Expression of VEGF_(121)in gastric carcinoma MGC803 cell line

INTRODUCTIONVascular endothelial growth factor(VEGF)whichis also known as vascular permeability factor(VPF)is a heparin-binding,dimeric polypeptide growthfactor and a potent mitogen for endothelial cells.VEGF can stimulate the endothelial cell growth andenhance the motility through its two knownreceptors flt-1 and KDR.Acting through thesereceptors,VEGF may stimulate angiogenesis

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞的分化

目的:研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌MGC803 细胞分化作用及其机制. 方法:采用ConA凝集实验、碱性磷酸酶(ALP)比活性测定、免疫荧光染色细胞化学、免疫细胞化学及划痕标记荧光染料示踪技术(SLDT)等方法,观察DADS诱导人胃癌MGC803细胞分化的作用. 结果:人胃癌MGC803细胞对ConA的凝集率从79.1%下降为27.0%(x2=29.78,P<0.05);ALP比活性由2.00 nkat/g 降至0.67 nkat/g(F=207.6,P<0.05),下降率为66.1%; 细胞骨架蛋白呈细丝状,由胞核向胞质规则、放射状伸展,表明其合成增加与重组;SLDT表明人胃癌MGC803 细胞不显示荧光染料的传播,失去细胞间通讯功能, DADS处理后黄色荧光分布在伤沿细胞列和相邻的数列细胞内,表示细胞间通讯功能恢复.免疫细胞化学结果显示,p21WAF1表达增加,突变型p53、Ras-p21、C-myc 表达降低,而pRb表达无改变. 结论:DADS可以诱导MGC803细胞分化,癌基因与抑癌基因在此过程中起着重要作用.

MiR-23a质粒的构建及其在胃腺癌细胞系MGC803中的表达

目的构建表达微小RNA-23a(miR-23a)的真核表达质粒,为进一步研究小RNA分子miR-23a在胃腺癌细胞系MGC803中的功能奠定良好的实验基础。方法首先设计并合成扩增miR-23a前体基因全长的PCR引物,提取胃腺癌细胞系MGC803基因组为模板,PCR扩增大小为324 bp的目的基因;PCR产物经过EcoR I和Bgl II酶切后,与线性化的pcDNA3载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒经脂质体方法转染MGC803细胞,实时定量PCR检测转染细胞MGC803中miR-23a的表达水平,经MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验、TUNEL实验及Transwell实验,观察过表达miR-23a后对MGC803细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果纯化质粒的相对分子质量为5.7 kb,酶切及测序鉴定结果符合目的条带大小(324 bp),插入的寡核苷酸序列与miR-23a前体基因序列完全相符;实时定量PCR结果表明pcDNA3/miR-23a能够有效表达miR-23a;MTT、平板克隆形成及软琼脂克隆形成实验结果显示,过表达miR-23a可以促进MGC803细胞活性;TUNEL实验结果显示,过表达miR-23a可以减少胃腺癌细胞MGC803凋亡的发生;Transwell实验结果显示miR-23a可以促进胃腺癌细胞MGC803的侵袭能力。结论构建的真核表达质粒在胃腺癌细胞MGC803中有效表达miR-23a,能够促进细胞活性及侵袭能力,并能抑制凋亡的发生。

封闭内源性miR-23a对人胃腺癌细胞系MGC803增殖及侵袭的影响

目的设计并合成miR-23aASO(ASO-23a),封闭内源性miR-23a的功能后,检测人胃腺癌细胞系MGC803增殖及侵袭能力的改变。方法首先设计并合成ASO-23a,经脂质体方法转染MGC803细胞,实时定量PCR检测转染细胞MGC803中miR-23a的表达水平;经MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验、TUNEL实验及transwell实验-观察细胞内源性miR-23a功能被封闭后对MGC803细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果实时定量PCR结果表明ASO-23a能够有效封闭细胞中内源性miR-23a;MTT、平板克隆形成及软琼脂克隆形成实验结果显示,封闭内源性miR-23a后可抑制MGC803细胞活性;TUNEL实验结果显示,ASO-23a可以促进MGC803细胞凋亡的发生;Transwell实验结果显示,ASO-23a可以抑制MGC803细胞的侵袭能力。结论设计并合成的.ASO-23a在人胃腺癌细胞系MGC803中有效封闭内源性miR-23a,能够抑制细胞活性及侵袭能力,并能促进细胞凋亡的发生。

蚯蚓提取物透析组分对MGc803胃癌细胞DNA合成的抑制作用

作者用透析方法分离蚯蚓提取物并观察了可透析组分对MGc803胃癌细胞~3H-TdR参入的影响.实验结果:①该组分可抑制胃癌细胞的~3H-TdR参入(实验组1776±217cpm,对照组2118±183cpm,P<0.01);②该组分经56℃加热0.5h,上述抑制作用仍然存在(加热组1808±407 cpm,对照组2118±183cpm,P<0.05);③该组分加热处理与否对胃癌细胞~3N-TdR参入的抑制作用无显著差别(实验组1776±217 cpm,加热组1808±407cpm,P>0.05).这些结果表明,蚯蚓提取物透析组分具有直接抑制MGc803胃癌细胞生长的作用.该作用不因加热到56℃而消失,提示蚯蚓提取物透析组分具有一定的耐热性.

