VHL病小脑血管母细胞瘤破裂出血致死1例

1案例1.1简要案情刘某,女,24岁,与朋友乘车外出途中突发不适、呕吐,并出现意识不清,急送附近卫生院,经医务人员确认刘某已无生命体征。1.2尸体检验于死后1 d进行尸体检验。尸表检查:成年女性尸体,尸长155 cm,发育正常,营养中等;尸斑呈暗红色,颜面、口唇、双手指甲床明显发绀;全身浅表淋巴结未触及;头部有轻微头皮挫伤;胸廓对称,腹部平坦,外生殖器未见异常,体表未见其他损伤。

家族性VHL综合征患者家系突变类型及二次打击的分析

目的分析家族性希佩尔·林道(VHL)综合征患者家系的突变类型、临床特征,探索VHL患者发病的分子遗传学机制,及其二次打击的类型。方法收集VHL患者家系资料,并在先证者外周血和肾癌标本中提取DNA,通过高通量测序(NGS)检测患者VHL基因胚系突变位点,并通过UCSCXena数据库、甲基化特异性PCR法(MSP)、微卫星稳定性检测来明确患者的第二次打击位点。结果NGS测序发现胚系突变位点位于第3外显子上的c.500G>A R167Q突变,依据UCSCXena数据库、MSP分析、微卫星稳定检测结果提示患者存在单核苷酸多态性,未见明确杂合性缺失、甲基化、体系突变。结论第3外显子的胚系突变是该家族性肾癌先证者出现临床特征的基础,第二次打击位点是疾病发生的关键,对家族性肾癌家系的胚系突变和第二次打击位点的研究对患者及患者家系的诊断及治疗有指导意义。数据库的利用能够为家族性肾癌突变、甲基化位点的筛选进行指导。

乳腺癌中干细胞标志物ALDH1及VHL/HIF-1α的表达及意义

目的探讨乙醛脱氢酶1(acetaldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)、缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及希佩尔林道(Von Hippel-Lindau,VHL)在乳腺癌中表达的关系及意义。方法采用免疫组化SP法分别检测15例乳腺正常组织、30例乳腺增生组织及40例乳腺浸润性导管癌组织中干细胞标志物ALDH1、HIF-1α及VHL的表达。结果 (1)AL-DH1、HIF-1α及VHL在乳腺正常组织、乳腺增生组织、乳腺浸润性导管癌组织中阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Spearman等级相关分析显示VHL与HIF-1α、肿瘤病理分级、临床分期、肿块大小、淋巴结转移呈负相关;HIF-1α与肿瘤病理分级、临床分期、肿块大小、淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。(3)HIF-1α与ALDH1在乳腺癌中的表达有相关性(r=0.976,P=0.001),VHL与ALDH1在乳腺癌中的表达有相关性(r=0.971,P=0.001)。结论乳腺癌中存在ALDH1、HIF-1α、VHL的异常表达,三者在乳腺癌发生、发展、侵袭和转移中可能具有重要作用。VHL/HIF-1α信号通路可能与肿瘤干细胞生长和分化密切相关。

肾透明细胞癌VHL基因突变与CyclinD1过度表达的相关性

背景与目的:VHL基因突变与肾透明细胞癌发生关系密切,而CyclinD1基因通过促进细胞过度增殖,对肾透明细胞癌发生和发展起重要作用。本研究拟初步探讨肾透明细胞癌中VHL基因突变的状况及其与CyclinD1表达上升的相关性。方法:取50例肾透明细胞癌手术标本,抽提病变组织和癌周正常组织中的基因组DNA和总RNA。通过PCR扩增VHL基因各外显子序列并测序以及内切酶鉴定的方法,确定肿瘤组织中VHL基因突变的比率和具体位点。通过RT-PCR和Westernblot方法,检测相应肿瘤组织中CyclinD1的表达水平是否发生改变。结果:VHL基因序列检测结果表明,有42例(84.0%)肾透明细胞癌标本的VHL基因发生各种形式的突变,有12(24.0%)例甚至发生2种以上的基因突变。在57例VHL基因外显子突变中,1号外显子突变有17例(29.8%);2号外显子突变有26例(45.6%);3号外显子突变有14例(24.6%)。CyclinD1的表达水平在42例VHL基因发生突变的组织中均有不同程度的上升,达到正常对照组的2～10倍(3.91±1.54倍)(P<0.01),另8例表现为正常。结论:在肾透明细胞癌中存在各种VHL基因突变,导致CyclinD1过度表达。

