大骨节病和克山病老病区粮食中T-2毒素和黄绿青霉素污染状况调查

目的观察大骨节病与克山病老病区丰田村和林茂村地产粮食中T鄄2毒素和黄绿青霉素(CIT)的污染状况。方法选40岁以上自愿者作右手X线拍片检查,评估大骨节病历史患病情况;收集文献数据评估克山病历史病情;用ELISA法和高效液相色谱(HPLC)法检测病区地产粮食T鄄2毒素和CIT。结果丰田村和林茂村成人大骨节病患病率很高,是历史上的严重病区。地产面粉中T鄄2毒素阳性检出率为77.78%,T鄄2毒素平均水平为120.64 μg/kg;地产玉米面中CIT阳性检出率为42.31%,CIT毒素平均水平为12.33 μg/kg,均明显地高出本省市场同类粮食。结论丰田村和林茂村是大骨节病、克山病历史上的严重病区,地产粮食中T鄄2毒素、CIT 水平仍然相当高,如果不是当地粮食占居民主食中的比例已经很小(< 20%),这两种病的当前检出率也许达不到现在程度的低水平。

黄绿青霉素的高效液相色谱法检测

目的摸索高效液相色谱(HPLC)检测粮食中黄绿青霉素(citreoviridin,CIT)的实用方法。方法以CIT标准品人工污染几种粮食,然后用二氯甲烷提取、过滤、自然干燥、流动相定容、上机。使用日本岛津SPD鄄10Avp液相色谱仪,紫外鄄可见检测器,Hypesil SiO2 色谱柱(4.6 mm ×150 mm,5 μm)。流动相是乙酸乙酯∶正已烷(7∶3)。流速和检测波长分设为0.5 ml/min和388 nm。结果最低检出量为10 ng/g。标准曲线小剂量R1 = 0.999,Se1 = 0.015 532;大剂量R2 = 0.999,Se2 = 0.030 24。回收率82.5%～96.1% 。日间与日内变异均< 2%。结论高效液相色谱检测法灵敏、简捷、经济,适用于地方病病区粮食黄绿青霉素污染水平的检测。

黑龙江省13个县的市售粮食中黄绿青霉素污染水平的调查

目的检测黑龙江省县级市场销售粮食中黄绿青霉素(CIT)污染水平,为克山病病因研究提供新的参考数据。方法从黑龙江省尚志、林口、密山、铁力、富裕、依兰、孙吴、肇东、巴彦、呼兰、双城、宾县、五常等13个县城的主要市场,采集面粉、大米和玉米面粮样共390份。采样后2周内,按30%比例随机抽取3种粮样各39份,采用HPLC法检测CIT水平。结果大米与面粉均为0检出;玉米面检出频率为12/39,阳性样品检出量范围为4.9～13.8μg/kg,平均值7.1μg/kg。结论目前黑龙江省的市售粮食中的CIT污染程度很轻。今后要继续扩大检查范围,取得CIT对粮食污染情况更深入的了解。

低剂量黄绿青霉素对大鼠心肌细胞色素C氧化酶与琥珀酸脱氢酶活性的影响

目的观察低剂量黄绿青霉素(CIT)对大鼠心肌细胞色素C氧化酶(COX)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响。方法将刚断乳的Wistar雌性大鼠随机分为4组,3个实验组饲料加入乙醇提取的CIT粗毒素,按动物体质量给予CIT剂量分别为0.5、1.5、3.0 mg/kg,对照组正常饲料加乙醇。饲养30 d后用乙醚麻醉处死大鼠,取心室肌,酶组织化学染色法观察COX和SDH酶活性变化。结果1.5 mg/kg CIT剂量组可见酶染颗粒减少,与对照组相比呈浅染;3.0 mg/kg CIT剂量组酶染颗粒大量减少,且分布不均,局部可见点灶样缺失。图像定量分析表明,与对照组相比,1.5、3.0 mg/kg剂量组的COX、SDH酶活性均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CIT剂量达1.5 mg/kg时可致大鼠心肌组织COX、SDH酶活性显著减弱,且呈剂量效应关系。

