UHPLC-MS/MS法测定耕地周围地表水中5种除草剂含量

实验研究建立了超高压液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定耕地周围地表水中2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼除草剂含量的分析方法。随机采集耕地周围地表水样品,预处理后,取上述水样500 mL,调节酸度为中性,取HLB固相萃取柱,活化完毕后,设定程序,将上述水样以12 mL·min^(-1)的流量过柱,最后用16 mL甲醇洗脱,收集洗脱液;洗脱液于氮吹至近干,加甲醇1 mL定容,涡旋混匀,质谱分析采用多反应监测模式,定性、定量检测。2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼质量浓度在0.004~4.0μg·mL^(-1)范围内呈良好的线性关系,检测限分别为0.21μg·L^(-1)、0.23μg·L^(-1)、0.14μg·L^(-1)、0.25μg·L^(-1)、0.15μg·L^(-1);三水平回收率范围在85.4%~96.6%;2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼重复性RSD分别为3.4%,4.0%,3.2%,2.9%,3.6%,方法重复性良好。实验结果表明,此方法具有快速、准确等特点,方法可以用于耕地周围地表水中2,4-二氯苯氧乙酸、灭草松、草铵膦、α-萘乙酸、马来酰肼等除草剂的监测。

基于UHPLC-MS技术的NSCLC血浆生物学标志物的筛选及鉴定研究

目的研究UHPLC-MS技术的NSCLC血浆生物学标志物的筛选及鉴定。方法本研究纳入符合非小细胞肺癌临床诊断标准的60例NSCLC患者,随机分为两组,接受靶向治疗(TACE)的非小细胞肺癌患者为鉴别诊断组,未接受靶向治疗的NSCLC患者为正常对照组。结果在60例NSCLC患者中,通过LC-MS/MS技术共检测到552个生物标志物。在其中17个生物标志物中,有8个出现在已知的EGFR突变患者中,另7个出现在ALK融合患者中,6个出现在HER2突变患者中。此外,NSCLC患者血浆中含有丰富的非编码RNA(miRNA),包括58个miRNA和23个mRNA。结论本研究中,采用LC-MS/MS技术对NSCLC患者血浆进行分析,可快速、高效地获得血浆样品中的生物学标志物。这些标志物可以作为NSCLC诊断的潜在生物学标志物,并且可以用于预测肿瘤进展和不良预后。

UHPLC-MS/MS同时测定清感童饮中6种有效成分在大鼠体内血药浓度及药代动力学研究

[目的]本实验旨在研究清感童饮活性成分在大鼠血浆中的药代动力学特征。[方法]实验建立大鼠血浆中甘草次酸、木犀草素、芹菜素、芍药苷、连翘酯苷A、连翘苷等6种活性成分的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法,考察大鼠灌胃给药清感童饮后,6种成分在大鼠体内的药代动力学特征。采用WELCN Ultimate XB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm)分离;流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B);梯度洗脱;进样量3μL;流速为0.2 mL/min;柱温40℃;在多反应监测模式(MRM)下正、负离子同时测定。[结果]结果显示,大鼠血浆样品中各成分的线性关系均良好(r>0.99),其日内、日间精密度、准确度、稳定性、基质效应以及提取回收率均符合生物样品的分析要求。药动学参数结果显示,各成分的t_(1/2z)为1.18~34.12 h,T_(max)为0.44~19.33 h,C_(max)为9.00~318.09μg/L,AUC_(0~t)为12.40~15 969.32 h·μg/L,MRT_(0~t)为2.23~23.19 h。[结论]本实验所建立的检测方法快速、准确、重复性好,可适用于清感童饮中甘草次酸、木犀草素、芹菜素、芍药苷、连翘酯苷A、连翘苷在大鼠血浆中的药动学研究。

UHPLC-MS/MS测定人血浆中的阿普斯特浓度及生物等效性研究

目的采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法,建立快速、简单、灵敏的测定人血浆中阿普斯特浓度的方法并用于阿普斯特人体生物等效性试验研究。方法采用蛋白沉淀法处理,以阿普斯特-d5作为内标,色谱柱为Phenomenex Kinetex C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,2.6μm),流动相为0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈,流速0.45 mL·min^(-1)梯度洗脱,采用电喷雾(ESI)离子源以正离子方式进行MRM检测,用时3 min。结果阿普斯特在2~600 ng·mL^(-1)(r^(2)=0.9977)范围内线性关系良好,准确度和精密度均小于15%。空腹和餐后条件下阿普斯特片受试制剂AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)和C_(max)的90%CI为参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。结论受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