PPARγ激活剂罗格列酮抑制人胃癌MGC803细胞增殖机制的研究

目的探讨PPARγ激活剂罗格列酮抑制人胃癌MGC803细胞增殖的机制。方法采用MTT法、集落形成实验和流式细胞仪分别观察罗格列酮作用于胃癌MGC803细胞48 h对细胞增殖和细胞周期的影响。结果12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的罗格列酮对人胃癌MGC803细胞生长抑制率分别为10.85%、32.52%、57.47%、78.94%,罗格列酮处理后MGC803细胞集落形成明显受到抑制,且细胞周期停滞于G1期。结论罗格列酮对人胃癌MGC803细胞的增殖抑制作用与诱导细胞周期G1期停滞有关。

吐温化合物对人胃癌MGC803细胞生长的影响

目的 研究吐温化合物对人胃癌MGC80 3细胞生长的影响 ,确定诱导分化剂二烯丙基二硫 (DADS)的溶媒。方法 采用MTT比色、生长曲线分析、细胞活力检测和流式细胞仪观察溶媒Tween2 0、Tween 80与二烯炳基二硫 (DADS)对MGC80 3细胞生长的影响。结果 Tween 80稀释浓度由 1 0 0 0倍～ 1 60 0 0倍时 ,其他浓度组均具有抑制作用 ,并呈浓度依赖性 (IR 6.2 %～ 92 .6% ,P <0 .0 5 )。Tween2 0稀释浓度由 5 0 0 0倍～ 30 0 0 0倍时 ,均对MGC80 3细胞具有促生长作用 (PR 3.6%～ 1 6.1 % ,P <0 .0 5 )。Tween 80稀释浓度 32 0 0 0倍对MGC80 3细胞生长、生长曲线、细胞群体倍增时间、细胞周期均无影响 ,与对照组、DADS处理组细胞存活率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而以此作为溶媒的不同浓度DADS具有抑制MGC80 3细胞生长的效果 ,与对照组和Tween 80组的差异均具有显著性 (P <0 .0 5 ) ,抑制率呈现时间 -效应依赖关系 (P <0 .0 5 ) ,对细胞群体倍增时间延长 (P <0 .0 5 ) ,并且可阻滞MGC80 3细胞于G2 /M期。结论 Tween 80具有抑制MGC80 3细胞生长作用 ,而Tween2 0对MGC80 3细胞具有促生长作用。选择Tween 80稀释浓度 32 0 0 0作为DADS溶媒 ,用于DADS对人胃癌MGC80 3细胞影响的研究比较合适。

PPARγ激活剂罗格列酮对人胃癌MGC803细胞周期及其PTEN表达的影响

目的探讨不同浓度的罗格列酮对人胃癌MGC803细胞增殖及其PTEN蛋白表达的影响。方法不同浓度的罗格列酮(12.5、25、50、100μmol/L)分别与MGC803细胞系共同培养48 h后,采用流式细胞仪检测罗格列酮对MGC803细胞周期的影响,免疫细胞化学检测MGC803细胞PTEN蛋白表达。结果罗格列酮使MGC803细胞停滞于细胞周期G1期,呈剂量依赖性,并诱导PTEN表达上调。结论罗格列酮可以通过诱导PTEN表达上调,使MGC803细胞停滞于细胞周期G1期,进而抑制人胃癌MGC803细胞生长,这可能是PPARγ激活剂抗肿瘤的机制之一。

罗格列酮诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及其对bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨罗格列酮对人胃癌MGC803细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:吖啶橙(AO)荧光染色和流式细胞仪分析检测细胞凋亡。同时行bax和bcl-2细胞免疫化学染色和定量分析。结果:罗格列酮能诱导MGC803细胞凋亡,且随着浓度增加,其凋亡率逐渐增加。罗格列酮(25μmol/L、50μmol/L)作用于人胃癌MGC803细胞48h后bax表达的光密度值由0·10±0·02分别升至0·42±0·03、0·75±0·04,P=0·000;bcl-2表达的光密度值由0·51±0·02分别降至0·25±0·04、0·12±0·01,P=0·001。结论:罗格列酮能诱导人胃癌MGC803凋亡,其机制可能与bax基因表达上调、bcl-2基因表达下调有关。