粮食中黄绿青霉素的高效液相色谱法检测

目的用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）检测粮食中黄绿青霉素（ｃｉｔｒｅｏｖｉｒｉｄｉｎ，简称ＣＩＴ）的含量，用于评价粮食受青霉菌污染程度。方法用ＣＩＴ纯品污染粮样，再用二氯甲烷提取、过滤，过４ｃｍ硅胶柱，用乙酸乙酯∶正己烷（７∶３，Ｖ／Ｖ）洗脱，６０℃氮气吹干，ＨＰＬＣ检测。结果最低检出量为８ｎｇ，线性、重复性良好，回收率较高。结论文中报告的方法可用于地方病区粮食黄绿青霉素污染水平的检测、评价。

黄绿青霉素致细胞DNA损伤的单细胞电泳实验观察

目的 应用单细胞电泳技术探讨黄绿青霉素 (CIT)对细胞 DNA损伤的作用 ,探索 CIT暴露的生物标志。方法 SGC-790 1细胞常规培养 ,荧光显微镜观察 CIT不同剂量对 DNA的效应。用 Kinetic彗星图像分析软件 ,对 DNA的尾长和尾长积差进行分析。结果 CIT可致细胞 DNA损伤 ;随着 CIT浓度的增加 ,DNA的迁移长度和尾长积差都明显增加 ,呈显著剂量效应关系 ,以尾长积差指标更灵敏。结论 单细胞电泳技术检测的 DNA损伤有望成为

温度和pH的交互作用对黄绿青霉菌产毒影响

目的在实验室条件下观察温度、pH对黄绿青霉菌（PCV）产毒的影响及其交互作用。方法采用析因实验设计，用察氏培养基培养黄绿青霉菌，二氯甲烷提取黄绿青霉素（CIT）。高效液相色谱法检测CIT毒素含量。结果黄绿青霉菌在高温、低温、酸性及碱性条件下均可产毒，产毒量60．30-336．10μg/g培养基；高温、碱性条件下产毒量较高，是低温条件的2倍以上。结论温度和pH对黄绿青霉菌产毒量有较大影响，且有交互作用。

用SCGE法观察砷、氟、黄绿青霉素和T-2毒素引起的SGC-7901细胞基因组DNA损伤

目的 观察砷、氟、黄绿青霉素和 T-2毒素对 SGC-790 1细胞基因组 DNA的损伤作用及特点。方法 染毒剂量 10μmol/ L ,染毒后 4h应用单细胞凝胶电泳技术结合“彗星图像分析系统”检测 DNA损伤。结果 Na As O2 组尾长明显大于对照组 ;Na F组拖尾率显著高于对照组 ;CIT组总拖尾率、尾长和尾动量均高于对照组 ;而 T-2毒素组各指标均高于对照组。结论 Na As O2 、Na F、CIT和 T-2毒素均可引起 DNA损伤 ,但各有特点 ,说明它们引起

不同条件对黄绿青霉菌产毒的影响

目的 在实验室条件下观察温度、pH和培养时间对黄绿青霉菌（PCV）产毒的影响。方法 用察氏培养基在不同温度、pH和培养时间条件下培养黄绿青霉菌，提取黄绿青霉素（CIT），用高效液相色谱法检测毒素含量。结果 黄绿青霉菌在高温（30℃）和低温（8℃）条件下均可产毒，且无明显差异（产毒量为222．36～231．02μg／g培养基）；但在变温条件下产毒量剧增（产毒量为532．16μg／g培养基）；酸性条件可有效抑制黄绿青霉菌产毒（产毒量为161．86μg／g培养基）；培养10d左右产毒量最高，此后，CIT可因氧化降解而含量减少。结论 变温条件有利于黄绿青霉菌产毒；而酸性条件可抑制产毒；黄绿青霉菌培养10d左右时产毒量最高。

一种合成CIT毒素的新方法

目的黄绿青霉素的合成。方法黄暗青霉菌接种于已高压灭菌的大米中混匀,培养数日后,将霉变大米的乙醇提取液,旋转蒸干,溶于苯,浓缩后得到的粗毒素在硅胶柱上层析,依次用苯、乙醚、乙酸乙酯、丙酮洗脱,收集乙酸乙酯部分浓缩,4℃放置2 d后结晶。结果所得产物经高效液相色谱检测成分单一,纯度高。结论用大米做培养基产量高,杂质少;新的柱层析法易分离,利结晶。

黄绿青霉素的高效液相色谱检测法的改进

目的 对黄绿青霉素的高效液相色谱检测法进行改进 ,提供一种简便、廉价的检测方法。方法 用二氯甲烷提取培养物中的黄绿青霉素 ,过滤 ,取滤液避光快速挥干 ,得黄绿青霉素粗毒素 ,用乙酸乙酯∶正己烷 (7∶3,V/V)定容后HPLC法检测。结果 线性、重复性较好 ,回收率可满足需要。结论 简化了黄绿青霉素检测方法 ,便于现场和实验室检测。

