miR-150-5p、miR-135b在糖尿病肾病患者中的表达及意义

目的探讨外周血miR-150-5p、miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者尿白蛋白排泄率(UAER)、预后的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2019年1月至2021年10月延安大学附属医院收治的85例DN患者作为DN组[男46例,女39例,年龄(46.28±4.41)岁,2型糖尿病(T2DM)病程(7.24±2.31)年],另纳入76例单纯T2DM患者作为T2DM组[男40例,女36例,年龄(44.95±6.13)岁,T2DM病程(6.98±3.28)年],80例健康体检者作为对照组[男43例,女37例,年龄(45.74±5.68)岁]。收集3组患者临床资料及外周血miR-150-5p、miR-135b水平,Spearman分析各指标与UAER相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC),分析各指标预后的预测效能,采用相对危险度(RR)及95%置信区间(CI)分析各指标对预后的影响。结果DN组外周血miR-150-5p、miR-135b水平>T2DM组>对照组[(3.36±0.68)比(1.03±0.62)比(0.78±0.21)、(3.96±0.51)比(1.24±0.48)比(0.66±0.12)],差异均有统计学意义(F=560.11、1519.26,均P<0.05);DN组UAER>300 mg/24 h患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平>UAER 30~300 mg/24 h患者>UAER<30 mg/24 h患者[(4.10±0.92)比(3.42±0.64)比(2.73±0.51)、(5.40±0.87)比(3.87±0.61)比(3.02±0.49)],差异均有统计学意义(F=23.53、78.25,均P<0.05);DN患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平与UREA呈正相关(r=0.783、0.835,均P<0.05);随访12个月,15例发生终末期肾病(ESRD),发生ESRD患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平均高于未发生ESRD患者[(4.41±0.55)比(3.14±0.38)、(4.67±0.61)比(3.81±0.42)],差异均有统计学意义(t=10.67、6.53,均P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-135b、联合预测DN并发ESRD的AUC分别为0.733、0.829、0.944。外周血miR-150-5p、miR-135b高水平患者并发ESRD的RR分别为低水平的3.619倍、10.889倍,其95%CI分别为1.105~11.856、1.503~78.872。结论外周血miR-150-5p、miR-135b水平与DN患者UAER呈正相关,联合检测可作为预测DN并发ESRD的重要辅助手段,为临床诊治提供可靠数据支持。

miR-150对T细胞PD-1表达及肺肿瘤生长的影响

目的:探讨miR-150对小鼠外周T细胞PD-1表达及肺移植肿瘤生长的影响。方法:选取miR-150基因敲除(miR-150KO)及其野生型正常对照(WT)小鼠,流式细胞数术检测miR-150KO小鼠外周T细胞数量及其活化表型分子CD69和免疫检查点分子PD-1的表达变化;采用Lewis肺癌细胞系(LLC)皮下注射制备miR-150KO和WT小鼠移植肿瘤模型,观察miR-150敲除对肺肿瘤生长的影响;采用抗PD-1抗体腹腔注射miR-150KO和WT荷瘤小鼠,观察其对两组小鼠的肿瘤生长抑制效果。结果:与WT小鼠相比,miR-150KO小鼠脾脏和淋巴结CD4^(+)T细胞比例和数量显著升高,外周血CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞比例和数量显著降低;miR-150敲除导致淋巴结和外周血CD4 T和CD8 T细胞中CD69^(+)细胞比例显著升高,同时导致外周血CD4 T和CD8 T细胞中PD-1^(+)细胞比例显著升高;与WT荷瘤小鼠相比,miR-150KO荷瘤小鼠肿瘤生长明显加快,同时miR-150KO荷瘤小鼠淋巴结和外周血CD4 T和CD8 T细胞中PD-1^(+)细胞所占比例显著升高。抗PD-1封闭抗体处理对miR-150KO荷瘤小鼠的肿瘤生长具有明显抑制作用。结论:miR-150敲除通过提高T细胞中PD-1表达促进小鼠肺肿瘤生长,同时增强抗PD-1抗体对肿瘤的免疫治疗作用。

