小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。

“3S2E”管理护理在心力衰竭患者护理中的应用

目的:探讨“3S2E”管理护理在心力衰竭患者护理中的应用效果。方法:选取2020年12月1日~2022年12月1日收治的154例心力衰竭患者为研究对象,采取随机数字表法分为对照组和观察组各77例,对照组实施常规护理,观察组实施“3S2E”管理护理;比较两组干预前后负性情绪[采用焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)]、自我感受负担[采用自我感受负担量表(SPBS)]、生活质量[采用生活质量综合评定问卷(GQOLI-74)]和不良事件发生率。结果:干预后,两组SAS、SDS、SPBS评分均低于干预前(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.01);干预后,两组GQOLI-74评分高于干预前(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.01);观察组不良事件发生率低于对照组(P<0.01)。结论:将“3S2E”管理护理应用于心力衰竭患者中,不仅能有效缓解患者负性情绪,减轻自我感受负担,还能够提升其生活质量,减少不良事件的发生。

Functionalized selenium nanoparticles ameliorated acetaminophen-induced hepatotoxicity through synergistically triggering PKCδ/Nrf2 signaling pathway and inhibiting CYP 2E1

Selenium nanoparticles(SeNPs)have been demonstrated potential for use in diseases associated with oxidative stress.Functionalized SeNPs with lower toxicity and higher biocompatibility could bring better therapeutic activity and clinical application value.Herein,this work was conducted to investigate the protective effect of Pleurotus tuber-regium polysaccharide-protein complex funtionnalized SeNPs(PTR-SeNPs)against acetaminophen(APAP)-induced oxidative injure in HepG2 cells and C57BL/6J mouse liver.Further elucidation of the underlying molecular mechanism,in particular their modulation of Nrf2 signaling pathway was also performed.The results showed that PTR-SeNPs could significantly ameliorate APAP-induced oxidative injury as evidenced by a range of biochemical analysis,histopathological examination and immunoblotting study.PTR-SeNPs could hosphorylate and activate PKCδ,depress Keap1,and increase nuclear accumulation of Nrf2,resulting in upregulation of GCLC,GCLM,HO-1 and NQO-1 expression.Besides,PTR-SeNPs suppressed the biotransformation of APAP to generate intracellular ROS through CYP 2E1 inhibition,restoring the mitochondrial morphology.Furthermore,the protective effect of PTR-SeNPs against APAP induced hepatotoxicity was weakened as Nrf2 was depleted in vivo,indicating the pivotal role of Nrf2 signaling pathway in PTR-SeNPs mediated hepatoprotective efficacy.Being a potential hepatic protectant,PTR-SeNPs could serve as a new source of selenium supplement for health-promoting and biomedical applications.

