小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。

“3S2E”管理护理在心力衰竭患者护理中的应用

目的:探讨“3S2E”管理护理在心力衰竭患者护理中的应用效果。方法:选取2020年12月1日~2022年12月1日收治的154例心力衰竭患者为研究对象,采取随机数字表法分为对照组和观察组各77例,对照组实施常规护理,观察组实施“3S2E”管理护理;比较两组干预前后负性情绪[采用焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)]、自我感受负担[采用自我感受负担量表(SPBS)]、生活质量[采用生活质量综合评定问卷(GQOLI-74)]和不良事件发生率。结果:干预后,两组SAS、SDS、SPBS评分均低于干预前(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.01);干预后,两组GQOLI-74评分高于干预前(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.01);观察组不良事件发生率低于对照组(P<0.01)。结论:将“3S2E”管理护理应用于心力衰竭患者中,不仅能有效缓解患者负性情绪,减轻自我感受负担,还能够提升其生活质量,减少不良事件的发生。

H9N2亚型禽流感病毒多拷贝M2e蛋白单克隆抗体的制备

为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;采用间接ELISA测定腹水效价,鼠源单克隆抗体亚类鉴定试剂盒检测单克隆抗体腹水,三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定单克隆抗体的特异性;使用IFA鉴定3M2e蛋白在Sf9细胞的表达和检测H9N2亚型AIV在MDCK细胞的感染。结果显示:获得了3株分泌多拷贝M2e抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C7-B11、4E10-A10和5A12-B5;获得腹水的效价均为1∶1000000;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定三株单克隆抗体均能与2M2e、3M2e和4M2e原核重组蛋白及在Sf9细胞表达的3M2e发生特异性反应;IFA鉴定结果也显示三株单克隆抗体均能检测3M2e蛋白在Sf9细胞的表达,并且能检测到H9N2亚型AIV在MDCK细胞上的感染,出现特异性的绿色荧光;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1。研究获得了H9N2亚型AIV多拷贝M2e单克隆抗体,可用于Westernblot和IFA鉴定,为靶向M2e蛋白H9N2亚型禽流感疫苗的研究提供特异性的检测工具。

Functionalized selenium nanoparticles ameliorated acetaminophen-induced hepatotoxicity through synergistically triggering PKCδ/Nrf2 signaling pathway and inhibiting CYP 2E1

Selenium nanoparticles(SeNPs)have been demonstrated potential for use in diseases associated with oxidative stress.Functionalized SeNPs with lower toxicity and higher biocompatibility could bring better therapeutic activity and clinical application value.Herein,this work was conducted to investigate the protective effect of Pleurotus tuber-regium polysaccharide-protein complex funtionnalized SeNPs(PTR-SeNPs)against acetaminophen(APAP)-induced oxidative injure in HepG2 cells and C57BL/6J mouse liver.Further elucidation of the underlying molecular mechanism,in particular their modulation of Nrf2 signaling pathway was also performed.The results showed that PTR-SeNPs could significantly ameliorate APAP-induced oxidative injury as evidenced by a range of biochemical analysis,histopathological examination and immunoblotting study.PTR-SeNPs could hosphorylate and activate PKCδ,depress Keap1,and increase nuclear accumulation of Nrf2,resulting in upregulation of GCLC,GCLM,HO-1 and NQO-1 expression.Besides,PTR-SeNPs suppressed the biotransformation of APAP to generate intracellular ROS through CYP 2E1 inhibition,restoring the mitochondrial morphology.Furthermore,the protective effect of PTR-SeNPs against APAP induced hepatotoxicity was weakened as Nrf2 was depleted in vivo,indicating the pivotal role of Nrf2 signaling pathway in PTR-SeNPs mediated hepatoprotective efficacy.Being a potential hepatic protectant,PTR-SeNPs could serve as a new source of selenium supplement for health-promoting and biomedical applications.

CYP2E1稳定高表达肝细胞系的构建及其在药物性肝损伤活性筛选模型中的应用

药物性肝损伤是临床常见且严重的药物不良反应之一,对乙酰氨基酚是临床常用的解热镇痛药,是引起药物性肝损伤的常见因素.肝微粒体酶细胞色素P4502E1(CYP2E1)在对乙酰氨基酚诱导的肝细胞损伤中发挥了重要作用.由于体外培养的肝细胞系几乎不表达微粒体酶CYP2E1,采用CYP2E1-慢病毒转染人肝癌细胞系HepG2构建了稳定高表达CYP2E1基因的肝细胞系,利用该细胞系建立了对乙酰氨基酚诱导的肝细胞损伤体外筛选模型,并对实验室从中药香附中提取得到24个天然产物进行了活性筛选,发现了8个具有潜在体外抗药物性肝损伤活性的天然化合物.本研究为药物性肝损伤提供了合适的体外筛选模型,活性筛选结果也为传统中药香附的研究与开发提供了理论依据.

