^(188)Re间接标记单克隆抗体的研究

采用先标记后偶联的方法 ,以NHS -MAG3 为双功能连接剂 ,研究了用188Re标记单克隆抗体的各种实验条件 ,得到了最佳标记方法和偶联方法。标记抗体188Re -NHS -MAG3 -IgG体外稳定性良好。完成了188Re -NHS -MAG3 -CL3在小鼠体内的生物分布实验 ,结果表明该配合物在体内稳定性良好。

^(188)Re─—一个有希望的治疗用放射性核素

综述了^（１８８）Ｒｅ－高铼酸钠的物理化学性质、核性质和体内生物学行为；^（１８８）Ｗ－^（１８８）Ｒｅ发生器的制备；^（１８８）Ｒｅ标记化学及目前^（１８８）Ｒｅ及其标记化合物在肿瘤治疗、关节滑膜切除和防止动脉血管术后再狭窄等方面的临床研究最新进展。

^(188)Re-TCTMP的合成及在小鼠体内的分布

合成了氮杂环甲撑膦酸配体TCTMP(1,4,8,11 四氮杂环十四烷 1,4,8,11 四甲基膦酸),研究了亚锡还原下188Re TCTMP的制备条件,并探索了该配合物的体外稳定性及在正常小鼠体内分布。结果表明,pH=2,SnCl2量为0 8～1 6mg,配体量为50mg时,可以制得标记率大于95%的配合物188Re TCTMP;配合物具有很高的体外稳定性,室温下放置8d,标记率仍不低于95%。小鼠体内分布表明,配合物很快为小鼠骨骼摄取并保留较长时间;与188Re HEDP(1 羟基亚乙基二膦酸)相比,188Re TCTMP表现出更低的非靶组织摄取。因此,188Re TCTMP有望取代186,188Re HEDP,成为新型的缓解治疗骨肿瘤疼痛的放射性药物。

磁性纳米微粒的^(188)Re标记

将组氨酸固载到氨基化磁性纳米微粒表面。以188Re的面式结构三羰基配合物fac-[188Re(CO)3(H2O)3]+为放射性标记前体,对磁性纳米微粒进行了标记。固载有组氨酸的磁性纳米微粒在70℃、pH6.6下反应40min,标记率为(91.4±0.3)%,并且标记物在37℃的小牛血清中有良好的体外稳定性,72h后放射性仍保留80%以上。

^(188)Re—HEDP的制备研究

为了研制一种新型的骨转移疼痛缓解治疗剂－(188)Re－HEDP，合成了配体HEDP，产率大于90％，并用自制(188)W－(188)Re发生器产生的(188)Re标记HEDP。系统地研究了HEDP、SnCl2和VitC的量，溶液pH值，反应温度和反应时间对标记产额的影响。标记物经HPLC和PC检测，放化纯度及标记率大于95％。在体外12h稳定。

医用^(188)W-^(188)Re发生器的制备

采用酸性Ａｌ２Ｏ３为吸咐剂制成医用１８８Ｗ－１８８Ｒｅ发生器。以生理盐水或生理盐水添加抗坏血酸为淋洗剂，并以真空快速淋洗，发生器在３个月使用期内，淋洗效率达７０％以上，１８８Ｗ的穿透率小于１０－４％，１８８Ｒｅ放射性核纯度和放射化学纯度均大于９９％。

^(188)Re诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

采用MTT法、光镜、电镜、流式细胞仪和免疫组化方法研究了^(188)Re诱导三种肿瘤细胞凋亡的形态学变化、剂量时间效应关系以及凋亡相关基因Bcl-2和Bax在其中的表达情况。结果表明:^(188)Re对三种肿瘤细胞有明显的杀伤效应,能诱导其产生凋亡的形态学变化;并且随着浓度的增大和时间的延长,凋亡率增加,Bcl-2表达减弱,Bax表达增强,二者比值下降;细胞阻滞于G_2/M期;三种肿瘤细胞对^(188)Re的敏感性由高到低依次为PC-3细胞、ER-75-30细胞、A549细胞。