UHPLC-MS/MS测定化妆品中67种植物提取物标识成分

建立了超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)测定化妆品中67种植物提取物标识成分的方法。化妆品样品经甲醇(含1%甲酸)超声提取,样液在0.1%甲酸溶液-乙腈流动相体系下经Agilent RRHD Eclipse Plus Zorbax C18(3.0 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱梯度洗脱分离。采用电喷雾正、负离子模式分别对67种成分进行定性定量分析,其中正离子采用多反应监测(MRM)方式,负离子采用动态多反应监测(DMRM)方式,以基质匹配外标法定量。以膏霜、乳液基质为代表,67种成分在各自质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))均大于0.99;检出限为0.0026~1.7μg/g,定量下限为0.0080~5.0μg/g;3个不同加标水平下,膏霜、乳液基质的平均回收率分别为85.6%~117%和82.7%~116%,相对标准偏差(RSD,n=6)分别为1.0%~12%和0.90%~12%。该法简单快速,灵敏度高,适用于化妆品中67种植物提取物标识成分的定性鉴定和含量测定。

UHPLC-MS/MS法测定面膜化妆品中甘草、人参和黄芩类功效成分

建立了超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UHPLC-MS/MS)测定面膜化妆品中甘草功效成分(甘草苷、甘草酸)、人参功效成分(人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re)和黄芩功效成分(黄芩苷)的方法,并用该方法对市售20批面膜样品进行风险监测。样品采用0.1%甲酸甲醇超声提取法,以0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱分离,以UHPLC-MS/MS负离子模式检测。同时对样品前处理条件及色谱-质谱条件进行优化,并对方法学进行验证。结果表明:甘草苷、黄芩苷在0.25~100 ng/mL及人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re和甘草酸在0.50~200 ng/mL质量浓度范围内呈良好线性关系,相关系数大于0.998;检出限为0.41~6.4μg/kg(S/N=3);基质中加标回收率为95.9%~109.1%,相对标准偏差小于4.9%(n=6)。该方法适用于面膜化妆品中甘草、人参和黄芩功效成分的测定。

UHPLC-MS/MS法检测化妆品中禁用原料非那西丁

建立了灵敏检测化妆品中禁用原料非那西丁的超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UHPLC-MS/MS)法。针对染发剂、烫发剂、膏霜、乳液和液态水基样品,用饱和氯化钠分散,乙腈作为提取溶剂进行超声辅助液液萃取。采用Poroshell 120 EC-C_(18)(100 mm×2.1 mm×2.7μm)色谱柱,水和乙腈分别作为流动相。串联质谱检测器采用ESI源,在多反应监测(MRM)模式下进行检测,并进行了方法评价。该方法线性关系良好,在5种基质中的检出限为0.002~0.006 mg/kg,定量限为0.006~0.02 mg/kg,加标回收率为93.7%~113.7%,相对标准偏差(RSD)为1.0%~5.6%。对60批化妆品进行检测,其中3批染发剂样品和1批烫发剂样品中检出非那西丁。该方法操作简便、灵敏度高,适用于化妆品中禁用原料非那西丁的准确检测。

UHPLC-MS/MS法测定盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔

目的建立盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法。方法Waters ACQUITY UPLC CSH TM C 18色谱柱(3.0 mm×150 mm,1.7μm),10 mmol·L^(-1)甲酸铵的水溶液(含0.1%甲酸)作为流动相A,乙腈溶液(含0.1%甲酸)作为流动相B,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^(-1),柱温为50℃,进样器温度为5℃,进样体积为10μL,采用多反应监测(MRM)模式,对盐酸普萘洛尔缓释片中的N-亚硝基普萘洛尔进行定量检测。结果N-亚硝基普萘洛尔在1~20 ng·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系。低、中、高3个浓度的加样回收率(n=3)在98.4%~103.2%之间,RSD≤2.7%。检测限和定量限分别为0.09 ng·mL^(-1)和0.3 ng·mL^(-1)。检出盐酸普萘洛尔缓释片中基因毒性杂质N-亚硝基普萘洛尔含量为1.8μg·g^(-1)。结论该方法灵敏度高、专属性强,可用于测定盐酸普萘洛尔缓释片中的N-亚硝基普萘洛尔,为盐酸普萘洛尔缓释片的质量控制提供参考。