血细胞VHL基因拷贝数变化与高原红细胞增多症易感相关性研究

目的探讨血细胞的VHL(Von Hippel-Lindau)基因拷贝数变化与高原红细胞增多症的易感性关系。方法分别取年龄、职业等相匹配的高原红细胞增多症患者(n=20)、健康对照组(n=20)的静脉血2 ml/人,提取DNA,通过定量PCR方法(染料法)检测血细胞的VHL基因的相对拷贝数。结果高原红细胞增多症病例组的VHL基因拷贝数显著低于对照组(P<0.05)。结论高原红细胞增多症患者的VHL基因的拷贝数较低,与高原红细胞增多症的发病相关。

MALAT1通过VHL／β-catenin通路影响口腔鳞状细胞癌生长侵袭的实验研究

目的:探讨肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)生长侵袭的影响及其作用机制。方法:使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低MALAT1在人OSCC细胞系SCC25、UM1中的表达;CCK-8法、流式细胞术检测敲低MALAT1表达后OSCC增殖能力、细胞周期及细胞凋亡的变化;细胞迁移实验及Transwell实验检测细胞运动及侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检测细胞周期及凋亡相关蛋白、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及侵袭相关蛋白、VHL及β-catenin等蛋白表达变化。结果:敲低OSCC中MALAT1表达后,细胞增殖能力显著下降,细胞周期出现G1/S期阻滞,周期相关蛋白cyclin D1表达减少,P21表达增多;细胞凋亡增多,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax表达增多;且EMT相关蛋白N-cadherin、vimentin表达减少,E-cadherin表达增多,侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9蛋白表达减少,细胞迁移、侵袭能力下降;同时发现敲低MALAT1表达后VHL蛋白表达增多,β-catenin蛋白表达减少。结论:MALAT1是OSCC生长侵袭的重要调节因素,可能通过VHL/β-catenin通路发挥调控作用。

3个VHL综合征家族的基因检测及临床调查

目的明确von Hippel-Lindau综合征(VHL综合征)家族基因突变及临床表现特点,筛查出家族内基因突变携带者行临床筛查,综合家族发病特点行家族健康指导。方法通过流行病学调查,共3例先证者临床诊断VHL综合征。抽取先证者及家族自愿者外周血,应用聚合酶链反应(PCR)体外扩增得到vhl基因片段,通过测序得到基因信息;再对家族内具有vhl基因突变的携带者进行头颅MRI、腹部B超等对全身多系统行临床筛查;综合家族发病特点给出家族健康指导。结果 3例先证者均发现vhl基因发生突变,家族1中5例成员基因阳性,突变方式为外显子1 c.330C>A;家族2先证者外显子3488del C;家族3发现7例基因阳性者,突变方式为外显子1 c.233G>A。其中,家族成员1III3、3III1、3III4、3IV3确定为基因突变携带者,临床检查显示其中3例成员已发病,1III3表现为双肾多发囊肿,胰腺多发囊肿;3III1表现为胰腺多发囊肿;3III4表现为视网膜血管母细胞瘤、胰腺多发囊肿,视网膜血管母细胞瘤接受激光治疗。3IV3由于年龄较小,临床检查未见明显异常。所有基因携带者接受规范化随访。结论基因检测可早期确诊VHL综合征,临床上对vhl基因突变患者需进行严密随访,从而提高患者治疗效果、延长生存期或改善生活质量。

VHL相关性和散发性中枢神经系统血管母细胞瘤

目的 探讨VHL病相关性和散发性中枢神经系统(CNS)血管母细胞瘤(HB)临床、处理及预后特征。方法 回顾性分析连续20年中我科收治的66例CNS-HB病人资料。对近期病例作了VHL基因突变和VEGF表达检测。结果 66例HB病人中,散发性58例,VHL相关性8例,共79处病变,7例为多发病变。全组62例共施行了70次手术治疗,其中5例进行了多次手术。8例VHL相关病人中有3例多次手术。64次全切,6次大部分切除。大部分切除的病人有4例复发。手术死亡3人。70次手术中手术效果良好者46次,病情改善者18次,稳定者3次。57例平均随访6.7年(1～16年),41例恢复工作,5例生活自理,部分自理和完全不能自理各1例,9例死亡。VEGF基因突变率为75％(18/24),HB中均见VEGF过度表达。结论 CNS-HB病人的手术治疗结果良好,VHL相关病人的远期愈后较差。