甲状腺癌患者血清miR-302e、MYCBP2及B7-H3表达水平与临床分期和预后的相关性研究

目的甲状腺癌(TC)患者血清微小RNA-302e(miR-302e),MYC结合蛋白2(MYCBP2)及共刺激分子(B7-H3)表达水平与临床分期和预后的相关性研究。方法选取本院2018年7月至2020年7月期间接诊的138例TC患者作为疾病组,同期选取138例进行体检的健康者作为对照组。根据对患者随访3年的结果,将疾病组分为预后不良组(n=20)和预后良好组(n=118)。采用qRT-PCR法检测血清miR-302e、MYCBP2水平,ELISA法检测血清B7-H3水平;TargetScanHuman网站预测miR-302e与MYCBP2的靶向关系;运用ROC曲线分析血清miR-302e,MYCBP2,B7-H3对TC患者预后的预测价值。结果与对照组(1.05±0.23、1.03±0.22、28.46±4.18μg/L)相比,疾病组血清miR-302e(1.78±0.40),B7-H3(34.33±5.94μg/L)水平明显升高,血清MYCBP2(0.82±0.15)水平降低,差异有统计学意义(t=18.586,9.265,9.494,P<0.05);与临床分期Ⅰ+Ⅱ期患者(1.65±0.37、0.90±0.15、32.68±3.29μg/L)相比,Ⅲ+Ⅳ期患者血清miR-302e(2.16±0.48),B7-H3(39.20±4.08μg/L)水平明显升高,血清MYCBP2(0.58±0.14)水平降低,差异有统计学意义(t=6.511,9.510,11.084,P<0.05);预后不良组临床分期Ⅲ期+Ⅳ期占比、淋巴结转移占比、血清miR-302e(2.16±0.45),B7-H3水平(43.26±6.85μg/L)显著高于预后良好组,血清MYCBP2(0.58±0.11)低于预后良好组(1.72±0.39、0.86±0.16、32.82±5.79μg/L),差异有统计学意义(χ^(2)=10.954,24.620,t=4.561,7.519,7.257,P<0.05);MYCBP2与miR-302e可能有靶向关系,且经Pearson相关性分析,MYCBP2与miR-302e呈负相关性(r=-0.513,P<0.001);血清miR-302e,MYCBP2,B7-H3、临床分期、淋巴结转移是TC患者预后的影响因素(P<0.05);血清miR-302e,MYCBP2,B7-H3联合预测TC患者预后的曲线下面积(AUC)为0.975,优于各自单独预测(Z_(联合vs miR-302e)=2.448、Z_(联合vs MYCBP2)=3.024、Z_(联合vs B7-H3)=2.133,P=0.014、0.003、0.033)。结论TC患者血清miR-302e,B7-H3水平明显升高,血清MYCBP2明显降低,与患者临床分期及预后密切相关,3项联合检测对患者预后有更高的预测价值。

“3S2E”护理管理模式在脑卒中吞咽障碍患者中的应用

目的:探讨“3S2E”护理管理模式在脑卒中吞咽障碍患者中的应用效果。方法:选取2020年8月1日~2022年8月31日收治的80例脑卒中吞咽障碍患者为研究对象,根据入院顺序分为对照组和观察组各40例,对照组行常规护理,观察组行“3S2E”护理管理模式,由8名责任护士实施对应护理措施。比较观察组干预前,干预14 d时责任护士临床护理质量;两组营养指标[包括血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)及血红蛋白(Hb)],吞咽功能等级。结果:干预14 d时,观察组责任护士临床护理质量评分高于干预前(P<0.05,P<0.01);干预14 d时,两组TP、ALB及Hb均高于干预前(P<0.01),且观察组高于对照组(P<0.05);观察组吞咽功能等级优于对照组(P<0.01)。结论:“3S2E”护理管理模式可提升临床护理质量,改善脑卒中吞咽障碍患者的吞咽功能水平,保证体内营养均衡。

组蛋白去甲基化酶JMJD2E抑制肝癌细胞恶性进展的研究

目的:探讨JMJD2E在肝癌细胞中的作用机制,以及其与miR372之间的调控关系。方法:本研究中,选择了Hep3B人肝癌细胞并构建了JMJD2E过表达的细胞系。使用了多种实验技术,包括RT-PCR、Northern印迹法、Western blotting等,来检测JMJD2E及相关基因的表达,同时通过miRNA检测工具详细分析和验证了miR372的表达。此外,还进行了免疫沉淀实验、RNA免疫沉淀、染色质免疫沉淀和超级凝胶移位实验,以深入研究JMJD2E蛋白与核酸的相互作用和染色质水平的作用机制。最后,通过CCK8测定法和细胞菌落形成效率测定评估了肝癌细胞的增殖和生长能力,并在小鼠体内进行异种移植实验验证了研究结果。结果:JMJD2E过表达明显抑制了肝癌细胞的生长和增殖能力,包括细胞数量减少、集落形成效率下降以及细胞增殖率的减少。异种移植实验证实了这种抑制效应。此外,JMJD2E在表观遗传学上减弱miR372的表达。结论:本研究揭示了JMJD2E在肝癌细胞中的抑制作用,可能通过调控miR372的表达发挥关键作用。JMJD2E的过表达降低了miR372的表达水平,从而影响了肝癌细胞的生长和增殖。为肝癌治疗提供了新的潜在靶点和策略,有望改善肝癌的治疗效果。