脓毒症患者外周血miR-125b、miR-150表达及其临床意义

目的 探讨脓毒症患者外周血微小核糖核酸-125b(miR-125b)、微小核糖核酸-150(miR-150)表达及其临床意义。方法 选取邢台市中心医院收治的103例脓毒症患者为研究组,另选取体检健康者82例为健康组,均测定外周血miR-125b、miR-150表达及血清白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平。对比研究组、健康组各指标水平,采用Pearson相关性分析法分析脓毒症患者miR-125b、miR-150表达与IL-6、CRP、PCT水平的关系;比较不同严重程度脓毒症患者及不同预后患者的miR-125b、miR-150表达;采用多因素Logistic回归分析法分析miR-125b、miR-150表达与预后的关系;通过受试者工作特征曲线分析miR-125b、miR-150表达对脓毒症预后的预测价值。结果 研究组外周血miR-125b表达与IL-6、CRP、PCT水平分别为(2.43±0.35)、(159.42±26.81)pg/mL、(115.47±20.38)mg/L、(10.57±2.03)ng/mL,均高于健康组(t=31.012、52.149、48.978、46.945,均P=0.000),miR-150表达(0.21±0.04)低于健康组(t=52.008,P=0.000);经Pearson相关性分析,脓毒症患者外周血miR-125b表达与IL-6(r=0.706,P=0.016)、CRP(r=0.711,P=0.013)、PCT(r=0.759,P=0.001)水平均呈正相关,miR-150与IL-6(r=-0.702,P=0.018)、CRP(r=-0.709,P=0.015)、PCT(r=-0.728,P=0.006)水平均呈负相关;脓毒症者外周血miR-125b表达(2.16±0.43)低于严重脓毒症者(2.82±0.27)(t=8.815,P=0.000),脓毒症者外周血miR-150表达(0.24±0.02)高于严重脓毒症者(0.16±0.03)(t=16.248,P=0.000);入院28 d生存者外周血miR-125b表达(2.25±0.41)低于死亡者(3.13±0.36)(t=8.982,P=0.000),生存者外周血miR-150表达(0.23±0.04)高于死亡者(0.13±0.02)(t=11.078,P=0.000);年龄、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、疾病严重程度及外周血miR-125b表达均是脓毒症患者预后的危险因素(OR=2.438、2.689、2.866、2.824,P=0.036、0.012、0.000、0.005),miR-150表达是其保护因素(OR=0.390,P=0.003);外周血miR-125b、miR-150表达预测脓毒症预后的最佳截断点分别为2.854、0.179,灵敏度分别为76.19%、80.95%,特异度分别为79.27%、75.61%,曲线下面积分别为0.861、0.843。结论 与健康人群比较,脓毒症患者外周血miR-125b表达升高,而miR-150表达降低,且miR-125b、miR-150表达均与炎症因子水平、疾病严重程度及预后相关,并对预后具有一定的预测价值,可作为临床判断病情严重程度及预后的指标。

乳腺癌患者组织中miR-150-5p表达及临床意义

目的探讨乳腺癌患者组织中微小RNA-150-5p(miR-150-5p)表达及临床意义。方法前瞻性选取河南省洛阳市妇幼保健院2019年12月至2022年5月收治86例乳腺癌患者为对象,收集患者年龄、乳腺癌家族遗传史、肿瘤直径大小、疾病类型等一般资料,并测量所有患者癌组织与癌旁正常组织miR-150-5p水平。结果乳腺癌患者癌组织miR-150-5p水平高于癌旁正常组织(P<0.001)。miR-150-5p高水平组肿瘤直径大小、Ⅲ~Ⅳ期占比高于低水平组(P<0.05)。86例乳腺癌患者中共发生复发转移11例(12.79%),其中miR-150-5p低水平组3例,高水平组8例。logistic回归分析结果显示,miR-150-5p水平与乳腺癌复发转移有关(P<0.05)。结论乳腺癌患者癌组织中miR-150-5p呈异常高表达,可能是患者预后不良的指标之一。miR-150-5p水平与肿瘤直径、分期有关。

