关节炎小鼠关节软骨的退变。

甲泼尼龙对呼吸机相关性肺损伤大鼠肺组织TRPV4/MMP-2/MMP-9信号通路的影响

目的评价甲泼尼龙对呼吸机相关性肺损伤(VILI)大鼠肺组织瞬时受体电位香草酸4 (TRPV4)/基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/MMP-9)信号通路的影响。方法清洁级雄性SD大鼠100只,采用随机数字表法分为5组(n=20):对照组(C组)、机械通气组(V组)、甲泼尼龙组(Mp组)、甲泼尼龙+GSK1016790A组(MpG组)、HC-067047组(H组)。C组不行机械通气,自主呼吸空气4 h;V组机械通气(RR 40次/min,VT 40 m L/kg,I∶E 1∶1,PEEP 0,Fi O221%) 4 h;Mp组在机械通气前20 min静脉输注甲泼尼龙10.0 mg/kg;MpG组在给予甲泼尼龙前20 min静脉输注GSK1016790A 0.025 mg/kg;H组机械通气前30 min静脉输注HC-067047 10.0 mg/kg。机械通气4 h时,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、总蛋白浓度,测定肺通透指数(LPI)、肺湿/干质量比(W/D),观察肺组织病理学结果。Western blot法检测肺组织TRPV4、MMP-2、MMP-9的表达水平。结果与C组比较,V组和MpG组BALF中IL-1(ng/m L:84.56±5.35 vs. 144.85±9.39、121.56±7.69)、TNF-α(ng/m L:179.65±45.73 vs. 486.18±94.79、316.93±69.71)、总蛋白(mg/m L:321.29±28.76 vs. 687.78±65.78、476.39±46.67)升高,肺组织LPI [(2.47±0.17)×10^(-3)vs.(6.19±0.29)×10^(-3)、(4.24±0.25)×10^(-3)]、W/D比值(4.42±0.19 vs. 8.83±0.61、6.32±0.41)升高,TRPV4(1.85±0.25 vs.5.81±0.92、3.87±0.65)、MMP-2 (0.44±0.06 vs. 1.16±0.23、0.85±0.11)、MMP-9(0.19±0.03 vs. 0.46±0.09、0.34±0.07)表达上调(P<0.05);与V组比较,Mp组、MpG组和H组BALF中IL-1(ng/m L:144.85±9.39 vs. 89.78±5.91、121.56±7.69、94.23±6.78)、TNF-α(ng/m L:486.18±94.79 vs. 186.42±49.37、316.93±69.71、193.71±51.41)、总蛋白(mg/m L:687.78±65.78 vs. 348.78±31.52、476.39±46.67、359.68±36.12)降低,肺组织LPI [(6.19±0.29)×10^(-3)vs.(2.85±0.14)×10^(-3)、(4.24±0.25)×10^(-3)、(2.97±0.21)×10^(-3)]、W/D比值(8.83±0.61 vs. 4.75±0.22、6.32±0.41、4.82±0.25)降低,TRPV4(5.81±0.92 vs. 2.13±0.29、3.87±0.65、2.35±0.37)、MMP-2 (1.16±0.23 vs. 0.48±0.08、0.85±0.11、0.52±0.08)、MMP-9(0.46±0.09 vs. 0.22±0.04、0.34±0.07、0.25±0.05)表达下调(P<0.05),肺组织病理损伤减轻;与Mp组比较,MpG组BALF中IL-1 (ng/m L:89.78±5.91 vs. 121.56±7.69)、TNF-α(ng/m L:186.42±49.37 vs. 316.93±69.71)、总蛋白(mg/m L:348.78±31.52 vs. 476.39±46.67)升高,肺组织LPI [(2.85±0.14)×10^(-3)vs.(4.24±0.25)×10^(-3)]、W/D比值(4.75±0.22 vs. 6.32±0.41)升高,TRPV4(2.13±0.29 vs. 3.87±0.65)、MMP-2(0.48±0.08 vs. 0.85±0.11)、MMP-9(0.22±0.04 vs. 0.34±0.07)表达上调(P<0.05)。结论甲泼尼龙可减轻大鼠VILI,与其抑制TRPV4/MMP-2/MMP-9信号通路有关。