有临床应用意义的^(188)W/^(188)Re发生器的研制

对18 8 W / 188Re发生器的吸附条件及装柱工艺等进行了研究 ,确定了最佳的吸附条件及吸附容量等重要参数 ,制备了以酸性氧化铝为吸附剂的医用188W / 188Re发生器 ( 7 4 0GBq) ,可用生理盐水淋洗得到188Re。188Re的淋洗效率在 3个月之内大于 70 % ,188W的漏穿率小于 10 - 4% ,核纯度和放射化学纯度均大于 99%。

^(188)Re-HEDP的制备和初步动物实验

用188W／188Re发生器淋洗液制备了骨肿瘤治疗剂188Re－HEDP。188Re－HEDP的最佳标记条件为：5mgHEDP，2.0mgSnCl2和1mgVc。在pH2．0的条件下，标记率大于95％，其体外12h内稳定性良好。在制备188Re－HEDP时加入辅剂，注射后4h，小鼠股骨摄取为（7.86±1．62）％ID／g；而对照组仅有（1．92±0.61）％ID／g（P＜0.01）。兔全身显像清晰，说明188Re－HEDP是一个很有前途的骨肿瘤治疗剂。

三羰基铼[^(188)Re]的放射化学合成

合成了化合物[N(Et)4]2[Re(CO)3Br3],并用IR,ICPMS,元素分析等方法对化合物进行了表征。分析了此化合物溶于水后,阴离子部分的3个Br-可定量地被3个H2O分子取代,得到前体化合物fac[Re(CO)3(H2O)3]+。同时合成了放射性前体化合物fac[188Re(CO)3(H2O)3]+,放化产率约为80%,SepPak分离后,放化纯度大于95%。通过HPLC分析比较了这两个前体,确定了放化前体fac[188Re(CO)3(HO)]+的结构。

Lanreotide的^(188)Re标记及其生物分布

以氯化亚锡为还原剂、酒石酸钠为转换络合剂,用188Re直接标记了Lanreotide;并观察了标记物在动物体内的分布。结果表明,标记反应的最佳条件是:10μgLanreotide、1.5mg酒石酸钠、1.0mg氯化亚锡和100μL(74MBq)188ReO4-溶液,调反应液pH2～3、60℃下反应40min,标记率为88%～94%;标记物经Sep-PakC18柱纯化,放化纯度大于95%;标记物的体外稳定性较差,但加入一定量的Vc可以提高其稳定性;动物实验表明,188Re-lanreotide在肠和肺中的摄取量较高、血液清除速度较快,并经肝脏代谢。

^(188)Re诱导乳腺癌ER-75-30细胞凋亡及其与bcl-2、bax基因表达的研究

目的 研究放射性核素188铼 (188Re)诱导乳腺癌ER 75 3 0细胞凋亡及其与bcl 2和bax基因表达的关系。方法 应用光镜、电镜、流式细胞仪和免疫组化图像分析技术 ,检测不同浓度188Re作用于体外培养的乳腺癌ER 75 3 0细胞后 ,不同时间点诱导细胞凋亡情况及其与bcl 2和bax基因表达情况。结果 188Re能诱导乳腺癌ER 75 3 0细胞发生凋亡形态学变化 ,并且随着188Re浓度增大和作用时间延长 ,凋亡率增加 ,bcl 2表达减弱 ,bax表达增强。结论 188Re能诱导乳腺癌ER 75 3 0细胞凋亡且具有浓度、时间和周期依赖性 ,bcl

^(188)Re-HEDP治疗转移性骨肿瘤疼痛的临床价值

目的 探讨188Re -HEDP(188铼 - 1-羟基亚乙基二瞵酸盐 )治疗转移性骨肿瘤疼痛的临床价值。方法用188W - 188Re发生器淋洗的188Re示踪剂制备188Re -HEDP ,38例癌骨转移患者用188Re -HEDP治疗 ,观察其疗效。结果 38例经188Re -HEDP治疗后骨痛消失 12例 (31.6 % ) ,骨痛明显减轻 19例 (5 0 % ) ,止痛总有效率为83.7% ;治疗后骨转移灶完全消失 1例 (2 .6 % ) ,转移灶减少或缩小在 5 0 %以上 3例 (7.9% ) ,减少或缩小在 2 5 %以上 5例 (13.2 % ) ,转移灶消失或缩小的总有效率为 2 3.7%。结论 188Re-HEDP对恶性肿瘤多发性骨转移所致疼痛有明显疗效 。