甲状腺癌患者血清miR-302e、MYCBP2及B7-H3表达水平与临床分期和预后的相关性研究

目的甲状腺癌(TC)患者血清微小RNA-302e(miR-302e),MYC结合蛋白2(MYCBP2)及共刺激分子(B7-H3)表达水平与临床分期和预后的相关性研究。方法选取本院2018年7月至2020年7月期间接诊的138例TC患者作为疾病组,同期选取138例进行体检的健康者作为对照组。根据对患者随访3年的结果,将疾病组分为预后不良组(n=20)和预后良好组(n=118)。采用qRT-PCR法检测血清miR-302e、MYCBP2水平,ELISA法检测血清B7-H3水平;TargetScanHuman网站预测miR-302e与MYCBP2的靶向关系;运用ROC曲线分析血清miR-302e,MYCBP2,B7-H3对TC患者预后的预测价值。结果与对照组(1.05±0.23、1.03±0.22、28.46±4.18μg/L)相比,疾病组血清miR-302e(1.78±0.40),B7-H3(34.33±5.94μg/L)水平明显升高,血清MYCBP2(0.82±0.15)水平降低,差异有统计学意义(t=18.586,9.265,9.494,P<0.05);与临床分期Ⅰ+Ⅱ期患者(1.65±0.37、0.90±0.15、32.68±3.29μg/L)相比,Ⅲ+Ⅳ期患者血清miR-302e(2.16±0.48),B7-H3(39.20±4.08μg/L)水平明显升高,血清MYCBP2(0.58±0.14)水平降低,差异有统计学意义(t=6.511,9.510,11.084,P<0.05);预后不良组临床分期Ⅲ期+Ⅳ期占比、淋巴结转移占比、血清miR-302e(2.16±0.45),B7-H3水平(43.26±6.85μg/L)显著高于预后良好组,血清MYCBP2(0.58±0.11)低于预后良好组(1.72±0.39、0.86±0.16、32.82±5.79μg/L),差异有统计学意义(χ^(2)=10.954,24.620,t=4.561,7.519,7.257,P<0.05);MYCBP2与miR-302e可能有靶向关系,且经Pearson相关性分析,MYCBP2与miR-302e呈负相关性(r=-0.513,P<0.001);血清miR-302e,MYCBP2,B7-H3、临床分期、淋巴结转移是TC患者预后的影响因素(P<0.05);血清miR-302e,MYCBP2,B7-H3联合预测TC患者预后的曲线下面积(AUC)为0.975,优于各自单独预测(Z_(联合vs miR-302e)=2.448、Z_(联合vs MYCBP2)=3.024、Z_(联合vs B7-H3)=2.133,P=0.014、0.003、0.033)。结论TC患者血清miR-302e,B7-H3水平明显升高,血清MYCBP2明显降低,与患者临床分期及预后密切相关,3项联合检测对患者预后有更高的预测价值。

脂肪酸类天然产物2E,4E-癸二烯酸对烟草根际微生物群落的影响

【目的】脂肪酸类化合物2E,4E-癸二烯酸(2E,4E-decadienoic acid,DDA)为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)Tpb55与棘孢木霉(Trichodermaasperellum)HG1共培养发酵产物,对疫霉具有特异性抑制作用。论文旨在评价DDA防治烟草疫霉(Phytophthoranicotianae)引起的烟草黑胫病的效果及其对根际土壤微生物群落的影响,为该类天然产物在植物疫霉病害防治上的应用提供依据。【方法】通过温室盆栽试验测定DDA对烟草黑胫病的防治效果,采用实时荧光定量PCR技术检测处理后根际土壤中烟草疫霉DNA拷贝数,利用Illumina Hiseq高通量测序分析烟草根际土壤细菌、真菌和卵菌群落结构,基于冗余分析和Mantel检验研究土壤养分因子与微生物群落结构的相关性。【结果】与对照(0.5%DMSO)处理相比,1.25 g·L-1的DDA溶液灌根处理组烟草黑胫病病情指数和烟草根际烟草疫霉DNA拷贝数分别降低77.06%和84.35%,土壤pH由6.72增至6.82,电导率增加102.11%,有机质含量则降低13.05%。DDA灌根处理对烟草根际土壤真菌和细菌多样性和丰富度无显著影响,但卵菌的OTU水平、香农指数、Chao1指数和ACE指数显著增加,辛普森指数显著降低。主坐标分析结果显示,DDA处理显著影响烟草根际卵菌群落结构(r=0.667,P=0.028),对真菌(r=0.259,P=0.305)和细菌(r=0.593,P=0.098)则无显著影响。DDA处理组烟草根际土壤Phycicoccus、地杆菌属等革兰氏阳性细菌菌属的相对丰度显著增加,德沃斯氏菌属、鲍特氏菌属、假黄单胞菌属等革兰氏阴性细菌菌属丰度显著降低,曲霉属、Albifimbria、Arcopilus、树粉孢属等植物有益真菌菌属得到显著富集,疫霉属相对丰度显著下降、腐霉属丰度显著上升。Mantel检验结果表明,施用DDA引起的土壤理化性质变化对根际微生物群落无显著影响。【结论】2E,4E-癸二烯酸(DDA)作为一种新型天然脂肪酸化合物,能够有效防治烟草黑胫病、降低烟草根际黑胫病菌数量,并特异性调控烟草根际卵菌群落结构,具有防治作物卵菌病害的应用潜力。