克山病的病因与流行机制

目的报告关于克山病病因的研究结果。方法病因流行病学方法;病理学和实验病理方法;文献学方法。结果克山病病因流行病学研究所见克山病的病因是特定自然、社会、生活条件下形成的黄绿青霉毒素(citreoviridin,CIT)中毒;传播途径是病区产的粮食与饮水无关;玉米、小米等粮食传病,小麦不传或少传;粮食在湿冷环境中被青霉菌污染并产生CIT毒素。克山病的病理、病理化学、实验病理研究所见从亚急型克山病以及解剖可见,心肌的早期病理改变是线粒体功能与结构的破坏。ATPases同琥珀酸脱氢酶等系列心肌酶的活性被明显抑制、改变、比例失衡,同时线粒体的结构也出现了相应的改变。心肌线粒体肿胀,嵴膜破坏,线粒体膜融合、消失。CIT毒素对心肌线粒体的作用机制CIT是ATP的类似物,可与ATPases相作用而降低其活性。由此开始,逐步发展、变化,最终导致克山病特异的心肌坏死。结论上述的3个方面基本是相互独立的各自发现,但可紧密的相互认证,相互支持,支持克山病的致病因子可能是青霉菌污染粮食产生的黄绿青霉毒素。

黄绿青霉素生物合成及鉴定

目的生物合成和纯化黄绿青霉素(CIT)。方法市售小米查子加入30%水分,接种黄暗青霉菌孢子后,15～25 ℃培养3周,可获得较高产量的黄绿青霉素。霉变米粉经乙醇提取数次,减压浓缩后,溶解于热苯中,4 ℃过夜并过滤,滴加正己烷于黄色苯溶液中,将生成的黄色沉淀通过硅胶柱,在正己烷∶丙酮(1∶1)中展开蒸干,并溶于甲醇中,形成黄色粉末。结果最终合成的黄绿青霉素成分单一,所含杂质较少。结论实验合成的黄绿青霉素纯度高、杂质少,操作方便、可行性好,便于实验室开展研究工作。

黄绿青霉素致人胃癌细胞损伤的电镜观察

目的 电镜观察黄绿青霉素 (CIT)对离体细胞损伤的超微形态变化。方法 细胞株为人胃癌细胞(SGC- 790 1) ,常规培养。实验组分高低剂量两组 ,CIT在细胞培养液的终浓度分别为 2 0 ,6 0 μmol/ L,37℃ 5 % CO2孵箱中孵育 2 4h。结果 实验两组 CIT均导致细胞线粒体损伤。表现为线粒体嵴膜破坏 ,嵴变短、消失 ,线粒体肿胀、空泡变 ;高剂量组还伴有核浓缩、染色质边集。结论

流动注射化学发光法对饮用水中黄绿青霉素的在线检测

利用黄绿青霉素对鲁米诺-过氧化氢-纳米氧化铜化学发光体系的抑制作用检测饮用水中可能出现的突发性污染,并对测定体系的条件进行单因素试验和响应面试验优化。结果表明:在优化的实验条件下,黄绿青霉素检测线性范围为0.005~3 mg/L,检出限为8.2×10^(-5) mg/L。对质量浓度为0.005 mg/L的黄绿青霉素进行平行测定11次,相对标准偏差为2.3%,黄绿青霉素加标回收率范围为78%~91%。该方法简便快捷、实用性强,可应用于饮用水中黄绿青霉素突发性污染在线快速检测。

粮食中黄绿青霉素的薄层色谱法检测

目的探索薄层色谱法(thin-layer chromatography,TLC)检测粮食中黄绿青霉素(citreoviridin,CIT)的实用方法。方法以CIT标准品人工污染粮样,然后用乙腈和水(80:20)提取,石油醚脱脂,蒸干.甲苯:乙酸乙酯:甲酸(6:3:1)定溶。溶液点样于60目高效薄层硅胶板上,在甲苯:乙酸乙酯:甲酸(6:3:1)溶液中展开,在紫外长波(366 nm)下观察黄色条带来进行半定量分析,利用双波长薄层色谱扫描仪对CIT进行定量检测。结果最低检出限25 ng,回收率在80.0%～103.1%。结论检测方法经济、快速、有效。