VHL慢病毒表达和干扰载体的构建及对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的构建人VHL重组慢病毒表达载体及干扰载体,建立稳定转染细胞株,观察VHL对肾癌细胞株增殖和凋亡的影响。方法构建p Zs Green1-VHL及p LL3.7-sh VHL重组慢病毒载体,与3质粒包装系统用脂质体法共同转染293T细胞,包装成病毒颗粒,分别感染A498、Caki-1细胞,并进行RT-PCR和Western blot检验细胞中VHL的表达。用MTS法和流式细胞仪检测VHL对肾癌细胞增殖和凋亡效应的影响。结果重组慢病毒载体及稳定转染细胞株构建成功,转染后VHL在细胞中表达明显变化;VHL过表达细胞的增殖速度明显低于各对照组,而凋亡率明显高于各对照组;VHL干扰细胞的增殖速度明显高于各对照组,而凋亡率明显低于各对照组(P<0.05)。结论 VHL对肾癌细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。

内淋巴囊瘤的临床和VHL基因突变分析研究

目的观察内淋巴囊瘤的临床特点、影像学和听力学特征,探讨内淋巴囊瘤的VHL基因突变情况。方法经术后病理确诊、经过我院手术治疗的内淋巴囊瘤病人共4例(2男2女),中位年龄为40.5岁(15～62岁),整理该病例系列临床基本资料,以及影像学和听力学检查结果,进行VHL基因突变检测,术后随访6～35个月。结果三例患者中首发症状1例为患侧面瘫,3例为患侧单侧耳鸣,听力测试提示感音神经性听力下降。颞骨CT表现为内淋巴囊区类圆形膨胀性骨质破坏,局部呈虫蚀样。内耳MR表现为内淋巴囊区混杂T1长T2信号影,边缘呈分叶状,部分其内见液-液平面,病灶不均匀明显强化。病例3还发现肾脏下极占位(病理:肾透明细胞癌),结合内淋巴囊瘤,以及发现VHL第3外显子发生杂合缺失c.620_633del,导致p.Ala207GlyfsX44,最终确诊为von Hipple-Lindau(VHL)病,并给予遗传咨询。结论对临床上单侧耳鸣、听力下降的患者需考虑到内淋巴囊瘤的可能,它独立发生,或合并其他中枢神经系统或内脏病变,是VHL病的一个表现,需要进一步进行VHL基因突变检测和遗传咨询。

大肠癌中VHLmRNA,FIH-1mRNA的表达对HIF-1α蛋白水平的影响

目的:检测大肠癌中VHLmRNA,FIH-1mRNA以及HIF-1α蛋白的表达,探讨VHL,FIH-1对HIF-1α蛋白水平的影响.方法:采用RT-PCR技术检测42例大肠癌组织和相应的癌旁正常粘膜组织中VHLmRNA,FIH-1mRNA的表达,采用免疫组化SP法检测HIF-1α蛋白在大肠癌和癌旁正常组织中的表达,Spearman相关关系检验分析其之间的相关性.结果:大肠癌组织VHLmRNA和FIH-1mRNA的表达水平显著低于癌旁正常组织(t=-10.14,P=0.00;t=-15.26,P=0.00);二者的表达水平随Dukes分期而降低,DukesA+B期显著高于DukesC+D期(t=2.84,P=0.01;t=-5.13,P=0.00);它们的表达水平与与肿瘤部位、性别无关.大肠癌组织HIF-1α蛋白表达阳性率为69.1%(29/42),在癌旁正常组织中均为阴性;DukesC+D期(80.0%,24/30)显著高于DukesA+B期(41.7%,5/12),(t=5.89,P=0.02);Spearman相关分析显示,HIF-1α表达水平与VHLmRNA,FIH-1mRNA的表达水平显著负相关(rs=-0.97,P=0.01,rs=-0.66,P=0.01).结论:HIF-1α的过表达在大肠癌的发生发展、浸润转移过程中起着重要作用,大肠癌组织中VHL以及FIH-1的水平下降与HIF-1α蛋白水平的升高之间存在密切相关.

VHL综合征遗传学研究

VHL综合征(von Hippel-Lindau syndrome,VHL;MIM 193300)是一种常染色体显性遗传的多系统肿瘤综合征,最常见临床表现是视网膜或中枢神经系统(central nervous system,CNS)血管母细胞瘤.CNS血管母细胞瘤和肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)的并发症是VHL患者最主要的死因.VHL综合征主要因VHL基因(the vonHipple-Lindau gene,VHL)突变所致,细胞周期素D1基因(the cyclin D1 gene,CCND1)突变和蛋白异常也可能参与其发生.目前已建立了多个VHL基因缺陷动物模型.在此就VHL综合征的遗传学研究进展作一概述.