3S2E护理模式在慢性创面患者中的应用效果

目的:观察3S2E护理模式在慢性创面患者中的应用效果。方法:选取2022年2月至2023年2月该院收治的88例慢性创面患者进行前瞻性研究,按照抽签法将其分为对照组和观察组各44例。对照组实施常规护理,观察组在对照组基础上实施3S2E护理模式,两组均护理至出院后1个月。比较两组护理期间换药次数、创面愈合时间,护理前后自护能力[自我护理能力测定量表(ESCA)]评分、舒适度[视觉模拟评分法(VAS)]评分、生命质量[诺丁汉健康量表(NHP)]评分,以及护理满意度。结果:观察组护理期间换药次数少于对照组,创面愈合时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);护理后,观察组ESCA评分高于对照组,VAS评分低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);护理后,观察组躯体活动、疼痛、精力、社会生活、情感反应、睡眠等NHP各维度评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组护理满意度为97.73%(43/44),高于对照组的79.55%(35/44),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:3S2E护理模式应用于慢性创面患者可提高自护能力评分、生命质量评分和护理满意度,减少护理期间换药次数,缩短创面愈合时间,改善舒适度,效果优于常规护理。

“3S2E”护理管理模式对ICU重症肺炎患者呼吸功能、不良情绪和睡眠质量的影响

目的:分析将“3S2E”护理管理模式实施在ICU重症肺炎患者护理中,对该类患者的作用。方法:选取2022年12月至2023年12月山东大学齐鲁医院ICU收治的重症肺炎患者60例作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组30例。对照组患者接受常规护理,观察组患者接受“3S2E”护理管理模式,并将2组患者的呼吸功能、不良情绪、睡眠质量、并发症发生情况以及临床各项指标等进行比较分析。结果:2组患者呼吸功能比较,观察组呼吸频率、氧合指数及每分通气量均更低,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者不良情绪比较,观察组焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表SDS评分均更低,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者睡眠质量比较,观察组睡眠效率、睡眠障碍、入睡时间以及觉醒次数均更低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对于在ICU接受诊治的重症肺炎患者来说,采用“3S2E”护理管理模式干预,对提升患者预后效果具有积极影响。

基于“5M2E+PDCA+任务成熟度法”的民用飞机客户服务产品在飞行试验阶段验证的进度管理模型研究与应用

当前国内外民用航空型号研制快速发展,而飞机客户服务产品(如手册、地面支援设备、飞行模拟机等)是作为飞机维护、修理和运营的重要指南。因此,构建高效、实用的飞机客户服务产品验证进度管控方法在民用飞机研制阶段具有重要意义。以PDCA循环理论为基础,对民用飞机客户服务产品在飞行试验阶段验证的进度管理方法开展研究,从人、机、料、法、环、测、其他(5M2E)7个角度构建飞机客户服务产品验证进度管理模型,并引入任务成熟度星级管理法进行过程管控,以飞行模拟机试飞数据采集为案例进行实证分析与应用。结果表明:将5M2E方法、PDCA循环和任务成熟度管理理论相结合,可以使飞机客户服务产品在飞行试验阶段验证全过程的进度管控目标更明确、资源分配更合理和管理流程更优化,为后续其它型号的飞机客户服务产品提升验证效率和验证效果提供方法指导。

基于“4M2E+熵权法”的化工企业碳审计评价指标体系构建

化工行业是国民经济的重要支柱,而其碳排放存在着“排放总量有限但强度突出”的特点。因此,构建合理、有效的化工企业生产碳审计评价指标体系在化工行业实现“双碳”目标之路上具有重大意义。文章以审计相关理论为基础,对化工企业碳排放进行追本溯源,从人员、机器、原料、方法、环境、经济(4M2E)6个角度构建碳审计评价指标体系,并利用熵权法赋权重,以JH集团为案例进行实证分析与应用,同时基于分析结果提出“节能减碳”建议,助力企业实现绿色、低碳、可持续发展。