大鼠背根神经节持续受压后脊髓背角TRPV4蛋白表达及分布的变化

目的:探讨大鼠背根神经节持续受压(chronic compression of the dorsal root ganglion,CCD)后瞬时感受器电位离子通道香草素亚族受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)在脊髓背角中的蛋白表达及分布规律。方法:选取清洁级雄性Wistar大鼠30只,按随机数字表法分组:空白对照组5只,手术组25只(术后4天、7天、14天、28天各5只;免疫荧光组5只)。制备大鼠背根神经节持续受压模型,于术后4天,7天,14天及28天,测量机械刺激缩爪反应痛阈,观察机械痛阈的变化;利用western blot技术检测空白对照组及术后4天,7天,14天及28天,手术侧及对侧脊髓背角TRPV4蛋白表达的变化;利用免疫荧光技术检测术后4天,手术侧与对侧脊髓背角TRPV4阳性细胞分布。结果:大鼠背根神经节持续受压后4—14天,机械痛阈值明显下降(P<0.001);术后4—7天,手术侧脊髓背角TRPV4表达升高(P<0.01),对侧无明显变化;手术侧脊髓背角内TRPV4阳性细胞数目高于对侧(P=0.0008)。结论:大鼠背根神经节持续受压后,机械痛阈下降的同时,手术侧脊髓背角内TRPV4蛋白表达上调及阳性数目增多,TRPV4可能参与CCD后病理性神经痛的中枢敏化机制。

杜鹃花总黄酮对缺血/再灌注损伤模型大鼠脑基底动脉TRPV4的作用研究

目的探讨杜鹃花总黄酮(TFR)对缺血/再灌注损伤模型大鼠脑基底动脉(CBA)瞬时感受器电位通道香草酸受体亚型Ⅳ(TRPV4)的作用。方法以改良四血管阻断法(4-VO)建立大鼠缺血/再灌注模型(IR);运用加压灌注法和细胞膜电位记录法,离体观察TFR对KCl预收缩IR大鼠CBA的舒张作用和超极化反应及TRPV4阻断剂钌红(RR)对其的影响;采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法,在体观察TFR对IR大鼠脑血管内皮细胞TRPV4 mRNA和蛋白表达以及RR对其的影响。结果递增浓度的TFR可诱导IR大鼠离体CBA产生明显剂量依赖性的舒张效应和超极化反应。去除血管内皮细胞后,TFR仍能介导CBA产生较弱的舒张作用和超极化反应,与血管内皮完整组比较,差异有显著性(P<0.01);去除一氧化氮(NO)和前列环素(PGI2)舒张作用后,TFR仍能诱导IR大鼠CBA产生明显的舒张效应和超极化作用,此作用可被TRPV4通道阻断剂RR抑制;TFR可明显上调IR大鼠脑血管TRPV4 mRNA和蛋白表达,而阻断TRPV4可明显抑制TFR上调的TRPV4基因表达。结论 TFR能介导IR大鼠CBA产生较强的内皮依赖性和较弱的内皮非依赖性血管舒张反应和超极化作用,其内皮依赖性效应推测可能与TFR促使脑血管内皮激活,促进内皮细胞生成和释放内皮衍生性超极化因子(EDHF)增多,继而激活TRPV4,引发Ca^(2+)内流,导致血管平滑肌细胞膜超极化,产生血管舒张效应有关。

TRPV4通道在膝骨关节炎软骨细胞中的功能表达

目的基于瞬时感受器电位离子通道家族(TRP)香草素受体亚家族成员Ⅳ型(TRPV4)的特点,探讨其在人类软骨细胞中的功能性表达,以及对于膝骨关节炎(KOA)的意义。方法人类KOA软骨细胞原代培养。分别用浓度为0、1、10和100 ng/ml,以及浓度为1和10μg/ml的脂多糖(LPS)全培孵育24 h,或用浓度为1μg/ml的LPS全培分别孵育0、4、8、12、24和48 h,qRT-PCR检测软骨细胞TRPV4的基因表达。软骨细胞分为空白组、LPS组、LPS+TRPV4抑制剂组,行实时荧光钙成像观察各组钙离子内流情况,并提取培养上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-3及MMP-13水平。结果浓度为1、10、100 ng/ml和1μg/ml的LPS均能增加人类软骨细胞TRPV4通道的基因表达(P <0.05);实时荧光钙成像分别观察20、40和60 s的荧光强度发现:LPS组荧光强度较空白组增加(P <0.05),LPS+TRPV4抑制剂组荧光强度较LPS组降低(P <0.05);此外,LPS组的MMP-1、MMP-3及MMP-13水平高于空白组(P <0.05),而LPS+TRPV4抑制剂组低于LPS组(P <0.05)。结论在KOA的炎症环境下,TRPV4不仅存在表达量升高,还存在功能表达增强。TRPV4通道可能通过影响MMP-1、MMP-3及MMP-13的表达水平参与KOA软骨降解的过程。

在LPS致大鼠发热过程中下丘脑TRPV4对体温及cAMP含量、[Ca^(2+)]i浓度的影响

目的探讨TRPV4在发热时是否参与体温调节过程。方法用脂多糖复制大鼠发热模型,结合应用钌红抑制TR-PV4的活性,观察发热时的下丘脑组织中TRPV4含量、钙离子浓度变化与cAMP含量的关系。结果单独给予钌红组体温降低;钌红+LPS组与LPS组相比,△T、cAMP与[Ca2+]i增高幅度均降低;钌红组与钌红+LPS组TRPV4表达明显低于对照组。结论①TRPV4通道可能参与正常体温的维持;②通过激活TRPV4通道,使钙离子内流增多,进而中枢发热介质cAMP表达增多,这可能是LPS致大鼠发热的重要途径。