LncRNA FAM83A-AS1通过miR-150/HMGA2轴对视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)序列相似家族83成员A-反义核糖核酸1(FAM83AAS1)在视网膜母细胞瘤(RB)细胞中的作用及其潜在的分子机制。方法体外培养RB细胞,将Vector、pcDNA-FAM83A-AS1、NC-siRNA、FAM83A-AS1-siRNA分别转染至细胞中(依次为pcDNA-FAm83A-AS1组、NC-siRNA组、FAm83A-AS1-siRNA组),检测RB细胞中FAM83A-AS1的表达、RB细胞增殖能力、凋亡率。生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验预测和验证FAM83A-AS1与miR-150以及miR-150与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的靶向关系。RT-qPCR检测RB细胞中miR-150、HMGA2 mRNA的表达;Western blot检测RB细胞中HMGA2蛋白的表达;MTT实验和流式细胞术检测转染后RB细胞增殖和凋亡能力。结果pcDNA-FAM83A-AS1组细胞中FAM83A-AS1的表达显著高于Vector组,低于NC-siRNA组(P<0.05)。pcDNA-FAM83A-AS1组较Vector组的细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。FAM83AAS1-siRNA组较NC-siRNA组的细胞增殖能力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。miR-150 mimic可显著抑制RB细胞增殖能力,促进细胞凋亡。而pcDNA-HMGA2可显著逆转miR-150 mimic对RB细胞增殖和凋亡的作用。结论敲低lncRNA FAM83A-AS1通过调控miR-150/HMGA2轴抑制RB细胞增殖,促进细胞凋亡。

miR-150-5p对脑小血管病大鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响

目的 分析miR-150-5p对脑小血管病(CSVD)大鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响。方法 56只雄性大鼠14只作为正常组并不做处理,剩余42只建立CSVD模型,建模中途死亡6只。将建模成功的大鼠随机分为模型组、上调组、下调组,每组8只,做miR-150-5p转染,鉴定miR-150-5p转染率、氧化应激指标水平、神经凋亡率和乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果 与正常组、模型组相比,上调组miR-150-5p表达量升高,下调组miR-150-5p表达量降低,具有统计学差异(P<0.05),证明miR-150-5p转染成功。与正常组相比,模型组、下调组细胞凋亡率、LDH释放率、丙二醛(MDA)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,上调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平降低,SOD水平升高,具有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,下调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平升高,SOD水平降低,上调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平降低,SOD水平升高,具有统计学差异(P<0.05);与上调组相比,下调组细胞凋亡率、LDH释放率、MDA水平升高,SOD水平降低,具有统计学差异(P<0.05)。结论 miR-150-5p可能作用于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路,影响CSVD大鼠脑微血管内皮细胞凋亡。

LncRNA DSCAM-AS1调节miR-150-5p/BRAF轴对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨lncRNA DSCAM-AS1调节miR-150-5p/BRAF轴对甲状腺癌(TC)细胞恶性生物学行为的影响。方法qRT-PCR检测TC细胞中DSCAM-AS1表达;FISH、pull down实验、双荧光素酶报告基因实验验证DSCAM-AS1、BRAF与miR-150-5p靶向调控关系;检测SW579细胞增殖、迁移和侵袭,Western blot检测BRAF、E-cadherin、vimentin蛋白表达;小鼠体内肿瘤形成实验验证DSCAM-AS1对TC肿瘤生长的影响。结果DSCAM-AS1在TC细胞中高表达(P<0.05);DSCAM-AS1、BRAF与miR-150-5p存在靶向调控关系;抑制DSCAM-AS1表达或过表达miR-150-5p可显著抑制SW579细胞增殖、迁移、侵袭及EMT(P<0.05);抑制miR-150-5p表达或过表达BRAF可逆转抑制DSCAM-AS1表达或过表达miR-150-5p对SW579细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);体内实验显示,抑制DSCAM-AS1表达可显著抑制小鼠移植瘤的生长(P<0.05)。结论DSCAM-AS1在TC细胞中上调表达,抑制DSCAM-AS1表达可通过调节miR-150-5p/BRAF信号轴,抑制TC恶性进展。

