表达人自身抗原SSA/Ro60重组体的构建及鉴定

目的 :构建表达人自身抗原SSA/Ro6 0的重组体 ,为研究自身免疫病中的抗原抗体作用提供物质基础。方法 :采用逆转录 PCR技术克隆自身抗原SSA/Ro6 0cDNA ,定向插入表达载体PGEX 2T ,并经酶切电泳 ,DNA测序鉴定分析。结果 :经鉴定 ,证明成功构建了表达人自身抗原SSA/Ro6 0的重组体。结论 :SSA/Ro6 0表达型重组体可用于自身抗原SSA/Ro6 0的大量生产并用于诊断。

抗SSA/Ro抗体的检测方法比较

综合比较了四种检测抗SSA/Ro抗体方法的敏感性、特异性及阳性检出率 ,得出IBT法与ID法相结合是比较实用、又能显著提高检出率的理想方法。

自身抗原SSA/Ro-52kD抗原优势表位分析

探讨自身抗原ＳＳＡ／Ｒｏ－５２ｋＤ的抗原优势表位，为疾病机制的研究提供依据，根据计算机软件进行的蛋白质序列结构分析。采用ＰＣＲ法克隆自身抗原ＳＳＡ／Ｒｏ－５２ｋＤ多肽片段的ｃＤＮＡ，定向插入表达载体ＰＧＥＸ－５Ｘ－１，并且导入大肠杆菌中表达重组融合蛋白，用ＧＳＴ亲和层析柱进行纯化，经免疫印迹法与病人阳性血清进行反应，结果表明片段Ｒｏ５２３具有较强的抗原性。

红斑狼疮皮损内角质形成细胞凋亡和SSA/Ro抗原的表达

目的 :探索光敏感红斑狼疮 (LE)皮损形成的机理和SSA/Ro抗原表达的来源。方法 :用原位切口标记法和免疫荧光法测定了 1 9例光敏感型红斑狼疮 (LE)患者新鲜皮损内自身抗原SSA/Ro表达情况和角质形成细胞凋亡情况。结果 :发现 7例LE皮损表皮内棘细胞周围有不同程度的颗粒状SSA/Ro抗原表达 ;而对照组无 1例荧光着色 ,1 3例皮损表皮棘细胞内可见凋亡细胞荧光着色。结论 :光敏感LE患者的角质形成细胞通过细胞凋亡释放SSA/Ro抗原 ,并参与皮损形成。

利用重组抗原检测抗SSA/Ro-52kD自身抗体及其临床意义

目的重组表达 SSA/ Ro- 5 2 k D融合蛋白 ,并用于检测自身抗体。方法应用 DNA重组技术构建 SSA/Ro- 5 2 k D工程菌 ,并表达 SSA/ Ro- 5 2 k D融合蛋白。经谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)柱层析纯化后 ,作为抗原 ,分别用免疫印迹法 (IBT)和酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测 2 0份 SS患者血清、6 0份 SL E患者血清和 30份正常人血清。结果重组抗原检测抗 SSA/ Ro- 5 2 k D自身抗体敏感性较高 ,而且抗体滴度与病程相关。结论利用重组抗原对自身抗体进行定性。

SSA/Ro60自身抗原的基因克隆与表达纯化

目的 克隆人SSA/Ro60自身抗原并表达纯化,为辅助诊断自身免疫提供物质基础。方法 采用RT-PCR技术扩增SSA/Ro60基因,定向插入pPICZ表达载体,转入毕赤酵母表达系统,将获得的重组蛋白行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果 扩增出约1.5kb的SSA/Ro60全长序列,获得相对分子质量60×103的重组蛋白,经鉴定具有SSA/Ro60抗原性。结论成功克隆并表达SSA/Ro60,为诊断自身免疫疾病奠定基础。

核糖核蛋白SSA/Ro的结构及其特性

从组织细胞中提取的核糖核蛋白抗原SSA/Ro被广泛应用于临床中各种自身免疫性疾病检测 ,特别在检测SS、SLE、NLE等病人的血清中阳性率较高。因而在临床诊断上尚有十分重要的参考价值。本文综述了SSA/Ro抗原的结构、生物特性方面的研究情况 。