内淋巴囊肿瘤分子遗传学研究进展

内淋巴囊肿瘤(ELST)较为罕见,主要与VHL基因突变相关,VHL基因主要通过依赖缺氧诱导因子途径引起VHL病。单独的VHL突变不足以导致肿瘤发生,VHL基因突变需要同样位于3号染色体短臂上的相关抑癌基因(PBRM1、SETD2、BAP1)的协同作用,才能最终导致肿瘤发生。散发性ELST中,第一外显子的突变最为常见,VHL病相关性ELST中,第三外显子的突变最为常见。ELST最常见的突变形式是截短突变。靶向治疗研究主要集中在血管内皮生长因子(VEGF)通路、缺氧诱导因子(HIF)通路、mTOR通路、促红细胞生成素(EPO)通路,抑制肿瘤生长和血管形成。全基因测序、单细胞测序等新技术的应用,也必将为更加全面地解释ELST的发病机制和治疗策略提供分子依据。

遗传性嗜铬细胞瘤/副神经节瘤及其相关综合征的临床与遗传学研究

目的 探讨不同遗传性嗜铬细胞瘤/副神经节瘤(pheochromocytoma/paraganglioma, PCC/PGL)及其相关综合征的临床表型、遗传特征及其治疗随访策略。方法 共纳入陆军特色医学中心泌尿外科2000年1月至2022年8月临床确诊的44例PCC/PGL患者,收集患者及其家系成员的临床信息,采用二代测序对43例患者进行遗传学检测,以及采用Sanger测序对先证者和家系成员进行突变验证。结果 共15例患者确诊为遗传性PCC/PGL,其中7例von Hippel-Lindau(VHL)综合征,3例多发性内分泌腺瘤病2型(multiple endocrine neoplasia type 2,MEN2),5例家族性副神经节瘤综合征。7个VHL综合征家系按照临床表现分别诊断为VHL2A(c.500G>A)、VHL2B(c.239G>T和c.444_457del)和VHL2C(c.293A>G)3种亚型,先证者均接受了手术治疗,2例复发性PCC及多发性肾癌患者还接受了舒尼替尼靶向治疗。3个MEN2家系分别携c.1901G>C、c.1832G>A和c.1901G>A错义突变,临床诊断均符合MEN2A,所有患者接受肾上腺及甲状腺切除手术,其中1例为预防性甲状腺切除。5个家族性副神经节瘤综合征家系中,共检测到4例SDHB突变患者,1例SDHD突变患者(SDHB:c.343C>T,c.541-2A>G,c.575G>A,c.268C>T;SDHD:c.337_340del),以散发性腹膜后PGL多见。结论 超过1/3的PCC/PGL患者可携带胚系基因突变,并具有明显的基因型-表型相关性,基因诊断技术在临床精准治疗及随访、遗传咨询等方面具有重要的指导作用。

肾癌患者血清VHL HIF-1α HIF-2α水平变化及意义

目的:探讨血清希佩尔-林道基因(VHL)、缺氧诱导因子(HIF)1α及HIF-2α在肾癌患者中的变化及意义。方法:收集2015年1月至2016年4月的45例肾癌患者作为肾癌组,并在同一时期收集健康查体者作为对照组,检测两组血清VHL、HIF-1α及HIF-2α水平;对肾癌患者的癌灶最大直径进行测定;对肾癌患者进行6个月随访,观察并记录复发患者情况。结果:肾癌组比对照组血清VHL水平明显下降,但HIF-1α和HIF-2α水平显著上升(P<0.01);肾癌患者血清VHL、HIF-1α和HIF-2α表达和患者年龄、性别没有明显关系(P>0.05),但和TNM分期、临床分期、癌灶直径以及淋巴结转移呈显著相关(P<0.01)。未复发组比较,复发组病例术后血清VHL水平显著更低,而HIF-1α和HIF-2α水平明显更高(P<0.05,P<0.01)。结论:血清VHL、HIF-1α及HIF-2α水平与肾癌病理分级、临床分期、癌灶大小以及淋巴结转移相关,可能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要作用。