阿替普酶联合抗血小板聚集治疗可影响急性缺血性脑卒中患者miR-150-5p及miR-199a表达水平

目的:观察阿替普酶联合抗血小板聚集治疗对急性缺血性脑卒中(AIS)患者miR-150-5p及miR-199a表达的影响。方法:选取150例AIS患者,随机分为对照组和观察组,每组75例。对照组予阿替普酶溶栓治疗,观察组在对照组的基础上联合抗血小板聚集治疗。比较2组美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、改良Rankin评分量表(mRS)、Barthel指数、miR-150-5p及miR-199a表达变化情况。比较2组患者早期神经功能恶化的发生率。结果:2组患者治疗14 d后Barthel指数较治疗前升高,NIHSS、mRS评分较治疗前降低(P均<0.05)。与对照组比较,观察组治疗14 d后的临床总有效率、Barthel指数、血清miR-150-5p及miR-199a表达更高,而NIHSS、mRS评分更低(P均<0.05)。2组患者早期(1周内)神经功能恶化总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿替普酶联合抗血小板聚集治疗AIS患者,可减轻神经功能损害,提高患者生活自理能力,还可上调miR-150-5p及miR-199a表达。

miR-150靶向β-catenin调控人牙周膜干细胞成骨分化能力的机制研究

目的 体外研究miR-150对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs成骨分化能力的调控作用及其分子机制。方法 分离培养hPDLSCs并进行成骨向分化诱导,q-PCR检测miR-150及成骨相关基因(RUNX2、OCN、OPN、ALP)的表达;hPDLSCs中转染miR-150沉默(inhibitor)及过表达模拟物(mimics),q-PCR检测miR-150和β-catenin的表达,茜素红染色实验检测hPDLSCs成骨分化能力的变化;qPCR及Western blot检测沉默及过表达miR-150后β-catenin表达水平的变化;双荧光素酶报告基因实验验证miR-150的潜在靶基因;在hPDLSCs中过表达miR-150并加入SKL2001(Wnt/β-catenin通路激动剂),检测β-catenin表达及hPDLSCs成骨分化能力的变化。结果 RUNX2、OCN、OPN、ALP基因在hPDLSCs成骨向分化诱导后表达明显上调,而miR-150的表达则显著下调;q-PCR及茜素红染色结果显示抑制miR-150可明显上调成骨相关基因的表达并促进hPDLSCs成骨向分化,而过表达miR-150则结果相反;生物信息学分析显示β-catenin为miR-150的潜在靶基因,双荧光素酶报告进一步验证β-catenin为miR-150的靶基因;而SKL2001激活β-catenin后可逆转miR-150 mimics对hPDLSCs成骨分化的抑制作用。结论 miR-150可靶向β-catenin调控hPDLSCs的成骨向分化能力,提示miR-150在牙周组织工程损伤修复中发挥重要作用。

寻常型银屑病皮损中CXCL8、miR-150表达与病情严重程度相关

目的探讨寻常型银屑病患者皮损组织中CXC趋化因子配体8(CXCL8)、miR-150表达与病情严重程度的关系。方法选取2020年1月至2021年5月在南阳市第一人民医院接受治疗的80例寻常型银屑病患者皮损组织作为研究对象,并选其皮损旁正常组织作为对照,用银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)对银屑病患者病情进行分级,用免疫组化法检测CXCL8蛋白的表达,用RT-qPCR检测miR-150表达,用Western blot检测CXCL8蛋白表达,进一步分析CXCL8蛋白、miR-150表达水平与病情严重程度的相关性。结果寻常型银屑病患者皮损组织中CXCL8 mRNA水平高于正常组织(P<0.05),miR-150水平低于正常组织(P<0.05);患者皮损组织中CXCL8蛋白表达率为68.75%,明显高于正常组织的37.50%(P<0.05);在患者皮损组织中CXCL8蛋白的表达水平明显高于正常组织(P<0.05);miR-150水平随着病情的加重逐渐降低(P<0.05),CXCL8蛋白水平随着病情的加重逐渐升高(P<0.05);Pearson结果显示,寻常型银屑病患者miR-150水平与CXCL8蛋白水平及PASI评分之间均呈负相关(r=-0.467、-0.475,P<0.05),CXCL8蛋白水平与PASI评分之间呈正相关(r=0.424,P<0.05)。结论寻常型银屑病患者miR-150表达降低,CXCL8表达升高,二者均与患者病情严重程度相关。