通过慢病毒载体构建SSA/Ro52稳定基因沉默细胞系

目的利用慢病毒载体持续表达RNA干扰序列抑制基因表达,建立SSA/Ro52稳定基因沉默细胞系,为进一步研究SSA/Ro52的功能提供有效工具。方法 4条SSA/Ro52特异序列(克隆1为TGGCATGGTCTCCTTCTACAA,克隆2为CTGCCTTCTTTATGGGACTTA,克隆9为TGAG从GTTGGAAGTGGAAAT,克隆1 1为AGTTATCCTATGGTCCTGGGT)和无关对照序列克隆至慢病毒载体pLKO-puro,表达后可形成小发卡结RNA(small hair-pin,shRNA),通过RNA干扰机制抑制特异基因表达。表达SSA/Ro52特异序列的克隆1、2、9、11以及表达无关序列的对照克隆(scramble,S)分别与包装载体pGag-Pol和pVSV-G共同转染293T细胞,收集含病毒颗粒的培养液。用表达SSA/Ro52特异序列和无关对照序列的病毒颗粒感染Hela细胞,抗生素筛选,建立稳定细胞系。以GAPDH为内对照定量实时PCR检测SSA/Ro52 mRNA的表达。免疫印记检测SSA/Ro52蛋白,扫描SSA/Ro52条带与β-actin条带相比为SSA/Ro52蛋白的相对表达水平。克隆1、2、9、11转染细胞中SSA/Ro52的表达水平与对照克隆S的比值为基因表达的抑制程度。结果慢病毒颗粒可以有效感染Hela细胞,含shRNA表达框架的病毒序列可以整合至细胞基因组,形成稳定细胞系。克隆1、2、9、1 1转染细胞在抗生素筛选3 d后,其SSA/Ro52 mRNA表达水平分别是克隆S转染细胞的25.5%、31.2%、13.0%和77.2%;而上述克隆转染细胞SSA/Ro52蛋白表达水平是对照的5%、50%、10%和80%。培养4周后上述克隆SSA/Ro52蛋白表达水平没有明显变化。但用干扰素α刺激细胞后,SSA/Ro52在对照克隆转染细胞中表达增加,而克隆1、2、9、11转染细胞SSA/Ro52的表达是对照的30%、70%、5%和100%。结论克隆1、2、9可以有效抑制SSA/Ro52的表达,通过慢病毒载体转染细胞建立了SSA/Ro52稳定基因静默细胞系。在SSA/Ro52表达被上调时,克隆9仍然可以有效抑制SSA/Ro52的表达,为进一步研究SSA/Ro52的功能打下了基础。

人自身抗原SSA/Ro60的基因克隆和原核表达

目的:克隆并表达人自身抗原SSA/Ro60。方法:应用RT-PCR技术,从HL-60细胞株中克隆人自身抗原SSA/Ro60全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在IPTG诱导下表达,产物行SDS-PAGE和Western blot。结果:PCR产物约为1.6 kb,与预期1614 bp接近,测序结果与Genebank报道的完全一致。pGEX-5T-SSA/Ro60重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白分子量为86 KD,具有天然人自身抗原SSA/Ro60的免疫原性。结论:成功克隆表达人自身抗原SSA/Ro60,为下一步工作奠定了基础。

抗SSA/Ro52抗体阳性获得性血友病A1例报告并文献复习

获得性血友病A(AHA)是较少见的血液系统疾病,主要表现为黏膜、肌肉、内脏的出血,并且出血通常具有自发性、突然性、弥漫性和危急性,诊治不及时可造成严重出血,导致患者死亡。本文通过报道1例抗SSA/Ro52阳性AHA患者的临床诊断及治疗过程,旨在加深对于AHA的认识。

HCV感染者抗SSA/Ro52抗体及其IgG亚型检测的意义

目的分析检测HCV感染者抗SSA/Ro52抗体及其Ig G亚型的意义。方法选取2012年1月至2014年8月开封市中心医院收治的临床确诊HCV感染者60例,同期系统性红斑狼疮(SLE)患者56例,干燥综合征患者23例,健康体检者60例,用线性免疫印迹法筛查抗SSA/Ro52抗体,间接ELISA检测抗SSA/Ro52抗体Ig G亚型。结果 HCV感染者抗SSA/Ro52抗体阳性率较SLE以及干燥综合征患者低(P<0.05),HCV感染者的单项阳性率高于SLE以及干燥综合征患者(P<0.05)。HCV感染者、SLE、干燥综合征阳性患者Ig G1亚型阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论单项抗SSA/Ro52抗体阳性是区分HCV感染是否合并干燥综合征的重要指标之一。

