试验旨在克隆羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌HN07株ompW基因序列(登录号:CP007040.1),使用DNAMAN 5.0软件设计1对引物,选取高保真酶PrimeSTARMax DNA Polymerase进行PCR反应...试验旨在克隆羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌HN07株ompW基因序列(登录号:CP007040.1),使用DNAMAN 5.0软件设计1对引物,选取高保真酶PrimeSTARMax DNA Polymerase进行PCR反应获取目的基因片段,并对ompW基因的核苷酸序列及预测的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明,PCR扩增产物约为615bp,编码204个氨基酸。核苷酸同源性比对分析显示,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源、牛源、禽源多杀性巴氏杆菌同源性较高,而与兔源同源性较低。系统进化树结果发现,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源多杀性巴氏杆菌ompW基因亲缘关系最近。经生物信息学分析发现,ompW蛋白分子式为C1007H1567N257O283S3,分子质量为21.90ku,理论等电点(pI)为9.16,属碱性蛋白质,疏水指数为96.57,总平均疏水性(GRAVY)为0.173(>0),属于疏水类蛋白;前21位氨基酸为信号肽,第5-27位氨基酸区域存在1个跨膜区,存在N-糖基化位点及磷酸化位点,不存在O-糖基化位点,具有多个B细胞、CTL细胞及Th细胞抗原表位;二级结构的α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占17.65%、35.29%、3.92%和43.14%;三级结构是呈β-桶状的单聚体,隶属于外膜蛋白家族成员之一。本研究结果为进一步阐明羊源多杀性巴氏杆菌侵染宿主过程中自身的抗宿主免疫胁迫机制及疫苗的开发与研制提供了理论依据。展开更多
目的利用生物信息学分析方法预测布鲁氏菌外膜蛋白OmpW家族蛋白(OmpW family protein)的理化性质、信号肽、蛋白结构和抗原表位,为布鲁氏病基因疫苗的研制提供理论基础。方法从GenBank中获取OmpW家族蛋白的氨基酸序列,运用在线软件PortP...目的利用生物信息学分析方法预测布鲁氏菌外膜蛋白OmpW家族蛋白(OmpW family protein)的理化性质、信号肽、蛋白结构和抗原表位,为布鲁氏病基因疫苗的研制提供理论基础。方法从GenBank中获取OmpW家族蛋白的氨基酸序列,运用在线软件PortParam分析OmpW家族蛋白的理化性质;采用UCL在线分析工具预测OmpW家族蛋白的二级结构,SWISS-MODEL在线分析工具预测其三级结构。结果利用在线软件预测布鲁氏菌外膜蛋白OmpW分子式为C1136H1717N281O321,脂肪族指数为91.63,理论蛋白等电点(pI值)为5.67,原子总数为3457,其氨基酸序列Ala(A)占12.3%、Gly(G)占10.6%。正电荷残基(Arg+Lys)、负电荷残基(Asp+Glu)总数分别为16和18,其不稳定系数为23.01。该蛋白为稳定蛋白,亲水性系数为GRAVY为0.143。结论OmpW有一个跨膜结构域,存在糖基化位点和磷酸化位点,具有多个抗原表位。二级结构有链、螺旋和卷曲;三级结构为单聚体,属于外膜蛋白家族。本研究结果为进一步研究布鲁氏菌外膜蛋白OmpW家族蛋白及疫苗的开发与研制提供了理论依据。展开更多
Gram-negative Vibrio parahaemolyticus is a common pathogen in humans and marine animals. The outer membrane protein of bacteria plays an important role in the infection and pathogenicity to the host. Thus, the outer m...Gram-negative Vibrio parahaemolyticus is a common pathogen in humans and marine animals. The outer membrane protein of bacteria plays an important role in the infection and pathogenicity to the host. Thus, the outer membrane proteins are an ideal target for vaccines. We amplified a complete outer membrane protein gene (ompW) from V. parahaemolyticus ATCC 17802. We then cloned and expressed the gene into Escherichia coli BL21 (DE3) cells. The gene coded for a protein that was 42.78 kDa. We purified the protein using Ni-NTA affinity chromatography and Anti-His antibody Western blotting, respectively. Our results provide a basis for future application of the OmpW protein as a vaccine candidate against infection by V. parahaemolyticus. In addition, the purified OmpW protein can be used for further functional and structural studies.展开更多