CYP2E1介导酒精性心肌病的心脏纤维化作用及其机制

目的探讨细胞色素P450家族成员2E1(CYP2E1)介导酒精性心肌病心肌纤维化的作用及可能的机制。方法将心脏成纤维细胞分为:对照组(control)、酒精组(ethanol,100 mmol/L)、二烯丙基硫醚组(diallyl sulfide,DAS,CYP2E1抑制剂,100μmol/L)及酒精+DAS组(ethanol+DAS);利用激光共聚焦显微镜技术检测心脏成纤维细胞活化为肌成纤维细胞的标志蛋白α-SMA,应用Western blotting检测成纤维细胞中CYP2E1的蛋白表达水平,以及由成纤维细胞生成的细胞间质Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)水平和具有调控纤维化的重要细胞因子TGF-β1的水平。将心脏成纤维细胞分为4组:对照组(control)、肿瘤坏死因子β1组(TGF-β1,10 ng/ml)、DAS组(100μmol/L)及TGF-β1+DAS组。利用激光共聚焦显微镜技术检测心脏成纤维细胞活化为肌成纤维细胞的标志蛋白α-SMA。结果与对照组相比,酒精组心脏成纤维细胞CYP2E1、α-SMA及CollagenⅠ蛋白表达水平都显著升高(P<0.01);与酒精组相比,酒精+DAS组酒精对心脏成纤维细胞的上述效应被显著抑制(P<0.05)。同时,与对照组相比,酒精组心脏成纤维细胞TGF-β1蛋白水平显著升高(P<0.01);与酒精组相比,酒精+DAS组心脏成纤维细胞TGF-β1蛋白的水平未受显著影响(P>0.05)。与对照组相比,TGF-β1组α-SMA表达水平显著升高(P<0.01);与TGF-β1组相比,TGF-β1+DAS组α-SMA的表达水平显著降低(P<0.01)。结论酒精通过促进TGF-β1蛋白水平增加,导致CYP2E1蛋白水平升高,刺激心脏成纤维细胞活化成为肌成纤维细胞,并促进细胞外基质生成,最终导致心脏纤维化。

人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。

人参皂苷Rg1通过miR-144/Nrf2/ARE通路对糖尿病大鼠肝损伤的影响

目的探究人参皂苷(G)-Rg1通过微小RNA(miR)-144/核因子E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)通路对糖尿病(DM)大鼠肝损伤的影响。方法将大鼠随机分成control组、模型(model)组、二甲双胍(MET)组(100 mg/kg MET)组、G-Rg1-L(10 mg/kg G-Rg1)组、G-Rg1-H(30 mg/kg G-Rg1)组、G-Rg1-H+mimics NC组、G-Rg1-H+miR-144 mimics组、G-Rg1-H+miR-144 mimics+Nrf2激活剂(Hesperin组(10 mg/kg Hesperin)各10只;除control组外,其余组通过高脂高糖饲料喂养及链脲佐菌素(STZ)腹腔注射构建DM模型,并灌胃相应剂量MET或G-Rg1,尾静脉注射相应剂量mimics NC、miR-144 mimics慢病毒液,腹腔注射相应剂量Hesperin,control组、model组灌胃、尾静脉及腹腔注射等剂量生理盐水,共为期8 w。血糖测试仪及全自动生化分析仪检测血糖、肝功能指标;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测血清中二者含量;苏木素-伊红(HE)及过碘酸-雪夫(PAS)染色观察肝组织病理形态及糖原含量变化;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western印迹分析肝组织中miR-144、血红素加氧酶(HO)-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-144与Nrf2的靶向关系。结果与control组比,model组空腹血糖(FBG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著增加,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.05);与model组比,MET组、G-Rg1-L组、G-Rg1-H组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著减少,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);MET组与G-Rg1-H组比较,上述指标无明显差异(P>0.05);与G-Rg1-H组比,G-Rg1-H+miR-144 mimics组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著增加,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.05);与G-Rg1-H+miR-144 mimics组比,G-Rg1-H+miR-144 mimics+Hesperin组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著减少,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,Nrf2是miR-144的潜在靶基因。结论G-Rg1通过抑制miR-144表达来激活Nrf2/ARE通路,改善DM大鼠的肝损伤。