HLA-DQA1*0501、HLA-DQB1*02基因多态性与抗Ro/SSA抗体阳性pSS易感性的关系分析

目的基于数据库相关数据分析人类白细胞抗原(HLA)-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因多态性与抗Ro/SSA抗体阳性的原发性干燥综合征(pSS)易感性的关系。方法使用计算机检索相关数据库,筛选并收集pSS患者、抗Ro/SSA抗体阳性的pSS患者、抗Ro/SSA抗体阴性的pSS患者以及健康对照人群的HLA-DQA1*0501、HLA-DQB1*02基因多态性资料。使用STATA 16.0(USA)统计软件分析抗Ro/SSA抗体阳性的pSS患者中HLA-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因多态性与pSS发生的关系。结果纳入文献5篇,涉及420例pSS患者、250例抗Ro/SSA抗体阳性pSS患者、120例抗Ro/SSA抗体阴性的pSS患者和733例健康对照者。在pSS患者中,HLA-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因阳性分别为159、246例;在健康对照者中,HLA-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因阳性分别为196、282例;在抗SSA抗体阳性pSS患者中,HLA-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因阳性分别为129、158例;在抗SSA抗体阴性pSS患者中,HLA-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因阳性分别为30、46例。HLA-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因多态性与pSS的易感性有关(I2分别为62.99%、40.75%,合计OR值分别为2.60、2.43,95%CI分别为1.49~4.55、1.88~3.14,P均<0.05)。HLA-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因多态性也与抗Ro/SSA抗体阳性pSS的易感性有关(I2分别为0.00%、9.41%,合计OR值分别为3.85、2.61,95%CI分别为1.81~8.21、1.52~4.48,P均<0.05)。结论HLA-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因多态性与抗Ro/SSA抗体阳性的pSS患者的易感性相关。具有HLA-DQA1*0501和HLA-DQB1*02基因阳性的抗Ro/SSA抗体阳性患者更容易患pSS。

胎儿心脏超声检查在抗SSA/Ro-SSB/La抗体阳性妊娠管理中的应用

目的探讨超声评估胎儿心脏在母体抗SSA/Ro-SSB/La抗体阳性妊娠产前管理中的应用。方法前瞻性纳入2021年12月至2022年9月于北京协和医院就诊、抗SSA/Ro-SSB/La抗体阳性的孕妇,应用二维、M型和频谱多普勒超声评估胎儿心脏,观察心脏结构和房室壁、瓣环以及心肌回声,同时在五腔心切面测量胎儿房室传导时间,并随访妊娠结局。结果共纳入38例孕妇,其中8例原发性干燥综合征、13例系统性红斑狼疮、1例类风湿关节炎,16例临床诊断不明确。单胎37例,双绒毛膜囊双羊膜囊双胎1例,共计39例胎儿。12例(12/39,30.8%)胎儿合并心脏相关异常,包括10例(10/39,25.6%)左心室强回声,1例(1/39,2.6%)室间隔缺损,1例(1/39,2.6%)少量心包积液。2例(2/39,5.1%)胎儿诊断为I度房室传导阻滞,1例(1/39,2.6%)诊断为胎儿心律失常,Ⅱ度Ⅱ型房室传导阻滞(2:1传导),合并二尖瓣及三尖瓣瓣叶增厚及开放受限,收缩期三尖瓣可见少量反流。余36例(36/39,92.3%)胎儿心脏房室传导未见异常。1例因Ⅱ度房室传导阻滞孕中期引产,38例继续妊娠,胎儿平均出生体重为(2932.9±590.1)g。结论超声定期监测胎儿心脏可及早发现房室传导异常等免疫相关的心脏损伤,有助于母体抗SSA/Ro-SSB/La抗体阳性妊娠的产前管理。

原发性干燥综合征和系统性红斑狼疮患者血清中抗SSA/Ro抗体的研究

目的：分析原发性干燥综合征（ｐＳＳ）和系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）病人血清中抗ＳＳＡ／Ｒｏ抗体的类型。方法：对流免疫电泳抗ＳＳＡ／Ｒｏ阳性的血清经免疫印渍（ＩＢ）测定抗变性（ｄ）ＳＳＡ／Ｒｏ抗体和用重组人（ｒ）ＳＳＡ／Ｒｏ未经变性处理点杂交（ＤＢ）检测其抗天然（ｎ）ＳＳＡ／Ｒｏ抗体的阳性率。结果：抗ｄ５２ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ和抗ｄ６０ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ的阳性率５９例ｐＳＳ分别为７３％和２５％，４５例ＳＬＥ分别为３６％和２４％；仅抗ｄ５２ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ阳性者ｐＳＳＡ／Ｒｏ为５１％，ＳＬＥ为２０％；仅抗ｄ６０ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ阳性者ｐＳＳ（３７％）和ＳＬＥ（８９％）两者均较低（Ｐ＝０４１）。抗ｎ５２ｋＤｒＳＳＡ／Ｒｏ和抗ｎ６０ｋＤｒＳＳＡ／Ｒｏ抗体的阳性率ｐＳＳ分别为９３％和６３％，ＳＬＥ分别为６４％和３６％；抗ｎＳＳＡ／Ｒｏ双阳性者ｐＳＳ（６１％）明显高于ＳＬＥ（２９％）。结论：①抗ｄ５２ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ阳性不伴抗ｄ６０ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ者不仅见于ｐＳＳ也常见于ＳＬＥ；②抗ｎ５２ｋＤ和ｎ６０ｋＤｒＳＳＡ／Ｒｏ同为阳性者ｐＳＳ较ＳＬＥ更多见。

抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎的临床分析(附5例报告及文献复习)

目的探讨抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎的临床特征及治疗。方法回顾性分析5例抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎患者的临床资料,结合文献复习进行讨论。结果5例患者中男性1例、女性4例。主要临床表现为典型皮疹及肢体无力,可伴有呼吸困难、关节症状及口干眼干等症状,均诊断为抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎,且合并间质性肺炎;患者平均发病年龄(62.2±6.18)岁,平均病程(4.2±1.64)个月;1例患者血清肌酸激酶升高(472 U·L^-1);诊断明确后5例患者均接受了糖皮质激素与免疫抑制剂联合治疗。结论抗MDA5抗体与抗SSA/Ro52抗体双阳性的皮肌炎临床主要表现为典型皮疹,肢体无力、呼吸困难、关节症状及口干眼干等症状常见,血清肌酸激酶升高不明显,易合并间质性肺病;糖皮质激素与免疫抑制剂联合治疗为主要方案。预后不良。

ANA、SSA、SSB、RO-52在干燥综合征诊断中的临床意义

目的探讨干燥综合征(SS)患者ANA、SSA、SSB和RO-52抗体检测的临床意义。方法选取2010年5月至2012年5月南昌大学第二附属医院住院及门诊SS患者49例和非SS患者144例及40例健康对照体检者,采用间接免疫荧光法测ANA;免疫印迹法测抗SSA、SSB和RO-52抗体,并对结果进行回顾性分析。结果 (1)三组ANA、SSA、SSB、RO-52阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01);(2)SS组ANA与SSB、RO-52阳性率(P<0.01)和SSA与RO-52阳性率(P<0.05)比较差异有统计学意义,SLE组除SSA与RO-52外其余阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),MCTD组SSA与SSB、RO-52阳性率(P<0.01)和SSA与SSB阳性率(P<0.05)比较差异有统计学意义,RA组ANA与RO-52阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),各组其余阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);(3)SS组SSA/SSB与SSA/SSB/RO-52阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),SLE组SSA/RO-52与其余各项阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),MCTD组SSA/RO-52与其余各项阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);(4)在SS患者抗体检测中ANA的敏感性高但特异性差,SSA、SSB、RO-52敏感性稍低但特异性高。结论 SS患者检测ANA及抗SSA、SSB和RO-52抗体等自身抗体,对SS的诊断、鉴别诊断具有重要的作用,可提高SS的诊疗水平。

新生儿红斑狼疮与抗Ro/SSA和抗La/SSB抗体阳性2例

报告了 2例新生儿红斑狼疮。 1例出生后发现有心脏房室传导阻滞和室间隔缺损 ,脐血检测有抗Ro/SSA和抗U1RNP抗体 ,母亲为SLE患者。 1例出生后 1个月于面部、颈部及躯干上部出现环形红斑样皮疹 ,脐血检测有抗Ro/SSA和抗La/SSB抗体 ,母亲为SCLE患者。 2例患儿皮疹和心脏传导阻滞于生后 3个月内消退 ,自身抗体于生后 6个月内消退 ,随访 7年和 1 5年后均健康。

自身抗原52 kD-Ro/SSA的序列分析及抗原性预测

目的：分析自身抗原５２ｋＤＲｏ／ＳＳＡ的序列结构，预测其抗原位点。方法：将自身抗原５２ｋＤＲｏ／ＳＳＡ的氨基酸序列输入“蛋白质结构预测”软件包，分析蛋白质分子亲水性、表面可及性、柔性，并模拟其二级结构，预测其主要抗原位点。结果：自身抗原５２ｋＤＲｏ／ＳＳＡ是多抗原位点，其氨基酸序列中１２０～１３０、３００～３２０、３６０～３８０位间抗原性较强。结论：确定５２ｋＤＲｏ／ＳＳＡ的抗原优势表位，为研究抗原抗体间相互作用及其疾病机制打下基础。