UHPLC-MS/MS法同时测定三七中16个皂苷类成分在大鼠体内的含量及药代动力学研究

目的:建立UHPLC-MS/MS法同时测定三七中16个皂苷类成分(人参皂苷Rf、Rg_(1)、Rg_(2)、Re、Rd、Rb_(1)、Rb_(2)、Rb_(3)、Rc、Fa、Rk_(1)、Rg_(5)、Rg_(3)、F_(2)及三七皂苷R_(1)、Fc)在大鼠血浆中的含量,并探讨其药代动力学特征。方法:血浆样品经甲醇-乙腈(4∶1)沉淀蛋白处理后,采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱;以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱;采用电喷雾离子源(ESI);以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测,利用DAS 3.0软件计算药动学参数。结果:16个皂苷类成分在相应的浓度范围内与峰面积的线性关系良好(r>0.9900);日内、日间精密度的RSD为0.88%~14.41%,准确度为89.60%~114.00%;提取回收率为84.67%~111.87%,基质效应为77.04%~117.64%。结论:该研究建立的UHPLC-MS/MS分析方法准确、灵敏,可用于三七中16个皂苷类成分在大鼠体内的含量测定及药代动力学研究。

UHPLC-MS/MS法测定盐酸二甲双胍制剂中2种亚硝胺类基因毒性杂质

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定盐酸二甲双胍制剂中2种基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺(N-nitrosodimethylaminen,NDMA)和N-亚硝基二乙胺(N-nitrosodiethylamine,NDEA)的含量的方法。方法采用多反应监测(MRM)模式检测,离子源为APCI(+),色谱柱为ACE Excel 3 C_(18)-AR柱(100 mm×4.6 mm,3μm),以体积分数0.1%甲酸水溶液(A)-质量分数0.1%甲酸甲醇溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速0.5 mL·min^(-1),进样体积5μL。结果NDMA和NDEA的线性范围分别为0.99~99μg·L^(-1)(r>0.9999)和0.53~53μg·L^(-1)(r>0.9999),平均回收率为90.9%~98.9%,定量限分别为0.99和0.53μg·L^(-1),检测限分别为0.3和0.2μg·L^(-1)。用建立的方法测定不同剂型的6批样品,2批次检出NDMA,含量分别为9.5 ng·g^(-1)和86 ng·g^(-1),均未检出NDEA。结论本方法经方法验证可用于盐酸二甲双胍制剂中NDMA和NDEA的含量测定。

UHPLC-MS/MS法同时测定枳实薤白桂枝汤中10种成分

[目的]建立超高效液相色谱-质谱联用(UHPLC-MS/MS)方法同时测定枳实薤白桂枝汤中槲皮素、芹菜素、原儿茶酸、木犀草素、紫丁香苷、阿魏酸、柚皮苷、厚朴酚、橙皮苷、新橙皮苷的含量。[方法]采用Welchultimate XB-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,进样量为3μL,流速为0.2 mL/min,柱温40℃。采用电喷雾离子源(ESI),正负离子切换模式,多反应检测(MRM)模式。[结果]枳实薤白桂枝汤颗粒中10种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.995),精密度、稳定性及重复性实验的相对标准偏差(RSD)均小于2.86%,加样回收率均在97.68%~101.66%。[结论]该方法简便快捷、结果准确可靠,可用于枳实薤白桂枝汤颗粒的质量控制。

UHPLC-MS/MS和GC-MS/MS测定甜菜中523种农药及代谢物的残留量

建立同时检测甜菜中523种农药及代谢物的QuEChERS提取结合超高效液相色谱串联质谱法和气相色谱串联质谱分析方法。采用QuEChERS前处理方法提取,MgSO4和乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶(PSA)净化,采用UHPLC-MS/MS和GC-MS/MS检测。PSA的用量会影响40种农药的回收率,用量为0或5 mg·mL^(-1)时,回收率在60%~120%之间。523种农药在2~200μg·kg^(-1)添加浓度水平回收率在65.1%~116.4%之间,RSD值小于24.1%。方法定量为2μg·kg^(-1)或5μg·kg^(-1),线性相关系数均大于0.99,采用基质标准曲线定量分析。针对142种农药适用于两种仪器的检测结果无明显差异。实际样品检测出的农药残留物浓度均低于我国规定相应的最大残留限量,但根据欧盟标准的规定,部分样品中毒死蜱、溴氰菊酯和氰戊菊酯存在超标现象。该方法样品前处理简单快速,方法的准确度、精密度和灵敏度均满足农药残留在农作物中检测分析要求,适用于523种农药及代谢物在甜菜中的多残留检测。