转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及对胃癌MGC803细胞的沉默效应

目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响。方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4·1-CMVneo表达质粒,并做酶切及测序鉴定。用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitativePCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白表达。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-1 siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86·4%、86·1%和81·5%、79·6%。结论:pSilencer4·1-E2F-1重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础。

蚯蚓提取物凝胶过滤不同组分对MGc803胃癌细胞 DNA合成的影响

作者观察了用凝胶过滤技术分离蚯蚓提取物获得的第2、第3和第4组分对MGc803胃癌细胞~3H-TdR参入(单位为cpm)的影响.结果:①第4组分可非常显著地抑制该胃癌细胞的~3H-TdR参入(第4组分2705±488cpm,对照5387±728cpm,P<0.01);②该组分在56℃加热0.5h,上述抑制作用基本消失(加热第4组分5085±490cpm,P>0.05);③第2和第3组分无论加热与否,对该胃癌细胞的~3H-TdR参入均无抑制作用(第2组分5322±292cpm,P>0.005;加热第2组分5341±499cpm,P>0.05;第3组分5036±274cpm,P>0.05;加热第3组分5578±814cpm,P>0.05).实验结果表明,第4组分具有直接抑制MGc803胃癌细胞生长的作用,但该组分缺乏耐热性.

氯化锂对MGC803细胞增殖及细胞周期的影响

研究氯化锂(LiCl)在体外对MGC803胃癌细胞增殖及周期的影响,以不同浓度的LiCl作用MGC803细胞24h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组细胞的增殖活性,利用流式细胞术进行细胞周期分析。结果:①不同浓度的LiCl(10、20、40mmol/L)均对MGC803细胞具有抑制增殖的作用,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。②随着LiCl浓度的升高,发生G2/M期阻滞,与正常对照组相比,差异具统计学意义。说明LiCl能抑制MGC803胃癌细胞增殖和导致G2/M期阻滞。

姜黄素的体外抗癌作用及其水溶液的稳定性

目的探讨姜黄素（curcumin，Cur）对人癌细胞株的体外作用特点及其水溶液的稳定性。方法以MTT法观察对人胃癌MGC803、人肝癌Be17402、人红白血病K562及其耐阿霉素株K562／ADM等的体外杀伤作用，并以体外活性变化为指标观察Cur水溶液的稳定性。结果Cur8.5～136.0μmol·L-1对上述细胞的IC50分别为13.0，15.9，11.7，62.6μmol·L-1;低于8.5μmol·L-1就能完全对抗41.5nmol·L-1表皮生长因子（EGF）的促增殖作用。Cur水溶液于4℃贮存3～7d体外抗癌活性明显下降。结论Cur对MGC803、Be17402、K562等有明显的杀伤作用，并能对抗EGF的促增殖作用，其水溶液稳定性较差。

KLF2过表达及敲减胃癌稳转细胞株的建立

目的构建KLF2过表达BGC823和KLF2敲减MGC803胃癌稳转细胞株。方法克隆人源KLF2基因,连接到Age I/Age I酶切后GV358载体上,构建GV358-KLF2重组质粒,转染293T细胞,包装慢病毒;构建KLF2shRNA,连接到Bam HI和EcoRI双酶切后的PHBLV-U6-ZSGreen-Puro载体上,经鉴定后转染293T细胞。采用RT-PCR及Western印迹法检测稳转细胞株中KLF2的表达。结果利用慢病毒介导,重组质粒G V358-K L F2和K L F2-shRN A转导入B G C823细胞、M G C803细胞并稳定表达。RT-PC R和W estern印迹法结果均显示过表达稳转株KLF2表达量明显升高(P<0.05),敲减稳转株KLF2表达量明显下降(P<0.05)。结论成功构建了K L F2过表达B G C823细胞株和K L F2敲减M G C803细胞株,为后续K L F2功能实验奠定了基础。

蚯蚓纤溶酶增加胃癌细胞对放射线敏感性的实验研究

目的探讨蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞株MGC803的放射增敏作用及机制。方法采用克隆形成实验观察蚯蚓纤溶酶的放射增敏作用;流式细胞术观察药物对胃癌细胞株MGC803周期分布的影响;RT-PCR法检测药物对细胞内硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGPx)基因表达的影响。结果蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞有放射增敏效应,100uku/L、300uku/L蚯蚓纤溶酶的放射增敏比分别为1.06和1.14。射线照射后MGC803细胞发生G1期阻滞,蚯蚓纤溶酶对细胞G1期阻滞无明显影响;PCR检测发现射线可诱导的SeGPxmRNA表达下调,蚯蚓纤溶酶能够增强射线诱导的SeGPxmRNA表达下调作用。结论蚯蚓纤溶酶能够增加胃癌细胞对放射线的敏感性,增敏机理可能与药物下调细胞内抗氧化酶SeGPx基因表达有关。