“3S2E”护理管理模式在脑卒中吞咽障碍患者中的应用

目的:探讨“3S2E”护理管理模式在脑卒中吞咽障碍患者中的应用效果。方法:选取2020年8月1日~2022年8月31日收治的80例脑卒中吞咽障碍患者为研究对象,根据入院顺序分为对照组和观察组各40例,对照组行常规护理,观察组行“3S2E”护理管理模式,由8名责任护士实施对应护理措施。比较观察组干预前,干预14 d时责任护士临床护理质量;两组营养指标[包括血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)及血红蛋白(Hb)],吞咽功能等级。结果:干预14 d时,观察组责任护士临床护理质量评分高于干预前(P<0.05,P<0.01);干预14 d时,两组TP、ALB及Hb均高于干预前(P<0.01),且观察组高于对照组(P<0.05);观察组吞咽功能等级优于对照组(P<0.01)。结论:“3S2E”护理管理模式可提升临床护理质量,改善脑卒中吞咽障碍患者的吞咽功能水平,保证体内营养均衡。

基于3S2E模式的护理干预对有机磷农药中毒患者的影响

目的探讨基于3S2E模式的护理干预对有机磷农药中毒患者的影响。方法选取郑州大学第一附属医院2021年8月—2023年12月收治的有机磷农药中毒患者68例作为研究对象,按照组间基本特征具有可比性的原则分为对照组和观察组,每组34例。两组均给予常规对症治疗,在此基础上对照组给予常规护理干预,观察组给予基于3S2E模式的护理干预。比较两组患者护理干预前后的生命体征指标[心率(HR)、平均动脉压(MAP)]以及汉密尔顿焦虑(HAMA)与抑郁量表(HAMD)、自我感受负担量表(SPBS)评分,并比较两组患者的急救效果、治疗依从性和并发症发生率。结果护理干预前后,两组患者的HR、MAP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);护理干预前,两组患者HAMA、SPBS、HAMD评分的比较,差异无统计学意义(P>0.05);护理干预后,观察组患者的HAMA、SPBS、HAMD评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的阿托品化时间、抢救时间、胆碱酯酶(ChE)活力≥70%时间及留观时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的治疗依从程度高于对照组,并发症发生率低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论基于3S2E模式的护理干预能改善有机磷中毒患者的心理状态,减轻自我感受负担,提高治疗依从性和救治效率,降低并发症发生率。

组蛋白去甲基化酶JMJD2E抑制肝癌细胞恶性进展的研究

目的:探讨JMJD2E在肝癌细胞中的作用机制,以及其与miR372之间的调控关系。方法:本研究中,选择了Hep3B人肝癌细胞并构建了JMJD2E过表达的细胞系。使用了多种实验技术,包括RT-PCR、Northern印迹法、Western blotting等,来检测JMJD2E及相关基因的表达,同时通过miRNA检测工具详细分析和验证了miR372的表达。此外,还进行了免疫沉淀实验、RNA免疫沉淀、染色质免疫沉淀和超级凝胶移位实验,以深入研究JMJD2E蛋白与核酸的相互作用和染色质水平的作用机制。最后,通过CCK8测定法和细胞菌落形成效率测定评估了肝癌细胞的增殖和生长能力,并在小鼠体内进行异种移植实验验证了研究结果。结果:JMJD2E过表达明显抑制了肝癌细胞的生长和增殖能力,包括细胞数量减少、集落形成效率下降以及细胞增殖率的减少。异种移植实验证实了这种抑制效应。此外,JMJD2E在表观遗传学上减弱miR372的表达。结论:本研究揭示了JMJD2E在肝癌细胞中的抑制作用,可能通过调控miR372的表达发挥关键作用。JMJD2E的过表达降低了miR372的表达水平,从而影响了肝癌细胞的生长和增殖。为肝癌治疗提供了新的潜在靶点和策略,有望改善肝癌的治疗效果。