VHL基因对U251胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的:研究VHL基因对U251胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:使用VHL表达质粒转染胶质瘤细胞,采用RT-PCR检测VHL mRNA表达,Western blot检测VHL、MMP-2、MMP-9蛋白表达,应用Transwell体外侵袭实验、划痕实验检测上调VHL基因后对U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响。使用VHL表达质粒处理后的U251细胞建立裸鼠颅内模型,利用免疫组织化学染色法对颅内模型组织切片中VHL、MMP-2、MMP-9蛋白表达进行检测。结果:VHL表达质粒转染胶质瘤细胞后VHLmRNA、VHL蛋白表达增高,MMP-2、MMP-9蛋白表达下降;并抑制U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力。对染色后的组织切片进行分析,VHL表达质粒处理组中VHL的表达较对照组明显升高,MMP-2、MMP-9蛋白较对照组表达减少。结论:VHL基因能够有效抑制U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力,VHL基因可成为治疗胶质瘤的一个有效靶点。

VHL综合征与非VHL患者行嗜铬细胞瘤切除术围术期临床麻醉比较

目的比较VHL综合征与非VHL患者行嗜铬细胞瘤切除术的围术期手术及麻醉特点。方法回顾性分析2009-01-01至2014-12-31期间于北京协和医院行嗜铬细胞瘤切除术的患者50例,包括12例VHL综合征及38例非VHL患者,收集临床资料,特别关注临床表现、术前检查、准备时间、麻醉管理、手术时间及术后住院时间等围术期相关临床资料。结果与非VHL患者相比,VHL综合征患者行嗜铬细胞瘤切术年龄明显较小,肿瘤多发,并以去甲肾上腺素大幅升高为特点,药物准备时间长,手术时间和住院时间也明显延长(P<0.05),但术中血流动力学波动及预后方面无明显差异。结论 VHL综合征患者的嗜铬细胞瘤发病年龄小,以多发为主,肿瘤功能较强,手术时间长、风险高,围术期优化策略和充分的药物准备是保证手术安全的重要措施。

希佩尔-林道抑癌基因(VHL)在胚胎和胎盘发育中的作用

希佩尔-林道抑癌基因(VHL)得名于Von Hippel-Lindau病,由VHL突变引起的一种常染色体显性遗传的家族性肿瘤综合征,VHL编码蛋白pVHL,其生理功能与多个生殖事件有关。pVHL调控胎盘的血管生成,缺乏VHL表达的小鼠妊娠早期胚胎死亡。本文综述了VHL在胚胎和胎盘发育中的作用。

VHL基因多态性与前列腺癌易感性的相关性研究

目的 The Von Hippel-Lindau（VHL）抑癌基因是缺氧应答通路上的一个关键性调节基因。它在肿瘤发生尤其是肿瘤生长与血管化作用中扮演了重要角色。作者假设VHL功能区的单核苷酸多态性会影响前列腺癌发生的易感性。方法采用病例-对照研究,应用Tagman方法检测中国南方汉族人群中410名前列腺癌患者与440名非肿瘤患者的VHL基因rs779805 A〉G位点的基因型,比较不同基因型与前列腺癌易感性的关系。结果以AA基因型携带者作为参照物,AG基因型携带者发生前列腺癌的危险性明显降低（[OR]=0.79,95%[CI]=0.62-0.99）,而携带G等位基因者（AG/GG）患前列腺癌的风险是携带AA基因型的0.76倍（[OR]=0.76,95%[CI]=0.61-0.95）。分层分析中,在非吸烟（OR=0.73,95%CI=0.54-0.98）、非饮酒（OR=0.70,95%CI=0.54-0.91）、无肿瘤家族史（OR=0.72,95%CI=0.57-0.92）三组人群中,前列腺癌的发生风险降低的更为明显。另外,在前列腺特异抗原（PSA）〉20 ng/mL的患者亚群中（OR=0.68,95%CI=0.49-0.95）,AG或GG基因型与肿瘤风险降低也更加显著。结论 VHL基因rs779805 A〉G多态性可能与中国南方地区汉族人群的PCa易感性有关,rs779805的G等位基因携带者患前列腺癌的风险较低。

肝癌VHL基因突变的研究

目的:研究肝癌VHL基因突变以及其与血管内皮生长因子、微血管密度等临床病理特征之间的关系。方法:取30例肝癌标本;设计一对引物覆盖VHL第二外显子,RT-PCR加DNA序列测定分析其中10例VHL基因,分析HCC与VHL突变的关系,比较有无VHL基因突变的HCC其VEGF、MVD及临床病理特征的差异。结果:10例HCC标本,3例发生VHL基因突变(30%);与未发生VHL基因突变7例HCC相比,VHL突变肝癌VEGF、MVD均增高(P<0.05);临床病理分析显示VHL基因突变HCC病理分级较高(P<0.05)。结论:肝癌VHL突变率约30%;其突变与其临床病理特点有关,VHL突变肝癌有较高的恶性和侵袭性。