双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对不同胃癌细胞抑制作用的比较

目的比较肝细胞生长因子第一环状结构域基因(hepatocyte growth factor kringle 1,HGFK1)溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MGC803的抑制杀伤效果。方法以野生型腺病毒(AD5-EGFP)和空载体双靶向腺病毒(TH-AD-EGFP)为对照组,以双靶向HGFK1溶瘤腺病毒(TH-AD-HGFK1-EGFP)为试验组在感染复数(MOI)为100的条件下分别感染这三种胃癌细胞,测定其在72小时的细胞生存率状况(CCK8试验),并比较三种胃癌细胞试验组的差异。结果试验组双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞的72小时细胞抑制率均明显高于对照组(P<0.001),MKN45试验组明显低于SGC7901和MGC803试验组(分别是P=0.004和P=0.002)。而SGC7901试验组和MGC803试验组之间没有明显差别(P=0.599)。结论双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞SGC7901、MKN45、MGC803均具有抑制杀伤作用,但对SGC7901和MGC803的抑制效果明显高于MKN45。

毛茛总苷对人胃癌MGC803细胞血管生成拟态的影响及其机制

目的探讨毛茛总苷对人胃癌MGC803细胞血管生成拟态的影响及其机制。方法采用细胞黏附实验观察毛茛总苷对MGC803细胞黏附作用的影响;通过细胞划痕实验检测毛茛总苷对MGC803细胞迁移能力的影响;通过Matrigel肿瘤细胞类血管生成模型实验观察毛茛总苷对MGC803细胞体外类血管生成的作用;半定量RT-PCR方法检测毛茛总苷对MGC803细胞血管生成拟态相关基因表达的影响。结果毛茛总苷有效抑制MGC803细胞黏附、细胞迁移以及MGC803细胞介导的体外类血管生成;明显抑制MGC803细胞血管生成拟态相关基因VE-cadherin、sema 4D和integrinβ5的表达。结论毛茛总苷通过抑制血管生成拟态相关基因VE-cadherin、sema 4D和integrinβ5的表达来抑制MGC803细胞黏附、细胞迁移和血管生成拟态。

通莲汤对胃癌MGC803细胞周期及NF-κBs信号通路的影响

目的：研究通莲汤对胃癌MGC803细胞形态、生长周期的调节作用及细胞核转录因子κB（NF-κB）信号通路的影响,以探讨该方抑制胃癌细胞增殖的机制.方法：将MGC803细胞以1×104个细胞/孔的密度接种于96孔细胞培养板,以含5％胎牛血清DMEM培养液培养,37℃,5％饱和湿度的CO2培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25～800 mg·L-倍比梯度的通莲汤提取液,以10 ～ 160 mg·L-1倍比浓度的氟脲嘧啶为阳性对照组,孵育48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT比色法检测细胞增殖变化,曲线拟合法计算通莲汤和氟脲嘧啶50％抑制浓度（IC50）;以两者48 h IC50浓度处理细胞48 h,流式细胞技术（FCM）测定细胞周期,Western blot法测定细胞IκB激酶β（IKKβ）,NF-κB,phosph-NF-κB蛋白水平.结果：通莲汤和氟脲嘧啶48 h IC50值分别为192.74 mg.L-1,23.61 mg·L-1;与空白对照组相比,通莲汤显著影响MGC803细胞周期中G2期,氟脲嘧啶显著影响MGC803细胞周期中G1期（P＜0.05）;通莲汤和氟脲嘧啶均能显著抑制IKKβ与NF-κB的蛋白表达.结论：通莲汤抑制MGC803细胞生长与抑制细胞于G2期,下调NF-κB通路中IKKβ,NF-κB蛋白的表达有关.

通莲汤对胃癌MGC803细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究通莲汤(TD)对胃癌MGC803细胞形态和生长周期的调节作用;探讨其抑制胃癌细胞增殖的机制。方法将MGC803细胞于37℃,5%饱和湿度的CO2培养箱孵育24 h,分别加入倍比梯度的TD、TD化裁方(THC)和不同浓度的消癌平注射液(XAP),48h后以MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期。结果 TD的IC50值为60.2μg·mL-1;与空白对照组(C)相比,该方可显著抑制细胞增殖,影响细胞形态;流式细胞术分析表明,TD组细胞在G2期的比率为(69.56±2.06)%。结论通莲汤通过抑制细胞进入M分裂期从而干预胃癌MGC803细胞生长,与消癌平对该细胞系的调节周期作用相类似。