miR-150靶向AOC3调控绵羊前体脂肪细胞分化的研究

旨在通过探究miR-150与AOC3的靶标关系,揭示miR-150在广灵大尾羊前体脂肪细胞分化过程中的作用机制。本研究以3只5日龄发育正常且健康的广灵大尾羊公羊为试验材料,采用qPCR方法检测广灵大尾羊皮下、肾周和尾部脂肪组织中miR-150的表达量;采集广灵大尾羊的尾部脂肪组织并分离绵羊前体脂肪细胞;通过细胞免疫荧光技术鉴定细胞纯度;利用生物信息学软件预测和双荧光素酶报告试验验证miR-150与AOC3的靶标关系;转染miR-150 mimics和inhibitors并检测AOC3和成脂分化标志基因的表达情况;构建并转染绵羊AOC3基因的过表达和干扰载体至绵羊前体脂肪细胞,利用qPCR和Western blotting检测miR-150与AOC3在广灵大尾羊前体脂肪细胞分化中的表达规律;油红O染色检测成脂能力,上述试验方法均设立3个生物学重复。结果表明,miR-150在3个不同部位脂肪组织中尾部脂肪表达量最高,差异极显著(P<0.001)。与对照组相比,过表达miR-150后,AOC3基因和成脂标志基因的表达显著下调(P<0.05),且脂滴生成减少,抑制了绵羊前体脂肪细胞分化;抑制miR-150后,结果相反。miR-150与AOC3的3′-UTR存在结合位点,miR-150极显著降低了AOC3野生型的相对荧光活性(P<0.001)。过表达AOC3后,成脂分化标志基因的表达极显著上调(P<0.01),脂肪细胞产生了更多脂滴,AOC3促进了绵羊前体脂肪的分化;干扰AOC3后,结果相反。本研究表明,miR-150与AOC3的3′-UTR存在结合位点,在绵羊前体脂肪细胞分化的过程中,miR-150与AOC3的表达量呈负相关性,miR-150通过靶向AOC3抑制脂肪分化,研究结果为microRNAs(miRNAs)在分子水平上的研究提供了一定的理论依据。

尿沉渣miR-150-5p在IgA肾病无创诊断中的价值

背景IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是一种发病率高且呈进展性的疾病,现主要确诊手段为肾穿刺活检,临床诊疗中需要研究无创且具有特异性的IgAN诊断标志物。目的检测IgAN患者尿沉渣miR-150-5p表达水平并评估其诊断IgAN的价值。方法根据已经发表的3项有关IgAN尿沉渣miRNA芯片的研究数据,筛选IgAN患者与正常人群之间差异性表达的miRNA,最终确定miR-150-5p在IgAN患者与正常人群中表达差异显著且趋势一致,是正常人群的(30.22~598.34)倍。为了验证芯片筛选的准确性,选取解放军总医院第一医学中心2018年10月-2019年2月的30例IgAN患者和30例正常人进行了小样本RT-PCR验证。为进一步明确其是否具有疾病特异性,选取解放军总医院第一医学中心2019年3月-2022年5月的144例IgAN患者、84例其他肾病患者[60例膜性肾病(membranous nephropathy,MN)、8例微小病变型肾病(minimal change disease,MCD)、16例局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glomerular sclerosis,FSGS)]、67例正常人进行了较大样本的验证,比较miR-150-5p在IgAN组与不同疾病对照组之间的差异表达。绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估差异性表达miRNA在无创诊断IgAN中的价值。结果在小样本验证研究中,RTPCR实验显示IgAN患者尿沉渣miR-150-5p与正常对照组相比显著升高[Md(IQR):25.632(5.868~61.523)vs 0.557(0.218~1.258),P<0.0001],与文献中芯片测量结果基本一致。在加入疾病对照组的较大样本研究中,IgAN组miR-150-5p表达水平显著高于疾病对照组[Md(IQR):12.606(3.939~34.431)vs 2.808(1.420~9.616),P<0.0001]。miR-150-5p在IgAN组中表达水平较MN组和FSGS组高(P<0.001),与MCD组之间差异无统计学意义(P=0.613)。miR-150-5p诊断IgAN的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.844,95%CI为0.804~0.885,最佳截断值为2.505,敏感度71.51%,特异度84.48%。结论miR-150-5p或可作为无创诊断IgAN的潜在标志物。