CYP2E1在慢性肝病发生发展中的作用研究进展

慢性肝病(CLD)是指迁延不愈6个月以上的各种肝脏疾病,根据病因可分为肝炎病毒感染性肝病、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病(ALD)、自身免疫性肝病(MAFLD)、药物性肝病等^([1])。上述病因的持续存在可导致肝脏慢性损伤,进一步发展成肝纤维化和肝癌^([2])。全球每年因肝脏疾病病死的人数大约为200万,而由肝硬化及其合并症致死的人数则为100万.

3S2E干预模式联合多元化健康教育在老年肺癌患者放化疗中的应用效果

目的探讨3S2E干预模式联合多元化健康教育在老年肺癌患者放化疗中的应用效果。方法将106例老年肺癌患者按干预方法的不同分为常规干预组及3S2E教育组,每组53例,其中常规干预组给予常规干预,3S2E教育组在常规干预组的基础上给予3S2E干预模式联合多元化健康教育。比较两组患者汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、自我护理能力测定量表(ESCA)、疾病不确定感家属量表、欧洲癌症研究与治疗组织生命质量测定量表(EORTCQLQ-C30)、Piper疲乏修订量表(PFS-R)评分及满意度。结果干预后,3S2E教育组患者HAMA、HAMD、疾病不确定感家属量表、PFS-R量表各维度评分均明显低于常规干预组,EORTCQLQ-C30评分、ESCA量表各维度评分均明显高于常规干预组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。3S2E教育组患者满意度明显高于常规干预组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论老年肺癌患者放化疗中应用3S2E干预模式联合多元化健康教育,能够改善患者负性情绪、癌因性疲乏和家属不确定感,提高自护能力及生活质量。

“3S2E”干预管理联合多元集成干预对重症肺炎患者睡眠的效果研究

目的:研究重症肺炎患者实施“3S2E”干预管理联合多元集成干预配合后的成效。方法:选取2022年1月至2022年12月泉州市第一医院重症监护室(ICU)收治的重症肺炎患者42例作为研究对象,按照随机数字表法随机分为观察组和对照组,每组21例。观察组患者实施“3S2E”干预管理联合多元集成干预措施,对照组实施常规护理措施。对干预后2组患者睡眠满意度、呼吸频率、睡眠质量评分等观察指标实施分析比较。结果:干预后,2组睡眠满意度比较,观察组高于对照组(P<0.05);2组呼吸频率比较,观察组低于对照组(P<0.05);2组睡眠质量评分比较,观察组低于对照组(P<0.05)。结论:给予ICU重症肺炎患者“3S2E”干预管理联合多元集成干预,其实施后的效果相对较好。患者的睡眠满意度得以显著提升,且呼吸频率得以改善,睡眠质量随之提升,值得临床应用推广。

3S2E护理模式在慢性创面患者中的应用效果

目的:观察3S2E护理模式在慢性创面患者中的应用效果。方法:选取2022年2月至2023年2月该院收治的88例慢性创面患者进行前瞻性研究,按照抽签法将其分为对照组和观察组各44例。对照组实施常规护理,观察组在对照组基础上实施3S2E护理模式,两组均护理至出院后1个月。比较两组护理期间换药次数、创面愈合时间,护理前后自护能力[自我护理能力测定量表(ESCA)]评分、舒适度[视觉模拟评分法(VAS)]评分、生命质量[诺丁汉健康量表(NHP)]评分,以及护理满意度。结果:观察组护理期间换药次数少于对照组,创面愈合时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);护理后,观察组ESCA评分高于对照组,VAS评分低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);护理后,观察组躯体活动、疼痛、精力、社会生活、情感反应、睡眠等NHP各维度评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组护理满意度为97.73%(43/44),高于对照组的79.55%(35/44),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:3S2E护理模式应用于慢性创面患者可提高自护能力评分、生命质量评分和护理满意度,减少护理期间换药次数,缩短创面愈合时间,改善舒适度,效果优于常规护理。