^(188)W-^(188)Re发生器的研制

以酸性氧化铝为吸附剂，制备了一个１１８ＭＢｑ的１８８Ｗ－１８８Ｒｅ发生器，并对发生器性能进行了为期４个月的检测。结果表明，１８８Ｒｅ的淋洗产额在８０％—９０％之间，１８８Ｗ的穿透率约为１．０×１０－４％。由于采用了较大高径比的交换柱，使１８８Ｒｅ的放射性比活度较高，能满足用于放射免疫治疗研究的抗肿瘤单克隆抗体标记的要求。

^(188)Re直接标记抗体方法研究

以2-巯基乙醇作为抗体的还原剂,葡萄糖酸钠作为中间弱配体,在pH5.0的条件下,以SnCl2快速还原188ReO4-,进行了单克隆抗体IgG的直接标记。探讨了影响标记率的因素。结果显示,优化后的标记条件为pH5.0,室温下标记3 h,SnCl2用量2.66μmol,葡萄糖酸钠用量80μmol。该方法操作步骤简单方便,标记率较高,为94.4%±0.7%,标记物不需分离纯化,且有良好的体外稳定性,室温下可稳定保存8 h。

^(188)Re-NEPTDD的制备及生物分布研究

在首次合成NEPTDD(2,2,9,9-四甲基-4,7-二氮-4-乙撑哌啶-1,10-二硫癸烷)的基础上,采用SnCl2作还原剂制备了Re-NEPTDD。研究了Re-NEPTDD的生理盐水溶液通过尾静脉注射后在小鼠体内的生物分布188188及该配合物的碘化油溶液通过肝动脉灌注后在大白兔体内的生物分布;用SPECT扫描得出配合物的碘化油溶液通过肝动脉灌注后的大白兔全身显像。实验结果表明,188Re-NEPTDD具有理想的肝摄取,肝部的摄取和滞留较为主要,肝部显像清晰,非靶组织(特别是肺)的摄取和滞留低。

^(188)Re标记锡硫混悬液的制备及初步动物实验

１８８Ｒｅ标记锡硫混悬液经两步制备得到。先用１８８Ｒｅ的高铼酸盐与疏代硫酸钠溶液在明胶及酸性条件下加入氯化亚锡得到酸性的１８８Ｒｅ标记混悬液，然后调ｐＨ至中性而制得１８８Ｒｅ标记锡硫混悬液。混悬液的颗粒度主要为２—５ｕｍ，放化纯度大于９５％，体内、体外稳定性良好。动物实验表明，该混悬液对荷人脑胶质瘤裸鼠的抑瘤率达９０％。

^(188)Re-DTPA的制备及生物分布研究

以SnCl2·2H2O为还原剂,还原188ReO-4并与DTPA直接配合获得188Re DTPA,优化了标记反应条件;对188Re DTPA和Na188ReO4在正常小鼠体内分布进行了比较。实验结果表明,在最佳标记条件下,188Re DT PA的标记率大于95%;标记物体外稳定,经生理盐水稀释后,其稳定性下降。188Re DTPA在小鼠体内血液清除快,在甲状腺、胃及其它组织中的摄取率明显低于Na188ReO4,主要经肾脏通过尿液排出体外。

^(188)Re-HEDTMP在羟基磷灰石上的吸附效应

在制备188Re-HEDTMP的基础上,研究了吸附时间、反应温度、配体羟乙基乙二胺三亚甲基膦酸(HEDTMP)用量、pH等因素对配合物在羟基磷灰石(HA)上吸附的影响。结果表明,吸附时间t=10min,n(HEDTMP)∶n(Re)=50∶1,pH=1.5时,可以得到最佳吸附结果,温度对吸附几乎没有影响;吸附产物体外稳定性较好。

^(188)Re-NEMMPTDD的制备及生物分布研究

在合成新配体NEMMPTDD(2,2,9,9 四甲基 4,7 二氮 4 乙撑 (3,5 二甲基)哌啶 1,10 二硫癸烷)的基础上,以SnCl2 作还原剂制备了188Re NEMMPTDD。生物分布研究表明,该配合物的碘化油溶液具有较理想的肝摄取和滞留,非靶组织的摄取和滞留相对较低,配合物主要通过肾和胃肠代谢。