环状RNA-胞裂蛋白2/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1分子轴在重症急性胰腺炎中的作用及机制研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-胞裂蛋白2(SEPT2)/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)分子轴在重症急性胰腺炎(SAP)中的作用及机制。方法选取2019年12月至2021年12月赣南医学院第一附属医院收治的46例SAP患者作为重症组;并选取本院同期收治的41例轻症急性胰腺炎(MAP)患者作为轻症组;另选取本院同期35名健康体检者作为对照组。3组均采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定血清circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量,采用急性生理和慢性健康评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评估病情严重程度;采用重组慢病毒包装合成有效感染序列sh-SEPT2(干扰组)与过表达序列oe-SEPT2(过表达组)建立动物模型,采用酶联免疫吸附试验测定大鼠生化指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、D乳酸及二胺氧化酶(DAO)],采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1及细胞凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9 mRNA表达。比较3组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分,采用Pearson相关性分析SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分的相关性;比较干扰组与过表达组大鼠苏木精-伊红染色法(HE)结果、肠黏膜损伤评分、炎症因子水平及cir-cRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量。结果重症组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分均高于轻症组和对照组,且轻症组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性结果显示,SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分均呈正相关(r>0,P<0.05)。干扰组HE染色下胰岛细胞界限清晰,胰岛丰富,胞浆丰富,形态完整;过表达组大鼠胰岛细胞界限不清,胰岛数量较少,细胞形态不规则,细胞体积较大,边缘不齐;干扰组胰腺损伤评分为(2.58±0.16)分,低于过表达组的(3.95±0.53)分,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组IL-1β、IL-18、TNF-α、D乳酸及DAO水平均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1 mRNA表达及细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PARP-1通过靶向作用于circRNA-SEPT2/miR-150-5p参与SAP的发生与发展,抑制circRNA-SEPT2表达,可减轻SAP肠黏膜屏障损伤,能为SAP治疗提供新的靶点。

miR-150-5p与NCAPG的靶向关系及其对肝细胞肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的:探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)的靶向关系及其对肝细胞肝癌(HCC)细胞生物学功能的影响,为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。方法:通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照(mimic NC)组、miR-150-5p模拟物(miR-150-5p mimic)组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照(miR-150-5p mimic+ovNC)组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG(miR-150-5p mimic+ovNCAPG)组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平,5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测各组细胞EdU阳性率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性对照(agomiR-150-5p+ovNC)组和agomiR-150-5p+过表达NCAPG(agomiR-150-5p+ovNCAPG)组,Huh7细胞皮下成瘤,检测各组裸鼠肿瘤体积和质量。结果:双荧光素酶报告基因实验证实NCAPG是miR-150-5p的靶基因。与mimic NC组比较,miR-150-5p mimic组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);与miR-150-5p mimic+ovNC组比较,miR-150-5p mimic+ovNCAPG组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.05)。与agomiR-NC比较,agomiR-150-5p组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显减少(P<0.05);与agomiR-150-5p+ovNC组比较,agomiR-150-5p+ovNCAPG组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显增加(P<0.05)。结论:miR-150-5p通过靶向结合抑制NCAPG表达进而抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长,促进细胞凋亡。

miR-150靶向调控IGF2BP2对肝癌恶性表型的影响机制

目的本研究旨在阐明miR-150在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用和靶点。方法采用热图分析方法,从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas)数据库下载的6组HCC组织与邻近肝组织之间差异表达的miRNA。采用实时定量聚合酶链反应检测miR-150在HCC组织和细胞系中的表达;采用侵袭小室试验评估HCC细胞的增殖、侵袭和迁移潜能。此外,利用TargetScan软件用于预测miR-150的潜在靶标,并通过蛋白印迹(Western blotting)和荧光素酶法测定miR-150与其靶基因的关系。结果通过热图分析法,发现在HCC组织中有31个miRNA表达异常,其中miR-150表达差异最为显著,且与患者预后密切相关。细胞实验上,高表达miR-150可通过调节胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白2(recombinant insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)的表达显著降低人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论miR-150通过调控IGF2BP2抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,为HCC提供了新的治疗靶点。