黄绿青霉素对神经细胞PC-12损伤作用的研究

目的研究黄绿青霉素(CIT)诱导神经细胞PC-12的损伤作用。方法CIT处理组分为三组,终浓度分别为2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L,设DMSO为空白对照组。药物处理细胞24h后,观察细胞形态的变化,CCK-8法测细胞活性,流式细胞仪测ROS荧光值;取细胞培养液测LDH释放率、NO含量及MDA;细胞裂解液检测GSH含量及SOD活力。结果PC-12与CIT共培养后,细胞成团,出现空斑。与对照组比较,CIT组的细胞活力显著降低(P<0.01),LDH释放率显著升高(P<0.01);NO含量明显下降(P<0.05),呈剂量效应关系;氧化应激相关指标MDA含量显著升高(P<0.01);ROS含量在低、中、高剂量组中均显著升高(P<0.01,P<0.01,P<0.05);GSH含量呈下降趋势,10μmol/L组效果显著(P<0.05);SOD活力显著升高(P<0.01)。结论黄绿青霉素对神经细胞PC-12有明显的损伤作用,可能与氧化应激机制有关。

黄绿青霉素对心脏毒性损伤作用

目的观察黄绿青霉素(CIT)对离体心肌细胞及大鼠心肌组织结构和功能的损伤。方法电镜检查法观察黄绿青霉素致离体心肌细胞超微结构的改变,并对15 mg/(kg.d)CIT喂饲8周的大鼠心肌组织进行病理学观察。结果光镜下CIT处理组大鼠心肌发生变性和坏死,病变呈灶状或条索状分布,有炎性细胞浸润,肌原纤维凝集崩解,部分心肌细胞颗粒变或空泡变性。电镜下,2.5μmol/L CIT组,细胞形状不规则,染色质边集,肌丝明显,胞质内存在脂滴颗粒,线粒体嵴清晰,部分线粒体空泡变性;25μmol/L CIT可使完整的肌细胞结构消失;随剂量增加,毒性作用增强。结论CIT在体内和体外均可引发心肌的变性和坏死。

黄绿青霉素对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素的影响

目的观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-lβ)、IL-6和IL-8等细胞因子的影响,以及CIT上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞表达MCP-1、IL-lβ、IL-6和IL-8的作用。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),选择第5～6代进行试验,待细胞融合80%后随机分组,加入TNF-α(10μg/L)、CIT(2μmol/L)建立TNF-α组、CIT组、TNF-α+CIT联合处理组和空白对照组,处理时间24h。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8及MCP-1的含量;免疫荧光染色法测定细胞核转录因子κB(NF-κB)的激活表达;RT-PCR检测各组MCP-1 mRNA表达。结果在TNF-α组和TNF-α+CIT组,细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8、MCP-1浓度,细胞MCP-1 mRNA表达量,NF-κB P65蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05);且TNF-α+CIT组均高于TNF-α组(P<0.05)。结论 CIT可明显上调TNF-α诱导的内皮细胞MCP-1、IL-lβ、IL-6、IL-8表达和NF-κB的激活。

温度和湿度对黄绿青霉菌生长和产毒的影响

目的在实验室内观察温度和湿度对黄绿青霉菌(PCV)生长情况和产毒的影响。方法用察氏培养基培养黄绿青霉菌,使用真菌培养箱控制温度和湿度,观察黄绿青霉菌在温度和湿度其生长情况,提取产生的黄绿青霉毒素(CIT),用高效液相色谱法检测CIT毒素含量。结果温度从10℃,20℃到30℃,黄绿青霉菌生长情况逐步变好(H=12.869,P=0.002),湿度从0.40、0.60升高到0.80,黄绿青霉菌生长情况亦逐步好转(H=11.715,P=0.003);黄绿青霉菌在温度为10℃、20℃、30℃以及在湿度为0.40、0.60、0.80的条件下均可产毒,产毒量为3.02～5.98 mg。温度对PCV产毒没有影响(F=2.843,P=0.071),湿度对PCV产毒有影响(F=130.252,P<0.000 1),温度和湿度对PCV产毒有交互作用(F=3.184,P=0.024)。结论温度和湿度的提高有利于黄绿青霉菌的生长;温度对黄绿青霉菌产毒影响较小,湿度对黄绿青霉菌产毒影响较大,湿度的提高有利于产毒;温度和湿度对PCV产毒有交互作用,提高温度和湿度可明显提高产毒量。