“3S2E”护理管理模式对ICU重症肺炎患者呼吸功能、不良情绪和睡眠质量的影响

目的:分析将“3S2E”护理管理模式实施在ICU重症肺炎患者护理中,对该类患者的作用。方法:选取2022年12月至2023年12月山东大学齐鲁医院ICU收治的重症肺炎患者60例作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组30例。对照组患者接受常规护理,观察组患者接受“3S2E”护理管理模式,并将2组患者的呼吸功能、不良情绪、睡眠质量、并发症发生情况以及临床各项指标等进行比较分析。结果:2组患者呼吸功能比较,观察组呼吸频率、氧合指数及每分通气量均更低,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者不良情绪比较,观察组焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表SDS评分均更低,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者睡眠质量比较,观察组睡眠效率、睡眠障碍、入睡时间以及觉醒次数均更低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对于在ICU接受诊治的重症肺炎患者来说,采用“3S2E”护理管理模式干预,对提升患者预后效果具有积极影响。

基于“5M2E+PDCA+任务成熟度法”的民用飞机客户服务产品在飞行试验阶段验证的进度管理模型研究与应用

当前国内外民用航空型号研制快速发展,而飞机客户服务产品(如手册、地面支援设备、飞行模拟机等)是作为飞机维护、修理和运营的重要指南。因此,构建高效、实用的飞机客户服务产品验证进度管控方法在民用飞机研制阶段具有重要意义。以PDCA循环理论为基础,对民用飞机客户服务产品在飞行试验阶段验证的进度管理方法开展研究,从人、机、料、法、环、测、其他(5M2E)7个角度构建飞机客户服务产品验证进度管理模型,并引入任务成熟度星级管理法进行过程管控,以飞行模拟机试飞数据采集为案例进行实证分析与应用。结果表明:将5M2E方法、PDCA循环和任务成熟度管理理论相结合,可以使飞机客户服务产品在飞行试验阶段验证全过程的进度管控目标更明确、资源分配更合理和管理流程更优化,为后续其它型号的飞机客户服务产品提升验证效率和验证效果提供方法指导。

基于“4M2E+熵权法”的化工企业碳审计评价指标体系构建

化工行业是国民经济的重要支柱,而其碳排放存在着“排放总量有限但强度突出”的特点。因此,构建合理、有效的化工企业生产碳审计评价指标体系在化工行业实现“双碳”目标之路上具有重大意义。文章以审计相关理论为基础,对化工企业碳排放进行追本溯源,从人员、机器、原料、方法、环境、经济(4M2E)6个角度构建碳审计评价指标体系,并利用熵权法赋权重,以JH集团为案例进行实证分析与应用,同时基于分析结果提出“节能减碳”建议,助力企业实现绿色、低碳、可持续发展。

人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。

人参皂苷Rg1通过miR-144/Nrf2/ARE通路对糖尿病大鼠肝损伤的影响

目的探究人参皂苷(G)-Rg1通过微小RNA(miR)-144/核因子E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)通路对糖尿病(DM)大鼠肝损伤的影响。方法将大鼠随机分成control组、模型(model)组、二甲双胍(MET)组(100 mg/kg MET)组、G-Rg1-L(10 mg/kg G-Rg1)组、G-Rg1-H(30 mg/kg G-Rg1)组、G-Rg1-H+mimics NC组、G-Rg1-H+miR-144 mimics组、G-Rg1-H+miR-144 mimics+Nrf2激活剂(Hesperin组(10 mg/kg Hesperin)各10只;除control组外,其余组通过高脂高糖饲料喂养及链脲佐菌素(STZ)腹腔注射构建DM模型,并灌胃相应剂量MET或G-Rg1,尾静脉注射相应剂量mimics NC、miR-144 mimics慢病毒液,腹腔注射相应剂量Hesperin,control组、model组灌胃、尾静脉及腹腔注射等剂量生理盐水,共为期8 w。血糖测试仪及全自动生化分析仪检测血糖、肝功能指标;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测血清中二者含量;苏木素-伊红(HE)及过碘酸-雪夫(PAS)染色观察肝组织病理形态及糖原含量变化;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western印迹分析肝组织中miR-144、血红素加氧酶(HO)-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-144与Nrf2的靶向关系。结果与control组比,model组空腹血糖(FBG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著增加,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.05);与model组比,MET组、G-Rg1-L组、G-Rg1-H组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著减少,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);MET组与G-Rg1-H组比较,上述指标无明显差异(P>0.05);与G-Rg1-H组比,G-Rg1-H+miR-144 mimics组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著增加,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.05);与G-Rg1-H+miR-144 mimics组比,G-Rg1-H+miR-144 mimics+Hesperin组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著减少,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,Nrf2是miR-144的潜在靶基因。结论G-Rg1通过抑制miR-144表达来激活Nrf2/ARE通路,改善DM大鼠的肝损伤。