右美托咪定调控miR-150-5p/P2X7受体轴减轻脑出血大鼠小胶质细胞活化

目的:探讨右美托咪定(DEX)对脑出血(ICH)大鼠小胶质细胞(MG)活化的影响以及对miR-150-5p/P2X7受体(P2X7R)轴的调控作用。方法:将大鼠分为假手术组(n=12)、模型组(n=63),建立ICH大鼠模型,DEX低(25μg/kg)和高剂量(50μg/kg)组、DEX(50μg/kg)+NC antagomir(20nmoL/L,5μL)组以及DEX(50μg/kg)+miR-150-5p antagomir(20nmoL/L,5μL)组,每组12只。腹腔注射,每日1次,每次0.2mL,连续给药7d。给药结束后24h,进行神经功能评分;分离血清,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α、IL-1β含量;分离出血区(海马CA2区)脑组织,检测脑组织含水量,HE染色观察组织病理变化,免疫荧光观察MG形态,qRT-PCR法检测miR-150-5p、P2X7R mRNA表达,Western blot法检测离子钙接头蛋白分子-1(Iba-1)、P2X7受体(P2X7R)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与P2X7R靶向关系。结果:与模型组比较,DEX低、高剂量组脑组织病理变化逐渐减轻,红细胞与炎性细胞浸润减轻,核固缩现象减少;MG数量明显减少,胞体变小;神经功能评分、脑组织中miR-150-5p表达明显升高(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β含量,脑组织含水量,脑组织中P2X7R mRNA和蛋白表达以及Iba-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与DEX高剂量组、DEX+NC antagomir组比较,DEX+miR-150-5p antagomir组可见大量红细胞和炎性细胞浸润,脑组织结构紊乱,细胞排列无序;MG数量显著增多,胞体变大;神经功能评分、脑组织中miR-150-5p表达均明显降低(P<0.05);血清中TNF-α、IL-1β含量,脑组织含水量,脑组织中P2X7R mRNA和蛋白表达以及Iba-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果表明P2X7R是miR-150-5p的下游靶基因。结论:DEX能够通过上调miR-150-5p、下调P2X7R表达抑制MG活化,在ICH中发挥保护作用。

外泌体miR-150-5p通过靶向调控p53促进肝细胞癌的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨外泌体miR-150-5p通过靶向调控p53对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制。方法 选取吉安市中心人民医院2019年1月至2022年12月收治的39例肝癌(HCC)患者癌组织及癌旁组织,采用差速离心法提取外泌体并鉴定,qRT-PCR检测肿瘤组织及外泌体中miR-150-5p和p53表达;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与p53的互作;培养人肝癌细胞株(HCCLM3),给予癌组织及癌旁组织分离提取的外泌体处理(ExoNor和ExoHCC),同时给予GW 4869抑制细胞本身分泌外泌体,激光共聚焦显微镜对外泌体与受体细胞结合内化进行追踪;同时采用脂质体3000向HCCLM3细胞转染miR-150-5p mimics和miR-150-5p inhibitor;Transwell检测肝癌细胞迁移及侵袭能力,CCK-8检测细胞增殖,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞miR-150-5p和p53表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和p53蛋白表达。结果 HCC组织中提取的外泌体miR-150-5p相对表达量明显高于邻近正常癌旁组织;与癌旁组织提取的外泌体相比,HCC细胞系HCCLM3能摄取肿瘤组织提取的外泌体miR-150-5p,从而增加细胞的增殖和迁移能力。外泌体能携带miR-150-5p并靶向负调控p53蛋白;共孵育ExoHCC或转染miR-150-5p mimics组HCCLM3细胞中N-cadherin表达较对照组明显降低,E-cadherin表达较对照组明显升高,而miR-150-5p inhibitor抑制了肿瘤的迁移和增殖能力,促进肿瘤细胞凋亡。结论 HCC细胞分泌的外泌体可被周围肿瘤细胞内吞;肝癌细胞分泌的外泌体及过表达肝癌细胞中的miR-150-5p可以靶向抑制周围细胞p53表达,增加细胞迁移及侵袭。