文摘试验旨在克隆羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌HN07株ompW基因序列(登录号:CP007040.1),使用DNAMAN 5.0软件设计1对引物,选取高保真酶PrimeSTARMax DNA Polymerase进行PCR反应获取目的基因片段,并对ompW基因的核苷酸序列及预测的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明,PCR扩增产物约为615bp,编码204个氨基酸。核苷酸同源性比对分析显示,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源、牛源、禽源多杀性巴氏杆菌同源性较高,而与兔源同源性较低。系统进化树结果发现,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源多杀性巴氏杆菌ompW基因亲缘关系最近。经生物信息学分析发现,ompW蛋白分子式为C1007H1567N257O283S3,分子质量为21.90ku,理论等电点(pI)为9.16,属碱性蛋白质,疏水指数为96.57,总平均疏水性(GRAVY)为0.173(>0),属于疏水类蛋白;前21位氨基酸为信号肽,第5-27位氨基酸区域存在1个跨膜区,存在N-糖基化位点及磷酸化位点,不存在O-糖基化位点,具有多个B细胞、CTL细胞及Th细胞抗原表位;二级结构的α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占17.65%、35.29%、3.92%和43.14%;三级结构是呈β-桶状的单聚体,隶属于外膜蛋白家族成员之一。本研究结果为进一步阐明羊源多杀性巴氏杆菌侵染宿主过程中自身的抗宿主免疫胁迫机制及疫苗的开发与研制提供了理论依据。
文摘目的利用生物信息学分析方法预测布鲁氏菌外膜蛋白OmpW家族蛋白(OmpW family protein)的理化性质、信号肽、蛋白结构和抗原表位,为布鲁氏病基因疫苗的研制提供理论基础。方法从GenBank中获取OmpW家族蛋白的氨基酸序列,运用在线软件PortParam分析OmpW家族蛋白的理化性质;采用UCL在线分析工具预测OmpW家族蛋白的二级结构,SWISS-MODEL在线分析工具预测其三级结构。结果利用在线软件预测布鲁氏菌外膜蛋白OmpW分子式为C1136H1717N281O321,脂肪族指数为91.63,理论蛋白等电点(pI值)为5.67,原子总数为3457,其氨基酸序列Ala(A)占12.3%、Gly(G)占10.6%。正电荷残基(Arg+Lys)、负电荷残基(Asp+Glu)总数分别为16和18,其不稳定系数为23.01。该蛋白为稳定蛋白,亲水性系数为GRAVY为0.143。结论OmpW有一个跨膜结构域,存在糖基化位点和磷酸化位点,具有多个抗原表位。二级结构有链、螺旋和卷曲;三级结构为单聚体,属于外膜蛋白家族。本研究结果为进一步研究布鲁氏菌外膜蛋白OmpW家族蛋白及疫苗的开发与研制提供了理论依据。
基金Supported by the Key Laboratory Foundation of the Educational Department of Liaoning Province (No. 2009S024)the Dalian Municipal Government of China (No. 2007B11NC069)the Grant of Dalian Ocean University (No. SY2007005)
文摘Gram-negative Vibrio parahaemolyticus is a common pathogen in humans and marine animals. The outer membrane protein of bacteria plays an important role in the infection and pathogenicity to the host. Thus, the outer membrane proteins are an ideal target for vaccines. We amplified a complete outer membrane protein gene (ompW) from V. parahaemolyticus ATCC 17802. We then cloned and expressed the gene into Escherichia coli BL21 (DE3) cells. The gene coded for a protein that was 42.78 kDa. We purified the protein using Ni-NTA affinity chromatography and Anti-His antibody Western blotting, respectively. Our results provide a basis for future application of the OmpW protein as a vaccine candidate against infection by V. parahaemolyticus. In addition, the purified OmpW protein can be used for further functional and structural studies.