附子、黄连寒热药性对体外足细胞增殖及TRPV4、TRPC6蛋白表达的影响

目的研究附子、黄连寒热药性对体外足细胞增殖及TRPV4、TRPC6蛋白表达的影响。方法 MTT法检测足细胞增殖,实验分为:空白对照组、附子组和黄连组。附子组和黄连组加入不同浓度药液进行干预,并测定吸光值(A),计算细胞抑制率。检测TRPV4、TRPC6蛋白试验中,实验分为:空白对照组、附子组和黄连组,其中附子组给予200μg/ml药液、黄连组给予800μg/ml药液,再加入含RPMI 1640培养基培养足细胞24 h。用Western blot法检测附子、黄连对TRPV4、TRPC6蛋白表达影响。结果 MTT的研究表明,黄连组中50,100,200,400,800μg/ml药液均可抑制足细胞生长增殖,且与浓度成正相关。附子在相对较低的质量浓度范围内(<200μg/ml),促进足细胞生长增殖,超过一定实验浓度时(>200μg/ml),抑制足细胞生长增殖。实验表明附子和黄连均可以上调TRPV4蛋白表达,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而在TRPC6蛋白表达中,附子和黄连具有明显的下调TRPC6蛋白表达的作用,与空白对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论附子、黄连这两种不同药性的中药均可以影响与肾脏病相关的蛋白TRPV4、TRPC6表达。

不同药性祛风通络方干预下UUO大鼠肾小管上皮细胞TRPV4变化规律研究

目的:通过观察祛风通络方及寒热加味方对UUO模型大鼠肾组织TRPV4表达及功能状态的影响,探索不同药性祛风通络方对TRPV4的调节作用及其对肾间质纤维化的防治机理。方法:挑选SD雄性成年大鼠80只,随机分为空白对照组和模型组,单侧输尿管结扎法建立UUO模型,分为模型对照组、温热大剂量组、温热小剂量组、寒凉大剂量组、寒凉小剂量组、祛风大剂量组、祛风小剂量组,进行药物干预。术后第21天将大鼠全部处死,取术侧肾脏组织,一半用作病理学染色,一半用于分子生物学检测。RT-PCR和Western法检测肾脏组织TRPV4、α-SMA、vimentin mRNA含量变化及蛋白表达情况。结果:(1)造模成功后21 d,模型组及干预组大鼠术侧肾脏体积较对侧增大,剖面肾实质不同程度萎缩,肾盂扩张呈囊状,模型组最为明显。(2)干预各组病理情况均不同程度改善,其中温热小剂量组改善最为明显。(3)温热大剂量组TRPV4 mRNA含量明显增加(P <0. 01),其余各组均表现不同程度下降。(4)治疗各组α-SMA mRNA含量均表现不同程度下降(P <0. 05),以温热小剂量组下降最为显著(P <0. 01),各组Vimentin的表达表现出与α-SMA同样的变化趋势。结论:(1) TRPV4可能通过基因或蛋白水平的上调(下调)感受药性之寒热。(2)祛风通络方及加味方可能延缓肾间质纤维化的进展,且温热小剂量治疗效果最好。

TRPV4在小鼠脑血管内皮细胞中的表达及对血管张力调节作用研究

目的比较瞬时受体电位(TRP)通道家族中香草素受体亚家族(TRPV)和经典瞬时感受器电位亚家族(TRPC)在小鼠脑、心和肝微血管内皮细胞表达差异,寻找脑微血管中具有特异性高表达亚型,阐明其对脑动脉血管舒张的调节作用。方法挖掘GEO数据库中芯片表达谱数据,分析各个通道亚型差异表达情况,再采用免疫组化检测TRPV4、TRPP2和TRPC1在脑基底动脉中表达情况,血管张力实验检测TRPV4通道在调节小鼠脑基底动脉舒张中的效应。结果通过分析表达谱数据显示,在小鼠脑、心和肝三种微血管内皮中,TRPV4通道在脑微血管内皮细胞显著高表达,而TRPC3通道显著低表达。TRPV4、TRPP2和TRPC1在脑基底动脉内皮和平滑肌层也显著表达。TRPV4通道激动剂GSK1016790A能浓度依赖地舒张苯肾上腺素引起的脑基底动脉收缩,而且其舒张效应可以被TRPV4通道阻断剂HC067047所阻断。结论与心和肝血管内皮细胞相比,TRPV4通道在小鼠脑血管内皮细胞中显著高表达,可能在调节脑血管内皮功能中具有重要意义。