Linc01419调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖与侵袭

目的:探讨长链非编码RNA Linc01419对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:通过UALCAN软件(https://ualcan.path.uab.edu/)分析TCGA数据库中Linc01419在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达差异;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Linc01419在不同膀胱癌细胞系、22例经病理证实为膀胱癌的手术患者的肿瘤组织及癌旁正常膀胱组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验和Transwell小室侵袭实验检测敲低Linc01419表达对膀胱癌细胞增殖与侵袭的影响;采用双荧光素酶报告基因检测法分析Linc01419与miR-34a-5p及miR-34a-5p与E2F3之间的靶向调控关系。结果:UALCAN数据库分析显示相较正常膀胱组织,Linc01419在膀胱癌组织中显著高表达(P<0.001);RT-qPCR分析结果显示相较癌旁正常膀胱组织,Linc01419在22例膀胱癌组织中表达明显上调(P<0.001),与UALCAN数据库分析结果一致;Linc01419在4株膀胱癌细胞中的表达明显高于正常膀胱上皮细胞(P<0.01);敲低Linc01419表达,可显著抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭及N-cadherin、PCNA蛋白的表达,而显著促进E-cadherin的蛋白表达(P<0.05);miR-34a-5p过表达对膀胱癌细胞具有类似的抑制作用;双荧光素酶报告基因实验、RIP及Pull-down实验证实Linc01419可靶向结合miR-34a-5p,而后者进一步介导了对E2F3的靶向调控;抑制miR-34a-5p表达,可显著削弱Linc01419沉默对膀胱癌细胞生物学行为及E-cadherin、N-cadherin、PCNA、E2F3表达的影响。结论:Linc01419在膀胱癌中异常高表达,其通过调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖和侵袭,很可能是膀胱癌发生、发展过程中的一个重要环节。

岩藻黄质活化核因子E2相关因子2改善糖皮质激素诱导的成骨细胞凋亡

背景:骨质疏松症发病率高,易导致骨折等并发症的发生,而现有药物干预不良反应大,难以满足临床需求。目的:探索岩藻黄质对糖皮质激素诱导成骨细胞骨质疏松症模型的作用与潜在机制。方法:将原代大鼠成骨细胞接种于6孔板内,待细胞融合度达到80%后分4组干预:对照组单纯培养24 h,糖皮质激素组使用地塞米松干预24 h,岩藻黄质组使用岩藻黄质干预24 h,糖皮质激素+岩藻黄质组使用地塞米松与岩藻黄质同时干预24 h。干预结束后,检测细胞增殖、凋亡、细胞内活性氧含量以及凋亡相关蛋白、骨形成相关蛋白、细胞核核因子E2相关因子2的蛋白表达。结果与结论:①CCK-8检测显示,与对照组比较,糖皮质激素组细胞活性降低(P<0.05);与糖皮质激素组比较,糖皮质激素+岩藻黄质组细胞活性升高(P<0.05);②JC-1线粒体膜电位染色与流式细胞学检测显示,与对照组比较,糖皮质激素组细胞凋亡比例增加(P<0.05);与糖皮质激素组比较,糖皮质激素+岩藻黄质组细胞凋亡比例减少(P<0.05);③Western Blot检测显示,与对照组比较,糖皮质激素组BAX、裂解聚ADP核糖聚合酶的蛋白表达升高(P<0.05),BCL2、Ⅰ型胶原蛋白α1肽链、碱性磷酸酶、骨钙蛋白、RUNX2的蛋白表达降低(P<0.05);与糖皮质激素组比较,糖皮质激素+岩藻黄质组BAX、裂解聚ADP核糖聚合酶的蛋白表达降低(P<0.05),BCL2、Ⅰ型胶原蛋白α1肽链、碱性磷酸酶、骨钙蛋白、RUNX2的蛋白表达升高(P<0.05);④荧光探针检测显示,与对照组比较,糖皮质激素组活性氧含量增加(P<0.05);与糖皮质激素组比较,糖皮质激素+岩藻黄质组活性氧含量减少(P<0.05);⑤免疫荧光染色与Western Blot检测显示,与对照组比较,糖皮质激素组细胞核核因子E2相关因子2的蛋白表达降低(P<0.05);与糖皮质激素组比较,糖皮质激素+岩藻黄质组细胞核核因子E2相关因子2的蛋白表达升高(P<0.05);⑥结果表明,岩藻黄质通过活化核因子E2相关因子2改善糖皮质激素诱导的成骨细胞凋亡与骨形成相关分子表达。