UHPLC-MS/MS法同时测定壮骨关节胶囊中19种成分

目的 建立UHPLC-MS/MS法同时测定壮骨关节胶囊中毛蕊花糖苷、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、柚皮苷、川续断皂苷Ⅵ、槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、补骨脂甲素、补骨脂乙素、新补骨脂异黄酮、刺芒柄花素、二氢欧山芹醇当归酸酯、蛇床子素的含量。方法 该药物甲醇提取液的分析采用Hypersil GOLD Selectivity C18色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.9μm);流动相0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。结果 19种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.990),平均加样回收率98.55%~102.01%,RSD 0.98%~2.89%。结论 该方法简便、灵敏、稳定,可用于壮骨关节胶囊的质量控制。

超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定松茸中麦角甾醇含量

以松茸为试材,使用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法(ultrahigh-performance LC and tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS)快速测定麦角甾醇含量,为松茸中麦角甾醇的进一步研究提供技术支持。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱分离,甲醇等度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温30℃,进样量5μL,串联质谱为大气压化学电离(APCI)源正离子模式、选择反应监测(SRM)模式。结果表明,麦角甾醇在50~1000 ng·mL-1线性关系良好,相关系数大于0.999;平均回收率为92.1%、90.1%、98.5%,相对标准偏差为2.49%、1.57%、1.99%。该方法具有检测时间短、灵敏性高的优点,可以满足松茸中麦角甾醇的批量检测。

基于UHPLC-MS技术的枇杷叶次生代谢物周年变化研究

【目的】探明枇杷叶次生代谢物在生长过程中的变化规律,为枇杷叶的有效利用提供理论依据。【方法】以枇杷夏梢为试验材料,从新叶停止伸长生长(7月4日)开始,每3个月采样1次,以甲醇作为提取溶剂,采用超高效液相色谱-质谱法(UHPLC-MS),测定枇杷叶中的酚酸类、有机酸类、单宁类、黄酮类、萜类、生物碱类、香豆素类等次生代谢成分,分析其在不同时期的变化规律。【结果】在枇杷叶甲醇提取物中共分离鉴定出8类71种化合物,包括酚酸类8种,有机酸类5种,单宁类3种,黄酮类28种,萜类18种,生物碱类2种,香豆素类3种,其他类4种。酚酸类主要成分为绿原酸和新绿原酸,黄酮类主要成分为儿茶素和2″-O-对香豆酰基牡荆素,萜类主要成分为积雪草酸、山楂酸和皂皮酸。在枇杷夏梢周年生长中,各类次生代谢物质的化合物数量和总含量呈现出规律变化:从化合物数量看,除单宁类、生物碱类和其他类次生代谢物数量基本不变外,其余5类次生代谢物的化合物数量均呈增加趋势,而且化合物数量增加都在生长初期的6个月内完成;从每类物质总含量看,萜类和其他类物质含量呈逐渐上升趋势,酚酸、黄酮和香豆素3类物质含量呈先上升后下降趋势,单宁类物质含量变化不大,有机酸类与生物碱类物质含量总体呈下降趋势。【结论】以萜类为利用目标原料时,应在枇杷叶老熟并即将掉落时采集;而以酚酸、黄酮类物质为利用目标原料时,应在1月份采集。

UHPLC-MS/MS法测定瑞戈非尼中两种痕量基因毒性杂质

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)方法测定瑞戈非尼中两类基因毒性杂质[3-氟-4-氨基苯酚(SM2)、3-三氟甲基-4-氯异氰酸苯酯(SM3)]的含量。方法采用色谱柱Agilent RRHD C 18(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为0.05%甲酸水-甲醇,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为35℃;采用Agilent 1290-6470A液质联用仪和电喷雾离子源(AJS ESI)源检测,正负离子模式采集数据。结果本方法的专属性、线性与范围、定量限与检测限、准确度、精密度及稳定性均符合《中国药典》的验证指标。结论本方法操作简便,结果可靠,用于两批瑞戈非尼中潜在毒性杂质(3-氟-4-氨基苯酚、3-三氟甲基-4-氯异氰酸苯酯)的测定。两批样品中均未检测到SM2,而基因毒性杂质SM3的含量分别为13.6×10^(-6)和41.4×10^(-6)。