miR-150-5p靶向IGF2BP2抑制口腔鳞癌恶化的研究

目的探讨miR-150-5p调控口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用及作用机制。方法收集口腔鳞癌组织和癌旁正常组织,体外培养人口腔上皮胶质细胞系HOK和口腔鳞癌细胞系HN6、SCC-25和CAL-27,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time pCR,qRT-PCR)和western blot检测组织样本和细胞中miR-150-5p和胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)的表达。构建过表达miR-150-5p或沉默表达IGF2BP2的CAL-27细胞,采用Cell Counting Kit-8(CCK8)实验和EdU染色检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR-150-5p与IGF2BP2之间的靶向关系。功能拯救实验分析miR-150-5p/IGF2BP2轴在口腔鳞癌细胞生物学行为中的调控作用。结果口腔鳞癌组织和细胞中miR-150-5p低表达,而IGF2BP2 mRNA和蛋白高表达。与对照组比较,过表达miR-150-5p组和沉默IGF2BP2组细胞的增殖活性均降低,细胞凋亡率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞迁移和侵袭数目减少。在CAL-27细胞中miR-150-5p能够与IGF2BP2的3’UTR靶向结合。功能拯救实验显示,与miR-150-5p+pcDNA组比较,miR-150-5p+pcDNA-IGF2BP2组细胞增殖活性增强,细胞凋亡率降低,细胞划痕愈合率升高,细胞迁移和侵袭数目增多。结论miR-150-5p在口腔鳞癌中低表达,过表达miR-150-5p可能通过靶向抑制IGF2BP2基因表达,抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

miR-150-5p缓解肾小管上皮细胞-间质转化及纤维化的作用机制探讨

目的探究miR-150-5p对转化生长因子-β(TGF-β)诱导肾小管上皮细胞间质纤维化的作用及机制。方法利用TGF-β1诱导HK-2细胞构建肾间质纤维化HK-2细胞模型,通过RT-qPCR检测HK-2细胞中miR-150-5p的表达水平;构建的肾间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p mimic和inhabitor后,通过RT-qPCR和Western blot检测各组HK-2细胞中E-cadherin、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Vimentin和Snail的表达;通过RT-qPCR和ElISA分别检测各组细胞及培养液中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的表达;使用targetscan预测miR-150-5p靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验验证;构建的肾间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p mimic和pcDNA/β-catenin后,通过Western blot和ElISA检测各组细胞中I型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)和细胞纤连蛋白(FN)的表达。结果在TGF-β1诱导的HK-2细胞中miR-150-5p的表达显著降低(P<0.05);间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p mimic后,miR-150-5p的表达显著升高(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白表达也显著升高(P<0.05),α-SMA,Vimentin和Snail的mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05);间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p inhabitor后,结果与mimic相反。间质纤维化HK-2细胞转染miR-150-5p mimic后,Col-I、Col-Ⅲ和FN的表达水平显著降低(P<0.05);转染miR-150-5p inhabitor后,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的表达升高(P<0.05)。经双荧光素酶报告验证β-catenin是miR-150-5p的靶基因;间质纤维化HK-2细胞模型共同转染miR-150-5p和pcDNA/β-catenin后,细胞中Col-I,Col-Ⅲ和FN的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论miR-150-5p通过靶向β-catenin基因,调控TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮间质转化(EMT)过程和细胞外基质(ECM)的积累。

miR-150-5p在枸杞多糖缓解小鼠肾脏纤维化中的作用研究

目的探讨miR-150-5p在枸杞多糖(LBP)抑制小鼠肾脏纤维化过程中的作用。方法21只雌性的Balb/c小鼠随机分成假手术组(只暴露左侧输尿管,不结扎)、模型组(结扎左侧输尿管)和LBP干预组(在模型组的基础上灌胃0.1 mg/g LBP)。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胶原蛋白Ⅰ(Col-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)、纤连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化;通过RT-qPCR检测肾脏组织中miR-150-5p的表达;通过生物信息学数据库预测miR-150-5p的靶基因并用RT-qPCR进行验证。结果与假手术组相比,模型组小鼠肾脏湿重以及肾脏指数均显著减小,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN及α-SMA的mRNA表达水平显著升高,miR-150-5p的表达水平显著降低;LBP干预后,小鼠肾脏指数和肾脏湿重均有明显增加,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN及α-SMA的mRNA表达水平显著降低,miR-150-5p的表达水平显著上升。通过Targetscan数据库预测miR-150-5p的靶基因,筛选出与肝脏纤维化相关的靶基因总共有2个,分别是Mtmr1和Prickle。验证靶基因Mtmr1和Prickle mRNA的表达情况,结果表明在模型组小鼠肝脏组织中Mtmr1和Prickle的表达显著增加;在LBP干预组小鼠肝脏组织中Mtmr1的表达水平明显降低,Prickle没有显著改变。结论LBP能够调节miR-150-5p的表达并改善肾脏纤维化的作用,其机制可能是通过靶向Mtmr1实现的。