胃衡汤调控Nrf2-Keap信号通路抑制老年胃癌前病变患者氧化应激反应的临床研究

目的探讨胃衡汤调控核因子E2相关因子2(Nrf2)-Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白(Keap)信号通路抑制老年胃癌前病变(Precancerous lesions of gastric cancer,PLGC)患者氧化应激反应的作用。方法选取2022年3月-2023年3月期间于南京中医药大学第二附属医院消化腔镜中心和脾胃病科就诊的PLGC老年患者60例,按随机数字表法分为基础治疗组与胃衡汤治疗组,每组各30例。另选择同期常规胃镜体检的慢性浅表性胃炎患者30例为对照组。对照组仅入组接受研究相关指标检测,不予治疗。基础治疗组患者给予雷贝拉唑钠肠溶胶囊,胃衡汤组在基础治疗组上加用胃衡汤治疗,均治疗6个月。观察比较两组PLGC患者临床疗效、安全性,治疗前后中医证候评分、胃镜病理分级及Nrf2-Keap通路相关蛋白检测。结果治疗后胃衡汤治疗组中医证候疗效总有效率93.33%(28/30)明显高于基础治疗组76.67%(23/30),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后胃衡汤治疗组病理组织学疗效总有效率83.33%(25/30)明显高于基础治疗组63.33%(19/30),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者中医证候各项积分及总积分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且胃衡汤治疗组中医证候各项积分及总积分均明显低于基础治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者胃黏膜组织学各项积分及总分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且胃衡汤治疗组胃黏膜组织学各项积分及总分均明显低于基础治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者Nrf2和SOD表达高于治疗前,Keap1和MDA表达较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且胃衡汤治疗组Nrf2和SOD表达明显高于基础治疗组,Keap1和MDA表达明显低于基础治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组患者治疗前后肝肾功能、三大常规及心电图检查均未发现异常。结论胃衡汤治疗老年PLGC能够改善临床症状,抑制甚至逆转病理学改变,提高治疗效果,其机制与调节Nrf2-Keap信号通路而抑制氧化应激反应有关。

基于PGE2/COX-2信号通路探究扶正祛瘀解毒方对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的基于前列腺素(PG)E2/环氧合酶(COX)-2信号通路探究扶正祛瘀解毒方对结肠癌(CC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法CCK-8检测不同浓度扶正祛瘀解毒方对CC细胞的毒性。将CC细胞系HCT-116细胞分为对照组(正常培养)、塞来昔布组(30 mg/L塞来昔布)、扶正祛瘀解毒方组(1 g/L扶正祛瘀解毒方)和联合组(2 mg/L PGE2和1 g/L扶正祛瘀解毒方)。集落形成实验和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡情况;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中PGE2含量;Western印迹检测细胞中COX-2、PGE2受体EP2和EP4蛋白水平。结果扶正祛瘀解毒方和塞来昔布均可通过抑制PGE2/COX-2信号通路抑制HCT-116细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,但扶正祛瘀解毒方对HCT-116细胞的效用略低于塞来昔布。外源添加PGE2可在一定程度上逆转扶正祛瘀解毒方对HCT-116细胞的作用。结论扶正祛瘀解毒方可抑制CC细胞的恶性生物学行为,此过程可能是通过抑制PGE2/COX-2信号通路实现的。