基于UHPLC-MS/MS技术研究蒺藜炒制前后7个甾体皂苷在大鼠体内的组织分布

目的:考察生、炒蒺藜提取物中polianthoside D、蒺藜皂苷K、tribuluside A、terrestrinin D、蒺藜呋甾皂苷B、蒺藜皂苷D和海柯皂苷元在大鼠体内的组织分布情况,探讨蒺藜的炒制原理。方法:分别灌胃给予SD大鼠生、炒蒺藜提取物,采用UHPLC-MS/MS法同时测定大鼠组织(心、肝、脾、肺、肾、脑、肠)中7个甾体皂苷的含量,研究炒制对蒺藜中7个成分在大鼠体内组织分布的影响。结果:建立的方法专属性、精密度、准确度、提取回收率、基质效应和稳定性等均符合生物样品分析要求;各组织样本在检测浓度范围内线性关系良好;蒺藜炒制前后7个甾体皂苷主要分布的组织、组织分布的最高浓度及最高浓度出现的时间点等存在一定差异。结论:炒制对蒺藜甾体皂苷类成分在大鼠体内的组织分布具有较大影响,该研究结果为阐明蒺藜炮制原理奠定了基础。

IC-MS和UHPLC-MS/MS方法测定地表水中丁基黄原酸和苦味酸

建立了直接进样离子色谱-质谱(IC-MS)和超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)测定地表水中丁基黄原酸和苦味酸的方法,2种方法简便易行,且灵敏度高。比较了2种方法测定丁基黄原酸和苦味酸的检出限、准确度和精密度,并用这2种方法同时分析了22份实际水样品中丁基黄原酸和苦味酸的质量浓度,结果均未检出。2种方法均能满足检测的要求,通过试验结果发现UHPLC-MS/MS法的检出限低于IC-MS法,但不能同时检测丁基黄原酸和苦味酸,而IC-MS法在符合方法要求的同时,可一次性检测这2种物质。因此,在要求同时检定水样中丁基黄原酸和苦味酸2种有机物时,推荐优先使用IC-MS法。

UHPLC-MS/MS法同时测定金红片中6种活性成分的含量

目的 建立UHPLC-MS/MS法同时测定金红片中川楝素、延胡索甲素、延胡素乙素、木香烃内酯、莽草酸、去氢木香内酯6种活性成分的含量。方法 选用Infinitylab Poroshell 120 EC-C_(18)色谱柱(100 mm×4.6 mm, 2.7μm),以体积分数0.01%甲酸水溶液和体积分数0.01%甲酸乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL·min~(-1),木香烃内酯、延胡索甲素、去氢木香内酯、延胡索乙素的离子源为ESI+,川楝素和莽草酸的离子源为ESI-,采用多反应监测扫描方式检测。结果 莽草酸在质量浓度10~1 000μg·L~(-1)内呈现良好的线性关系(r=0.999 6),其余5种活性成分的质量浓度在1~100μg·L~(-1)内呈现良好的线性关系(r=0.993 5~0.999 4),平均加样回收率为91.2%~109.0%。结论 本研究可用于金红片中多种活性成分的含量测定,为金红片质量控制的完善提供参考。

UHPLC-MS/MS法测定鸡蛋中11种头孢菌素的残留量

采用UHPLC-MS/MS技术建立了鸡蛋中11种头孢菌素含量的同步测定方法。鸡蛋样品采用60%乙腈溶液进行超声波提取,离心后以阴离子小柱(PAX)净化除杂后,再以UHPLC-MS/MS进行分析测定。在最优条件下进行方法验证,在0.5~50 ng/mL质量浓度范围具有较好的线性关系,11种头孢菌素的相关系数(R^(2))均高于0.99;鸡蛋中头孢菌素的检出限(LOD)均为0.2μg/kg,定量限(LOQ)均为0.5μg/kg;以阴性鸡蛋样品为基质分别添加1,2,10μg/kg的加标回收试验(n=6),11种头孢菌素的平均回收率在81.7%~97.1%,平行实验的RSD在2.8%~6.8%。建立的方法具有高灵敏度、高准确度和高精密度的特点,可用于鸡蛋中11种头孢菌素含量的测定。