Keap1/Nrf2信号通路在非小细胞肺癌氧化应激机制中的作用

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达水平,分析其与临床病理参数、氧化应激指标的相关性,为临床治疗提供潜在靶点。方法选取2017年4月至2020年4月郑州市第三人民医院收治的100例NSCLC患者为研究对象,免疫组化法检测并比较癌组织、癌旁组织中Keap1、Nrf2蛋白表达水平;比较不同临床病理参数患者Keap1、Nrf2蛋白表达水平;比较不同Keap1、Nrf2蛋白表达患者血清超氧化物歧化酶(SOD)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)水平,并采用Spearman法分析SOD、i NOS、MDA与临床病理参数的相关性,采用Pearson法分析SOD、iNOS、MDA与Keap1、Nrf2蛋白水平的的相关性;比较不同Keap1、Nrf2蛋白表达患者的生存率。结果癌组织、癌旁组织Keap1蛋白阳性率分别为77.00%、53.00%,Nrf2蛋白阳性率分别为74.00%、45.00%,Keap1蛋白OD值分别为0.41±0.07、0.33±0.05,Nrf2蛋白OD值分别为0.39±0.06、0.31±0.06,癌组织Keap1、Nrf2蛋白阳性率及OD值明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);Keap1蛋白阳性表达与病理分级、T分期呈正相关(r=0.569、0.574,P<0.01),Nrf2蛋白阳性表达与病理分级、T分期呈正相关(r=0.527、0.539,P<0.01);Keap1蛋白阳性者、阴性者的血清SOD水平分别为(86.78±9.14)U/m L、(115.07±12.13)U/m L,MDA水平分别为(4.42±0.82)mmol/L、(3.24±0.56)mmol/L,i NOS水平分别为(22.74±4.31)U/m L、(15.59±3.02)U/mL,Nrf2蛋白阳性者、阴性者血清SOD水平分别为(84.94±9.12)U/mL、(117.06±12.37)U/mL,MDA水平分别为(4.48±0.85)mmol/L、(3.21±0.52)mmol/L,iNOS水平分别为(23.02±4.28)U/mL、(15.64±3.10)U/mL,Keap1、Nrf2蛋白阳性者血清SOD水平明显低于阴性者,MDA、iNOS水平明显高于阴性者,差异均有统计学意义(P<0.05);Keap1、Nrf2蛋白表达与SOD呈负相关(r=-0.612、-0.614,P<0.01),与MDA、iNOS呈正相关(r_(Keap1)=0.609、0.614,P<0.01;r_(Nrf2)=0.610、0.608,P<0.01);Keap1、Nrf2蛋白阳性表达者3年生存率为85.71%、83.78%,明显低于阴性表达者的95.65%、100.00%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NSCLC组织中Keap1、Nrf2蛋白表达水平升高,且与病理分级、T分期密切相关,该信号通路活化可参与氧化应激反应过程,且对预判患者预后具有一定临床意义。

SLC35E基因家族在麻风皮损中的表达

目的:明确溶质转运体家族蛋白SLC35E在多菌型(MB)与少菌型(PB)麻风皮损中的差异。方法:首先收集25例确诊为麻风感染患者的石蜡包埋皮损组织,其中多菌型麻风患者12例,少菌型13例,分析SLC35E1和SLC35E2B不同SNP位点的突变情况;同时收集12名健康对照者皮肤组织作为正常对照组,采用免疫组化染色法检测SLC35E1、SLC35E2B、CD68、S100在上述皮损及正常对照组中的表达差异,免疫荧光染色法检测CD68、S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白在皮损组织中的共表达情况。结果:对25例麻风组织样本进行生物信息学分析,SLC35E1的SNP位点rs202071873在麻风患者中的突变率为0%,SLC35E2B的3个SNP位点rs12729295、rs117820608、rs2072923在麻风患者中的突变率分别为100%、40%,100%。免疫组化染色显示SLC35E1、SLC35E2B、CD68、S100在麻风组织的真皮及表皮均有表达,其中CD68主要表达于麻风组织真皮,SLC35E1在真皮层的表达量与CD68基本一致,两者表达量基本呈正相关;S100在麻风患者表皮和真皮中的表达无显著差异,与SLC35E1、SLC35E2B表达量无明显相关性;与少菌型麻风相比,多菌型麻风患者SLC35E1在真皮层呈低表达(P=0.046);与健康对照组相比,多菌型麻风患者SLC35E2B在表皮层呈低表达(p=0.004);免疫荧光共染显示麻风组织皮损中CD68与SLC35E1、SLC35E2B蛋白共染均出现重叠结果,且与SLC35E1重叠荧光强度高于SLC35E2B;S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白共染未见重叠结果。结论:麻风患者皮损中可能存在SLC35E2B位点突变,SLC35E1的表达可预测多菌型(MB)与少菌型(PB)麻风在真皮层感染差异,SLC35E1、SLC35E2B可能通过影响巨噬细胞功能干扰机体对麻风分枝杆菌的清除,进而影响麻风的发病。